葱白提取物干预脂多糖诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激损伤的实验研究

目的:探讨葱白提取物对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激损伤的影响及分子机制。方法:将H9c2细胞随机分为NC组、LPS组、葱白提取物低剂量组、葱白提取物中剂量组、葱白提取物高剂量组、anti-miR-194-5p+LPS组、anti-miR-NC+LPS组、miR-194-5p+葱白提取物高剂量组+LPS组、miR-NC+葱白提取物高剂量组+LPS组。蛋白质印迹法检测Cleaved-Caspase-3、Bax蛋白表达;流式细胞术检测心肌细胞凋亡情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miR-194-5p表达水平。结果:LPS诱导的心肌细胞中Cleaved-Caspase-3、Bax蛋白表达水平和H9c2细胞凋亡率升高,MDA含量升高,SOD和CAT活性降低,miR-194-5p表达水平升高(P<0.05)。低、中、高剂量葱白提取物处理后,Cleaved-Caspase-3、Bax蛋白表达水平和细胞凋亡率降低,MDA含量降低,SOD和CAT活性升...     

LncRNA MIAT靶向miR-361-3p影响内毒素诱导的血管内皮细胞氧化应激损伤的分子机制

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)心肌梗死相关转录本(MIAT)对内毒素(LPS)诱导的血管内皮细胞氧化应激损伤的影响及分子机制。方法 将人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)随机分为control组、LPS组、si-LncRNA MIAT+LPS组、si-NC+LPS组、miR-361-3p+LPS组、miR-NC+LPS组、anti-miR-361-3p+si-LncRNA MIAT+LPS组、anti-miR-NC+si-LncRNA MIAT+LPS组；实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测LncRNA MIAT和miR-361-3p表达水平；流式细胞术实验检测细胞凋亡；Western印迹法检测凋亡相关蛋白表达；酶联免疫吸附试验(ELISA)检测丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性；双荧光素酶报告实验检测LncRNA MIAT和miR-361-3p的靶向关系。结果 LPS处理的血管内皮细胞中LncRNA MIAT表达水平明显升高，miR-361-3p表达水平明显降低，切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved-caspas...     

miR-181a-5p靶向PIAS1对雨蛙肽诱导的急性胰腺炎腺泡细胞损伤的影响

背景急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)引起的急性炎症对人们健康的危害性极大,严重时会危及生命.其发病机制复杂,尚未完全清楚,研究发现miRNA参与了AP的发病过程.研究发现miR-181a-5p可抑制癌细胞迁移、侵袭和血管生成; miR-181a-5p还能抑制胃癌细胞增殖、侵袭,转移和上皮间充质转化.抑制miR-181a-5p表达可通过负向靶向INPP5A抑制细胞增殖和侵袭,增强宫颈癌细胞凋亡. miR-181a可抑制胰腺癌细胞系的生长、减少迁移,增加凋亡.但miR-181a-5p在AP的增殖凋亡中的影响及作用机制尚不清楚.目的研究miR-181a-5p对AP腺泡细胞损伤的影响及潜在的作用机制.方法用100nmol/L的雨蛙肽处理大鼠胰腺腺泡AR42J和MPC-83构建AP模型,设置Con组、Caerulein组、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-181a-5p组(转染miR-181a-5p mimics)、anti-miR-NC组(转染antimiR-NC)、anti-miR-181a-5p组(转染anti-miR-181a-5p)、Caerulein+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC后进行Caerulein处理)、Caerulein+anti-miR-181a-5p组(转染anti-miR-181a-5p后进行Caerulein处)、Caerulein+pcDNA组(转染pcDNA后进行Caerulein处理)、Caerulein+pcDNA-PIAS1组(转染pcDNA-PIAS1后进行Caerulein处理)、Caerulein+anti-miR-181a-5p+si-NC组(anti-miR-181a-5p和si-NC共转染后进行Caerulein处理)、Caerulein+anti-miR-181a-5p+siPIAS1组(anti-miR-181a-5p和si-PIAS1共转染后进行Caerulein处理),用脂质体法转染至AR42J和MPC-83细胞.酶联免疫吸附试验法检测雨蛙肽处理AR42J和MPC-83细胞的TNF-α和IL-6的表达;qRT-PCR检测AR42J和MPC-83细胞中miR-181a-5p、PIAS1mRNA的表达水平; Western Blot检测蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性.结果雨蛙肽处理AR42J和MPC-83细胞后, TNF-α和IL-6的表达显著升高; miR-181a-5p的表达水平显著升高;PIAS1 mRNA和蛋白的表达水平显著降低. miR-181a-5p抑制表达和PIAS1过表达抑制TNF-α和IL-6的表达,抑制细胞凋亡. miR-181a-5p靶向负调控PIAS1;抑制PIAS1表达逆转了抑制miR-181a-5p对雨蛙肽处理AR42J和MPC-83细胞的凋亡抑制作用.结论抑制miR-181a-5p表达可以抑制雨蛙肽诱导的AP腺泡细胞损伤,其机制可能与靶向调控PIAS1有关.可为AP诊断和治疗提供新靶点和新思路.     

miR-216a-5p调控XIAP对急性胰腺炎腺泡细胞增殖、凋亡的影响

背景重症急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)是消化系统常见的危重急症,临床救治难度大,病死率高,严重危及患者生命.近几年来多种miRNA在AP中的差异表达,与其发生发展及诊断和预后密切相关,进一步探索其在AP发生发展、并发症等各环节的作用有助于为AP的诊断和治疗提供新的思路和方法.研究发现miR-216a-5p通过下调MMP16可抑制肺癌细胞的侵袭; miR-216a-5p通过靶向抑制PAK2基因可抑制膀胱癌细胞的增殖能力,促进细胞凋亡. miR-216a-5p可抑制小细胞肺癌的恶性进展,影响前列腺癌细胞的增殖、迁移和宫颈癌细胞的肿瘤发生.仅发现miR-216a在AP患者外周血中高表达,但miR-216a-5p在AP的增殖凋亡中的影响及作用机制尚不清楚.目的研究miR-216a-5p对AP腺泡细胞增殖、凋亡的影响及潜在的作用机制.方法用雨蛙素(caerulein, CAE)处理大鼠胰腺腺泡AR42J构建AP模型,设置miR-NC组(转染miR-NC)、miR-216a-5p组(miR-216a-5pmimics)、anti-miR-NC组(转染antimiR-NC)、anti-miR-216a-5p组(转染anti-miR-216a-5p)、pcDNA3.1组(转染pc DNA3.1)、pcDNA3.1-XIAP组(转染pcDNA3.1-XIAP)、anti-miR-216a-5p+si-NC组(共转染anti-miR-216a-5p和si-NC)、anti-miR-216a-5p+si-XIAP(共转染anti-miR-216a-5p和si-XIAP)组,均用脂质体法转染. qRT-PCR检测AR42J细胞中miR-216a-5p的表达水平; Western Blot检测蛋白表达; MTT法检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性.结果CAE处理AR42J细胞后,miR-216a-5p的表达水平显著升高(P0.05).抑制表达miR-216a-5p和过表达XIAP细胞活性显著升高,细胞凋亡率显著降低, Cyclin D1、Bcl-2蛋白的表达水平显著升高,P21、Bax蛋白的表达水平显著下降(P0.05). miR-216a-5p靶向负调控XIAP;抑制XIAP表达逆转了抑制miR-216a-5p对CAE处理的AR42J细胞增殖促进、凋亡抑制的作用.结论抑制miR-216a-5p表达可以抑制胰腺炎腺泡细胞凋亡,促进细胞增殖,其机制可能与靶向调控XIAP有关.可为AP诊断和治疗提供新靶点和新思路.     

MiR-193a-3p通过调控S100A4表达对oxLDL诱导的血管内皮细胞损伤影响

目的 探讨miR-193a-3p对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的血管内皮细胞损伤的影响及其作用机制。方法 体外培养人脐静脉血管内皮细胞株(EVC-304),使用oxLDL处理EVC-304细胞。采用qRT-PCR与Western blot分别检测miR-193a-3p、S100钙结合蛋白A4(S100A4)的表达水平。分别将miR-NC、miR-193a-3p mimics、si-NC、si-S100A4、miR-193a-3p mimics与pcDNA、miR-193a-3p mimics与pcDNA-S100A4转染至oxLDL诱导的EVC-304细胞。采用硫代巴比妥酸法检测MDA含量,采用黄嘌呤氧化酶法检测SOD活性,检测GSH-Px活性;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证miR-193a-3p与S100A4的靶向关系;Western blot检测细胞中B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达量。结果 OxLDL处理后miR-193a-3p的表达水平降低(P0.05),S100A4的表达水平升高(P0.05),MDA的含量升高(P0.05),SOD、GSH-Px的活性降低(P0.05),Bcl-2蛋白水平降低(P0.05),细胞凋亡率升高(P0.05),Bax蛋白水平升高(P0.05);转染miR-193a-3p mimics后可降低MDA含量、细胞凋亡率及Bax蛋白水平(P0.05),提高SOD、GSH-Px活性及Bcl-2蛋白水平(P0.05),而转染si-S100A4与其作用相似;双荧光素酶报告实验证实miR-193a-3p能够靶向结合S100A4;S100A4过表达能够明显减弱miR-193a-3p过表达对oxLDL诱导的血管内皮细胞损伤的作用。结论 MiR-193a-3p可能通过靶向调控S100A4表达而减轻oxLDL诱导的血管内皮细胞氧化损伤,并抑制细胞凋亡。     

长链非编码RNA NORA影响脂多糖诱导的心肌细胞炎症反应及细胞凋亡损伤的机制研究

目的：探讨长链非编码RNA NORAD(LncRNA NORAD)是否通过调控微小RNA-378a-3p(miR-378a-3p)表达影响脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞炎症反应及细胞凋亡。方法：体外培养大鼠心肌细胞H9C2,并将细胞分为6组：对照组、LPS组(10μg/mL LPS)、LPS+阴性序列组(10μg/mL LPS+转染阴性序列si-NC)、LPS+干扰NORAD组(10μg/mL LPS+转染干扰NORAD)、LPS+干扰NORAD+miR阴性对照组(10 g/mL LPS+共转染干扰NORAD和miR阴性对照)、LPS+干扰NORAD+miR-378a-3p抑制剂组(10μg/mL LPS+共转染干扰NORAD和miR-378a-3p抑制剂),除对照组细胞外，其余组细胞LPS刺激24 h。用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组NORAD、miR-378a-3p相对表达量；用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平；以流式细胞术检测细胞凋亡率；以双荧光素酶报告实验验证NORAD与miR-378a-3p靶向结合关系。结果：与对照组比较...     

LncRNA LUCAT1通过靶向miR-199a-5p调控宫颈癌细胞活性、侵袭迁移及其分子机制

目的研究长链非编码RNA肺癌相关转录产物(LUCAT)1对宫颈癌细胞的活性、迁移和侵袭的影响,并探讨其机制。方法运用qRT-PCR法检测宫颈癌细胞Hela、正常宫颈细胞Ect1/E6E7中LUCAT1、miR-199a-5p的表达;将si-con组(转染si-con)、si-LUCAT1组(转染si-LUCAT1)、miR-199a-5p组(转染miR-199a-5p模拟物)、miR-NC组(转染miR-NC)、si-con+anti-miR-199a-5p组(共转染si-con和anti-miR-199a-5p)、si-LUCAT1+anti-miR-199a-5p组(共转染si-LUCAT1和anti-miR-199a-5p),均用脂质体法转染至Hela细胞;噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的活性;Transwell法检测各组细胞的迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与正常宫颈细胞Ect1/E6E7相比,宫颈癌细胞Hela中LUCAT1表达显著升高,miR-199a-5p表达显著降低;敲减LUCAT1、过表达miR-199a-5p均可明显抑制Hela细胞的活性、迁移和侵袭;miR-199a-5p可抑制野生型LUCAT1细胞的荧光活性,且LUCAT1可负向调控miR-199a-5p的表达;抑制miR-199a-5p可逆转敲减LUCAT1对Hela细胞的活性、迁移、侵袭的抑制作用。结论 LUCAT1可促进宫颈癌细胞的活性、迁移、侵袭,其机制可能与靶向miR-199a-5p有关,将可为宫颈癌的治疗提供靶点。     

miR-92a-3p靶向GPR124调控糖尿病肾病足细胞损伤的机制

目的研究miR-92a-3p对糖尿病肾病足细胞损伤的影响及其机制。方法构建高糖(30 mmol/L)诱导的小鼠足细胞损伤模型;将高糖+anti-miR-92a-3p组(转染anti-miR-92a-3p)、高糖+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、高糖+pcDNA组(转染pcDNA)、高糖+pcDNA-GPR124组(转染pcDNA-GPR124)、高糖+anti-miR-92a-3p+si-con组(共转染pcDNA-GPR124和si-con)、高糖+anti-miR-92a-3p+si-GPR124组(共转染pcDNA-GPR124和si-GPR124)至小鼠足细胞,用30 mmol/L高糖处理48 h。Western印迹检测各组细胞中结蛋白(Desmin)、G蛋白耦联受体(GPR)124的蛋白表达;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;qRT-PCR检测各组细胞中miR-92a-3p、GPR124的表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞荧光活性。结果与对照组相比,高糖处理组小鼠足细胞中Desmin蛋白表达和细胞凋亡率均显著升高,miR-92a-3p表达明显升高,GPR124表达明显降低(P<0.05);抑制miR-92a-3p、过表达GPR124均可下调Desmin蛋白表达和细胞凋亡率;miR-92a-3p可抑制WT-GPR124足细胞的荧光活性,且负调控GPR124的蛋白表达;敲减GPR124可逆转抑制miR-92a-3p对高糖诱导的小鼠足细胞的保护作用。结论抑制miR-92a-3p可保护高糖诱导的小鼠足细胞损伤,其机制可能与靶向GPR124有关,将可为糖尿病肾病的治疗提供新方向。     

干扰FAM201A通过调控miR-146a-5p/GATA6影响直肠癌细胞生物学行为

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)FAM201A对直肠癌细胞生物学行为的影响及其分子机制。方法 选取23例直肠癌患者的癌组织及癌旁组织，用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测序列相似性201家族成员(FAM201)A、miR-146a-5p和人GATA结合蛋白(GATA)6 mRNA的表达水平；将直肠癌细胞SW837分为si-NC组、si-FAM201A组、miR-NC组、miR-146a-5p组、si-FAM201A+anti-miR-NC组、si-FAM201A+anti-miR-146a-5p组；克隆形成实验检测集落形成数；流式细胞术检测细胞凋亡；Western印迹法检测GATA6蛋白的表达；双荧光素酶报告实验检测FAM201A与miR-146a-5p, miR-146a-5p与GATA6的靶向关系。结果 直肠癌组织中FAM201A和GATA6 mRNA表达水平升高，miR-146a-5p表达水平降低，差异有统计学意义(P<0.05)。干扰FAM201A或过表达miR-146a-5p,直肠癌细胞的集落形成数减少，细胞的凋亡率升高，差异有统计学意义(P<0....     

普鲁卡因下调miR-516a-5p减轻高糖诱导心肌细胞损伤的研究

目的 探讨普鲁卡因是否通过下调微小RNA-516a-5p(miR-516a-5p)的表达从而减轻高糖诱导心肌细胞损伤。方法体外培养大鼠心肌细胞H9C2,使用33.0 mmol/L葡萄糖处理细胞建立细胞损伤模型,分别加入不同剂量的普鲁卡因处理高糖诱导的H9C2细胞,将miR-516a-5p mimics转染至高糖诱导的H9C2细胞,随后采用普鲁卡因处理细胞;采用MTT法检测细胞活性;应用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率;比色法检测丙二醛（MDA）水平、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）法检测miR-516a-5p表达量;Western blot法检测蛋白（Cleaved-caspase3、Pro-caspase3、Bax）表达量。结果 高糖可降低细胞活性、S期细胞比例、SOD和GSH-Px活性及Procaspase3蛋白水平（P <0.05）,提高G0-G1期细胞比例、凋亡率、MDA水平、miR-516a-5p表达水平及Cleaved-caspase3、Bax蛋白水平（P <0.05）;与高糖组比较,...     

miR-20a-5p通过靶向MRTFA缓解ox-LDL诱导的内皮细胞损伤

目的探讨miR-20a-5p是否可通过靶向心肌素相关转录因子A(MRTFA)缓解氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤。方法 RT-qPCR检测miR-20a-5p在不同剂量不同时间oxLDL诱导的HUVEC中的表达; MTT法、流式细胞术和Western blot检测过表达miR-20a-5p和MRTFA对ox-LDL诱导HUVEC增殖和凋亡的影响;乳酸脱氢酶(LDH)测试盒测定过表达miR-20a-5p对ox-LDL诱导HUVEC中LDH释放的影响; ELISA法检测过表达miR-20a-5p和MRTFA对ox-LDL处理的HUVEC中氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)、内皮型一氧化氮合酶(e NOS)和丙二醛(MDA)的影响;荧光素酶报告和Western blot实验验证miR-20a-5p与MRTFA的靶向关系。结果 miR-20a-5p的表达随着ox-LDL诱导时间和剂量的增加而逐渐下降;过表达miR-20a-5p可部分逆转ox-LDL诱导对HUVEC增殖和凋亡的影响;上调miR-20a-5p可部分修复ox-LDL诱导对HUVEC氧化应激损伤; MRTFA是miR-20a-5p的靶基因;在ox-LDL诱导HUVEC中,MRTFA过表达可逆转miR-20a-5p对ox-LDL诱导HUVEC细胞增殖和凋亡、氧化应激损伤指标的影响。结论 miR-20a-5p靶向MRTFA修复ox-LDL诱导的HUVEC损伤。     

Pan3基因第2-5外显子的环状RNA对脂多糖诱导的血管内皮细胞损伤的影响及机制

目的探讨Pan3基因第2-5外显子的环状RNA(circPAN3)对脂多糖诱导的血管内皮细胞损伤的影响及机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)随机分为对照组、脂多糖组、空载体组、circPAN3组、抑制剂阴性组、抑制剂组、circPAN3+过表达阴性组和circPAN3+过表达组(n=9),检测各组细胞中circPAN3、微小RNA-138-5p(miR-138-5p)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛、超氧化物歧化酶(SOD)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤2相关蛋白(Bax)、活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表达。结果与对照组比较,脂多糖组细胞中circPAN3表达降低,miR-138-5p表达升高(0.33±0.03 vs 1.00±0.07,3.65±0.24 vs 1.00±0.05,P=0.000)。对照组、脂多糖组、空载体组及circPAN3组circPAN3水平比较,差异有统计学意义(P=0.000)。与circPAN3+过表达阴性组比较,circPAN3+过表达组LDH,丙二醛,细胞凋亡率及细胞中Bax和活化Caspase-3蛋白水平明显升高,SOD和Bcl-2蛋白水平明显降低(P=0.000)。结论脂多糖可以抑制HUVEC中circPAN3表达,过表达circPAN3可能靶向负调控miR-138-5p抑制脂多糖诱导的HUVEC氧化应激和凋亡,减轻HUVEC损伤。     

沉默CDKN2B-AS1调控miR-98-5p、STAT3对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的影响

目的]探讨细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B反义RNA 1(CDKN2B-AS1)是否通过靶向miR-98-5p影响高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤。 [方法]将HUVEC分为对照组(含5 mmol/L葡萄糖的DMEM培养)、模型组(含33.5 mmol/L葡萄糖的DMEM培养)、模型＋si-NC组、模型＋si-CDKN2B-AS1组、模型＋miR-NC组、模型＋miR-98-5p模拟物组、模型＋si-CDKN2B-AS1＋anti-miR-NC组、模型＋si-CDKN2B-AS1＋anti-miR-98-5p组。运用实时定量聚合酶链反应检测HUVEC的CDKN2B-AS1、miR-98-5p表达;Western blot检测信号转导及转录激活因子3(STAT3)蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)试剂盒检测SOD、LDH、MDA水平。双荧光素酶报告实验分析miR-98-5p与CDKN2B-AS1、STAT3的靶向结合。 [结果]高糖使HUVEC中CDKN2B-AS1、STAT3表达、凋亡率、LDH、MDA水平升高,miR-98-5p表达、SOD水平降低(P＜0.05)。沉默CDKN2B-AS1或过表达miR-98-5p后,高糖诱导的HUVEC中CDKN2B-AS1、STAT3表达、凋亡率、LDH、MDA水平降低,miR-98-5p表达、SOD水平升高(P＜0.05)。双荧光素酶报告实验显示,CDKN2B-AS1靶向miR-98-5p,miR-98-5p靶向STAT3。抑制miR-98-5p逆转了沉默CDKN2B-AS1对高糖诱导的HUVEC凋亡、氧化应激、STAT3蛋白表达的抑制作用。 [结论]沉默CDKN2B-AS1通过调节miR-98-5p/STAT3轴抑制高糖诱导的HUVEC氧化应激和凋亡,CDKN2B-AS1可作为糖尿病相关血管并发症的候选治疗靶标。     

MiR-148b-3p通过调控CDKN1B表达影响心肌细胞增殖及凋亡的分子机制

目的探讨微小RNA-148b-3p(miR-148b-3p)是否通过调控细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1B(CDKN1B)表达影响心肌细胞增殖及凋亡。方法通过Lipofectamine2000将anti-miR-NC、anti-miR-148b-3p、pcDNA、pcDNA-CDKN1B、anti-miR-NC与si-NC、anti-miR-148b-3p与si-CDKN1B转染至心肌细胞,给予10μg/ml的脂多糖(LPS)刺激24 h,分别记作LPS+anti-miR-NC组、LPS+anti-miR-148b-3p组、LPS+pcDNA组、LPS+pcDNA-CDKN1B组、LPS+anti-miR-NC+si-NC组、LPS+anti-miR-148b-3p+siCDKN1B组。使用含有10μg/mL的LPS处理H9c2细胞24 h,记作LPS组。同时将正常培养的心肌细胞作为Con组。实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测miR-148b-3p、CDKN1B的表达量;甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证miR-148b-3p与CDKN1B的靶向作用;Western blot检测细胞周期蛋白1(CyclinD1)、P21、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达量。结果与Con组比较,LPS组miR-148b-3p的表达水平显著升高(P0.05),CDKN1B mRNA及蛋白水平显著降低(P0.05),细胞存活率显著降低(P0.05),细胞凋亡率显著升高(P0.05),CyclinD1、Bcl-2蛋白水平显著降低(P0.05),P21、Bax蛋白水平显著升高(P0.05);与LPS+anti-miR-NC组比较,LPS+anti-miR-148b-3p组心肌细胞存活率显著升高(P0.05),细胞凋亡率显著降低(P0.05),CyclinD1、Bcl-2蛋白水平显著升高(P0.05),P21、Bax蛋白水平显著降低(P0.05);与LPS+pc DNA组比较,LPS+pc DNACDKN1B组心肌细胞存活率显著升高(P0.05),细胞凋亡率显著降低(P0.05),Cyclin D1、Bcl-2蛋白水平显著升高(P0.05),P21、Bax蛋白水平显著降低(P0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-148b-3p可靶向结合CDKN1B;与LPS+anti-miR-NC+si-NC组比较,LPS+anti-miR-148b-3p+si-CDKN1B组细胞存活率显著降低(P0.05),细胞凋亡率显著升高(P0.05),Cyclin D1、Bcl-2蛋白水平显著降低(P0.05),P21、Bax蛋白水平显著升高(P0.05)。结论抑制miR-148b-3p的表达可通过靶向调控CDKN1B表达从而促进LPS诱导的心肌细胞增殖,抑制细胞凋亡。     

miR-181a-5p调控LIF的表达调节胰腺腺泡细胞凋亡的分子机制

背景急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)发病迅速,并发全身感染,因此早期的高效治疗对控制病情起到关键作用.微小RNA(microRNA, miRNA)在AP中的作用机制及临床应用的研究成为近几年的热点.其在AP发生发展及转归中的作用有助于为AP的诊断和治疗提供新思路.目的探讨miR-181a-5p对雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞AR42J凋亡的影响及机制.方法运用ELISA法检测雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞中AMY、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)的表达;将Cerulein+anti-miR-con组(转染anti-miR-con)、Cerulein+anti-miR-181a-5p组(转染anti-miR-181a-5p)、Cerulein+si-con组(转染si-con)、Cerulein+si-白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor, LIF)组(转染si-LIF),均用脂质体法转染至AR42J细胞,再用15 nmol/L的雨蛙素处理8h;流式细胞术法检测各组细胞的凋亡; qRT-PCR检测各组细胞中miR-181a-5p mRNA和LIF mRNA的表达; Western blot检测各组细胞中LIF、caspase-3的蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性.结果与对照组相比,雨蛙素处理8 h是AMY、TNF-α和IL-6的含量均升高的时间点,且细胞凋亡率显著降低(P 0.05);与Control组相比,Cerulein组AR42J细胞中miR-181a-5p mRNA表达显著下调, LIF mRNA和蛋白表达显著上调(P0.05);过表达miR-181a-5p、敲减LIF均可抑制雨蛙素诱导的AR42J细胞凋亡的促进作用; miR-181a-5p可抑制野生型LIF细胞的荧光活性,且可负向调控LIF的蛋白表达.结论 miR-181a-5p可抑制雨蛙素诱导的AR42J细胞的凋亡,其机制可能与靶向LIF有关,将可为AP的治疗提供新方向.     

金樱子总黄酮上调miR-1247-3p表达对缺氧/复氧诱导心肌细胞损伤的影响

目的:观察金樱子总黄酮(RLMTF)对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响及可能作用机制。方法:采用H/R诱导大鼠心肌细胞H9C2建立细胞损伤模型,采用不同剂量的金樱子总黄酮处理细胞,实验分为Con组、H/R组、H/R+RLMTF-L组、H/R+RLMTF-M组、H/R+RLMTF-H组、H/R+miR-NC组、H/R+miR-1247-3p组、H/R+RLMTF+anti-miR-NC组、H/R+RLMTF+anti-miR-1247-3p组。使用试剂盒检测丙二醛(MDA)水平与超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;流式细胞术检测细胞凋亡率;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测miR-1247-3p表达。结果:与Con组比较,H/R组MDA水平、细胞凋亡率和Cleaved-Caspase 3、Cleaved-Caspase 9蛋白水平升高(P<0.05),miR-1247-3p表达量和SOD、GSH-Px活性降低(P<0.05)。与H/R组比较,H/R+RLMTF-L组、H/R+RLMTF-M组、H/R+RLMTF-H组MD...     

lncRNA DANCR靶向调控miR-193a-3p表达对缺氧诱导的神经细胞氧化损伤的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)DANCR对缺氧诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞PC12氧化损伤的影响及其可能作用机制。方法:选取榆林市星元医院于2019年10月—2021年10月就诊的缺血性脑卒中病人40例为疾病组,以同期30名健康体检者为正常组,检测lncRNA DANCR、miR-193a-3p表达量,Pearson法分析血清lncRNA DANCR与miR-193a-3p的相关性;建立缺氧诱导的PC12细胞损伤模型,si-NC、si-DANCR、miR-NC、miR-193a-3p mimics分别转染至PC12细胞后缺氧处理24 h, si-DANCR+anti-miR-NC、si-DANCR+anti-miR-193a-3p分别共转染至PC12细胞后缺氧处理24 h;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测lncRNA DANCR、miR-193a-3p表达量;试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性;用凋亡试剂盒检测凋亡率;双荧光素酶报告实验检测lncRNA DANCR、miR-193a-3p靶向关系;蛋白质免疫印...     

普鲁卡因对缺氧诱导的N9细胞、PC12细胞损伤的影响及分子机制

[目的]探讨普鲁卡因对缺氧诱导的N9细胞、PC12细胞损伤的影响及分子机制。[方法] N9细胞、PC12细胞分为对照组、缺氧组、低、中、高剂量普鲁卡因组(缺氧+2、6、18 mg/L普鲁卡因)、anti-miR-con组、anti-miR-369-3p组、miR-con+高剂量普鲁卡因组(转染miR-con+缺氧+18 mg/L普鲁卡因)、miR-369-3p+高剂量普鲁卡因组(转染miR-369-3p+缺氧+18 mg/L普鲁卡因)。流式细胞术检测细胞凋亡,试剂盒检测细胞中活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性,ELISA检测炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)水平,RT-qPCR检测miR-369-3p表达水平。[结果]相比于对照组,缺氧组N9细胞、PC12细胞凋亡率升高,MDA、ROS含量升高,SOD活性降低,TNF-α、IL-1β、IL-6水平升高,miR-369-3p表达水平升高(P<0.05)。相比于缺氧组,低、中、高剂量普鲁卡因组N9细胞和PC12细胞凋亡率降低,MDA、ROS含量...     

Diplacone通过抑制氧化应激作用及NF-κB信号通路活性降低Hcy诱导的血管内皮细胞损伤

目的采用高同型半胱氨酸血症(HHcy)诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC),建立血管内皮细胞炎性损伤模型,通过Diplacone预处理,在之前实验的基础上进一步探讨Diplacone对血管内皮细胞可能的保护作用机制。方法以HUVEC为研究对象,经过不同浓度的Diplacone预孵育2 h后,加入2 mmol/L同型半胱氨酸(Hcy)继续处理12 h,流式细胞术检测细胞凋亡率;通过检测活性氧(ROS)细胞比率和抗氧化指标超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性及MDA含量的变化反应细胞氧化应激水平。Western blot和qRTPCR检测核因子κB(NF-κB)蛋白和mRNA表达水平的变化。结果与对照组比较,2 mmol/L Hcy模型组细胞凋亡率显著增加,ROS细胞比率和MDA含量显著升高,抗氧化指标SOD、GSH-Px的活性显著降低,NF-κB的蛋白和mRNA表达水平逐渐升高。与2 mmol/L Hcy模型组比较,0.1～10μmol/L Diplacone预处理后细胞凋亡率逐渐降低;氧化应激指标ROS细胞比率和MDA含量降低,抗氧化指标SOD、GSH-Px的活性增加; NF-κB的蛋白和mRNA表达水平逐渐降低。结论 Diplacone具有抑制Hcy诱导的HUVEC内皮损伤的作用,且作用机制可能是通过降低氧化应激作用和抑制NF-κB信号通路活性而降低细胞凋亡率,抑制细胞凋亡。