胶体金免疫层析试验检测霍乱弧菌的现场评价

霍乱是一种由霍乱弧菌引起的、以腹泻为主要症状的烈性肠道传染病，具有发病急、传播快及病死率高等特点。目前，快速检测霍乱弧菌的方法较多，虽有较高的特异性和敏感性，但存在着各种不同的缺陷，如技术条件要求高、设备比较昂贵等。为此，我们研制了胶体金免疫层析试验(dipstick方法)用于霍乱弧菌的快速诊断，现报道如下。     

O1群霍乱弧菌胶体金法快速检测

目的 了解胶体金法检测O1群霍乱弧菌的特异性、灵敏度和实用性。方法 取患者粪便标本,先用碱性蛋白胨水35℃增菌6h,然后用胶体金法进行检测,同时作霍乱弧菌常规培养,培养出细菌后用血清凝集法作为鉴别诊断O1群霍乱弧菌的金标准,用统计学方法对胶体金法诊断试验的评价指标进行计算。结果 700份样本中,常规法培养出O1霍乱弧菌105株,胶体金法试验阳性108株,经χ²检验,差异无统计学意义(χ²=0.24,P>0.05),表明胶体金法检测O1群霍乱弧菌与常规培养法检测结果之间的差异无统计学意义。胶体金法检测O1群霍乱弧菌诊断试验的灵敏度为93.33%,特异性为98.32%,阳性预测值为90.74%,阴性预测值为97.18%,假阴性率为1.68%,假阳性率为6.67%。结论 胶体金法检测O1群霍乱弧菌特异性高(98.32%),灵敏度好,与常规培养法的一致性也较高,在快速检测O1群霍乱弧菌中有一定应用价值。     

胶体金免疫层析法在霍乱弧菌诊断中的应用初探

胶体金免疫层析法是目前国内外所建立的一种快速诊断方法,在许多项目的应用中取得了较为理想的效果.霍乱弧菌传统诊断方法是细菌培养法.本文用胶体金免疫层析法与细菌培养法相结合的方式对疫区180份标本进行同步试验,比较分析并摸索出一些经验.现报道如下.     

胶体金法与分离法检测霍乱弧菌结果比较

2霍乱弧菌的检测目前以培养法为标准,该法可用于各种临床标本,而近几年发展起来的胶体金免疫快速检测法,是利用单克隆抗体胶体金标记技术和膜层析技术研制而成,用于定性检测标本中可能存在的霍乱弧菌群菌体抗原。该法操作简单,检测结果清晰,易于判断,巳广泛应用于临床和基层医疗单位对可疑霍乱标本的快速检测。为了探讨快速法在临床标本中的使用情况,我们对检测结果进行分析。     

应用判别分析评价霍乱弧菌的诊断试验

本研究采用由纯培养菌和NaCl配制的模拟标本，生理盐水作为空白对照，水弧菌和大肠杆菌作为病原体阴性对照，应用判别分析评价霍乱弧菌的诊断试验，结果表明，PCR试验、细菌培养，凝集试验的判别能力均显著，PCR试验的判别能力大于其他两个试验。     

霍乱弧菌三种试验的诊断效果比较

应用纯培养菌制备标本，以生理盐水为空白对照，共检测１１７例，并试验了实际标本的处理方法。从ＰＣＲ法、菌培养、凝集试验入选判别模型的顺序、真实性评价及ＲＯＣ曲线面积大小比较３个诊断试验的判别能力的大小。结果表明，３个诊断试验均入选判别模型，它们对诊断霍乱的判别能力均显著，３个指标的入选顺序为：ＰＣＲ试验→菌培养→凝集试验，第一个入选的指标是Ｘ１（ＰＣＲ），其对判别函数的贡献最大，判别能力也最大，其次是菌培养，最后是凝集试验；以判别函数为标准，ＰＣＲ试验的灵敏度及特异度均可达到１００％，细菌培养灵敏度为１００％，特异度为９６．５５％，假阳性率为３．４５％；凝集试验灵敏度为６４．７７％，特异度为９６．５５％，假阳性率为３．４５％，假阴性率为３５．２３％，３种试验的真实性评价表明ＰＣＲ试验的真实性高于其他两个试验；３种试验的ＲＯＣ曲线面积由大到小顺序是：ＰＣＲ试验（０．９６１７）＞菌培养（０．９５９６）＞凝集试验（０．６３３４），故诊断霍乱的判别能力由大到小的顺序是：ＰＣＲ试验＞菌培养＞凝集试验。ＰＣＲ试验的判别能力大于菌培养、凝集试验     

实时荧光PCR法、胶体金法和培养法检测甲鱼中霍乱弧菌

目的优化水产品甲鱼中霍乱弧菌的检测程序,提高甲鱼中霍乱弧菌检出率。方法用实时荧光PCR、常规细菌培养、胶体金法同时对甲鱼中霍乱弧菌进行检测,并用实时荧光PCR法检测标本中霍乱弧菌ctx基因。结果共检测185份甲鱼样品,其中实时荧光PCR法检出28份霍乱弧菌核酸阳性,阳性率为15.14%;6份ctx基因核酸阳性,阳性率21.43%(6/28)。常规细菌培养法分离出2株菌株,一株为O139群霍乱弧菌,一株为小川型霍乱弧菌,用实时荧光PCR检测这两株纯培养菌株或原始标本,霍乱弧菌ctx基因均为阴性;胶体金法未检出阳性标本。结论对于水产品标本,可先用实时荧光PCR法筛检霍乱弧菌,阳性标本再进行传统细菌分离培养,以提高霍乱弧菌菌株的检出率;同时阳性标本进行霍乱弧菌ctx基因核酸检测,如也为阳性,需提高警惕,加强流行病学上的预防控制措施,及时防范霍乱疫情的发生。     

胶体金法对淋病快速诊断的价值探讨

应用艾康生物技术(杭州)有限公司研发的淋病快速诊断试剂(胶体金法),对2001年1月～4月在我院STD门诊就诊的300例患者的分泌物进行了淋病检测,并同时进行淋球菌培养,以此来验证淋病快速诊断试剂(胶体金法)的特异性和敏感性.此外还对部分患者进行解脲支原体、人型支原体、沙眼衣原体的检测,以便观察其它病原体的存在对淋病快速诊断试剂的检测有无干扰作用.     

免疫微菌落染色法快速诊断霍乱弧菌研究

本文依据细菌在免疫液相中形成微菌落的基本原理,改进设计了一种用于快速诊断霍乱弧菌的免疫微菌落染色技术,该法与免疫荧光菌球法、基因探针法相比在仪器设备、试剂制备方面均大为简化,而与SPA协同凝集试验相比敏感性及特异性大为提高。通过在市内有大综合医院、基层各防疫站应用证明该法是一种简易的、敏感性特异性好的、适于在基层医疗卫生单位推广的新技术。     

胶体金法快速检测乙肝表面抗原的结果分析

我国是乙型肝炎的高发区,乙肝表面抗原(HBsAg)阳性者占总人口的10％以上。加强对病毒性肝炎的防治是保障我国人民健康,促进经济发展和社会进步的重要措施。因此,HBsAg的检测十分重要。而此项目的检测方法有很多种,因工作需要,我们今年建立了一种快速、准确的检测乙肝表面抗原的方法——全血快速乙肝表面抗原胶体金层析法。利用快速免疫层析测定的原理,用胶体金进行标记,在试纸条上实现抗原抗体反     

海宁市霍乱病原学调查检测

目的:为了查清我市水体等外环境及患者中霍乱弧菌的菌型分布特征、毒力基因、药敏等,为霍乱防控提供科学依据。方法:采用GB15984-1995附录A、C及《霍乱防治手册》第五版中有关要求进行调查检测。结果:从外环境标本和患者中共检出霍乱弧菌83株,经血清学鉴定分型,其中:O1群埃尔托霍乱弧菌(Vibriocholerae serotypeO1,b iotype E ltor,EVC)稻叶型38株,占45.78%,O1群EVC小川型16株,占19.28%,O139群霍乱弧菌29株,占34.94%。23株霍乱弧菌噬菌体生物分型以O1群EVC稻叶型1 f居多,占86.96%(20/23);14株霍乱弧菌毒力基因检测结果均为阳性(携带ctx,ace,zot 3种毒力基因);药敏试验O1群、O139群霍乱弧菌对抗菌药物均有不同程度的耐药,其中对磺胺的耐药率高达100%;对头孢噻肟、诺氟沙星、丁胺卡那霉素敏感率高达100%。结论:河水中菌型复杂,O139群、小川、稻叶三型并存,但以O139群为主,占48.94%;井水中检出4株埃尔托霍乱弧菌均为稻叶型;甲鱼塘水中O139群与O1群小川型并存;患者中以O1群EVC稻叶型为主,占88.24%(15/17)。经噬菌体生物分型,以不常见流行株为主,毒力基因检测均为产毒株。     

甲胎蛋白胶体金诊断试剂临床应用研究

目的：用甲胎蛋白－放射免疫测定（AFP－RIA）试剂盒作对照，测定AFP胶体金诊断试剂的灵敏度及特异度。方法：双盲法对426份正常人血清、1567份临床门诊病人血清标本进行检测，以AFP－RIA定量测定试剂为判断标准，对卫生部北京生物制品研究所研制的AFP胶体金诊断试剂进行客观的临床考核。结果：AFP胶体金诊断试剂在测定正常人血清标本时的假阳性率为1.88%(8/426)；该试剂在测定临床病人血清标本时的灵敏度达到99.3%(272/274)、特异度为97.2%(1257/1293)，与AFP－RIA诊断结果的符合率为97.6%。结论：AFP胶体金诊断试剂在灵敏度和特异度上均可以和AFP－RIA试剂相媲美，可以替代AFP－RIA试剂，用于原发性肝癌的筛查。     

金标测试条与EIA检测HBsAg结果比较

目的观察金标测试条检测ＨＢｓＡｇ的效果。方法应用金标测试条和ＥＩＡ同时检测４０８份健康体检血清。结果金标测试条和ＥＩＡ检测血样中ＨＢｓＡｇ的符合率为９９．２６％,金标测试条的特异性和敏感性分别为９９．５０％和９９．０３％。另外检测甲型肝炎血清,没有发现交叉阳性。结论金标测试条快速简便,适用于各级医疗单位,特别是紧急情况及单个样品的使用。     

多重荧光定量PCR同时检测霍乱弧菌、副溶血性弧菌和创伤弧菌的方法研究

目的:利用多重荧光定量PCR技术检测霍乱弧菌、副溶血性弧菌、创伤弧菌。方法:以溶藻弧菌等17种相关试验菌株做特异性检测;并将标准菌株稀释成不同梯度,做灵敏度检测。结果:与传统的检测方法相比,该方法有很好的特异性且灵敏度高,检测时间短并可节省人力,具有快速方便等优点。结论:适用于样品中霍乱弧菌、副溶血性弧菌和创伤弧菌的快速检测。检测限分别为:霍乱弧菌为280 cfu/ml;副溶血性弧菌为:100 cfu/ml;创伤弧菌为:450 cfu/ml。     

霍乱弧菌分子生物学检测技术介绍

随着医学分子生物学的迅速发展,大量的分子生物学技术被用于霍乱弧菌的研究,为霍乱弧菌快速检测及分型提供了重要依据,也进一步从分子水平阐明了霍乱弧菌的变异和不同菌株之间的遗传关系,以及霍乱疫情的溯源、菌株类型和流行性质.     

水产品中霍乱弧菌的监测方法研究

目的:研究水产品中霍乱弧菌的监测方法,及时发现被霍乱弧菌污染的水产品,采取有效防控措施,防范霍乱疫情的发生。方法:用实时荧光PCR法、胶体金法、分离培养法三种方法分别对180份水产品进行霍乱弧菌检测,阳性样品再进行霍乱肠毒素检测。结果:三种方法检出了44份核酸阳性标本,18份霍乱肠毒素阳性标本,分离出8株霍乱弧菌。结论:在进行水产品霍乱监测时,可以先用实时荧光PCR进行初筛,筛出核酸阳性标本,进行霍乱肠毒素检测,及时发现被霍乱产毒株污染的水产品,再对筛出的核酸阳性标本结合胶体金法进行分离培养和分型鉴定,进一步完成霍乱疫情的确证和分析。     

一例霍乱带菌者携带两株霍乱弧菌的生物学特性研究

目的:对同一霍乱带菌者中分离的2种血清型霍乱弧菌开展生物学特征研究。方法:应用噬菌体生物分型方法、药敏纸片法、PCR方法和脉冲场凝胶电泳试验对两株菌开展研究。结果:两株菌的血清型、噬菌体生物型均不同,耐药性、毒力基因结果相同,脉冲场凝胶电泳分型结果显示带型高度相似。结论:两株菌虽然存在一定差异,但差异非常小,应为同源菌株。     

霍乱弧菌的质粒研究进展

本文对国外报道的霍乱弧菌中的质粒携带率以及质粒决定的生物学功能进行综述。霍乱弧菌无论是Ｏ１、Ｏ１３９还是非Ｏ１非Ｏ１３９均不同程度携带质粒,这些质粒主要与菌株的耐药性有关,部分可能与菌株的致病性有一定联系。因此对霍乱弧菌进行质粒分析将是霍乱子生物学研究的重要内容。     

霍乱弧菌毒力基因LAMP方法快速检测

目的 建立快速、特异检测霍乱弧菌的环介导等温扩增(LAMP)方法。方法 针对霍乱弧菌毒素基因(ctxA)设计4条引物,建立环介导等温扩增检测方法,优化反应体系,测定方法的特异性和灵敏度,并进行鱼肉模拟样品和实际样品检测。结果 LAMP最佳反应条件为8.0 mmol/L Mg²⁺、0.6 mmol/L dNTPs、1.6 μmol/L FIP和BIP(2条内引物)、0.2 μmol/L F3和B3(2条外引物);对细菌纯培养物的检测灵敏度为10 cfu/mL,对鱼肉模拟样品检测灵敏度为10² cfu/g;在16份实际样品中检测出4份ctxA基因阳性。结论 建立的LAMP方法灵敏度高、特异性强,可快速地检测食品样品中霍乱弧菌。