子宫颈癌组织中HPV16癌基因及p53基因的检测

利用ＨＰＶ１６Ｅ６、Ｅ７基因特异性引物，ＰＣＲ技术及抗癌基因ｐ５３外显子７特异性引物，ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术对３５例进展期子宫颈癌组织进行研究，发现：（１）３５例标本中ＨＰＶ１６Ｅ６、Ｅ７ＤＮＡ的总检出率为７１．４２％（２５例），其中同时检出Ｅ６、Ｅ７为３１．４２％（１１例），另外８．５７％及３１．４２％（３例及１１例）仅分别检出Ｅ６、Ｅ７序列。（２）全组未见１例有ｐ５３基因外显子７的点突变及等位基因缺失。该结果说明ＨＰＶ１６与本地区妇女子宫颈癌发生有密切关系，并且癌组织中ＨＰＶ１６Ｅ６、Ｅ７亚基因的分布是不均一的，ｐ５３基因外显子７的改变并不常见。在实验中我们还建立了使用生物素标记的ｄＵＴＰ进行ＰＣＲ－ＳＳＣＰ的技术。     

p16基因突变及蛋白表达异常与人胰腺癌关系的研究

目的：研究ｐ１６基因的突变及蛋白表达异常在人胰腺癌发生及侵润转移中的作用。方法：应用ＰＣＲ、ＰＣＲ－ＳＳＣＰ、ＤＮＡ测序及免疫组织化学技术,对３５例人胰腺癌的ｐ１６基因第２外显子进行了检测,研究ｐ１６基因的突变及蛋白表达情况。结果：１２例在ｐ１６基因第２外显子部分存在至少５２２ｂｐ的纯合缺失。７例存在２个点突变（突变位点均相同）：其一为第１２６密码子碱基ＧＴＣ→ＡＡＴ的错义突变,氨基酸由缬氨酸（Ｖａｌ）变成了天冬酰胺（Ａｓｎ）;另一为第１２７密码子ＧＣＡ→ＧＣＧ的同义突变。缺失及突变共占５４．３％（１９／３５）。Ｐ１６蛋白三维结构模拟提示,Ｖａｌ１２６Ａｓｎ对蛋白空间结构有一定影响,从而影响Ｐ１６蛋白的功能。１２例缺失标本呈现Ｐ１６蛋白表达阴性,９例标本（其中７例点突变）出现Ｐ１６蛋白表达下降,共占６０％（２１     

乳腺癌p16基因的纯合缺失、高甲基化、突变及其表达

目的 研究ｐ１６基因在乳腺癌中的纯合缺失,高甲基化和突变等结构变化及其与表达之间的关系,方法 应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和ＰＣＲ甲基化银染分析技术（ＰＣＲ－ＭＡＳＳ）对６０例乳腺癌和２４例癌旁组织进行了ｐ１６基因纯合缺失和ｐ１６基在第１外显子的甲基化检测,用ＰＣＲ－单链构象多态性（ＳＳＣＰ）和ＤＮＡ测序技术进行了ｐ１６基因突变分析,检测了ｐ１６蛋白和ｍＲＮＡ的表达。结果 ６０例乳腺癌中,检出７例（     

人肺癌组织中p53,Rb基因突变研究

为探讨肺癌发生的分子遗传学机理，采用聚合酶链反应及聚合酶链反应－单链构象多态性技术，对４１例人肺癌组织中ｐ５３基因外显子５～８及Ｒｂ基因外显子１４～１６、２２～２３进行了突变分析。结果显示：ｐ５３基因突变１６例（１６／４１，３９％），分布于外显子５～７；Ｒｂ基因异常４例（４／４１，９．８％），其中外显子１４～１６区域部分缺失和外显子２２～２３区域突变各２例；在９例小细胞肺癌标本中，７例发生ｐ５３及Ｒ５基因的突变，其中１例存在ｐ５３基因两个外显子突变，另１例同时存在ｐ５３及Ｒｂ基因的突变。对部分ｐ５３基因突变标本序列分析，均在１个或３个密码子上存在导致ｐ５３蛋白异常的单碱基置换或插入突变。以上结果表明：肺癌、特别是小细胞肺癌的发生可能与ｐ５３及Ｒｂ基因的突变有关。     

肺癌CDKN2/p16基因纯合缺失的研究

目的　研究 Ｃ Ｄ Ｋ Ｎ２／ｐ１６ 基因的缺失与肺癌发生、发展的关系。方法　采用多重聚合酶链反应技术,对８９ 例肺癌进行了 Ｃ Ｄ Ｋ Ｎ２／ｐ１６ 基因第１ 、２ 外显子纯合缺失的分析研究。结果　标本取材方法的改良提高了聚合酶链反应技术对基因缺失的检出率,８９ 例肺癌中检出第１ 外显子缺失率１９ ．１ ％ （１７／８９） ,第２ 外显子缺失率２２ ．５ ％ （２０／８９） ,有１４ 例第１ 、２ 外显子共同缺失,第１ 或（ 和） 第２ 外显子总缺失率为２５８ ％ （２３／８９） 。 Ｃ Ｄ Ｋ Ｎ２／ｐ１６ 基因的缺失集中发生于非小细胞肺癌, 并与转移和分期有关。结论 Ｃ Ｄ Ｋ Ｎ２／ｐ１６ 基因的缺失是非小细胞肺癌的遗传易感因素,并在其恶性进展中起一定作用。     

Wilm瘤中p16基因缺失一例报告

为调查ｐ１６基因在Ｗｉｌｍ瘤中的改变，采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法对手术治疗的２４例Ｗｉｌｍ瘤患者肿瘤组织标本，进行了ｐ１６基因第１，２，３外显子的突变筛查，结果未发现异常泳动带。用双重对照ＰＣＲ，发现一例ｐ１６基因的纯合缺失。这一结果支持Ｗｉｌｍ瘤的发生涉及多个基因改变的假说     

膀胱移行细胞癌中p16基因的改变

目的 明确ｐ１６基因在膀胱移行细胞癌中的改变。方法 采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）及ＤＮＡ甲蜞化分析技术分别检测５２例膀胱移行细胞癌中ｐ１６基因的缺失、突变及５′ＣｐＧ岛甲基化。结果 ５２例膀胱移行细胞癌中１１例（２１．５％）存在ｐ１６基因的缺失;仅１例肿瘤于ｐ１６基因外显子２出现点突变;１９例（３６．５％）肿瘤发现ｐ１６基因５′ＣｐＧ岛甲基化。结     

非小细胞肺癌中p16 INK4／CDKN2基因的缺失和点突变

目的为了探讨周期素依赖性激酶４抑制因子基因（ｐ１６ＩＮＫ４）与肺癌发生的关系。方法采用双重ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和序列分析方法，对３１例原发性非小细胞肺癌中ｐ１６ＩＮＫ４基因的存在状况进行了研究。结果３例存在ｐ１６基因缺失（３／３１），其中１例整个ｐ１６基因发生缺失，另两例则分别为外显子１和外显子２缺失；ｐ１６基因点突变２例（２／３１），外显子１和外显子２各一例；并发现在这五例基因异常样品中，４例（２例缺失和２例点突变）样品均为淋巴转移的非小细胞肺癌（４／２０）。结论提示ｐ１６基因失活和某些非小细胞肺癌（５／３１）的发生有关，并且可能发生在癌症的晚期。     

星形细胞瘤p16与Rb蛋白的表达及其相关性研究

目的检测ｐ１６与Ｒｂ蛋白在原发性星形细胞瘤中的存在状况，以探讨不同病理类型星形细胞瘤中ｐ１６与Ｒｂ蛋白表达及其相关性。方法使用抗ｐ１６及Ｒｂ蛋白抗体对１０２例星形细胞瘤手术标本进行免疫细胞化学检测。结果低度恶性星形细胞瘤（ＷＨＯⅠ～Ⅱ级）中ｐ１６及Ｒｂ蛋白均为阳性表达，在高度恶性星形细胞瘤（ＷＨＯⅢ～Ⅳ级）中其阳性表达分别为４８．１％（２６／５４）和５７．４％（３１／５４）。在３１例Ｒｂ蛋白阳性标本中，有２４例（７７．４％）显示ｐ１６蛋白表达缺失或低表达，而在２３例Ｒｂ蛋白阴性标本中却有１９例（８２．６％）显示ｐ１６蛋白阳性或强阳性。结论（１）ｐ１６及Ｒｂ蛋白参与星形细胞瘤细胞增殖过程并影响其细胞分化；（２）ｐ１６与Ｒｂ蛋白之间阳性表达的相互抑制，可能是高度恶性星形细胞瘤的标志之一。     

原发性肝癌中MTS1/p16基因缺失的研究

肝癌的发生和发展是多种遗传改变的累积造成的，原发性肝细胞癌（ｈｅｐａｔｉｃｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＨＣＣ）的发生、发展与癌基因的激活和抑癌基因的失活有关。ＭＴＳ１／ｐ１６是新发现的多重抑癌基因（ｍｕｌｔｉｐｌｅｔｕｍｏｕｒｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ，ＭＴＳ１）现已证实，ＭＴＳ１／ｐ１６在人类多种恶性肿瘤中存在着不同形式的改变［１，２］。我们采用差别聚合酶链反应技术分析了３４例原发性肝细胞癌组织、癌旁组织和１０例肝炎后肝硬变肝组织的ＭＴＳ１／ｐ１６外显子２的缺失，以便了解ＭＴＳ１／ｐ１６基因…     

胃癌中p16基因缺失与突变的研究

目的:调查胃癌患者p16基因的改变。方法:采用PCR和DNA测序方法,对36例胃癌患者肿瘤组织标本的p16基因外显子1、2和3进行检测,研究p16基因的缺失和突变情况。结果:发现2例有p16基因外显子1的纯合缺失,3例有外显子3的纯合缺失,缺失频率为13.89%,5例均为弥漫型胃癌。所有标本未检出点突变。结论:p16基因的缺失与胃癌的发生和发展有一定的联系。     

Telomerase activity in gestational trophoblastic disease

AIMS: To investigate the pattern of telomerase activity in hydatidiform mole as compared with normal placenta and choriocarcinoma, and to determine the prognostic significance of telomerase activity in hydatidiform mole. METHODS: Telomerase activity in 35 cases of hydatidiform mole, 35 normal placentas, one choriocarcinoma sample, and two choriocarcinoma cell lines (JAR, JEG3) was determined using the sensitive polymerase chain reaction based telomeric repeat amplification protocol (TRAP) assay. Two cases of breast carcinoma and two cases of ovarian carcinoma were also included as positive controls in the telomerase assay. RESULTS: Telomerase activity was detected in 11 of 30 early placentas (36.7%), one of five term placentas (20%), five of 27 hydatidiform moles which regressed spontaneously (18.5%), and six of eight hydatidiform moles which developed persistent trophoblastic disease (75%) (including three which developed metastases). Hydatidiform moles which subsequently developed persistent disease, especially those which metastasised, were more likely to express telomerase activity (p < 0.01). However, there was no significant difference in the frequency of telomerase activity between early placentas and hydatidiform mole. Strong telomerase activity was observed in choriocarcinoma tissue, choriocarcinoma cell lines, and ovarian and breast carcinomas. CONCLUSIONS: Telomerase activation occurs in hydatidiform mole with a similar incidence to early normal placentas. This supports the concept that hydatidiform mole is essentially an abnormal conceptus. There is an association between telomerase activation and the development of persistent trophoblastic disease. Further study is warrant to confirm the prognostic significance of telomerase activity in hydatidiform mole.     

肺癌组织CDKN2/p16基因点突变的分析

目的 研究我国肺癌组织中CDKN2／p16基因点突变的发生情况。方法 采用聚合酶链反应－单链构象多态性和序列分析的方法，对89例肺癌组织中CDKN2／p16基因第2外显子的点突变进行了研究。结果 在未发生第2外显子缺失的69例肺癌组织中，发现CDKN2／p16基因第2外显子变异或可疑变异者16例；对该16例进行序列分析，共发现有9例存在不同类型的基因点突变。结论 点突变是CDKN2／p16基因失活的一种形式，但不是主要形式。由点突变引起的CDKN2／p16基因失活在肺癌的发生发展中起一定的作用。     

原发性肝癌及慢性肝脏病变端粒酶活性的研究

目的比较原发性肝细胞癌（ＨＣＣ）及其癌旁不同慢性病变组织端粒酶活性的异同,探讨端粒酶活性在恶性肿瘤诊断中的意义。方法用ＴＲＡＰ方法检测３８例ＨＣＣ及其癌旁不同慢性病变肝组织的端粒酶活性。同时以４例正常肝组织为对照。结果３８例ＨＣＣ中３２例显示端粒酶活性（８６８％）。端粒酶活性与ＨＣＣ的细胞分化、类型、大小及有无乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染无关,但与病人血清中甲胎蛋白（ＡＦＰ）水平相关。端粒酶活性阴性组ＡＦＰ水平明显低于各阳性组（Ｐ＜００１）。正常肝（４例）、先天性胆管闭锁（４例）、肝小叶间纤维增生（２例）、慢性病毒性肝炎（２例）及未见明显病变肝组织（７例）均未见有端粒酶活性。２５例肝硬化中４例端粒酶呈弱活性。结论端粒酶活性见于大多数ＨＣＣ及个别肝硬化组织,其活性可能在ＨＣＣ的发生、发展中起重要作用,有希望成为恶性肿瘤诊断的标记物。     

人非小细胞肺癌细胞中端粒酶活性的检测与研究

目的 研究非小细胞肺癌细胞癌组织中端粒酶活性表达,探讨端粒酶生表达与非小细胞肺癌发生发展的关系。方法 收集经手术及病理证实的非小细胞肺癌４８例标本,１２例肺癌癌旁肺组织、７例非肿瘤病例所取正常肺组织作对照。用端粒酶检测试剂盒检测组织本端粒酶活性。结果 ７５．００％（３６／４８）非小细胞肺癌组织标本检出端粒酶活性,８．３３％（１／１２）癌旁肺组织检出端粒酶活笥,７例非肿瘤标本所取的正常肺组织均未检出