鱼腥草素钠对铜绿假单胞菌生物被膜的清除作用

目的研究鱼腥草素钠对铜绿假单胞菌早期生物被膜及成熟期生物被膜的清除作用。方法用96孔板建立体外铜绿假单胞菌生物被膜,给药24 h后MTT法检测生物被膜最低清除浓度(sessile minimal eradicating concentration,SMEC),扫描电镜下观察药物对生物膜形态影响。结果鱼腥草素钠对铜绿假单胞菌生物被膜的SMEC50,早期是15.6 mg/L,成熟期是250 mg/L,在早期生物被膜向成熟生物被膜发展过程中SMEC50均在250 mg/L,镜下观察250mg/L药物质量浓度能清除大部分的生物被膜,同时可使铜绿假单胞菌发生形态变异。结论鱼腥草素钠对早期及成熟期的生物被膜有一定的清除作用,对早期生物被膜的清除作用更强于成熟期生物被膜。     

鱼腥草素钠对铜绿假单胞菌黏附的清除作用及对生物被膜形成的影响

目的:研究鱼腥草素钠(houttuyfonate sodium,SH)对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)黏附的清除作用及对生物被膜(biofilm,BF)形成的影响。方法:用96孔板孔建立铜绿假单胞菌黏附生物被膜,MTT法检测膜内菌的代谢变化、评价药物对黏附菌的最小清除浓度(minimum eliminateing concentration,MEC)及最小抑膜浓度(sessile minimal inhibitoryconcentration,SMIC);菌落计数法观察药物对黏附、膜内菌量影响;扫描电镜观察药物对受试菌黏附作用及生物被膜的形态结构影响。结果:鱼腥草素钠对铜绿假单胞菌的MEC80为500 mg·L-1,MEC50为125 mg·L-1,对铜绿假单胞菌早期生物被膜和成熟生物被膜SMIC80均为500 mg·L-1,早期生物被膜、成熟生物被膜SMIC50分别为31.25,1.95 mg·L-1。250 mg·L-1药物浓度使载体上黏附的及初步生物被膜、成熟生物被膜内的活菌数明显减少,和对照组比较差异显著(P<0.05),扫描电镜观察黏附载体上的细菌明显减少,连续用药后,成熟生物被膜阶段载体上未见有生物被膜结构,菌量明显减少并且细菌形态发生变异,由杆状变为球杆状。结论:鱼腥草素钠对铜绿假单胞菌的黏附有较强的清除活性,通过连续给药能抑制铜绿假单胞菌生物被膜的形成。     

大蒜提取液与环丙沙星杀菌活性的联合效应研究

目的:测定大蒜提取液与环丙沙星联合对铜绿假单胞菌PAO1、PAO-JP2生物被膜的影响进行研究,探讨联合用药对生物被膜细菌杀菌活性的作用。方法:采用棋盘法设计,分为空白对照组、大蒜提取液组、环丙沙星组、大蒜和环丙沙星组。结果:1/16、1/4MIC的大蒜提取液单独作用并不能使BF活菌数减少,但是1/16、1/4MIC的大蒜提取液却可以增强1/4MIC、1/2MIC、1MIC的环丙沙星对BF细菌的抑制作用。结论:大蒜提取液与环丙沙星联用对PAO1、PAO-JP2生物被膜抗菌有增效作用。     

黄连解毒汤抗铜绿假单胞菌生物被膜 及与阿奇霉素协同抗菌作用

目的:研究黄连解毒汤抗铜绿假单胞菌牛物被膜及与阿奇霉素协同抗菌作用.方法:微量倍比稀释法测定黄连解毒汤对铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度(MIC),棋盘稀释法测定黄连解毒汤和阿奇霉素协同抗菌作用,MTT法测定黄连解毒汤对铜绿假单胞菌生物被膜的最小抑膜浓度(SMIC),显微镜下观察药物对生物膜形态的影响.结果:黄连解毒汤对铜绿假单胞菌的MIC 100 g·L-1,阿奇霉素200 mg·L-1,两药联合后MIC分别为25 g·L-1和25 mg·L-1抑菌分级指数(FIC)0.1875,提示两药协同作用明显.黄连解毒汤对铜绿假单胞菌生物被膜的SMIC5.1,3d均为15.6 g·L-1,7 d31.25 g·L-1;SMIC801,3,7d均为250 g·L-1,形态观察提示黄连解毒汤SMIC80浓度对铜绿假单胞菌生物被膜的抑制作用明显.结论:黄连解毒汤具有抗铜绿假单胞菌生物被膜作用,与阿奇霉素有协同抗菌作用.     

鱼腥草与左氧氟沙星联合应用对生物被膜细菌的清除作用

目的探讨鱼腥草对细菌生物被膜的影响,观察鱼腥草与左氧氟沙星联合应用对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)生物被膜的作用.方法用试管二倍稀释法测定鱼腥草和左氧氟沙星的最低抑菌浓度;用平板培养法建立生物被膜细菌体外模型;用MTT活菌计数法测定存活细菌数;用扫描电镜观察药物对生物被膜的破坏及清除作用.结果铜绿假单胞菌培养7 d后可形成稳定的生物被膜.鱼腥草或左氧氟沙星单独作用,对生物被膜的形态及存活细菌数无明显改变.二者联合应用,能破坏生物被膜的结构,显著降低膜内存活细菌数.结论鱼腥草与左氧氟沙星联合运用对生物被膜细菌具有协同杀灭作用.     

麻杏石甘汤对铜绿假单胞菌生物被膜的影响

目的研究麻杏石甘汤对铜绿假单胞菌生物被膜的影响。方法微量倍比稀释法测定麻杏石甘汤、阿奇霉素对铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度(MIC),棋盘稀释法测定二者协同抗菌作用,MTT法评价二者对铜绿假单胞菌生物被膜SMIC(SMIC50、SMIC80)的影响,镀银染色法观察麻杏石甘汤对铜绿假单胞菌生物被膜形态的影响。结果麻杏石甘汤SMIC50和SMIC80分别为250,1 000 mg.ml-1;500 mg.ml-1的麻杏石甘汤对铜绿假单胞菌生物被膜的形态有显著影响。结论麻杏石甘汤对铜绿假单胞菌生物被膜有较强的抑制作用。     

大蒜提取液与环丙沙星联合对铜绿假单胞菌PAO1与PAO-JP2的形态学影响

目的:采用银染法快速鉴定、对铜绿假单胞菌PAO1、PAO-JP2生物被膜形态学的比较,应用大蒜提取液和环丙沙星抗菌药,以研究QS系统影响铜绿假单胞形成生物被膜的机制。方法:分空白对照组,大蒜组(40ug/ml、80ug/ml),环丙沙星组(0.3ug/ml、0.5ug/ml、2ug/ml),两者混合组。结果:混合组联合对PAO1生物被膜抑制作用大于PAO-JP2。而且同一剂量下联合组对单独组对PAO1、PAO-JP2比较有显著差异(P0.05),结论:大蒜提取液对环丙沙星对PAO1、PAO-JP2生物被膜抑制起增强作用,从而抑制QS系统作用而减少耐药产生。     

鱼腥草水提液对铜绿假单胞菌生物被膜的影响及与阿奇霉素的抗菌协同作用

目的研究鱼腥草水提液体外对铜绿假单胞菌生物被膜的影响及与阿奇霉素的抗菌协同作用。方法应用微量倍比稀释法测定鱼腥草水提液、阿奇霉素对铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度(MIC),棋盘稀释法测定二者协同抗菌作用,MTT法测定鱼腥草水提液对铜绿假单胞菌生物被膜内细菌代谢的影响,镜下观察该药对铜绿假单胞菌生物被膜的形态影响。结果实验结果提示,鱼腥草水提液对铜绿假单胞菌的MIC为250 g.L-1,协同实验表明与阿奇霉素有抗菌相加作用。鱼腥草水提液对铜绿假单胞菌生物被膜内细菌代谢的SMIC501,3,7d分别是31.25,62.5,62.5 g.L-1,SMIC80分别是250,250,250 g.L-1。SMIC80药物浓度显示对铜绿假单胞菌生物膜形态形成有干扰作用。结论鱼腥草水提液与阿奇霉素抗菌相加作用明显,并能抑制铜绿假单胞菌生物膜的形成,为鱼腥草治疗由生物膜引起的慢性感染提供了依据。     

复方百肤青抗外阴阴道念珠菌病混合菌生物被膜的作用

目的研究中药复方百肤青抗外阴阴道念珠菌病混合菌生物被膜的作用。方法用白念珠菌(C.albicans)、铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)混合菌液,体外建立白念珠菌混合菌生物被膜(biofilm,BF),采用XTT减低法及形态学观察白念珠菌混合菌生物被膜的形成过程;形态学观察及菌落计数法评价复方百肤青对白念珠菌混合菌生物被膜的最小抑膜浓度(SMIC)。结果白念珠菌混合菌48h能形成成熟的生物被膜;250 g.L-1浓度的百肤青能抑制白念珠菌混合菌生物被膜的形成。结论中药复方百肤青由于其有抗生物被膜的作用,可用于预防外阴阴道念珠菌病的复发。     

穿心莲内酯对铜绿假单胞菌PAO1生物被膜形成的影响

目的:采用激光共聚焦显微镜(CLSM)技术考察穿心莲内酯对铜绿假单胞菌PAO1生物被膜形成的影响,进一步揭示穿心莲内酯的抗菌机制。方法:使用玻璃爬片生物被膜培养法,在不同浓度穿心莲内酯(10μg/ml、1μg/ml、0.1μg/ml和0.01μg/ml)条件下孵育PAO1,并分别于24h、48h及72h取出玻璃爬片,用硫氰酸荧光素标记的刀豆蛋白和碘化吡啶双重免疫荧光染色,采用激光共聚焦显微镜技术观察穿心莲内酯对铜绿假单胞菌生物被膜形成的影响,并测量生物被膜的厚度。结果:断层图像显示和空白对照组比较,用药后PAO1生物被膜生长不完全,出现多种形态,其中在0.1μg/ml剂量下,生物被膜呈破碎絮状;与空白对照组比较,穿心莲内酯在0.1μg/ml、0.01μg/ml剂量下,可明显影响PAO1生物被膜的生长厚度。结论:穿心莲内酯可能具有干扰铜绿假单胞菌PAO1生物被膜形成的作用。     

四季青水煎液对铜绿假单胞菌生物被膜生成、毒力因子分泌的抑制作用及机制研究

目的:研究中药四季青水煎液对铜绿假单胞菌生物被膜生成、毒力因子分泌的抑制作用并探讨其作用机制。方法:将四季青水煎液与铜绿假单胞菌共同培养,观察四季青水煎液在亚抑菌浓度下对细菌生长的影响;将铜绿假单胞菌培养3天构建生物被膜模型,加入不同浓度的四季青水煎液共同培养,于不同时间取样,经结晶紫染色后570 nm处测定生物被膜的光密度(OD值);将不同浓度四季青水煎液与铜绿假单胞菌共同培养18 h,经氯仿提取后于540 nm处测定绿脓菌素光密度(OD值),与刚果红反应后,492 nm处测定弹性蛋白酶光密度(OD值);用荧光定量PCR法检测四季青水煎液作用于铜绿假单胞菌后Las I/R和Rhl I/R基因的表达;用LC-MS/MS法测定不同浓度四季青水煎液与铜绿假单胞菌共同培养48h,72 h后培养液中细菌信号分子3-oxo-C12-HSL和C4-HSL的浓度及与生物被膜生长及毒力因子分泌的关系。结果:在亚抑菌浓度下四季青水煎液不影响铜绿假单胞菌的生长,但能显著抑制铜绿假单胞菌生物被膜生成和毒力因子分泌。其减毒作用机制可能是四季青中含有铜绿假单胞菌群体感应系统抑制成分,抑制了该系统中上游信号分子3-oxo-C12-HSL与LasR基因的结合,从而阻断了下游基因的启动。结论:四季青水煎液能通过影响铜绿假单胞菌群体感应系统中信号分子对相关基因进行调控,从而降低铜绿假单胞菌的致病性。     

鱼腥草素钠增强亚胺培南抗铜绿假单胞菌生物被膜的作用

目的：研究鱼腥草素钠联合亚胺培南增强抗铜绿假单胞菌生物被膜的作用。方法：2倍稀释法测定被试药物最小抑菌浓度（MIC）,结晶紫染色法检测1/2MIC,1MIC,2MIC 的鱼腥草素钠（SH）、亚胺培南（IMP）单药组和1/2MIC的SH与IMP各药物浓度联合组对黏附菌的清除量、生物被膜生长量、藻酸盐产生量的影响。FDA-PI荧光素双染法荧光显微镜下观察各药物组膜分散后死活细菌、生物被膜形态。结果：鱼腥草素钠能增强亚胺培南抗绿假单胞菌生物被膜的作用,尤以2MIC药物浓度联合组作用最强（与阴性对照组比较P<0.001）。荧光显微镜下观察死活细菌、生物被膜形态支持了上述结果。结论：鱼腥草素钠联合亚胺培南能增强抗生物被膜作用,预期两药联合会提高相关感染的临床疗效。     

366株铜绿假单胞茵的耐药性分析

目的:分析引起医院感染的铜绿假单胞菌对抗菌药物的耐药状况.为配合临床合理使用抗生素提供依据.方法:用常规方法分离鉴定病原茵,用K-B法做药物敏感试验.结果:366株铜绿假单肥对亚胺培南(13.0%)、头孢哌酮-舒巴坦(27.0%)、头孢吡酸(28.0%)、头孢他啶(26.0%)的耐药辛较低,对替卡西林-克拉维酸(58%)和复方磺胺甲恶唑(90%)的耐药率均超过50%.结论:铜绿假单胞菌是医院感染的主要致病菌之一,其耐药机制复杂,有多重耐药性,应引起临床临床重视.     

黄连联合头孢菌素类抗生素的抑菌作用研究

目的:观察黄连合用头孢他啶或头孢噻肟体外抑菌作用.方法:采用稀释法测定黄连的MIC;在黄连含量为0.25和0.5 MIC情况下,扩散法测定抗生素纸片的抑菌环直径.结果:黄连水煎剂对3株标准株(大肠埃希菌ATCC25922,金葡菌ATCC25923,铜绿假单胞菌ATCC27853)和临床分离株的MIC为31.25～125 mg·ml-1.5/6的试验菌株中,黄连合用头孢他啶的抑菌环直径大于单用头孢他啶的抑菌环直径;5/5的试验菌株中,黄连合用头孢噻肟的抑菌环直径大于单用头孢噻肟的抑菌环直径6株产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)菌株的黄连合用头孢他啶的抑菌环平均直径基本等于头孢他啶加棒酸的抑菌环平均直径.结论:黄连合用头孢他啶或头孢噻肟可增强对金葡菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌的体外抑菌作用.     

基于LC-MS/MS和靶点网络探讨扶正透邪解毒化瘀方对多重耐药铜绿假单胞菌的干预机制

[目的] 从药物作用靶点层面探讨扶正透邪解毒化瘀方体外干预多重耐药铜绿假单胞菌的药效物质基础和直接/协同机制。[方法] 通过液相色谱-串联质谱联用（LC-MS/MS）、中药系统药理数据库和分析平台（TCMSP）筛选扶正透邪解毒化瘀方化学成分；通过Stitch数据库查找上述成分以及亚胺培南、头孢他啶、环丙沙星作用于铜绿假单胞菌的蛋白靶点；运用Cytoscape 3.9.1构建“中药—化学成分—作用靶点网络图”和“蛋白质-蛋白质互作网络”；筛选该方与抗菌药物共同作用靶点；借助DAVID数据库对靶点进行基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析。[结果] LC-MS/MS共鉴定出108个化学成分，TCMSP数据库共筛选出155个化学成分，去重后共得到162个化学成分，其中42个化学成分能够直接作用于铜绿假单胞菌240个靶蛋白；网络药理学筛选出17个核心成分，以黄酮类、甾醇类、萜类为主，其中β-谷甾醇、槲皮素、木犀草素度值较高；该方分别与亚胺培南、头孢他啶、环丙沙星有3/3/17个共同作用靶点，4种药物共同作用靶点2个，共同作用靶点主要作用于细菌能量和生化代谢、DNA复制、蛋白质功能、表面多糖形成等途径；GO和KEGG富集分析提示该方主要与调节细菌能量和生化代谢、调控DNA/蛋白质稳态、影响细菌胞质胞膜以及干预对细菌起保护作用的表面多糖和生物被膜合成等密切相关。[结论] 扶正透邪解毒化瘀方具有多成分、多靶点、多途径干预铜绿假单胞菌的特点，发挥主要干预作用的化学成分以黄酮类、甾醇类、萜类为主，直接/协同抗菌药物干预铜绿假单胞菌的机制与影响细菌遗传、代谢、生物被膜形成等相关。研究从药物作用靶点层面为从天然药物中开发抗菌药物提供了一定的思路和借鉴。     

五倍子醇提液对假单胞铜绿杆菌生物膜的影响

目的研究五倍子醇提液对假单胞铜绿杆菌生物膜的影响。方法采用试管对倍稀释法测定五倍子醇提液对假单胞铜绿杆菌的最小抑菌浓度（Minimal Inhibitory Concentration，MIC）。采用平板改良体外复制假单胞铜绿杆菌生物膜模型，并检测五倍子醇提液的不同MIC浓度对假单胞铜绿杆菌生物膜的影响作用。结果五倍子醇提液对假单胞铜绿杆菌的MIC为31．25mg／ml，1．5倍的MIC（46．8mg／ml）能使生物膜活菌数明显减少，但不能完全清除生物膜上的细菌，2倍的MIC（62．5mg／ml）对细菌生物膜有完全清除作用。结论五倍子对铜绿假单胞菌生物膜有清除效应，但还需要进行临床用药研究。     

苦参碱对大鼠铜绿假单胞菌感染肺组织Th1/Th2调节机制的研究

目的研究苦参碱对大鼠铜绿假单胞菌(PA)感染肺组织Th1/Th2机制的调节。方法 40只SPF级SD大鼠,随机分为5组,每组8只,分别为正常对照组、铜绿假单胞菌模型组、苦参碱干预组、左氧氟沙星干预组、左氧氟沙星联用苦参碱组。通过大鼠麻醉、支气管插管注入铜绿假单胞菌方法造模,正常对照组用0.9%Na Cl溶液代替铜绿假单胞菌。各组采取相应干预措施。观察大鼠肺组织病理变化,检测肺组织白细胞介素4(IL-4)、干扰素γ(IFN-γ)细胞因子含量,转录因子T-bet、Gata-3的变化;用RT-PCR半定量法检测IL-4 mRNA、IFN-γmRNA以及T-bet mRNA、Gata-3 mRNA的表达。结果苦参碱组、左氧氟沙星组及左氧氟沙星联用苦参碱组肺组织IL-4含量及IL-4 mRNA均较铜绿假单胞菌模型组降低,而IFN-γ水平及IFN-γmRNA较铜绿假单胞菌模型组升高(P0.05);苦参碱组、左氧氟沙星组及左氧氟沙星联用苦参碱组中肺组织转录因子Gata-3水平和Gata-3 mRNA表达较铜绿假单胞菌模型组降低(P0.05),而转录因子T-bet水平和T-bet mRNA表达较铜绿假单胞菌模型组升高(P0.05)。结论苦参碱能调节大鼠铜绿假单胞菌肺部转录因子T-bet和Gata-3表达,诱导大鼠机体由Th2型向Th1型分化,促进IFN-γ炎症因子合成、抑制IL-4合成,从而减轻肺部组织感染损伤。     

大蒜提取液的杀菌效果观察

目的:了解大蒜提取液对青霉菌,新型隐球菌和白假丝酵母菌的抑制作用。方法:使用K-B法对大蒜提取液对青霉菌、新型隐球菌和白假丝酵母菌的抑菌环直径进行测量。然后采用棋盘法分组对大蒜提取液联合环丙沙星对铜绿假单胞菌PAO1、PAO-JP2生物被膜细菌的影响进行实验测试,并进行比较分析。结果:大蒜提取液对青霉菌、新型隐球菌和白假丝酵母菌的抑制作用效果强弱依次为新型隐球菌、白假丝酵母菌和青霉菌。结论:大蒜提取液对青霉菌、新型隐球菌和白假丝酵母菌都有较强的抑制作用。其与环丙沙星联用,可以增强对铜绿假单胞菌PAO1、PAO-JP2生物被膜细菌的杀菌效果。     

芪归银方对耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药作用的影响

目的观察芪归银方体外逆转耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药的作用。方法采用血清药理学方法制备芪归银方含药血清;常规肉汤培养耐亚胺培南铜绿假单胞菌(1643菌株),分为含药血清组(M-H肉汤培养基0.8ml+含药血清0.2ml)、空白血清组(M-H肉汤培养基0.8ml+空白血清0.2ml)、阳性对照组(M-H肉汤培养基1ml),各组分别传代干预至第8代,用二倍稀释法测定细菌对亚胺培南的最小抑菌浓度(MIC),并比较抑菌环直径;耐亚胺培南铜绿假单胞菌冻融离心,收集酶粗提液,以头孢噻吩为底物,分为含药血清组(0.1mmol/L头孢噻吩95μl+3μl含药血清+2μl酶粗提液)和空白血清组(0.1mmol/L头孢噻吩95μl+3μl空白血清+2μl酶粗提液),测定耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺酶水解速率。结果含药血清组耐亚胺培南铜绿假单胞菌对亚胺培南的MIC为8μg/ml,空白血清组与阳性对照组均为16μg/ml;含药血清组抑菌环直径显著大于阳性对照组(P<0.05);含药血清组β-内酰胺酶水解速率显著低于空白血清组(P<0.05)。结论在芪归银方含药血清作用下,耐亚胺培南铜绿假单胞菌对亚胺培南的敏感性一定程度上得到了恢复,并且可以减慢β-内酰胺酶的水解速率,提示抑制β-内酰胺酶水解可能是芪归银方干预耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药的机制之一。     

扶正透邪方体外干预多重耐药铜绿假单胞菌研究

目的探讨扶正透邪方提取物及其组分和含药血清对多重耐药铜绿假单胞菌的体外抑制作用。方法运用二倍稀释法检测扶正透邪方提取物、提取物纯化组分(粗多糖、精多糖、皂苷、酚酸+香豆素、黄酮+蒽醌)及给予大鼠1/2等效剂量、等效剂量、2倍等效剂量、8倍等效剂量提取物灌胃后所得含药血清的体外抑菌情况。结果扶正透邪方提取物、提取物纯化组分中的皂苷具有较好的体外杀菌作用,其余组分在此次实验所用浓度下没有抑菌作用;给予大鼠2倍等效剂量和8倍等效剂量扶正透邪方提取物灌胃后所得的含药血清具有较好的体外抑菌作用。结论扶正透邪方提取物及其部分组分和含药血清具有体外抑菌作用,并能影响多重耐药铜绿假单胞菌的耐药性,为其干预多重耐药铜绿假单胞菌的进一步研究提供了实验依据。