应激对大鼠心肌硫氧还蛋白还原酶表达的影响

目的 探讨硫氧还蛋白还原酶在大鼠心肌抗氧化应激反应中的作用。方法 将Wistar大鼠冰泳5min，采用Northern blot和Western blot检测大鼠冰泳前后心肌硫氧还蛋白还原酶的表达情况。结果 应激后大鼠心肌中硫氧还蛋白还原酶的基因和蛋白表达均增加。结论 硫氧还蛋白还原酶增加有利于大鼠心肌对应激损伤的预防与修复。     

日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶的表达及特性分析

目的制备具有生物活性的重组日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶（SjTGR）硒蛋白。方法采用PCR法,在SjTGR基因开放阅读框的末端融合大肠埃希菌（E.coli）硒蛋白转译的硒代半胱氨酸插入序列以构建一个嵌合基因,将此嵌合基因亚克隆到表达载体pET-41a中形成重组表达质粒SjTGR-pET-41a。将重组表达质粒SjTGR-pET-41a和质粒pSUABC共转化到E.coliBL21中,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）诱导表达SjTGR蛋白。用阿糖胞苷-2＇,5＇-二磷酸琼脂糖凝胶通过亲和层析从表达产物中纯化重组SjTGR蛋白。以重组SjTGR免疫小鼠制备TGR多克隆血清,免疫印迹试验分析日本血吸虫体内是否存在天然TGR。采用生物化学方法分析重组SjTGR硫氧还蛋白还原酶、谷胱甘肽还原酶、谷氧还蛋白的酶活性。结果含有E.coli硒代半胱氨酸插入序列的SjTGR嵌合基因构建成功。含SjTGR基因的重组质粒SjTGR-pET-41a的转化子细菌在静止生长期经IPTG诱导,24℃培养24h可表达出可溶性SjTGR蛋白,质粒pSUABC表达产物可促进硒代半胱氨酸整合,增加硒蛋白的产量。免疫印迹试验结果显示,纯化重组SjTGR多克隆抗体可以识别血吸虫成虫体内天然的TGR。生化分析结果显示,SjTGR是一种具有硫氧还蛋白还原酶、谷胱甘肽还原酶、谷氧还蛋白活性的多功能酶。结论具有生物活性的SjTGR已被成功表达,为进一步研究其功能与应用价值奠定了基础。     

专家答疑

<正>问:何谓同型半胱氨酸?答:甲硫氨酸是体内的含硫氨基酸,同型半胱氨酸(HCY)是甲硫氨酸代谢的中间产物。同型半胱氨酸不稳定,很易氧化成为HCY或HCY-半胱氨酸二硫化合物,这些硫化合物在血浆中大部分与蛋白质结合,我们通常所指的HCY包括所有这些结合和游离的含HCY的化合物。一般推荐禁食12～14 h抽取静脉血,用EDTA-K3(或用     

同型半胱氨酸与糖尿病及其并发症的关系

同型半胱氨酸（Hey）是一种含硫氨基酸，在体内经蛋氨酸脱甲基化生成，是甲硫氨酸代谢的重要中间产物。主要通过三个途径分解代谢：①再甲基化途径：Hey以维生素B12为辅因子，以N-5-甲基四氢叶酸为甲基供体，在N-5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）的作用下，发生再甲基化，重新合成蛋氨酸。②转硫途径：Hey经转硫途径不可逆生成半胱氨酸和α酮丁酸，此过程需维生素B6依赖的胱硫醚β合成酶（CBS）参与。     

PC12细胞谷胱甘肽二硫键氧化还原酶cDNA的克隆表达与序列分析

目的获得PC12细胞谷胱甘肽二硫键氧化还原酶全长cDNA及表达的蛋白质,分析比较该cDNA及外推的蛋白质序列。方法用逆转录PCR(RT鄄PCR)获得该蛋白cDNA并将其分别克隆和亚克隆于PUC18和PQE31载体,受体细胞为BL21。亲和层析分离重组蛋白,SDS电泳分析表达产物。结果PC12细胞谷胱甘肽二硫键氧化还原酶全长cDNA含324个碱基,编码含107个氨基酸的蛋白质,并与小鼠和人的该序列有高度同源性,获得了具有活性的谷胱甘肽二硫键氧化还原酶。结论构建了PC12细胞谷胱甘肽二硫键氧化还原酶cDNA在大肠杆菌细胞的克隆表达体系;测定了该蛋白cDNA序列并推导出它的氨基酸排列顺序;证明了该蛋白与人和小鼠具有高度同源性。     

硫氧还蛋白生物活性及其与人类疾病的关系

硫氧还蛋白(thioredoxin，Trx)、硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase，TR)和还原型辅酶Ⅱ(NADPH)一起构成硫氧还蛋白系统(Trx系统)。这是一个广泛分布的NADPH依赖性二硫化物还原酶系统。Trx在TR的作用下可以从氧化型转变为还原型，还原型的Trx可以催化许多有二硫键暴露的蛋白质的还原反应。研究发现Trx除了基本的氧化还原调节功能，还有许多其他生物学活性，因而其与人类疾病的关系日益受到人们的重视。     

重组日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶动力学分析

目的对重组的日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶(SjTGR)进行酶动力学特征分析。方法用阿糖胞苷-2’,5’-二磷酸琼脂糖凝胶通过亲和层析纯化重组SjTGR蛋白。利用紫外分光光度计(UV-2550,SHIMADZU),在25℃条件下分别以5-联硫代-双-2-硝基苯甲酸(DTNB)、胰岛素、氧化型谷胱甘肽(GSSG)、β-羟乙基二硫化物(HED)为底物,测定SjTGR的硫氧还蛋白还原酶(TrxR)、谷胱甘肽还原酶(GR)、谷氧还蛋白(Grx)活性及其米氏常数。以金诺芬为抑制剂,测定其对SjTGR活性的抑制作用及抑制常数。结果 SjTGR是一种具有TrxR,GR,Grx活性的多功能酶,酶活性分别为8.11、2.19和12.10μmol·min-1mg-1。不同的酶底物得到的Km值分别为(21.42±0.44)μmol·L-1(NADPH)、(3.24±0.40)μmol·L-1(Trx)(、145.05±6.31)μmol·L-1(DTNB)(、49.55±6.31)μmol·L-1(GSSG)、(2 792±231)μmol·L-1(HED)(、1 698±54)μmol·L-1(GSH)。金诺芬对SjTGR活...     

人重组硫氧还蛋白对大鼠心肌缺血再灌注梗塞范围和心肌凋亡的影响

目的：探讨人重组人硫氧还蛋白对大鼠心肌缺血再灌注后心肌梗塞范围和心肌细胞凋亡的影响。方法：成年Wister大鼠被随机分为3组;I组：假手术组（8只）,Ⅱ组：缺血再灌注组（7只）,Ⅲ组：人重组硫氧还蛋白保护组（6只）。Ⅱ、Ⅲ组分别在结扎左室前降支30min后再灌注120min．Ⅲ组再灌注后立即静脉注人重组硫氧还蛋白。观察再灌注后心肌梗塞范围和心肌细胞凋亡以及凋亡相关基因的表达。结果：人重组硫氧还蛋白显著降低了再灌注后心肌梗塞范围和心肌细胞凋亡数量（P均〈0．01）,并上调凋亡相关基因bcl-2的表达（P〈0．05）。结论：人重组硫氧还蛋白对心肌缺血再灌注具有保护作用,其抑制凋亡的作用可能是通过上调bcl-2基因表达来发挥的。     

应激对大鼠心肌线粒体型硫氧还蛋白还原酶表达的影响

目的探讨线粒体型硫氧还蛋白还原酶（mitochondrial thioredoxin reductase，TR2）在大鼠心肌抗氧化应激反应中的作用。方法将Wistar雄性大鼠分成非应激组和应激组，应激组大鼠在处死前一天在冰水浴中泳动5min，采用Northern blot和Western blot检测大鼠心肌线粒体型硫氧还蛋白还原酶和蛋白的表达。结果应激组大鼠心肌中线粒体型硫氧还蛋白还原酶基因和蛋白表达均高于非应激组。结论线粒体型硫氧还蛋白还原酶基因和蛋白表达的增加有利于大鼠心肌抗氧化损伤。     

甲硫氨酸强化饲料对卒中易感型自发性高血压大鼠血压和脑卒中的影响

已有实验证实,鱼蛋白具有良好的降压和预防脑卒中作用。鱼蛋白中含硫氨基酸的含量较多,甲硫氨酸即为其中一种,它是否与鱼蛋白的作用直接有关是本实验的主要研究目的。材料和方法35只6周龄雄性卒中型自发性高血压大鼠(SHR_((?)p),由美国NIH引进在本院繁殖)随机分为2组。对照组18只,给予含甲硫氨酸0.5%的饲料;甲硫氨酸组17只,饲料含甲硫氨酸3.5%。两组均饮1.0%盐水。     

硫氧还蛋白、硫氧还蛋白相互作用蛋白与消化系疾病的关系

硫氧还蛋白系统是一类具有氧化还原活性的小分子蛋白系统,由硫氧还蛋白(TRX)、还原型辅酶Ⅱ(NADPH)和硫氧还蛋白还原酶(TRX-R)3部分组成,具有调节细胞氧化还原状态、对抗氧化应激、激活转录因子促进细胞生长以及抑制细胞凋亡等作用.硫氧还蛋白相互作用蛋白\硫氧还蛋白结合蛋白2\维生素D3上调蛋白1(TXNIP\TBP-2\VDUP-1)属于硫氧还蛋白结合蛋白的家族成员,通过抑制硫氧还蛋白系统的功能而发挥介导氧化应激、抑制细胞增殖及诱导细胞凋亡等作用,是TRX的负性调节因子.氧化应激与细胞凋亡参与了许多消化系疾病的发生发展.TRX与TXNIP作为氧化应激相关因子,可能在消化性疾病中发挥一定的作用.本文就TRX及TXNIP的结构特点、生物学功能以及与消化系疾病的关系等方面作一综述.     

人硫氧还蛋白真核载体的构建及表达

目的构建人硫氧还蛋白基因的重组真核表达载体。方法人硫氧还蛋白的cDNA克隆至pGEM-TEasy载体,经DNA测序证明后,将其克隆至真核表达载体pShttle构建重组pShttle-hTRX,pShttle-hTRX转染Hela细胞系进行瞬时表达,通过Westernblot、免疫组化、活性测定、酶切、PCR扩增等方法证实构建载体的正确性。结果构建携带人硫氧还蛋白基因的真核表达载体pShttle-hTRX,转染HeLa细胞后可检测到hTRX的转录和表达。结论正确构建了携带人硫氧还蛋白基因的真核表达载体,本结果可用于探讨硫氧还蛋白的生物学作用。     

硫氧还蛋白及其在寄生虫的研究进展北大核心CSCD

硫氧还蛋白(thioredoxin,Trx)是一类广泛存在于原核与真核生物体内的氧化还原调节蛋白,与硫氧还蛋白还原酶,NADPH等共同组成硫氧还蛋白系统,参与调节机体抗氧化、抗凋亡等生物学过程。由于Trx系统可以清除寄生虫虫体自身和宿主免疫细胞产生的的活性氧和活性氮,以减少其对虫体的损伤,因此寄生虫Trx的研究日益受到人们的关注。现对Trx的主要生物学功能及在寄生虫上的最新研究进展作一综述。     

低密度脂蛋白体外氧化修饰过程中几种产物变化的动力学研究

用Ｃｕ＾２＋引发低密度脂蛋白的氧化修饰，研究了低密度脂蛋白氧化修饰过程中脂氢过氧化物，共轭二烯烃，硫代巴比妥酸反应物质琼脂糖凝胶电泳迁移率和荧光物质含量变化的动力学。     

硫氧还蛋白与心血管疾病的研究进展

<正>1硫氧还蛋白概述硫氧还蛋白(Trx)广泛存在于原核及真核生物中,其相对分子量约12kDa。Trx的催化位点包含一段保守的氨基酸序列Cys-Gly-Pro-Cys,氧化条件下,Cys32和Cys35之间形成二硫键,该二硫键能被硫氧还蛋白还原酶(TrxR)通过还原性辅酶Ⅱ(NADPH)供氢来还原。Trx、TrxR以及NADPH共同组成了Trx系统。人Trx分为胞浆型(Trx1)和线粒体型(Trx2)两种亚型,与之相对应的TrxR也分别存在     

硫氧还蛋白和硫氧还蛋白相互作用蛋白与糖尿病及其并发症关系的研究进展

硫氧还蛋白系统是由硫氧还蛋白、NADPH和硫氧还蛋白还原酶三部分组成的氧化还原敏感的多功能小分子蛋白系统。硫氧还蛋白系统在细胞内外行使着多种功能,如调节细胞氧化还原状态以对抗氧化应激,激活转录因子如NF-κB和AP-1促生长,以及与ASK-1作用抑制细胞凋亡等。硫氧还蛋白相互作用蛋白\硫氧还蛋白结合蛋白2\维生素D3上调蛋白1为硫氧还蛋白结合蛋白之一,是硫氧还蛋白功能和表达的一种负性调节因子,通过抑制硫氧还蛋白系统功能而发挥介导氧化应激、诱导细胞凋亡及对抗细胞增殖等作用。高糖可以通过相互作用蛋白启动子上的CREs(碳水化合物反应元件)刺激硫氧还蛋白相互作用蛋白的产生而抑制硫氧还蛋白,进而促进氧化应激,损伤胰岛B细胞;诱导B细胞凋亡增加,促进糖尿病及其并发症的发生。因此,硫氧还蛋白相互作用蛋白或许在糖毒性和B细胞凋亡、糖尿病及其并发症之间起着重要作用。     

硫氧还蛋白系统在冰泳负荷致低硒大鼠心肌氧化损伤中的作用

目的探讨硫氧还蛋白(Trx)系统在低硒心肌氧化损伤中的作用并分析其机制。方法复制大鼠低硒模型，给予冰泳负荷，用光镜观察心肌形态改变，用Western blot检测心肌组织中硫氧化还原蛋白表达变化，检测血中脂质过氧化物(LPO)含量及心肌TR活性。结果低硒组大鼠血中LPO含量较常硒组增高，低硒加冰泳负荷后LPO增加更明显，并导致大鼠心肌细胞坏死和炎细胞浸润；常硒冰泳组大鼠心肌硫氧化还原蛋白还原酶(TR)活性和Trx表达升高；低硒冰泳组大鼠心肌TR活性和Trx蛋白表达较负荷前改变不明显。结论低硒条件下心肌Trx系统功能降低，遇到冰泳负荷时心肌不能及时清除过剩的自由基及修复损伤的蛋白，导致心肌抗氧化能力降低，使心肌易受损伤。     

高同型半胱氨酸血症与冠心病及临床处理

同型半胱氨酸又称为高半胱氨酸（Homocysteine,Hcy）,是一种含硫氨基酸,主要来源于食物,体内不能合成。Hcy是甲硫氨酸代谢过程中的重要中间产物,本身并不参加蛋白质的合成[1-2]。在体内约一半的Hcy和甲基四氢叶酸在蛋氨酸合成酶（Methionine synthase reductase,MS）的作用下,生成蛋氨酸和四氢叶酸,四氢叶酸在N5,N10-亚甲基四氢叶酸还原酶（Methylenetetralydrofolate,MTHFR）的作用下生成甲基四氢叶酸;另一半Hcy通过转硫基途径,即Hcy与丝氨酸在胱硫醚β合成酶（Cystathioninel3．synthase,CBS）作用下形成胱硫醚,其中一部分在胱硫醚裂解酶的作用下形成半胱氨酸,最后生成丙酮酸、硫酸和水,此过程需维生素β。和丝氨酸羟甲基转移酶;另一部分则生成同型丝氨酸。     

介导人硫氧还蛋白基因转移的重组腺病毒构建

目的应用基因重组方法构建携带人硫氧还蛋白(hTRX)基因的复制缺陷型重组腺病毒。方法用内切酶、RT-PCR、测序方法获得目的基因片段,然后将其cDNA克隆至表达载体pShuttle构建hTRX的重组真核细胞表达载体pShuttle-hTRX,在HeLa细胞中进行瞬时表达检测。从真核表达载体pShuttle-hTRX切下目的基因,并插入至腺病毒载体构建hTRX的重组腺病毒载体Adeno-hTRX,经PCR方法亦证明了成功构建腺病毒重组体。重组腺病毒在293细胞中扩增、纯化。结果成功构建了携带人硫氧还蛋白基因的复制缺陷型重组腺病毒,并以多种方法证实了构建载体的正确性。结论正确构建的人硫氧还蛋白重组腺病毒载体,可为基因治疗心血管系统疾病打下良好基础。     

谷胱甘肽与呼吸系统疾病

谷胱甘肽与呼吸系统疾病何权瀛谷胱甘肽氧化还原系统包括还原型谷胱甘肽、氧化型谷胱甘肽（ＧＳＳＧ）、谷胱甘肽氧化酶和谷胱甘肽还原酶，具有对抗氧自由基、保护肺组织免受氧化损伤作用，被称为组织抗氧化系统。近年来研究表明该系统功能降低和／或氧自由基生成增多，可...