抑制AMPK观察清燥救肺汤对肺癌细胞自噬启动相关蛋白表达的影响

目的 观察应用腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）抑制剂（compound C）后，清燥救肺汤对肺癌细胞自噬启动相关蛋白AMPK，哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR），UNC-51样激酶1（ULK1）表达的影响。方法 雄性C57BL/6J小鼠随机分为模型组，环磷酰胺（CTX）组（50 mg·kg^-1），清燥救肺汤组（11 g·kg^-1），AMPK抑制剂组（10 mg·kg^-1），清燥救肺汤加AMPK抑制剂组（清燥加抑制剂组）（11 g·kg^-1+10 mg·kg^-1）。小鼠右腋皮下注射Lewis肺癌细胞构建肺癌荷瘤模型。造模24 h后，CTX组腹腔注射给药，隔日1次，共7次，AMPK抑制剂组与清燥加抑制剂组腹腔注射compound C，每日1次，共14 d。清燥救肺汤组和清燥加抑制剂组，造模前后14 d均以中药设定剂量灌胃给药。实验结束后处死各组小鼠并取荷瘤组织，统计各组瘤质量；透射电镜（TEM）观察各组肺癌组织自噬溶酶体的生成情况；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测AMPK，磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（p-AMPK），mTOR，磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR），ULK1，磷酸化UNC-51样激酶1（p-ULK1），微管相关蛋白1轻链3B（LC3B）和p62蛋白的表达；苏木素-伊红（HE）染色观察各组肺癌组织病理学变化。结果 与模型组比较，清燥救肺汤组瘤质量降低（P<0.01），电镜下发现自噬溶酶体生成，p-AMPK，p-ULK1，LC3B，LC3B-Ⅱ蛋白表达和p-AMPK/AMPK，p-ULK1/ULK1，LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ均升高（P<0.05，P<0.01），p-mTOR，p62蛋白表达和p-mTOR/mTOR均降低（P<0.05）。与清燥救肺汤组比较，清燥加抑制剂组电镜下未见自噬溶酶体生成，p-AMPK，p-ULK1，LC3B，LC3B-Ⅱ蛋白表达和p-AMPK/AMPK，p-ULK1/ULK1，LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ均明显降低（P<0.05，P<0.01），p62蛋白表达升高（P<0.05）。HE染色结果显示，各给药组肺癌组织与模型组比较，病理有明显改善。结论 清燥救肺汤能促进自噬发生标志蛋白LC3B-Ⅱ升高及p62蛋白表达降低从而诱导自噬发生，其自噬启动机制可能不是调控AMPK/mTOR/ULK1通路介导，而是通过AMPK/ULK1通路实现的。     

基于“逆流挽舟”法探索人参败毒散对溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜屏障的干预作用＊

目的 观察人参败毒散对TNBS诱导的溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜屏障的影响及其可能机制。方法 将60只雄性SD大鼠随机分组，采用TNBS诱导法造模，人参败毒散各剂量（31.2、15.6、8 g·kg^-1）连续7天灌胃。检测各组血清白介素-1β（Interleukin-1β，IL-1β）、白介素-6（Interleukin-6，IL-6）、肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）、干扰素-γ（Interferon-γ，IFN-γ）含量；结肠组织咬合蛋白（Occludin）、闭合蛋白（Claudin-5）与闭锁蛋白（ZO-1）mRNA和蛋白水平。结果 与空白（Control）组比较，模型（Model）组的血清IL-1β、IL-6、TNF-α、以及IFN-γ含量明显增高（P < 0.05），结肠组织Occludin、Claudin-5与ZO-1 mRNA和蛋白水平明显下调（P < 0.05）。经治疗后，人参败毒散高、中、低剂量（RH、RM、RL）组血清中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ含量均有降低，RH组干预结果存在统计学意义（P < 0.05）；结肠组织Occludin、Claudin-5以及ZO-1 mRNA表达和蛋白表达均有上调，且RH组干预效应明显优于其他给药组，具有统计学意义（P < 0.05）。结论 “逆流挽舟法”代表方人参败毒散能有效改善UC大鼠症状，其作用机制可能与抑制炎性细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ释放，上调结肠黏膜Occludin、Claudin-5与ZO-1 mRNA和蛋白表达，促进肠上皮紧密连接修复，改善肠黏膜通透性有关。     

基于AMPK/mTOR/ULK1自噬相关通路探讨左归降糖通脉方对AGEs合并缺糖缺氧星形胶质细胞炎性损伤的影响

目的 探讨左归降糖通脉方对糖基化终末产物（AGEs）合并缺糖缺氧（OGD）损伤后星形胶质细胞（AS）的影响及干预机制。方法 使用细胞增殖与活性检测试剂盒（CCK-8）确定AGEs作用浓度及OGD时间，选择左归降糖通脉方（ZGJTTMP）含药血浆的作用浓度；将星形胶质细胞随机分为空白组、模型（AGEs+OGD）组、ZGJTTMP组、腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）抑制剂（Compound C）组、AMPK激动剂（AICAR）组、ZGJTTMP+AICAR组，倒置显微镜下观察各组细胞形态结构，CCK-8法检测各组细胞存活率，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组细胞中白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量；电镜下观察各组细胞内自噬小体的数目，免疫荧光染色法观察各组细胞中微管相关蛋白1轻链3（LC3）的表达情况，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组细胞LC3、p62、磷酸化（p）-AMPK、AMPK、磷酸化（p）-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、mTOR、磷酸化（p）-UNC-51样激酶1（ULK1）、ULK1蛋白的表达情况。结果 选择AGEs 200 mg·L^-1合并OGD 6 h作为最适造模条件，5%作为ZGJTTMP含药血浆的最佳作用体积分数。倒置显微镜下见造模后细胞受损严重，ZGJTTMP组与Compound C组细胞损伤得到明显改善；ELISA结果示模型组IL-1β、IL-6、TNF-α的含量显著增加（P<0.01），ZGJTTMP组与Compound C组炎症因子含量显著下降（P<0.01）；电镜下可见模型组细胞内自噬小体数目明显增多，免疫荧光结果示LC3荧光表达面积显著增加（P<0.01），ZGJTTMP组与Compound C组细胞内自噬小体数目明显减少，LC3表达面积显著减少（P<0.01）；Western blot结果显示，与空白组比较，模型组细胞LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p-AMPK/AMPK蛋白表达显著升高（P<0.01），p62、p-mTOR/mTOR、p-ULK1/ULK1显著下降（P<0.01），与模型组比较，ZGJTTMP组与Compound C组细胞内LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p-AMPK/AMPK蛋白表达显著下降（P<0.01），p62、p-mTOR/mTOR、p-ULK1/ULK1显著升高（P<0.01）。结论 ZGJTTMP对AGEs合并OGD炎性损伤的星形胶质细胞具有保护作用，这一作用是通过抑制了AMPK/mTOR/ULK1自噬相关通路的激活，从而抑制了自噬的过度表达实现的。     

基于AMPK/mTOR/ULK1信号通路介导的自噬探讨芪黄益气摄血方治疗免疫性血小板减少症模型小鼠的作用机制

目的 基于腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/Unc-51样激酶1（AMPK/mTOR/ULK1）信号通路介导的自噬探讨芪黄益气摄血方治疗免疫性血小板减少症（ITP）模型小鼠的作用机制。方法 50只BALB/c小鼠随机分为5组，分别为正常组、模型组、芪黄益气摄血方高、低剂量组和强的松组，每组10只。采用豚鼠抗小鼠血小板血清（APS）腹腔注射方法，建立ITP小鼠模型；注射APS后的第8天，各组分别灌胃给药，连续14 d。检测外周血血小板计数（PLT）和血红蛋白（Hb）浓度变化；分离脾脏、胸腺组织，称质量，计算脏器指数；取胸骨做骨髓涂片，显微镜下进行骨髓巨核细胞分类；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清血小板生成素（TPO）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转化生长因子-β₁（TGF-β₁）、γ干扰素（IFN-γ）水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测脾脏AMPK、mTOR、ULK1、微管相关蛋白1轻链3（LC3）、自噬关键分子酵母Atg6同系物（Beclin1）、p62 mRNA表达水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测脾脏AMPK、p-AMPK、p-mTOR、p-ULK1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、p62蛋白表达水平。结果 与正常组比较，模型组小鼠外周血PLT计数、Hb及TPO水平明显下降（P<0.05，P<0.01），脾脏和胸腺指数显著升高（P<0.01），骨髓产板巨核细胞数显著减少（P<0.01），血清IL-6、TNF-α、IFN-γ水平显著升高（P<0.01），而IL-10、TGF-β₁水平显著降低（P<0.01）；与模型组比较，芪黄益气摄血方高、低剂量组及强的松组显著增加模型小鼠PLT计数、TPO水平（P<0.01），明显降低脾脏和胸腺指数（P<0.05，P<0.01），明显增加骨髓产板巨核细胞数（P<0.05，P<0.01），明显降低血清IL-6、TNF-α、IFN-γ水平（P<0.05，P<0.01），明显提高IL-10、TGF-β₁水平（P<0.05，P<0.01）；与芪黄益气摄血方低剂量组比较，芪黄益气摄血方高剂量组和强的松组在改善PLT计数、细胞炎性因子水平方面呈现不同程度的显著性差异（P<0.05，P<0.01）。Real-time PCR和Western blot结果显示，与正常组比较，模型组小鼠脾脏AMPK、LC3、Beclin1 mRNA和p-AMPK/AMPK、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1蛋白表达均明显上调（P<0.05，P<0.01），mTOR、ULK1、p62 mRNA和p-mTOR、p-ULK1、p62蛋白表达水平明显下调（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，芪黄益气摄血方高、低剂量组及强的松组可明显下调脾脏AMPK、LC3、Beclin1 mRNA和p-AMPK/AMPK、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1蛋白表达（P<0.05，P<0.01），同时明显上调mTOR、ULK1、p62 mRNA和p-mTOR、p-ULK1、p62蛋白表达水平（P<0.05，P<0.01）。结论 芪黄益气摄血方可能通过调控AMPK/mTOR/ULK1信号通路抑制自噬的过度发生，从而调节免疫失耐受，发挥治疗ITP作用。     

益肾通络方对膜性肾病大鼠的肾保护作用及对AMPK/mTOR/ULK1信号通路的影响

目的 通过观察益肾通络方对膜性肾病大鼠自噬相关蛋白的影响,探讨其对膜性肾病大鼠肾脏保护作用的可能分子机制。方法 80只SD大鼠随机抽取20只设为正常组,其余大鼠均采用预免疫和尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白（C-BSA）的方法制作膜性肾病大鼠模型。将模型复制成功的SD大鼠随机分为模型组,盐酸贝那普利组（10 mg·kg^-1）及益肾通络方低、中、高剂量组（6.61,13.22,26.44 g·kg^-1）,给予相应剂量的药物灌胃,每天1次,连续灌胃4周。灌胃结束后,检测大鼠血浆白蛋白（ALB）,甘油三酯（TG）,胆固醇（TC）,血肌酐（SCr）,尿素氮（BUN）,24 h尿蛋白（UTP）定量指标的变化;苏木素-伊红（HE）染色、马松（Masson）染色、碘酸六胺银（PASM）染色及透射电镜下观测肾脏病理形态改变;免疫荧光法检测肾小球中免疫球蛋白（Ig）G和补体C3的沉积;免疫组化（IHC）法观察自噬标志蛋白Beclin-1,微管相关蛋白轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）,p62蛋白的表达情况;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测腺苷酸活化蛋白激酶/雷帕霉素靶蛋白/Unc-51样激酶1（AMPK/mTOR/ULK1）信号通路相关蛋白的表达情况。结果 与正常组比较,模型组大鼠UTP水平显著升高（P<0.01）,血清中TG,TC水平显著升高（P<0.01）,ALB水平显著下降（P<0.01）;肾小球结构紊乱,体积增大,基底膜可见不同程度增厚和部分肾小管空泡样变性,大量胶原纤维和嗜复红蛋白沉积,足细胞足突广泛融合,肾小球毛细血管襻IgG和补体C3弥漫性沉积;自噬标志蛋白Beclin-1,LC3Ⅱ表达显著降低（P<0.01）,p62蛋白表达显著升高（P<0.01）;磷酸化-腺苷酸活化蛋白激酶（p-AMPK）蛋白表达显著降低（P<0.01）,磷酸化-雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）,磷酸化-Unc-51样激酶1（p-ULK1）蛋白表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,益肾通络方各剂量组、盐酸贝那普利组大鼠TG,TC,UTP水平均有不同程度降低（P<0.05,P<0.01）,ALB水平显著升高（P<0.01）,血清SCr,BUN水平均差异无统计学意义;肾脏病理损害不同程度减轻;自噬标志蛋白Beclin-1,LC3Ⅱ表达水平不同程度升高（P<0.05,P<0.01）,p62蛋白表达不同程度降低（P<0.05,P<0.01）;p-AMPK蛋白表达水平不同程度升高（P<0.05,P<0.01）,p-mTOR,p-ULK1蛋白表达水平不同程度降低（P<0.05,P<0.01）。结论 益肾通络方对膜性肾病大鼠具有肾脏保护作用,其机制可能与调控AMPK/mTOR/ULK1信号通路相关蛋白的表达,激活自噬有关。     

探讨补阳还五汤通过AMPK/ULK1线粒体自噬通路抑制细胞焦亡治疗糖尿病周围神经病变

目的 观察补阳还五汤通过腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）/UNC-51样激酶1（ULK1）线粒体自噬通路抑制细胞焦亡治疗糖尿病周围神经病变（DPN）的作用机制。方法 动物实验采用雄性SPF级SD雄性大鼠（6~7周）60只,按体质量进行编号,计算机产生随机数字法随机分为4组,分别为正常组、模型组、α-硫辛酸组（60 mg·kg^-1）、补阳还五汤组（15 g·kg^-1）,每组15只。通过注射链脲佐菌素（STZ）制备糖尿病模型。造模成功后α-硫辛酸组和补阳还五汤组分别给与相应药物,正常组和模型组给予生理盐水。给药12周结束后检测感觉神经传导速度（SNCV）和机械性痛阈（PWT）。免疫组化和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测背根神经节（DRG）中磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（p-AMPK）、磷酸化UNC-51样激酶1（p-ULK1）、微管相关蛋白1轻链3（LC3）、选择性自噬受体（p62/SQSTM1）、Beclin1、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）、胱天蛋白酶-1（Caspase-1）、白细胞介素-1β（IL-1β）的表达。免疫荧光检测gasdermin D的N端（N-GSDMD）表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠空腹血糖显著升高（P<0.01）,SNCV、PWT显著降低（P<0.01）,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、p-AMPK/AMPK、p-ULK1/ULK1显著降低（P<0.01）,p62、NLRP3、N-GSDMD/GSDMD、IL-1β、剪切的（cleaved） Caspase-1/Caspase-1显著升高（P<0.01）;与模型组比较,各用药组SNCV、PWT显著升高（P<0.01）,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、p-AMPK/AMPK、p-ULK1/ULK1明显升高（P<0.05,P<0.01）,p62、N-GSDMD/GSDMD、cleaved Caspase-1/Caspase-1、NLRP3、IL-1β明显降低（P<0.05,P<0.01）;与α-硫辛酸组比较,补阳还五汤组SNCV、PWT明显升高（P<0.05）,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p-ULK1/ULK1明显升高（P<0.05）,NLRP3、N-GSDMD/GSDMD明显降低（P<0.05）。结论 补阳还五汤通过AMPK/ULK1通路调节线粒体自噬抑制细胞焦亡,防治DPN,其治疗效果较α-硫辛酸可能更好。     

黄连粗多糖协同小檗碱改善溃疡性结肠炎肠黏膜屏障损伤的作用

目的 考察黄连粗多糖与小檗碱在溃疡性结肠炎小鼠治疗中的协同作用。方法 采用雄性BALB/c小鼠30只随机分为5组,除正常组6只外,其余在小鼠日常饮水中给予5%葡聚糖硫酸钠建立结肠炎模型。建模成功后,每组分别进行灌胃给药4 d,每日1次,小檗碱组（100 mg·kg^-1 BBR）、小檗碱+低剂量粗多糖组（100 mg·kg^-1 BBR+22.8 mg·kg^-1 CCP）、小檗碱+高剂量粗多糖组（100 mg·kg^-1 BBR+45.6 mg·kg^-1 CCP）,模型组和正常组灌胃同体积生理盐水。实验结束后处死小鼠提取结肠,通过蛋白免疫印迹法检测小鼠结肠组织紧密连接闭锁连接蛋白-1（ZO-1）、紧密连接蛋白-1（Claudin-1）和闭合蛋白（Occludin）蛋白的表达。以正常组为对照,评价各治疗组模型小鼠疾病活动指数（DAI）评分、结肠长度、结肠组织形态和结肠紧密连接蛋白的表达水平。结果 与正常组比较,模型组小鼠ZO-1、Claudin-1和Occludin蛋白表达显著降低（P<0.01）;与模型组比较,小檗碱组Claudin-1蛋白表达无明显差异,ZO-1和Occludin蛋白表达显著升高（P<0.01）,黄连粗多糖联合小檗碱组Claudin-1、ZO-1和Occludin蛋白表达显著升高（P<0.01）;与小檗碱组比较,黄连粗多糖联合小檗碱组紧密连接蛋白表达明显强于小檗碱单独给药（P<0.05）。结论 黄连粗多糖协同小檗碱给药能有效改善溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜屏障损伤。     

基于AMPK/mTOR自噬通路探讨芍药苷保护溃疡性结肠炎小鼠的作用机制

目的 探讨芍药苷通过腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）自噬通路对溃疡性结肠炎（UC）小鼠的保护作用机制研究。方法 自由饮用4%葡聚糖硫酸钠（DSS）建立UC小鼠模型，56只BALB/c雄性小鼠，随机分为模型组、AMPK抑制剂组（20 mg·kg^-1）、芍药苷（50 mg·kg^-1）+抑制剂（20 mg·kg^-1）组、芍药苷高剂量组（50 mg·kg^-1）、中剂量组（25 mg·kg^-1）、低剂量组（12.5 mg·kg^-1）药物干预7 d后，通过比较小鼠体质量、疾病活动指数（DAI）变化和苏木素-伊红（HE）染色结果判断芍药苷对UC的保护作用。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组小鼠血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）的水平，免疫荧光检测结肠中微管相关蛋白1轻链3（LC3）的含量，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测结肠组织中AMPK、mTOR蛋白及其磷酸化蛋白p-AMPK、p-mTOR，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测AMPK、mTOR、Beclin1、LC3和p62的mRNA表达水平。结果 与空白组比较，模型组小鼠体质量下降、DAI评分升高、结肠出现严重的病理学损伤，炎症因子TNF-α、IL-6在血清中含量上升（P<0.01），LC3和p-AMPK/AMPK在结肠组织中蛋白水平下调，p-mTOR/mTOR蛋白水平上调（P<0.01）；AMPK、LC3的mRNA表达水平下调，mTOR、p62的mRNA表达上调（P<0.01）。与模型组和芍药苷+抑制剂组比较，经芍药苷治疗后小鼠体质量上升、DAI评分降低、结肠组织病理损伤减轻，炎症因子TNF-α、IL-6在血清中含量下降（P<0.05），LC3和p-AMPK/AMPK在结肠组织中蛋白水平上调，p-mTOR/mTOR蛋白水平下调（P<0.01），AMPK、Beclin1、LC3的mRNA表达水平上调，mTOR、p62的mRNA表达下调（P<0.01），抑制剂组小鼠结肠组织病理损伤严重，各项指标趋势与芍药苷高剂量组完全相反。结论 芍药苷可通过激活AMPK/mTOR信号通路，增强自噬，减轻UC小鼠的炎症损伤，从而起到保护作用。     

基于TRPV1对动脉血管平滑肌的自噬作用探讨人参汤治疗AS的作用机制

目的 基于香草酸受体亚型1（TRPV1）对动脉血管平滑肌的自噬作用探讨《金匮要略》人参汤治疗动脉粥样硬化（AS）的作用机制。方法 SPF级8周龄雄性C57BL/6J小鼠14只作为正常组,8周龄载脂蛋白E基因敲除（ApoE^-/-）小鼠70只作为模型组。模型组采用高脂饲料喂食8周制备AS小鼠模型,随后随机分为模型组、人参汤低、中、高剂量（2.715、5.43、10.68 g·kg^-1·d^-1）组和辛伐他汀（0.02 g·kg^-1·d^-1）组,连续给药8周。8周后,取血清,采用检测试剂盒测定血清总胆固醇（CHO）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平,观察小鼠血脂水平的变化;取主动脉,采用苏木素-伊红（HE）染色观察主动脉根部整体的病理情况,采用油红O染色检测主动脉斑块内脂质沉积情况,并计算主动脉根部面积占管腔面积百分比;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测小鼠主动脉组织中TRPV1、腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（p-AMPK）及自噬效应蛋白-1（Beclin-1）、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）、微管相关蛋白1轻链Ⅰ（LC3Ⅰ）的表达情况。结果 与正常组比较,模型组小鼠血清中CHO、TG、LDL-C水平显著升高,HDL-C水平显著降低,主动脉根部斑块面积显著增多（P<0.01）;与模型组比较,人参汤各剂量组可明显降低AS模型小鼠血清中CHO、TG、LDL-C水平（P<0.05,P<0.01）,人参汤低、中剂量组最为显著（P<0.01）。与正常组比较,辛伐他汀组、人参汤低、中、高剂量组均能明显减少主动脉根部斑块面积（P<0.05,P<0.01）,其中人参汤高剂量组效果减轻斑块效果最为显著（P<0.01）。与正常组比较,模型组小鼠的TRPV1、p-AMPK/AMPK、Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的相对表达量明显降低（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,人参汤中、高剂量组TRPV1、p-AMPK/AMPK、Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的相对表达量均明显升高（P<0.05,P<0.01）。结论 《金匮要略》人参汤具有抗AS作用,其作用机制可能是通过调节TRPV1的表达上升,进而恢复了由AMPK介导的自噬水平实现的。     

柴胡加龙骨牡蛎汤对帕金森病伴发抑郁模型大鼠的神经保护作用及对AMPK/mTOR信号通路的影响

目的 观察柴胡加龙骨牡蛎汤（CLMT）对帕金森病伴发抑郁（PDD）模型大鼠多巴胺能神经元的保护作用，并基于腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（AMPK/mTOR）信号通路探讨其作用机制。方法 80只雄性SD大鼠，随机选取10只作为正常组，其余采用长期低剂量颈背部皮下注射鱼藤酮联合慢性不可预见性温和应激（CUM）建立PDD大鼠模型，将造模成功的PDD大鼠随机分为模型组、西药组（多巴丝肼0.032 g·kg^-1+盐酸氟西汀0.002 g·kg^-1）、CLMT低、中、高剂量组（5、10、20 g·kg^-1），每组10只，正常组和模型组予以等体积生理盐水灌胃，连续4周。旷场实验、爬杆实验评估各组大鼠行为学变化；高效液相色谱法（HPCL）测定脑脊液中多巴胺（DA）、5-羟色胺（5-HT）含量；苏木素-伊红（HE）染色法观察各组大鼠黑质DA能神经元病理改变；免疫组化法（IHC）检测黑质酪氨酸羟化酶（TH）阳性表达；免疫荧光法（IF）检测黑质α-突触核蛋白（α-synuclein）表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测纹状体微管相关蛋白1轻链3（LC3）、AMPK、磷酸化AMPK（p-AMPK）、mTOR、磷酸化mTOR（p-mTOR）蛋白表达。结果 与正常组比较，模型组大鼠旷场实验水平运动总距离及中央区域活动时间均明显减少（P<0.05，P<0.01），爬杆时间明显缩短（P<0.01），评分升高（P<0.01），脑脊液中DA、5-HT含量减少（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，CLMT高剂量组和西药组水平运动总距离明显增加及中央区域活动时间均增加（P<0.05，P<0.01），爬杆时间延长（P<0.05），评分下降（P<0.05，P<0.01），DA及5-HT含量增加（P<0.05，P<0.01）。与正常组比较，模型组大鼠黑质DA能神经元数量明显减少，胞体缩小且排列疏松，α-synuclein荧光表达显著增强（P<0.01），TH阳性表达显著降低（P<0.01）；与模型组比较，CLMT高剂量组和西药组黑质DA能神经元数量增加，胞体增大，α-synuclein荧光表达明显减弱（P<0.05，P<0.01），TH表达显著增加（P<0.01）。与正常组比较，模型组纹状体LC3Ⅱ/Ⅰ、p-AMPK/AMPK表达明显降低（P<0.05，P<0.01）、p-mTOR/mTOR表达显著增加（P<0.01）；与模型组比较，CLMT高剂量组和西药组LC3Ⅱ/Ⅰ、p-AMPK/AMPK表达均明显增加（P<0.05，P<0.01）、p-mTOR/mTOR表达显著降低（P<0.01）。结论 CLMT可抑制鱼藤酮神经毒性，发挥神经保护作用，提高DA水平，从而改善帕金森病大鼠抑郁状态，其机制可能与调控AMPK/mTOR信号通路，激活自噬，促进异常聚集的α-synuclein降解有关。