核因子-κB激活途径与TNF-α和细胞间黏附分子-1在原发性肝细胞性肝癌中的作用探讨

目的研究核因子κB(Nuclear factor-kappa B,NF-κB)、肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor alpha,TNF-α)和细胞间黏附分子-1(Intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)在原发性肝癌(primary hepatocellular carcinoma,PHC)中的表达并探讨其意义。方法采用免疫组织化学SP法检测34例原发肝细胞性肝癌组织、14例癌旁正常肝组织中NF-κB、TNF-α和ICAM-1的表达情况。结果原发肝细胞性肝癌NF-κB、TNF-α和ICAM-1表达定位于细胞核和细胞质中,其表达明显高于癌旁正常肝组织(P<0.05)。三者的表达与性别、年龄、肿瘤大小等没有相关性(P>0.05),与淋巴结转移、组织分化及癌栓等有关(P<0.05);三者之间阳性表达呈明显正相关(P<0.05)。结论 NF-κB、TNF-α和ICAM-1在原发肝细胞性肝癌呈高表达,且与原发肝细胞性肝癌的发生、发展和转移密切相关。     

肝细胞癌组织CD133和CD90表达及其临床意义

目的检测肿瘤干细胞标记物CD133和CD90在人原发性肝细胞癌组织中的表达情况,分析其与肝细胞癌的生物学行为及预后之间的关系。方法运用组织芯片和免疫组织化学(PV6000)方法检测245例肝细胞癌组织、82例癌旁组织和82例肝硬化组织中CD133、CD90的表达,分析其与临床病理特征和生存期的关系,并分析CD133与CD90表达的相关性。结果肝细胞癌组织中CD133的阳性表达率明显低于癌旁组织和肝硬化组织(χ2=71.736、21.497,P<0.05),且CD133表达与肿瘤分化程度有关,高分化肝细胞癌的阳性表达率明显高于低分化肝细胞癌(χ2=6.634,P<0.05)。肝细胞癌组织中CD90的阳性表达率明显高于癌旁和肝硬化组织,差异有显著性(χ2=42.201、42.201,P<0.05),且CD90表达与肿瘤大小相关(χ2=4.572,P<0.05)。CD133与CD90在肝细胞癌组织中的表达均与生存期无关。CD133与CD90在肝细胞癌组织中的表达无相关性。结论 CD133作为肝癌干细胞的标记物有待进一步探讨,CD90可能在肝细胞癌的发生、发展过程中发挥重要作用。     

PD-L1、CTLA-4及CD276蛋白在肝癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系

目的 探讨细胞程序性死亡配体1 (PD-L1)、细胞毒T淋巴细胞相关抗原4 (CTLA-4)及CD276蛋白在肝癌组织表达及其与临床病理特征的关系。方法 收集84例经病理明确诊断的原发性肝癌患者手术切除的肿瘤组织和临床资料,免疫组织化学方法检测PD-L1、CTLA-4及CD276分子的表达情况,分析各分子表达水平与临床病理参数之间的关系。结果PD-L1高表达组肝硬化阳性例数和丙氨酸氨基转氨酶≤40 U/L例数占比均高于PDL1低表达组(均P <0.05),CD276高表达组甲胎蛋白<100μg/L例数占比低于CD276低表达组(P <0.05)。结论 PD-L1及CD276表达与肝癌发生发展密切相关,为潜在的肝细胞癌免疫治疗的实验室指标。     

不同类型原发性肝癌组织中干细胞的表达及其预后

目的探讨不同类型的原发性肝癌组织中干细胞表达及其预后。方法回顾性分析2015年1月～2017年1月期间在我院接受治疗的125例原发性肝癌患者的诊治资料。选取患者的手术切除肝细胞性肝癌、肝内胆管细胞癌、肝硬化结节、混合型肝癌和癌旁组织标本,每组25例。对五组标本进行免疫组织化学检测,比较上皮细胞黏附分子(EpCAM)、CD133和CD90在不同类型的组织中的表达及与临床特征和生存期的关系。结果肝内胆管细胞癌、肝细胞性肝癌和混合型肝癌中CD133、EpCAM、CD90的阳性率明显高于肝硬化结节、癌旁组织,差异有统计学意义(P0.05)。在三组肝癌组织中,CD90表达阳性率明显高于EpCAM、CD133阳性率,但差异无统计学意义(P0.05)。EpCAM、CD133和CD90阳性表达患者的肿瘤低分化比例、淋巴结转移比例和临床分期为Ⅲ/Ⅳ期的比例明显高于阴性表达者,其中位生存期短于阴性者,差异有统计学意义(P0.05)。结论干细胞在原发性肝癌中高表达,但在不同类型的肝癌组织中的阳性率接近,干细胞参与了肝癌的发生和进展,是不良预后的标志之一。     

原发性肝细胞癌的HLA—Ⅰ类抗原表达

目的 确定体内原发性肝细胞癌细胞的HLA-Ⅰ类抗原表达情况。方法 采用免疫组织化学LSAB法对6例原发性肝细胞癌冰冻组织进行研究。结果 6例标本的肝癌细胞都有较强的HLA-Ⅰ类抗原表达。结论 从HLA-Ⅰ类抗原表达角度看,研制肝癌CTL疫苗是可行的。     

原发性肝细胞癌的HLA-Ⅰ类抗原表达

目的　确定体内原发性肝细胞癌细胞的 HL A - 类抗原表达情况。方法　采用免疫组织化学L SAB法对 6例原发性肝细胞癌冰冻组织进行研究。结果　 6例标本的肝癌细胞都有较强的 HL A- 类抗原表达。结论　从 HL A- 类抗原表达角度看 ,研制肝癌 CTL疫苗是可行的     

B超引导下细针吸取肝细胞癌的端粒酶活性检测

目的 探讨应用B超引导下细针穿刺吸取肝癌细胞进行端粒酶活性检测在肝癌早期诊断中的价值。方法 采用TRAP-PCR定性技术对细针穿刺吸取原发性肝癌28例,肝转移癌6例,慢性肝病8例和正常肝组织标本4例,进行端粒酶活性检测,并对检测结果进行分析。结果 原发性肝细胞癌28例中端粒酶表达阳性26例,阳性率92．8％;6例转移肝性癌中4例端粒酶表达阳性,阳性率66．7％;8例慢性肝病组织中有5例端粒酶表达阳性,阳性率62．5％;正常肝组织端粒酶检测均为阴性。肝癌组织端粒酶检测阳性率与α-AFP水平无关。肝癌细胞的端粒酶活性检测阳性率明显高于细胞涂片阳性检出率,与组织活检病理诊断检出率无明显差别。结论 肝癌细胞中存在端粒酶活性表达,正常肝细胞中不表达端粒酶活性。端粒酶可能作为诊断原发性肝细胞癌的肿瘤标志物。B超引导下细针穿刺吸取肝癌细胞进行端粒酶活性检测可作为一种早期诊断原发性肝癌的有效、敏感的方法。与细胞涂片检查相结合可提高肝癌的早期确诊率,并且可应用于高危人群的普查和肝癌治疗疗效评估等方面．     

原发性肝癌组织的端粒酶活性表达的研究

目的：研究原发性肝癌组织端粒酶活性的表达，探讨端粒酶活化在原发性肝癌进展中的作用。方法：采用改良TRAP－银染法检测30例原发性肝细胞癌端粒酶活性并以30例癌旁组织作对照。结果：30例原发性肝癌组织中，有27例端粒酶表达阳性，阳性率为90％，而癌旁组织10％表达阳性，两组间比较有统计学学差异（P＜0．001），结论：端粒酶活性见于绝大多数原发性肝细胞癌，可能在其发生发展中起重要作用，其检测可用于原发性肝癌的诊断。     

CD147和基质金属蛋白酶-9在肝细胞肝癌中的表达与微血管生成的相关性

目的:探讨细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(CD147)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在肝细胞肝癌组织中的表达与肝细胞肝癌血管生成的关系。方法:采用免疫组织化学法检测63例肝细胞肝癌组织中CD147和MMP-9的表达,光镜下计数(分化抗原105 CD105)标记的微血管密度。结果:63例肝细胞肝癌组织中CD147阳性率为65.1%,MMP-9阳性率73.0%,二者阳性率在肿瘤大小、门静脉癌栓、肿瘤分化和TNM分期间差异均有统计学意义(P<0.05～P<0.01),而在患者的性别、年龄及甲胎蛋白的表达水平间差异无统计学意义(P>0.05)。CD147和MMP-9阳性组微血管密度值均明显高于阴性组(P<0.01)。CD147在肝细胞肝癌中的表达与MMP-9表达呈正相关关系(P<0.01)。结论:肝细胞肝癌组织中CD147表达上调可能通过促进MMP-9的生成参与肝癌微血管的生成,进而有利于肝癌侵袭和转移。     

应用组织芯片技术研究肝癌与乙肝病毒感染的关系

目的　研究肝细胞性肝癌 (HCC)与乙肝病毒感染的关系。方法　制作包含 40例肝细胞性肝癌及相应的癌旁和非癌组织的组织芯片。以免疫组织化学方法 (SP法 )检测 40例肝癌组织及其相应的癌旁组织及非癌组织中的 HBs Ag和 HBc Ag表达情况。结果　 40例肝癌组织及其相应的癌旁组织和非癌组织中的 HBs Ag检出率分别为 7.5 %、40 %和 45 %;HBc Ag的检出率分别为 2 0 %、5 2 .5 %和 6 7.5 %;HCC肿瘤组织中的 HBs Ag和HBc Ag的表达率明显低于癌旁及非癌组织 (P<0 .0 1)。结论　 HCC的发生与 HBV感染有密切关系 ,随着 HCC的发展 ,HBV抗原的表达降低。组织芯片技术是可高效进行肿瘤分子病理研究的技术平台 ,能够在严格、均一的实验条件下 ,高通量、快速、平行地检测大批量组织样本中的一个或多个实验指标。     

肝细胞肝癌(HCC)中PDGF-A的表达及其临床意义

 目的    阐明血小板源性生长因子A(platelet-derived growth factor A,PDGF-A)在人肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达情况及临床意义。方法  在手术切除的50例HCC组织中,应用定量RT-PCR的方法检测PDGF-A mRNA水平,并分析其与临床病理分期之间的关系。采用Western blot检测正常肝细胞株L02和7株肝癌细胞株中PDGF-A蛋白质水平。运用免疫组化方法在43例HCC石蜡组织中检测PDGF-A蛋白质水平。再利用免疫荧光双染色方法检测HCC组织中间质区域炎症细胞中PDGF-A与炎症细胞标志物(CD4、CD8、CD19和CD68)共表达情况。结果    与相应癌旁肝组织相比,HCC癌组织PDGF-A mRNA水平升高,约50%(24/50例)癌组织PDGF-A mRNA水平是癌旁肝组织的2倍及以上,这种差异在BCLC 0期和C期的HCC病例中更为显著。PDGF-A蛋白质见于L02、SMMC-7721、HCCLM3和MHCC97-H细胞株,而HepG2、Hep3B、Huh7和BEL-7402细胞株未检测到该蛋白质。近60%的HCC病例中,肝癌细胞表达PDGF-A,阳性染色有两种分布方式:弥漫于胞质内及在细胞质/细胞膜局部聚集。PDGF-A也大量分布于肿瘤间质区域和紧邻癌组织间质区域的炎症细胞(CD4+、CD8+、CD19+和CD68+)中。结论    HCC癌组织PDGF-A基因表达高于癌旁肝组织,在早期和进展期(BCLC 0和C期)病例更为明显;PDGF-A蛋白表达于HCC癌细胞和间质炎症细胞。     

原发性肝细胞性肝癌中p16基因的失活与P16蛋白表达的研究

作者分别采用多重PCR、SSCP以及以PCR为基础的甲基化分析法,对２５例原发性HCC标本及其相应的非肿瘤肝组织标本中p16基因的缺失、点突变及甲基化情况进行了检测。另用免疫组化SLAB法对３５例（包括前述已作基因检测的２５例）原发性HCC肿瘤标本及其相应的非肿瘤组织标本中P16蛋白的表达情况进行了检测。结果：２５例原发性HCC肿瘤标本中,３例有p16基因缺失,无p16基因缺失的２２例肿瘤标本中均未发现有p16基因点突变存在。肿瘤标本中基因的甲基化发生率为24%（6/25）,而全部非肿瘤组织均未出现p16基因甲基化。在３５例HCC肿瘤标本中共发现P16蛋白表达缺失16例(45.7%),而全部非瘤组织P16蛋白均表达阳性。由此提示,p16基因的失活与P16蛋白表达的丧失与原发性肝细胞性肝癌的发生及发展有关。     

CD105在原发性肝细胞癌血管内皮细胞的表达及临床意义

目的研究原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织血管内皮细胞CD105表达与根治术后早期复发的关系.方法 HCC行根治性切除术后随访1年以上患者32例(分为1年内有复发组和无复发组),用免疫组织化学法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测肝癌组织血管内皮细胞CD105的表达情况.结果 CD105在边缘癌组织、癌旁组织及正常肝组织的阳性例数分别为21、8、2例,其差异具有显著性意义(P＜0.01);边缘癌组织CD105的阳性表达率与术后早期复发有关(P=0.004).1年复发组边缘癌组织微血管密度IMVD-CD105(53.69±12.16)明显高于1年未复发组(37.80±16.62),差别有显著意义(t=3.37,P=0.002);而癌旁组织IMVD-CD105的表达在两组之间无统计学意义(t=1.52,P=0.199).中心处癌组织中CD105 mRNA的表达水平为(0.45±0.02),明显高于正常肝组织(0.26±0.02)(P＜0.05);肿瘤边缘处癌组织中CD105 mRNA的表达水平为(0.65±0.08),明显高于中心处癌组织(P＜0.05).边缘癌组织CD105 mRNA高表达与根治术后早期复发有关(t=4.34,P＜0.01);中心处癌组织CD105 mRNA表达与根治术后早期复发无关(t=0.93,P＞0.05);边缘癌组织IMVD、CD105 mRNA表达与患者年龄、癌肿的大小、临床病理分期和病理类型等均无关(P＞0.05).结论 CD105-IMVD与原发性肝细胞癌术后早期复发密切相关,可能是肝细胞癌的一个独立的预后指标;HCC边缘处癌组织CD105 mRNA表达水平明显高于中心处癌组织及正常肝组织,且其表达与肝癌的术后早期复发有关.     

凋亡抑制基因Survivin在人肝细胞肝癌中的表达及其临床意义

目的 :探讨凋亡抑制基因Survivin在人肝癌 (HCC)中的表达及其临床意义。　方法 :应用SABC免疫组化染色技术和逆转录聚合酶链反应 (RT PCR) ,检测 95例HCC及其癌旁组织、8例非肝癌肝组织Survivin蛋白以及 8例HCC组织SurvivinmRNA的表达 ,分析其与病理分级、临床分期和肿瘤大小等临床指标之间的关系。　结果 :HCC组织中Survivin基因蛋白表达率显著高于癌旁组织和非肝癌肝组织 (5 9.77%vs 2 6 .0 0 %和 5 9.77%vs0 .0 0 % ,P <0 .0 1) ;HCC组织中SurvivinmRNA表达阳性率显著高于癌旁组织 (37.5 %vs 0 .0 0 % ,P <0 .0 1) ;Sur vivin蛋白表达与肝癌组织学分级、临床分期、肿瘤大小无相关关系。　结论 :Survivin基因在HCC组织表达上调 ,提示该基因参与了HCC的发生过程 ;Survivin基因表达与组织分化程度无关 ,提示其可能成为HCC特异性诊断指标或基因治疗的新靶点。     

Expression of hepatitis B virus X protein in tumor and nontumor tissues of patients with hepatocellular carcinoma (HCC)]

PAP technique and rabbit anti-X serum were used to detect the X protein in tumor and nontumor liver tissues from 34 patients with HCC. The positive rate of the X protein in both tissues were 94.1% and 84.4% respectively. Of the 34 patients with HCC, 27 were complicated by liver cirrhosis, in whom 92.6% were X protein positive in liver cells. It was found that almost all of the liver cells adjacent to the tumor tissue showed strong positive staining. The high frequency and predominant expression of X protein in HCC and liver cirrhosis tissues indicated that X protein may play an important role in hepatocarcinogenesis. X protein was detected in 17.2% of the patients with CAH, which suggested the risk of transformation from CAH to cirrhosis and/or HCC. X protein was first found in bile duct epithelial cells in 59.4% of the patients with HCC, and 6 of 34 HCC were combined with bile duct carcinoma, and some cancer cells were found positive for X protein. It seems that X protein may also be a potential factor in the oncogenesis of bile duct carcinoma.     

用荧光差异显示法分离新的肝细胞癌相关基因

目的 :寻找新的肝细胞癌 (hepatocellularcarcinoma ,HCC)相关基因。方法 :应用荧光 差异显示 (fluorescentdifferentialdisplay)技术分析人HCC、配对非癌肝、胎肝、正常肝等组织之间的基因差异表达 ,差异表达cDNA片段 ,经测序后 ,再用RNA狭缝杂交对部分差异片段在上述 4种组织中的表达进行验证。结果 :共得到差异表达cDNA片段 110条。经狭缝杂交筛选 ,获得了 4条阳性片段 ,未知cDNA片段L2和与人醛缩酶B 99.5 %同源的cDNA片段L7在部分HCC中特异性低表达 ,未知cDNA片段LC2 7和与人Nip3基因 99.4%同源的cDNA片段LC2 0在部分HCC中特异性高表达。结论 :确认了 4条HCC相关基因。其中L2和人醛缩酶B基因可能为阻抑HCC发生、发展的基因 ,而人Nip3基因和LC2 7可能为促进HCC发生、发展的基因。L2和LC2 7为目前未知的新基因。     

实时荧光定量PCR检测原发性肝癌中CDK4基因的表达

目的：应用实时荧光定量PCR法检测原发性肝细胞癌中CDK4基因的表达。方法：提取手术切除人肝癌和癌旁组织总RNA并逆转录为cDNA。应用实时荧光定量PCR法观察人肝细胞癌组织及癌旁组织中cDK4的表达水平。结果：20例肝细胞癌标本中有18例肿瘤组织中CDK4基因表达明显高于癌旁肝组织，其中7例高出4倍以上。结论：实时荧光定量PCR可以准确定量测定基因的表达；CDK4基因在肝细胞癌的发生、发展中可能起重要作用。     

肝细胞癌患者癌和癌旁组织中Fas抗原和bcl-2表达的研究

目的：探讨人体肝细胞癌患者癌及癌旁组织中Ｆａｓ抗原的原位表达、分布，并与抗凋亡基因产物ｂｃｌ－２蛋白比较，探讨Ｆａｓ抗原在肝细胞癌形成过程中的生物学意义。方法：用免疫组织化学方法检测２０例患者的肝细胞癌及癌旁组织中Ｆａｓ抗原和ｂｃｌ－２蛋白的原位表达。结果：１８例癌组织中有Ｆａｓ表达，大多数表现为胞质阳性，所有癌旁组织均见Ｆａｓ表达，阳性可见于胞质及胞膜，炎细胞浸润明显之汇管区及纤维间隔附近的肝细胞阳性表达有所增强。ｂｃｌ－２在１９例ＨＣＣ和所有癌旁组织均有表达；胞质着色，癌组织较癌旁表达为弱。结论：人体肝癌组织有Ｆａｓ表达，以胞质阳性为主，癌旁组织胞质及胞膜均有表达，与淋巴细胞浸润关系密切，ｂｃｌ－２的表达并不减弱细胞Ｆａｓ的表达，二者在ＨＣＣ的发生过程中可能有着独立的作用机制并起了一定的作用。     

乙型肝炎病毒X蛋白单克隆抗体的制备及肝癌组织中相应抗原的检测

应用基因工程技术制备的１７０００乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）Ｘ蛋白（ＨＢｘＡｇ）免疫动物，成功地制备了抗－ＨＢｘ单克降抗体，以此抗体对原发性肝癌（ＨＣＣ）组织、慢性活动性肝炎（ＣＡＮ）肝组织行相应抗原检测，并同时进行乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）及乙型肝炎病毒核心抗原（ＨＢｃＡｇ）的检测。在ＨＣＣ标本中ＨＢｘＡｇ在癌内及癌周肝组织中的阳性率分别为５６％及４８％，ＨＢｓＡｇ为１６％及７４％。ＨＢｃＡｇ仅见于癌周，阳性率为１８％。在ＣＡＨ标本中，ＨＢｘＡｇ、ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ阳性率分别为６．６％、７３．３％及０。血清ＨＢｓＡｇ阳性ＨＣＣ标本中，ＨＢｘＡｇ的检出率为８２．３％、明显高于血清ＨＢｓＡｇ阴性标本（５４．５％）。结果显示。ＨＢｘＡｇ在ＨＣＣ标本中的表达是ＨＢＶ标志物中最活跃的。ＨＢｘＡｇ的表达不依赖于ＨＢＶ的复制，可能是ＨＢＶＸ基因同宿主细胞基因整合后的产物，ＨＢｘＡｇ在ＨＣＣ标本中的活跃表达为抗－ＨＢｘ抗体作为ＨＣＣ导向治疗载体提供了依据。