乙型肝炎病毒C基因及其启动子变异研究进展

本文就近年来导致ＨＢｅＡｇ阴性的ＨＢＶＣ基因及其启动了变异的研究进展综述，在发现前Ｃ１８９６Ｇ→Ａ变异的基础上发现了Ｃ区启动子变异，此外，尚有前Ｃ起始密码变异，第二密码子变异以及Ｃ２４～２７位碱基插入变异。前Ｃ／Ｃ变异发生率可能与病毒基因型有关，干扰素治疗是否促进前Ｃ／Ｃ变异发生尚难定论，前Ｃ／Ｃ及Ｃ区启动子变可能使病毒致病力加强，但并非肝病加重的唯一的原因，发生前Ｃ／Ｃ变异的病毒对干扰素的反应性     

内江市东兴区乙型肝炎病毒基因型、基本核心启动子和前C区变异分析

目的 了解内江市东兴区乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）慢性感染者中的HBV基因型和基本核心启动子（basal core promoter,BCP）、前C(Precore,PC)区变异。方法 从慢性HBV感染者血清标本中提取病毒DNA,进行核苷酸测序,构建进化树确定基因型,分析BCP和前C区位点变异。结果 S基因序列进化树分析显示,64份标本为B基因型,7份为C基因型,1份为I基因型;获取的53份BCP和PC序列标本中,25份标本发生A1762T/G1764A或G1896A变异;7份C基因型标本中6份发生A1762T/G1764A变异;B基因型标本以G1896A变异为主,并与A1762T/G1764A联合变异,HBeAg阳性组和阴性组之间G1896A和A1762T/G1764A变异率有差异（P均<0.05）。其他包括HBeAg前体启动子变异、1846位点核苷酸缺失等。结论 内江市东兴区慢性HBV感染者以B基因型感染为主,1例为I基因型。B基因型HBV以G1896A变异最常见,并与A1762T/G1764A联合变异,C基因型HBV更容易发生A1762T/G1...     

乙肝病毒核心基因启动子突变的研究进展

乙肝病毒核心基因启动子突变的研究进展方钟燎王树声·综述·１９９７－０７－０５收稿。作者单位：广西壮族自治区卫生防疫站（南宁５３００２１）乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）是一个３．２Ｋｂ的环状ＤＮＡ病毒，含有４个开放读码框的ＨＢＶ基因组至少编码７种病毒蛋白，ＨＢ...     

慢性乙型肝炎病毒感染者乙型肝炎病毒S基因变异分析

目的探讨湖州地区慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者乙型肝炎病毒S基因序列变异状况,了解该地区乙型肝炎病毒S基因的病毒学特点。方法应用聚合酶链反应(PCR)扩增湖州地区40例HBV-DNA阳性的慢性乙型肝炎病毒感染者S基因,并对扩增产物进行测序,将测序结果与GenBank中的标准序列进行比对分析。结果 40例HBV感染者中B基因型26例,C基因型14例,血清学分型adw型25例,adr型13例,ayw和ayr各有1例;随无症状携带者、慢性肝炎、肝硬化、肝癌疾病的进展,氨基酸变异有逐渐增加的趋势,肝硬化、肝癌患者与携带者、慢性肝炎患者比较,S基因变异率在主要亲水区(MHR)、a决定簇以及第一茎环区差异均有统计学意义(P<0.05);126位点氨基酸变异在较为严重的肝脏疾病中发生率较高(P<0.05)。结论湖州地区乙型肝炎病毒血清型以adw型和adr型为主,S基因变异可能与肝病严重程度相关,特别126位点变异可能与较为严重肝病有一定相关性。     

乙型肝炎病毒C基因启动子变异检测方法的建立

目的 建立乙型肝炎病毒（HBV）C基因启动子（BCP）变异的限制性片断长度多态性（RFLP）检测方法,更好地了解BCP变异的发生与乙型病毒性肝炎（乙肝）的病情、预后以及治疗的影响。方法 结合引物设计软件Primer Premier5.0,选定保守区域,设计了2对最佳引物,建立了HBV BCP变异检测PCR-RFLP的实验方法。结果 对34例不同乙肝患者进行BCP变异检测发现：肝硬化（LC）组和慢性乙型肝炎（CHB）组中发生变异的例数明显高于无症状感染者（Asl）（χ2值分别为6.39和3.98,P〈0.05）。并且HBeAg（-）组发生变异的例数明显高于HBeAg（＋）组（χ2=4.60,P〈0.05）,结论该方法操作简便、敏感度与特异性高、结果 可靠,并可用于较大范围调查该变异株的流行情况,为临床进一步诊断和治疗提供了科学的依据,同时对人们进一步了解HBVBCP变异的发病机制具有重要意义。     

HBsAg无症状携带者乙型肝炎病毒核心基因启动子突变的研究

目的了解HBsAg无症状携带者乙型肝炎病毒(HBV)核心基因启动子双突变(nt1762 A→T,nt1764 G→A)发生情况及其与基因型、病毒量和HBeAg的关系。方法 HBsAg无症状携带者从隆安研究队列中选择,用套式聚合酶链反应(nested PCR)对研究对象血清HBV核心基因启动子、S基因扩增、序列分析及基因分型,用HBV引物和双标记的TaqMan探针扩增和定量病毒DNA。结果观察开始时核心基因启动子为野毒株的109例观察对象,3年后双突变平均年发生率为2.8%;观察开始时已发生nt1762或nt1764点突变的59例对象,3年后另一个位点也发生突变的平均年发生率为6.8%,两率差异有统计学意义(χ2=5.109 0,P<0.05)。nt1762 A→T突变组HBeAg阳性率(45.5%,10/22)与nt1764 G→A突变组HBeAg阳性率(10.8%,4/37)差异有统计学意义(χ2=9.149,P<0.05)。20例基因型B未发生双突变,重组基因型年双突变率为4.8%(2/14),基因型C年突变率为3.1%(7/75),各基因型间突变率差异无统计学意义(P>0.05)。5例双突变发生后HBeAg仍然阳性者病毒量有下降趋势,而另5例突变发生后HBeAg阴性者其病毒量有升有降。结论 HBV核心基因启动子双突变年发生率较高,这两个位点中的任何一个发生突变是双突变的过渡形式,双突变与基因型无关,nt1764 G→A突变与HBeAg阴性有关。     

乙型肝炎病毒前C区及基本核心启动子区变异与基因型的临床相关性研究

目的探讨乙型肝炎病毒前C区G1896A突变、基本核心启动子区A1762T、G1764A双突变与基因型、拉米夫定疗效的相关性。方法采用基因测序法对接受拉米夫定治疗的81例慢性重型乙型肝炎患者的血清标本进行前C区、基本核心启动子区(BCP区)、基因型及逆转录酶区(P区)检测,并对前C区、BCP区的变异与基因型、逆转录酶区的变异进行相关性分析。结果 81例慢性重型乙型肝炎患者送检标本中,68份标本可检出前C区G1896A变异或BCP区A1762T/G1764A变异;单纯G1896A突变31例,单纯A1762T/G1764A突变24例,前C区联合BCP区变异13例;81例慢性重型乙型肝炎患者经拉米夫定治疗后,有45例发生变异,其中180M和204V变异株35例,204I变异株10例;前C区变异在野生型组、变异型组中的检出率分别为38.9%、66.7%,两者差异有统计学意义(P<0.05);BCP区变异在野生型组、变异型组中的检出率分别为33.3%、55.6%,两者差异有统计学意义(P<0.05);在81例慢性重型乙型肝炎患者血清标本中,B基因型18例,C基因型63例;前C区变异在B、C基因型中的检出率分别为72.2%、33.3%,两者差异有统计学意义(P<0.05);BCP区变异在B、C基因型中的检出率分别为16.7%、54.0%,两者差异有统计学意义(P<0.05);G1896A突变在B基因型感染者中检出率明显高于C基因型感染者;A1762T/G1764A双突变在B基因型感染者中检出率明显低于C基因型感染者。结论发生G1896A突变和A1762T/G1764A突变的患者,在接受拉米夫定治疗后更易发生逆转录酶区的变异;G1896A突变易出现在B基因型感染者中,A1762T/G1764A突变易出现在C基因型感染者中。     

乙型肝炎病毒X基因变异的研究进展

乙型肝炎病毒Ｘ基因是ＨＢＶ基因组中比较保守的开放读码框架。本文就ＨＢＶ Ｘ基因的结构特点，游离ＨＢＶ Ｘ基因的变异，整合ＨＢＶ基因的突变和ＨＢＶ Ｘ基因变异的生物学意义等有关情况作了简述。     

原发性肝癌患者乙型肝炎病毒C基因启动子变异与HBV DNA关系的探讨

目的研究原发性肝癌患者乙型肝炎病毒C基因启动子变异(HBVBCP)与HBVDNA关系。方法(1)采用PCR微板核酸杂交结合ELISA检测显示技术,对患者血清进行检测HBVBCP区核苷酸(nt)1762碱基A→T和1764G→A联合突变。(2)采用PCR结合荧光探针检测技术,检测患者血清HBVDNA含量。结果(1)HBVBCP变异在原发性肝癌组的阳性率为70.0%(14/20),显著高于慢性肝病组的阳性率37.8%(59/156)(P=0.008)。(2)原发性肝癌组的血清HBVDNA含量(107.6414±1.3398拷贝/ml)明显高于慢性肝病组的HBVDNA含量(106.7672±1.7669拷贝/ml)(P=0.034)。结论HBVBCP变异与原发性肝癌关系密切,且血清HBVDNA复制水平在原发性肝癌的发生中可能也起到主要的作用。     

广西原发性肝癌患者HBV—DNA核心基因启动子突变的研究

用套式ＰＣＲ对广西１６例原发性肝癌患者血清ＨＢＶ ＤＮＡ核心基因启动子进行扩增，阳性者用Ｓａｎｇｅｒ氏ＤＮＡ测序法进行序列分析，结果表明１４例患者ＰＣＲ阳性，阳性率为８７．５０％，其中除唯一的ＨＢｅＡｇ阳性者（Ｃ２３）外，均具有双突变，而且所有的血清标本在这突变点周围均有不同部位的点突变，但在标本Ｃ２３整个启动子中，未发现任何碱基突变。本文对这种突变株可能的致癌机理进行了讨论。     

慢性乙型肝炎患者HBV前C区及BCP区变异与血清细胞因子的关系

目的探讨乙型肝炎e抗原(HBeAg)阴性和阳性慢性乙型肝炎(CHB)患者乙型肝炎病毒(HBV)前C区、基本核心启动子(BCP)区变异特点以及与血清细胞因子干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-10水平的关系。方法将120例HBV DNA阳性CHB患者(HBeAg阴性和阳性各60例)与60例健康体检者(对照组)纳入研究。荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测HBeAg阴性和阳性组患者HBV DNA水平,直接测序法检测两组前C区G1896A变异及BCP区A1762T和G1764A变异,双抗夹心酶联免疫吸附试验检测血清细胞因子IFN-γ/、IL-10的水平。结果 120例HBV DNA阳性CHB患者HBV前C区和BCP区变异总检出率为60.00%(72/120),其中HBeAg阴性组变异检出率为80.00%(48/60),HBeAg阳性组变异检出率为40.00%(24/60),两组比较,差异有显著性(x~2=20.00,P=0.000)。HBeAg阴性组G1896A变异(38.33%)和联合变异(G1896A、A1762T和G1764A同时变异,25.00%)的检出率明显高于HBeAg阳性组(16.67%、0.00%)(分别x~2=7.06,P=0.008;x~2=17.14,P=0.000)。变异组血清IFN-7水平为(102.33±27.20)pg/mL,明显高于无变异组(79.18±16.43)pg/mL及对照组(35.77±4.23)pg/mL(分别t=5.72,t=19.33,均P=0.000);变异组血清IL-10水平为(28.13±7.00)pg/mL,明显高于无变异组(13.91±5.42)pg/mL及对照组(13.68±2.27)pg/mL(分别t=12.50,t=15.65,均P=0.000)。结论 G1896A变异和联合变异更常见于HBeAg阴性CHB;G1896A和A1762T/G1764A变异与血清细胞因子IFN-γ和IL-10水平升高有关。     

上海市88例乙型肝炎患者乙肝病毒基因型与基因突变的关系

[目的]了解乙型肝炎患者乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)基因型分布及有关位点的基因突变情况. [方法]随机抽取上海市88例乙肝患者,采用巢式聚合酶链反应检测HBV基因型,扩增HBV Pre-S/S区和C区序列并测序.[结果]在88名研究对象中共检出C基因型52例(59.09％)、B基因型36例(40.91％).B基因型的平均年龄为(38.56±12.55)岁,低于C基因型的(44.54±15.72)岁,两组年龄分布差异有统计学意义(P＜0.05).B基因型的乙肝表面E抗原(HBeAg)阳性率(66.67％)高于C基因型(28.85％),差异有统计学意义(P＜0.05).C基因型C1762、C1764位点的突变率分别为50.00％和50.77％,分别高于B基因型的27.78％和25.00％,差异均有统计学意义(P＜0.05). [结论]本研究乙型肝炎患者的HBV基因型以C型为主,C基因型C1762、C1764位点的突变率高于B基因型,应加强HBV基因型和基因突变的监测.     

太原地区孕妇HBV感染者a决定簇的变异

目的 了解太原地区孕妇乙型肝炎病毒（HBV）感染者HBVS基因a决定簇变异情况。方法 2001年11月～2004年7月，采集太原市传染病医院妇产科住院的HBsAg阳性孕妇外周血，采用ELISA法检测血清HBsAg、HBeAg，巢式PCR法检测血清HBVDNA，对41例孕妇标本进行了PCR产物直接测序，与Genebank中HBV中国大陆流行株进行多重序列比对，分析HBVS基因a决定簇变异情况。结果 14．63％（6／41）孕妇携带HBVS基因a决定簇变异株。检出的突变位点中，aa126，aa127，aa131，aa143为较常见的氨基酸变异位点，aa125，aa135，aa137及aa140变异报道较少，大多数位点的变异导致了氨基酸替换。结论 太原地区孕妇HBV感染者携带a决定簇突变株。     

The incidence rate over 10 years of naturally occurring,cancer related mutations in the basal core promoter of hepatitis B virus

Cross-sectional analyses showed that the prevalence of basal core promoter (BCP) double mutations (nt 1762T, 1764A) of hepatitis B virus (HBV) gradually increases with age. We aimed to determine the incidence rate of the mutations over 10 years. Study subjects were selected from the Long An cohort established in 2004, including 59 with HBV with single mutations at nt 1762 or 1764 in the BCP and 342 with wild type BCP sequences at baseline. Their serum samples for analysis were obtained at the 3rd and 10th annual visits, respectively. The results showed that the annual incidence rate of BCP double mutations is 3.8% (95% confidence interval [CI]: 1.4–6.2) and tends to decrease with age. The peak incidence is in the 30–34 years age-group. The incidence rate in HBeAg positive individuals (5.5%) is significantly higher than in those without HBeAg (3.4%) (P < 0.05). The incidence rate is significantly higher in genotype C (4.8%) than in genotype B (2.8%) or I (3.1%). The incidence rate of the mutations (6.8%) developing from a single mutation at nt 1762 or 1764 is significantly higher than that (3.8%) from the wild type sequence (P < 0.005). The difference in incidence of single mutations between nt 1762 (0.7%) and 1764 (0.03%) is significant (P < 0.05). In conclusion, the incidence rate of BCP double mutations tends to decrease with age after the age of 35 years. Viruses with a single mutation at nt 1762 or 1764 are more prone to develop double mutations. Nt 1762 is the more common site of the first mutation.     

Non-A hepatitis B virus genotypes in antenatal clinics, United Kingdom

In the United Kingdom, the National Screening Programme for identification of hepatitits B virus (HBV) infection in pregnant women uses HBV e antigen (HBeAg) and antibody to HBeAg (anti-HBe) as markers of infectivity to determine use of immunoglobulin for hepatitis B. Serum samples from 114 HBV-infected women were analyzed. Viral loads correlated with HBeAg/anti-HBe status and viral genotypes. Among 95 mothers whose serum contained anti-HBe, viral loads ranged between undetectable and 8.6 x 10(6) IU/mL (median 228 IU/mL). Ten (10.5%) of these mothers had plasma viral loads >10(4) IU/mL; 6 were infected with genotype E and one each with genotypes A, B, C, and D. All viruses had precore stop codon or basal core promoter mutations. Preponderance of genotypes other than A among antenatal mothers in the United Kingdom reflects increasing globalization and trends in immigration. HBeAg serostatus is no longer sufficiently accurate for inferring potential infectivity of pregnant HBV carriers.     

乙肝病毒前S基因变异与乙肝肝硬化的相关性研究

目的 探讨乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)前S基因(preS)变异与HBV感染后肝硬化发生的相关性。方法 采用病例对照研究设计,对50例慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者和67例乙肝肝硬化(liver cirrhosis,LC)患者的血清HBVPreS基因进行扩增和测序,应用MEGA7软件进行序列比对,使用SPSS 16.0统计软件对PreS基因热点变异与LC的相关性进行单因素和多因素分析。结果 单因素分析结果表明,HBV基因组PreS区T3116m(χ²=8.470,P=0.004)、A49m(χ²=4.939,P=0.026)、T53m(χ²=6.683,P=0.010)、A109m(χ²=5.868,P=0.015)及PreS缺失变异(χ²=12.154,P=0.000)与LC发生显著相关。PreS缺失变异在失代偿期LC患者中的频率(63.16%)显著高于代偿期LC患者(31.03%)(P=0.007)。多因素分析结果表明,年龄越大(OR=1.07,95%CI:1.02~1.11)、T3116m(OR=4.18,95%CI:1.39~12.61)、PreS缺失变异(OR=7.20,95%CI:2.09~24.80)是LC的独立危险因素。结论 HBV PreS缺失变异与T3116m是乙型肝炎患者进展至LC的危险变异,还需要大样本人群进行验证。     

50例HBV基因分型及P区耐药突变分析

目的:调查温州乙型肝炎患者血清HBV基因分型和P区基因逆转录酶区(RT区)序列的突变情况。方法:选取50例接受核苷类似物治疗后的乙型肝炎患者作为研究对象,采用PCR产物直接测序法,并对扩增产物进行测序,将测序结果与GenBank中的标准序列进行比对分析,同时确定基因型。结果:在50例中C型44例,占88%,B型6例,占12%。存在位点突变者25例(50%)。其中检出以单位点rtM204I/V/S突变为主,9例,占36%,rtA181V/T突变4例,占16%,rtM204I/V/S+rtL180M突变5例,占20%,rtV214A,rtA181V/T+rtV173L,rtM204I/V/S+rtQ215H,rtM204I/V/S+rtL180M+rtV173L,rtM204I/V/S+rtL180M+rtV207I,rtM204I/V/S+rtL180M+rtT184A/G/I/S,rtM204I/V/S+rtL180M+rtT184A/G/I/S+rtA181V/T突变各占1例,占4%。结论:多数乙型肝炎患者在HBV P区可检出突变,突变形式多样,其中以rtM204I/V/S突变为主,应用DNA序列测定法分析HBV P区基因突变,获得的信息全面,对临床评估病情进展和实施抗病毒治疗有参考价值。     

贵州省乙型肝炎病毒前C区及基本核心启动子变异分布

目的调查贵州省乙型肝炎病毒(HBV)前C区A1896、基本核心启动子区(BCP) T1762/A1764变异分布。方法收集贵阳、遵义、凯里、都匀4地区不同民族无症状携带者(ASC)、慢性肝炎(CH)、肝炎肝硬化(LC)、肝细胞肝癌(HCC)患者血清482份,用测序及限制性片段长度多态性检测A1896、T1762/A1764变异,用S基因PCR-RFLP确定基因型。结果A1896、T1762/A1764变异检出率分别为23.03%和29.67%。汉族感染者A1896、T1762/A1764变异检出率为27.64%和36.04%,高于侗、苗、布依族感染者合并后的7.96%、8.85%(P<0.01)。A1896变异在B、C基因型中的分布为20.34%和27.13%(P>0.05),T1762/A1764变异为18.97%和46.28%(P<0.01)。A1896、T1762/A1764变异在HBeAg阴、阳性组间的分布差异有统计学意义(P值均<0.01)。从ASC到HCC组,A1896、T1762/A1764变异分布逐渐增高,LC、HCC组的检出率明显高于CH和ASC组(P值均<0.01)。A1896、T1762/A1764变异的分布:贵阳(分别为31.79%和41.06%)高于遵义(10.94%和14.06%)、都匀(8.64%和11.1I%)及凯里(2.86%和2.86%),但多因素logistic回归分析在控制了HBeAg、HBV基因型及临床类型影响后,在地区间分布差异无统计学意义。结论A1896、T1762/A1764变异在贵州省不同民族间分布有一定差异。C型感染者易发生T1762/A1764变异,两种变异均与疾病进展有关。     

阿德福韦酯相关位点预存病毒变异的病原学及临床特征分析

目的了解慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者抗病毒治疗前阿德福韦酯(ADV)相关位点预存病毒变异的发生情况以及临床特点。方法采用基因测序的方法对211例拟行抗病毒治疗的慢性HBV感染者的血清样本进行P区病毒基因测序,同时检测HBV基因型、HBV血清学标志物、HBV DNA等。依据病毒检测结果分为预存病毒变异组和无变异组。结果 211例慢性HBV感染者中,检测出ADV预存病毒变异9例(4.27%),其中4例有不规范的核苷(酸)类似物用药史(ADV除外),变异位点以rtN238T为主(44.44%),且以多个位点变异(55.56%)、完全变异株和野生株共存(88.89%)为主;预存病毒变异组中男性及终末期肝病的构成比均高于无变异组(P<0.05,P<0.001);预存病毒变异组的年龄为(45.9±10.5)岁,无变异组为(35.6±10.2)岁(t=2.978,P=0.003);两组的HBV基因型构成、E抗原阳性状态及HBV DNA水平比较差异均无统计学意义。结论在未经ADV抗病毒治疗的慢性HBV感染者中存在ADV相关位点预存病毒变异,并可能与患者不规范应用抗病毒药物有关;HBV感染史较长、病情持续进展以及男性患者易出现ADV相关位点预存病毒变异;患者应该接受和执行规范的抗病毒治疗,以达到预防病毒变异,从而避免挽救治疗。