γ射线诱发GPA基因位点突变的剂量效应关系研究

60Coγ射线照射能引起人红白血病K562细胞株的血型糖蛋白A基因发生随机突变.通过对其第3外显子上的SacI内切酶位点进行分析,发现其基因突变率与受照剂量有着较好的线性关系,这与染色体畸变分析法所得的结果一致.分析基因突变率有可能推知受照剂量.     

基因位点突变分析在辐射生物剂量估算中的应用

生物剂量计是根据电离辐射引起的一系列生物效应,估算个人受照剂量的技术方法。     

辐射诱发外周血淋巴细胞HPRT基因位点突变的研究进展

在分析和定量辐射诱发体细胞基因突变增高的方法中,应用最广的是抗6-p琉基鸟嘌呤(6-thioguanine resistance,6-TG)突变分析,用于检测次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(Hypoxanthine-guanine phosphoribosyl transgerase,HPRT)基因位点的突变.     

低剂量X射线诱发人体细胞HPRT基因位点突变的剂量效应关系研究

体细胞次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT)基因位点是一个对电离辐射比较敏感的位点,该位点的控制基因定位于X染色体长臂末端。目前研究表明某些肿瘤患者,接触过环境中各种诱变剂的人群和电离辐射者等,其突变频度都可增加,且与剂量之间有一定的依赖关系。利用多核细胞检测法,测定HPRT基因位点突变的方法,在研究电离辐射所致人体遗传损伤的机理及损伤后的远期效应评价中,不仅可弥补染色体、微核方法的不足,而且方法简单、快速、灵敏度高,特别是在研究低剂量范围内以单基因突变为主的辐射损伤中更有其独特的意义。现将本文所作的100cGy以下X射线诱发的HPRT基因位点突变频率的剂量效应研究     

γ射线诱发培养淋巴细胞TCR基因突变的剂量-效应关系

目的　探讨γ射线诱发培养淋巴细胞T细胞受体 (TCR)基因突变的剂量 效应关系。方法　以不同剂量 (0～ 4 0Gy)的γ射线照射新鲜分离的健康成人外周血淋巴细胞 ,植物血凝素脉冲式刺激 2h后 ,用白细胞介素- 2培养 7d ,用单克隆抗体直接免疫荧光标记流式细胞术检测TCR基因突变频率 (TCRMF)。应用SAS统计软件包编写的程序进行辐射剂量 效应曲线的拟合和筛选。结果　培养 7d后 ,TCRMF (10 -4)随照射剂量D (Gy)的增加而增高 ,最佳拟合曲线为二次多项式模型 ,其方程式可描述为 :TCRMF =2 . 74+ 6. 0 5D + 7 60D2 (F =3 62. 3 7 16,P <0 . 0 1,经校正的R2 =0 . 9999)。结论　TCR基因突变作为一种有潜力的生物剂量计可能用于近期辐射照射生物剂量的估算。     

健康成人体细胞HPRT基因位点突变频度值测定

健康成人体细胞ＨＰＲＴ基因位点突变频度值测定黄权光，史纪兰，商希梅，李志荣，贾喜铭，刘伟，乔健维（山东省医科院放射医学研究所济南２５０００１）近年来新近发展起来的次黄嘌呤一鸟嘌呤转磷酸糖基酶位点（ＨＰＲＴ）检测是一种快速、灵敏测定人体细胞突变的方法，...     

氡及其子体诱发大鼠体细胞HPRT基因位点的突变

[目的]用多核细胞法研究氡及其子体诱发大鼠外周血淋巴细胞和气管-支气管上皮细胞的次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT)基因位点突变情况。[方法]Wistar雄性大鼠24只,采用HD-3型多功能移动式氡室进行动态吸入染毒,按照氡染毒的累计暴露量,分为3个实验组和1个对照组;获取大鼠外周血淋巴细胞和气管-支气管上皮细胞,以多核细胞法检测该两种细胞的HPRT基因突变频率。[结果]大鼠外周血淋巴细胞和气管-支气管上皮细胞的HPRT基因突变频率均随氡累积暴露剂量的增加而相应增加,剂量-效应关系明显,拟合的函数分别为(?)=1.785×10~(-5)D~2 1.174×10~(-3)D 1.054和(?)=3.538×10~(-5)D~2 8.338×10~(-4)D 1.032。[结论]氡及其子体能诱发大鼠外周血淋巴细胞和气管-支气管上皮细胞的HPRT基因突变,呈现一定的剂量-效应关系。     

特异位点DNA加合物诱发突变的机制

特异位点ＤＮＡ加合物诱发突变的机制北京医科大学（北京１０００８３）朱慧萍马文军编译常元勋审校许多致癌剂和致突变剂可通过与ＤＮＡ反应生成加合物而表现其致癌性或致突变性。然而，每种致癌剂／致突变剂通常与ＤＮＡ分子中不同的位点结合，生成不同的加合物。因而，...     

乙肝基因分型与耐药位点突变的关系

目的:检测本地区乙肝病毒复制病人中基因型分布情况,探讨HBV基因型与抗病毒疗效关系。方法:应用乙肝病毒型特异性引物采用巢式PCR方法,对45例HBV-DNA阳性患者进行HBV基因型分析,用DNA测序方法检测耐药位点突变。结果:B型7例,占15.56%;C型34例,占75.56%;未分型3例,占6.67%;B+C混合型1例,占2.22%。未发现其他型别。C型病人人均病毒载量5.67±1.61(1oglncopies/m1)较B+C混合型5.54(只有1例)、B型(4.42±1.39)及未分型(2.65±0.57)高。C型病人耐药变异位点多,病人比例高。结论:浙江等地区HBV—DNA基因分型以C、B为主,而B基因型抗病毒治疗疗效最好,C型、混合型及其它型对抗病毒治疗药物疗效较差。     

晚期混合裂变产物内照射诱发大鼠外周血淋巴细胞hprt基因位点突变与染色体畸变的研究

应用多核细胞法研究晚期混合裂变产物内照射诱发大鼠外周血淋巴细胞ｈｐｒｔ 基因位点突变， 并与染色体畸变进行比较。结果表明， 淋巴细胞ｈｐｒｔ 基因位点突变不仅随内照射剂量增加而增加， 呈现出良好的正相关， 而且与染色体畸变之间亦呈现出较好的相关性。说明辐射诱发ｈｐｒｔ 基因位点突变和染色体畸变的剂量效应关系动力学相似。因此ｈｐｒｔ 基因位点突变有可能成为生物剂量计。     

镉和氯化汞致体细胞hprt基因位点突变的作用和突变频率的研究

目的 了解镉和汞对细胞hprt基因位点的影响，探讨化学诱变物致机体损伤早期检测的敏感指标。方法 采用多核细胞法研究化学诱变物氯化汞和镉对人血淋巴细胞hprt基因位点的影响及突变频率。结果 氯化汞可诱发大鼠血淋巴细胞hprt基因位点突变，突变频率随着染毒浓度的增加而升高，突变频率Y↑^（10^-3)与氯化汞浓度C（mg/kg)之间拟合成Y↑^=0.0423C 1.0463的直线回归方程，不同浓度金属镉也能致hprt基因突变，镉浓度与突变频率之间有剂量反应关系。结论 氯化汞和镉对血淋巴细胞hprt基因位点及突变频率有影响，hprt基因突变频率可作为接触环境致突变物人群检测的敏感指标。     

X射线诱发大鼠淋巴细胞TCR基因突变的剂量-效应关系

目的 探讨X射线诱发大鼠外周血淋巴细胞TCR基因突变的剂量-效应关系。方法 以不同剂量(0~3Gy)的X射线照射新鲜分离的大鼠外周血淋巴细胞,PHA、ConA、IL-2协同刺激培养7d,流式细胞仪检测TCR突变频率。结果 大鼠淋巴细胞体外培养7d后,TCR突变频率随照射剂量的增加而增加,二者存在良好的剂量-效应关系,最佳拟合曲线为二次多项式模式,回归方程为:TCRMF=1.615+9.979D+1.712D²(F=146.781,P<0.01,R_adj²=0.864)。结论 本研究结果显示:X射线诱发大鼠外周血淋巴细胞TCR基因突变频率与照射剂量间存在良好的剂量-效应关系。     

磷氧氮丙啶诱发CHO细胞HGPRT基因位点正向突变的分子特征

ＭＡＰＯ诱发的ＣＨＯ细胞ＨＧＰＲＴ基因位点突变克隆ＤＮＡ，经ＥｃｏＲＩ和ＰｓｔＩ酶切消化后，用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交法，与ＨＧＰＲＴ基因探针杂交。从杂交图谱可见，正常ＣＨＯ细胞基因组ＤＮＡ经ＰｓｔＩ酶切后杂交可显出６条杂交带，其中８３ｋｂ，７６ｋｂ，６０ｋｂ，和３２ｋｂ带为Ｘ染色体连锁的ＨＧＰＲＴ基因所有，分别代表外显子２，６８，４和３，其余两条带为假基因。而经ＥｃｏＲＩ酶切后，正常ＣＨＯ细胞基因组ＤＮＡ有１７５ｋｂ和１１３ｋｂ两条ＨＧＰＲＴ基因杂交带，分别代表了外显子６９和２４。而从ＭＡＰＯ所诱发的ＨＧＰＲＴ基因突变细胞杂交图谱可见，其主要改变是ＨＧＰＲＴ基因全部缺失或部分缺失，同时出现了新的杂交带。ＰｓｔＩ酶切的７个突变克隆均显出基因缺失或新的杂交带型，而ＥｃｏＲＩ酶切８个突变克隆中，有３个无ＨＧＰＲＴ基因改变。由此可见，ＭＡＰＯ诱发ＨＧＰＲＴ基因位点突变的分子机理主要是由于基因缺失或重排。     

1-溴丙烷致中国仓鼠肺细胞hprt基因位点突变作用研究

目的 探讨1-溴丙烷(1-BP)对中国仓鼠肺细胞(V79)次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(hprt)基因位点的致突变作用.方法 将V79分为大鼠肝微粒体混合功能氧化酶(S9)代谢活化系和非S9代谢活化系,每系各设3.375、6.750、13.500 g/L3个不同质量浓度的1-BP实验组;另设1.000 g/L甲磺酸乙酯阳性对照组(非S9代谢活化系)、0.001g/L甲基硝基亚硝基胍阳性对照组(S9代谢活化系)和溶剂对照组,溶剂对照组加等体积的无血清培养基.染毒时间为6h.应用细胞克隆检测法检测V79 hprt基因位点的突变率.结果 非S9代谢活化系,1-BP实验组突变率与溶剂对照组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);S9代谢活化系,3.375、6.750 g/L 1-BP实验组突变率均高于溶剂对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01),但不存在剂量-反应关系.结论 1-BP经代谢活化后可能对V79 hprt基因位点具有致突变作用.     

次黄嘌呤磷酸核糖转移酶基因位点突变测定的方法探讨

人体外周血淋巴细胞中抗 6 硫代鸟嘌呤 (6 TG)突变体是在次黄嘌呤磷酸核糖转移酶 (HPRT)基因位点上的突变细胞 ,通过检测人外周血抗 6 TG细胞出现的份额 ,便可知外周血淋巴细胞突变频率[1- 3 ]。国内外已广泛用于某些肿瘤患者、接触环境中各种诱变剂的人群及电离辐射者监测。研究结果显示 ,其突变率都有不同的增加趋势 ,且具有一定的剂量依赖关系[1- 3 ]。目前检测和定量抗 6 TG细胞常用的方法为放射自显影、克隆检测及细胞松弛素B(Cyt B)法 ,各有其不同优点和不足 ,前两者使用仪器、试剂较繁杂或用血量大 ,培养时间长 ,要求条件高 ,…     

^60Coγ射线诱发人外周血GADD45A基因表达的变化研究

目的探讨电离辐射诱导人外周血GADD45A基因的表达变化,为寻找急性照射条件下辐射损伤早期诊断标志物提供实验依据。方法采集无急慢性疾病、不抽烟、年龄在26～29周岁的3名男性非放射性工作者外周血各10ml,分为10组,每组1ml。利用中国辐射防护研究院。^60Co照射装置对采集的血样分组照射,剂量率为0．313Gy／min。吸收剂量分别为0．05、0．1、0．2、0．4、0．6、0．8、1、2和3Gy,照射后的人外周血于37℃培养箱中静置2h后提取RNA,利用实时荧光定量PCR技术对外周血GADIM5A基因进行检测。结果实时荧光定量PCR检测结果表明各剂量组与对照组相比,其基因表达均有显著变化。0．05～0．6Gy剂量组与对照组相比基因表达下调,其中0．05～0．2Gy之间,随着照射剂量的增加,基因表达量逐渐降低;0．2～0．6Gy之间,随着照射剂量的增加基因表达量又逐渐增加。0．8Gy时,基因表达量增幅较大,高于对照组和1Gy剂量组。1～3Gy剂量组基因表达量均高于对照组,且随着剂量增大,表达量增加,具有明显剂量相关性。结论电离辐射可以诱导人外周血GADD45A基因的差异表达,1～3Gy之间具有明显剂量相关性。0．05～0．2Gy之间外周血淋巴细胞表现出辐射刺激效应。     

DNA加合物位点特异性与突变关系的研究进展

化学毒物直接或经生物代谢后与遗传物质DNA共价结合，形成DNA加合物。与DNA结合的部位也即基因作用靶点，是环境基因组学研究的重要内容，对外源化学物质的毒性评价、药物筛选、肿瘤防治等均具有重要意义。化学物质经代谢活化后与DNA大分子的结合具有位点特异性，可能是某种化学毒物导致特定部位特定肿瘤的原因之一。现就DNA加合物形成的位点特异性及特异位点DNA加合物与突变的关系的研究进行综述，为深入认识其致癌机制提供线索。     

^60Coγ射线诱发的V79细胞HPRT位点突变频率

用中国仓鼠Ｖ７９细胞次黄嘌呤－鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶（ＨＰＲＧ）位点正向突变试验方法（Ｖ７９／ＨＰＲＴ ＳＹＳＴＥＭ）检测了不同剂量的＾６Ｃｏ－ｙ射线诱发的Ｖ７９细胞ＨＰＲＴ位点的突变频率。     

MYO7A、CDH23、SLC26A4基因新突变位点导致先天性耳聋分子诊断与产前诊断

目的通过3个先天性耳聋家系的致病基因突变分析,查找耳聋未知致病突变,帮助高风险家庭进行产前诊断。方法对5名经过常见突变位点聋病易感基因筛查阴性,但临床诊断为耳聋的患者及核心家系成员,进行听力、视力相关检查,使用基因组全外显子测序方法及基因测序方法进行检测;采集高风险家庭孕18周母亲胎儿羊水20ml1份,行产前基因分析。结果一个家系致病基因为MYO7A基因的c.397dupC和c.4937C>A两个位点复合杂合突变致病;一个家系致病基因为CDH23基因的c.7240-1G>A和c.7252G>A两个位点复合杂合突变致病;一个家系致病基因为SLC26A4基因的c.259G>T和IVS7-2A>G(c.919-2A>G)两个位点复合杂合突变致病,孕18周胎儿基因检测与先证者携带相同的致病基因。其中检出MYO7A基因的c.397dupC位点突变和CDH23基因的c.7252G>A位点突变为国内首报新突变位点。结论通过基因测序、家系临床资料分析,基因突变携带者高风险家庭产前诊断,减少出生缺陷,丰富广西耳聋突变谱。     

醋酸铅体外诱发人外周血淋巴细胞HPRT基因位点突变的研究

目的 了解醋酸铅对人外周血淋巴细胞HPRT基因位点的影响,以探讨铅的致突变性。方法 采用多核细胞法体外研究醋酸铅对人外周血淋巴细胞HPRT基因位点的影响及突变频率。结果 0．25mmol/L醋酸铅即可诱发人外周血淋巴细胞HPRT基因位点突变,且突变频率随着染毒浓度的增加而升高,突变频率Y(10^-3)与醋酸铅浓度C(mmol/L)之间存在一定的剂量-效应关系,直线方程分别为：Y=1．0566 0．1661C(r=0．9582)和Y=1．0762 0．1987C(r=0．9434)。结论 在一定条件下,醋酸铅对人外周血淋巴细胞HPRT基因位点及突变频率有影响,HPRT基因突变频率可望成为接触环境致突变物人群检测的敏感指标。