糖尿病血管病变患者血管组织基因谱的表达

目的　利用基因芯片初步观察糖尿病外周血管病变的血管组织基因谱的差异性表达。方法　用cy3和cy5两种荧光染料通过逆转录反应将正常人血管和糖尿病外周血管病变患者血管的mRNA分别标记成两种探针 ,并与载有一组靶基因的基因芯片进行杂交 ,通过计算机扫描分析得出差异表达的某些基因。结果　筛选出包括与细胞周期蛋白、离子通道、细胞凋亡相关的蛋白、DNA合成、修复和DNA结合、转录和转录因子、蛋白翻译合成、代谢、细胞受体、细胞信号和传递蛋白等相关表达差异的基因 4 33条 ,其中 2 0 1条表达上调 ,2 32条表达下调。结论　糖尿病患者血管组织某些基因的异常表达可能是糖尿病外周血管病变的基础。     

2型糖尿病伴周围神经病变患者外周血单个核细胞中醛糖还原酶mRNA水平测定

目的探讨外周血单个核细胞(PBMC)中醛糖还原酶(AR)mRNA水平与2型糖尿病并发周围神经病变的关系.方法用RT-PCR法检测32例2型糖尿病患者及35名正常对照者PBMC中ARmRNA水平,用肌电图检测腓神经传导速度,根据神经传导速度有无减慢将糖尿病患者分为普通糖尿病组和糖尿病神经病变组.结果2型糖尿病患者PBMC中AR mRNA的表达量(0.59±0.56)高于正常对照组[(0.30±0.1l),P=0.003];糖尿病是否伴神经病变患者之间AR mRNA的表达量无差别.结论2型糖尿病患者PBMC中AR mRNA表达水平增高与是否伴神经病变无关.     

2型糖尿病周围神经病变靶向基因与蛋白的初步研究

目的：筛选2型糖尿病周围神经病变（DPN）靶向基因与蛋白,探讨DPN发病机制。方法：利用基因芯片分析2例2型糖尿病伴有DPN患者、2例2型糖尿病不伴周围神经病变（DM）患者以及2例正常对照（CON）外周血单个核细胞基因表达谱的差异;利用蛋白芯片技术比较50例DPN患者、50例DM患者以及15例CON者血清蛋白质谱的差异,寻找DPN可能的致病因子。结果：与DM患者和CON者比较,DPN患者外周血单个核细胞中上调基因4条,     

2型糖尿病远端对称性多发性神经病变的临床特点及相关因素分析

目的 探讨2型糖尿病并发远端对称性多发性神经病变（DSPN）的患病情况、临床特点及相关危险因素。方法 选取2016年1~6月北京积水潭医院门诊或病房明确诊断2型糖尿病并自愿参加糖尿病神经病变筛查的患者160例,根据是否合并DSPN分为DSPN组和非DSPN组,比较两组的临床特点、糖尿病肾病及糖尿病相关合并症的发生情况,采用Logistic回归分析探讨DSPN的危险因素。结果 在160例2型糖尿病患者中,共筛查出合并DSPN患者98例,DSPN发生率达61.3%。DSPN组患者的年龄、糖尿病病程和吸烟率高于非DSPN组,且差异均有统计学意义（P<0.05）;DSPN组较非DSPN组糖尿病肾病发生率和心脑血管疾病发生率高,且差异有统计学意义（P<0.05）;多因素Logistic回归分析结果显示年龄、糖尿病病程、HbA1c、是否吸烟、是否合并糖尿病肾病以及是否合并心血管疾病与2型糖尿病并发DSPN有关。结论 2型糖尿病患者DSPN发生率高,年龄大、糖尿病病程长、吸烟、糖尿病肾病以及合并心血管疾病是2型糖尿病并发DSPN的危险因素。     

60Co-γ照射后早期小鼠肝组织基因表达谱

目的：以基因芯片技术研究辐射后小鼠肝脏的基因表达谱，从分子水平探讨辐射引起小鼠肝脏损伤的机制。方法：采用小鼠基因表达谱芯片（4096个基因）对^60Co-γ照射后48h小鼠肝组织基因表达谱进行研究。RT-PCR验证基因芯片结果。结杲：与正常小鼠相比，辐射后小鼠肝组织有124条基因差异表达，78条下调，46条上调。其中57条基因的功能已知，这些差异表达的基因按功能可分为6类：DNA修复和应激蛋白，细胞骨架，离子通道和转运蛋白，信号转导，免疫蛋白，代谢调控，其中下调基因主要为细胞骨架基因，而上调基因主要为细胞周期调控蛋白和转录因子。RT-PCR结果表明，Hspa5、Rasa3、Nqol基因的表达和芯片结果一致。结论：辐射造成的肝损伤具有多靶点、多层次及多通路的特点。     

60Co-γ照射后早期小鼠肝组织基因表达谱

目的:以基因芯片技术研究辐射后小鼠肝脏的基因表达谱,从分子水平探讨辐射引起小鼠肝脏损伤的机制.方法:采用小鼠基因表达谱芯片(4096个基因)对60Co-γ照射后48 h小鼠肝组织基因表达谱进行研究.RT-PCR验证基因芯片结果.结果:与正常小鼠相比,辐射后小鼠肝组织有124条基因差异表达,78条下调,46条上调.其中57条基因的功能已知,这些差异表达的基因按功能可分为6类:DNA修复和应激蛋白,细胞骨架,离子通道和转运蛋白,信号转导,免疫蛋白,代谢调控,其中下调基因主要为细胞骨架基因,而上调基因主要为细胞周期调控蛋白和转录因子.RT-PCR结果表明,Hspa5、Rasa3、Nqol基因的表达和芯片结果一致.结论:辐射造成的肝损伤具有多靶点、多层次及多通路的特点.     

应用基因芯片技术对2型糖尿病胰岛素抵抗脂肪信号转导相关基因的研究

目的 应用基因芯片技术比较2型糖尿病胰岛素抵抗(IR)患者与正常人大网膜脂肪组织信号转导相关基因表达谱的差异,以进一步阐明IR的发病机制并探索新的治疗方法。方法 分别以Cy5和Cy3两种荧光染料通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)将IR组和对照组脂肪组织的mRNA标记成探针,并与载有1组靶基因的基因表达谱芯片进行杂交。通过扫描荧光强度,经计算机软件分析,寻找两组差异表达基因。结果 IR组和对照组之间共筛选出82条差异表达基因。其中信号转导相关差异表达基因19条,表达增加的基因12条,表达降低的基因7条。RT-PCR验证,IR组MKP-4表达明显升高。结论 基因表达谱芯片筛选提示IR的发病涉及多个方面,并与受体信号转导密切相关,为阐明IR的信号转导机制提供强有力的工具。     

以基因芯片技术研究Kkay小鼠2型糖尿病相关基因

目的以基因芯片技术研究Kkay2型糖尿病小鼠的差异表达基因。方法以包含8192条小鼠的cDNA基因表达谱芯片研究Kkay2型糖尿病小鼠肝脏的基因表达谱。结果共筛选出差异表达基因154条,包括全长基因68条,表达序列标识(EST)86条;其中40条基因表达增加,114条表达降低。结论多数已知功能基因的表达异常与以往的研究结论是一致的;cDNA基因芯片技术能够高通量分析糖尿病相关基因。     

芳维A酸氨丁三醇对Hacat细胞信号转导途径的影响

目的通过研究芳维A酸氨丁三醇(Arotinoid Trometamol,AT)诱导HaCat细胞后的基因表达差异,初步探讨AT治疗银屑病的作用机制。方法应用基因芯片技术,检测AT(10-6mol/L)诱导HaCat细胞24小时前后基因表达谱的改变。结果在4000条人类全长cDNA中,有580条的表达量差异达到2倍以上,其中,注释完整的基因有253条(143条表达量增加,110条表达量减少)。差异表达的基因主要是细胞内信号基因(17.8%),细胞受体基因(8.3%),DNA结合、转录因子基因(11.9%),细胞因子基因(4.0%),细胞周期及细胞凋亡的调控基因(5.6%)。结论AT能够通过影响信号转导途径中包括KLF4、HSPA8、HSPCB在内的多个基因表达而发挥其生物学作用。     

基因芯片分析釉基质蛋白对hBMSCs基因表达谱的影响

目的 应用基因芯片技术分析釉基质蛋白(EMPs)对人骨髓基质细胞(hBMSCs)基因表达谱的影响.方法 全骨髓法体外传代培养hBMSCs.以200 μg/mL EMPs刺激hBMSCs作为实验组,以正常培养的hBMSCs作为对照组.培养5 d后,选择含4 096种人类基因的cDNA基因芯片进行检测和分析.运用实时PCR方法对呈差异表达基因中的4条进行扩增和检测,以验证基因芯片分析结果.结果 hBMSCs经EMPs刺激后,有27条差异表达基因,其中18条基因表达上调,9条基因表达下调.经实时PCR检测的4条差异表达基因结果与基因芯片结果一致.结论 应用基因表达谱芯片可筛选经EMPs诱导后hBMSCs的差异表达基因.为进一步研究EMPs促进牙周组织再生的分子学机制奠定了基础.     

基因芯片技术分析系统性红斑狼疮患者外周血白细胞基因表达谱的初步研究

目的比较系统性红斑狼疮（SLE）患者与正常对照外周血白细胞的基因表达谱的改变，筛选SLE差异表达基因。方法采集静脉血5ml提取总RNA后，反转录合成、标记cDNA探针，与基因芯片杂交后检测。结果9例患者与正常人对照均有相似差异表达的基因共89个，涉及细胞因子及受体相关基因、免疫相关基因、细胞信号和传递蛋白、蛋白翻译合成、离子通道和运输蛋白、凋亡相关基因、DNA和RNA结合、转录蛋白、细胞的外基质成分等。聚类分析结果显示在不同病人间尽管存在个体差异性，但是在其基因表达变化模式上仍然具有极大的相似性。结论基因芯片技术筛选出的差异表达基因可能为进一步研究SLE的发生和发展以及寻找分子诊断标志和药物治疗靶标提供线索。     

基因芯片技术筛选2型糖尿病胰岛素抵抗脂肪代谢相关差异表达基因

目的:应用基因芯片技术比较2型糖尿病胰岛素抵抗(IR)患者和正常人大网膜组织脂肪代谢相关基因表达谱的差异,探讨IR可能的发病机制.方法:分别用Cy5 和Cy3两种不同的荧光染料通过逆转录反应将IR组(n＝5)和正常对照组(n＝5)脂肪组织的mRNA标记成探针,并与载有一组靶基因的基因表达谱芯片进行杂交,通过扫描荧光强度,计算机软件分析,寻找两组差异表达基因.然后对芯片筛选结果中差异表达的FOXC2基因用Northern印迹法进行验证.结果:IR组和正常对照组之间共筛选出82条差异表达已知基因;其中脂肪代谢相关基因10条,表达增加的基因5条,表达降低的基因5条.Northern印迹证实IR组FOXC2 mRNA表达明显升高,与基因芯片检测结果一致. 结论:IR的发病与脂肪代谢相关,FOXC2可能是2型糖尿病IR的候选基因.     

基因芯片技术分析系统性红斑狼疮患者外周血白细胞基因表达谱的初步研究

目的 比较系统性红斑狼疮(SLE)患者与正常对照外周血白细胞的基因表达谱的改变,筛选SLE差异表达基因。方法 采集静脉血5ml提取总RNA后,反转录合成、标记cDNA探针,与基因芯片杂交后检测。结果 9例患者与正常人对照均有相似差异表达的基因共89个,涉及细胞因子及受体相关基因、免疫相关基因、细胞信号和传递蛋白、蛋白翻译合成、离子通道和运输蛋白、凋亡相关基因、DNA和RNA结合、转录蛋白、细胞的外基质成分等。聚类分析结果显示在不同病人间尽管存在个体差异性,但是在其基因表达变化模式上仍然具有极大的相似性。结论 基因芯片技术筛选出的差异表达基因可能为进一步研究SLE的发生和发展以及寻找分子诊断标志和药物治疗靶标提供线索。     

E2F-1过表达对胃癌细胞生物学行为影响的分子机理初步研究

目的 利用基因表达谱芯片技术筛选过表达E2F-1的胃癌MGC-803细胞与对照组间的差异表达基因,探讨E2F-1对胃癌细胞生物学行为影响的分子机理。方法 分别抽取转染E2F-1的胃癌MGC-803细胞和未转染E2F-1的胃癌MGC-803细胞的总RNA。纯化mRNA,逆转录合成cDNA标记后,与22K人类基因表达谱芯片进行杂交,扫描后筛选出表达差异的基因。随机选取3个差异表达基因,分别设计引物,用半定量RT-PCR检测验证。 结果 在21522条基因中,两组细胞间的差异表达基因有740条,其中上调基因405条,下调基因335条。差异基因中有73条功能信息不明。随机选取的3个差异表达基因的RT-PCR结果与基因芯片扫描结果相似,具有相同的方向性。结论 胃癌的发生发展是多基因相互作用、多种信号通路相互调节的结果。生物信息学分析显示, E2F-1基因可以通过TP53信号传导途径影响胃癌MGC-803细胞生物学行为的改变,还与众多基因的差异性表达密切相关。     

与大劣按蚊先天免疫相关丝氨酸蛋白酶的克隆及分析

目的克隆及分析与先天免疫相关的大劣按蚊差异基因。方法利用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)方法克隆大劣按蚊差异基因,并对与先天免疫相关的差异基因(文中命名为T6基因)进行生物信息学分析及半定量实验,分析约氏疟原虫感染前后其转录的变化,探讨它与按蚊抗疟原虫感染的先天免疫反应的关系。结果目前克隆的差异基因包含以下几类:①与先天免疫相关的酶类;②与能量代谢有关的酶;③与信号传递和调节有关的因子。对与先天免疫相关的分子进行的半定量实验表明,大劣按蚊T6基因的转录与感染疟原虫相关。结论本研究成功地克隆了与先天免疫相关的大劣按蚊差异基因,进一步的实验分析提示该基因可能与按蚊抗约氏疟原虫感染的黑化反应相关。     

四环素致BALB/c小鼠肝脏毒性的基因表达谱研究

目的利用毒理基因芯片技术研究四环素肝脏毒性效应的分子机制.方法利用本室构建的小鼠毒理基因芯片和四环素致BALB/c小鼠肝毒性动物模型,观察不同剂量和时相点小鼠肝脏基因表达谱变化,利用Gene OntologyConsortium分析系统并结合层次聚类对差异表达基因进行初步功能分析.结果四环素作用后引发肝脏多种基因表达改变,聚类分析发现高、低剂量四环素作用的表达谱明显差异,高剂量各时相点差异基因聚类分为4类,涉及的分子机制包括能量代谢抑制,蛋白质合成和降解增加,抗氧化体系受损,信号转导基因表达改变促进凋亡发生,以及药物代谢相关酶系基因抑制等.结论毒理基因芯片技术能够为我们在分子水平上提供四环素对小鼠肝脏毒性损伤机制的众多线索,为进一步生物学效应研究奠定基础.     

多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗患者血清miRNA差异表达及二甲双胍干预作用

目的：二甲双胍对多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗（PCOS-IR）患者血清基因表达谱的影响。方法：选择PCOS-IR患者6例为治疗组，健康育龄期女性6例为健康对照组，采用基因芯片和RT-PCR的方法研究临床诊断为PCOS-IR患者的血清miRNA表达变化及二甲双胍干预后的血清miRNA变化。对筛选并验证后具有差异表达的miRNA先用生物信息学方法，再用Gene Ontology和KEGG通路的数据库进行功能和通路分析。结果：系统聚类结果显示治疗组治疗前与健康对照组和治疗后均存在差异。通过RT-PCR验证，治疗组治疗前与健康对照组比较，得到10个差异表达变化的miRNA（P＜0.05）；治疗组治疗前与同组治疗后比较，得到8个差异表达变化的miRNA（P＜0.05）。GO分析显示：差异表达基因与转录调控、信号转导、跨膜转运、细胞增殖、细胞凋亡、细胞代谢、细胞黏附、蛋白磷酸化、蛋白质运输、多细胞生物发育、凝血功能、神经传导等有关。KEGG分析显示，差异表达miRNA参与显著表达的通路有：EGFR酪氨酸激酶抑制剂抗性、Rap1信号通路、wnt信号通路、前列腺癌通路、mTOR信号通路、cAMP信号通路、磷脂酰肌醇信号系统、MAPK信号通路。共得到878个与PCOS-IR及其二甲双胍治疗更相关的靶基因。结论：部分miRNA参与PCOS-IR的发病和二甲双胍治疗过程。     

电离辐射相关低密度寡核苷酸基因芯片的制备

目的：构建一种适用于辐射研究领域的低密度寡核苷酸基因芯片．方法：根据以往的研究报告,筛选参与辐射生物效应的基因和相关基因,从GenBank获取mRNA序列,使用Mprobe软件设计特异的探针,构建低密度辐射相关的基因芯片．在不同辐射敏感性肺癌细胞系中对该芯片的灵敏度和特异性进行评价,并对一些差异表达基因进行RT—PCR验证,以确认芯片检测结果的可信性．结果：构建出了辐射相关的寡核苷酸基因芯片,该芯片共含有143个基因,即127个辐射相关基因和16个对照基因．在不同辐射敏感性的A549和NCI—H446细胞中,筛选出18个差异表达基因．经RT—PCR对4个基因的验证,结果与芯片资料较一致．结论：辐射相关低密度寡核苷酸基因芯片可以检测不同辐射敏感性肿瘤细胞的差异表达基因,为辐射领域的研究提供了一种技术平台．     

基质金属蛋白酶1/组织金属蛋白酶抑制因子1在常染色体显性遗传性多囊肾组织中的表达

目的:探讨基质金属蛋白酶1(MMP1)/组织金属蛋白酶抑制因子(TIMP1)在正常肾脏、常染色体显性遗传性多囊肾病(ADPKD)肾脏以及肾移植平均(2.5±1.2)年后切除的ADPKD肾组织中的表达差异.方法:用基因表达谱芯片筛选正常肾脏、ADPKD肾脏及肾脏移植后ADPKD肾脏的差异表达基因;以RT-PCR法验证其中差异表达的MMP1/TIMP1.结果:基因芯片筛选发现在正常肾组织与ADPKD肾组织中存在463条差异表达基因,肾移植后ADPKD肾组织对比ADPKD肾组织存在130条差异表达基因.筛选结果表明ADPKD以及肾移植后ADPKD肾脏MMP1/TIMP1表达较正常肾组织明显上调(P＜0.05),而前两者间无显著差异.RT-PCR法证实MMP1/TIMP1在ADPKD肾脏以及肾移植后ADPKD肾组织中的表达均明显上调,明显高于正常肾脏组织(P＜0.05),而前两者间无显著差异.结论:ADPKD的病理改变可能与MMPs/TIMPs基因表达失衡有关,MMPs抑制剂可能会对其有一定的治疗作用.     

人参皂甙对K562细胞作用的基因表达谱研究

目的 运用基因芯片技术研究人参总皂甙(TSPG)作用后K562细胞基因表达谱的变化.方法 200 μg/ml TSPG作用于K562细胞3 d后,提取总RNA,合成cRNA并分别用cy3和cy5标记,与AgilentHuman 1B寡核苷酸基因芯片杂交,研究基因表达谱的变化.结果 TSPG刺激K562细胞后共有362个基因表达发生变化,与对照组K562细胞比较,表达上调的基因有20个,主要有代谢相关基因,信号转导相关基因,细胞受体相关基因等;表达下调的有342个,包括免疫防御相关基因,DNA结合与转录因子,代谢相关基因,细胞周期相关基因等.RT-PCR技术验证了FOSL1、E2F2、CCNE2和ODZ1四个基因表达的变化.结论 TSPG刺激K562细胞后,影响了细胞内一系列基因的表达.这些基因可能与TSPG的抗肿瘤机制有关.