EB病毒潜在膜蛋白对鼻咽癌细胞系CNE1生长及HLA表达的影响

目的研究ＥＢＶ－ＬＭＰ对高分化鼻咽癌细胞株ＣＮＥ１生长及ＨＬＡ表达的影响。方法以人高分化鼻咽癌细胞株（ＣＮＥ１）为对象，采用电穿孔基因转染技术，将重组ＥＢＶ－ＬＭＰ表达质粒ｐＣＭＶａ－ＬＭＰ转染ＣＮＥ１细胞。用细胞体外增殖试验、免疫组化和流式细胞术等方法，观察细胞生长及ＨＬＡ表达的变化。结果ＥＢＶ－ＬＭＰ在体外可明显促进ＣＮＥ１细胞的增殖，增殖吸光度（Ａ）比值试验组与空白组及阴性对照组比较有显著性差异（Ｐ＜０．０１）；实验组细胞软琼脂克隆形成率显著高于空白及阴性对照组（Ｐ＜０．０１）；细胞ＤＮＡ含量明显增高（Ｐ＜０．０１／０．０５）；ＦＣＭ法测定细胞角蛋白表达，实验组比空白及阴性对照组阳性率显著降低（Ｐ＜０．０５）；ＨＬＡ免疫组化检测结果表明，ＬＭＰ表达细胞系ＨＬＡⅠ类及Ⅱ类抗原的表达都明显下降（Ｐ＜０．０１）。结论ＥＢＶ－ＬＭＰ对ＣＮＥ１细胞生长有明显的促进作用且可明显抑制细胞分化，ＬＭＰ可致鼻咽癌细胞ＨＬＡ抗原的表达改变。     

EB病毒潜伏膜蛋白对人鼻咽癌细胞系CNE1生长分化的影响

目的 研究ＥＢ病毒潜伏膜蛋白（ＥＢＶ－ＬＭＰ）对人高分化鼻咽癌细胞生长分化的影响。方法 以人高分化鼻咽癌细胞株（ＣＮＥ１）为对象,采用电穿孔基因转染技术,将重组ＥＢＶ－ＬＭＰ表达质粒转染ＣＮＥ１细胞。以载体质粒转染及ＣＮＥ１细胞为对照,用细胞体外增殖实验、流式细胞信（ＦＣＭ）和裸鼠体内丰瘤实验等,观察细胞生长分化的变化。结果 ＥＢＶ－ＬＭＰ在体外可明显促进ＣＮＥ１细胞地增殖,实验组平均吸光度（Ａ）     

整合在鼻咽癌细胞株SUNE-1中的EB病毒LMP-1基因的缺失性改变

目的:研究EBVLMP-1基因在SUNE-1细胞染色体上的整合情况。方法:采用PCR方法检测整合于SUNE-1染色体的LMP-1基因;限制性内切酶酶切和PCR方法初步验证部分LMP-1基因发生缺失;DNA测序进一步确定LMP-1基因的缺失情况。结果:LMP-1基因在SUNE-1细胞染色体上的整合有完整与缺失两种情况;其缺失发生于其两个内含子部分。结论:整合于SUNE-1染色体DNA上的EBVLMP-1,有部分发生了内含子 1与 2的完全缺失.     

鼻咽癌高发区何杰金病EB病毒DNA及潜伏感染膜蛋白检测的意义

为检测鼻咽癌高发区何杰金病中爱泼斯坦-巴尔病毒（EBV）DNA及其表达产物──潜伏感染膜蛋白的存在及探讨其意义，采用热启动聚合酶链反应（PCR）及LSAB免疫组化法结合微波处理技术，检测了选自鼻咽癌高发区的40例何杰金病、20例淋巴结良性病变存档标本中的EBVDNA和潜伏感染膜蛋白（LMP1）。结果显示：65％的何杰金病中EBVDNA阳性，淋巴结良性病变中的阳性率也达50．0％（10例／20例），两者差异无显著性（P＜0．05）。LMP1只在何杰金病肿瘤细胞中表达，其检出率为52．5％（21例／40例）。20岁以下何杰金病中EBVDNA和LMP1的检出率分别为84．6％（11例／13例）和76．9％（10例／13例），皆明显高于20岁以上年龄组（分别为14例／25例，56．0％和10例／25例，40．0％）P＜0．05。本结果表明：鼻咽癌高发区半数以上何杰金病肿瘤细胞中有EBV潜伏感染，并可能在肿瘤的发生发展中起着一定的作用。提示青少年何杰金病和EBV潜伏感染并表达LMP1的关系更为密切。     

EB病毒LMP1表达对鼻咽癌细胞增殖及细胞周期分布的影响

目的:观察EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)表达对鼻咽癌细胞系增殖和细胞周期分布的作用。方法:用免疫组化(LSAB)法检测LMP1蛋白的表达;用MTT法测定鼻咽癌细胞系的增殖能力;用流式细胞术检测细胞周期的分布。结果:表达LMP1的鼻咽癌细胞系L-CNE1的OD值明显高于LMP1阴性的鼻咽癌细胞系V-CNE1和CNE1(P＜0.001)。L-CNE1细胞系的G₁期细胞百分率明显减少和S期细胞百分率明显增加,与V-CNE1和CNE1细胞系比较均有非常显著性差异(P＜0.001)。而V-CNE1与CNE1细胞系之间各期细胞百分率则无明显差异(P＞0.05)。结论:EBV-LMP1表达可使鼻咽癌细胞系细胞周期分布改变和增殖能力增强。     

EB病毒潜在膜蛋白对鼻咽癌细胞系CNE1生长及HLA表？…

研究ＥＢＶ－ＬＭＰ对高分化鼻咽癌细胞株ＣＮＥ１生长及ＨＬＡ表达的影响。方法 以人高分化鼻咽癌细胞株为对象，采用电穿孔基因转染技术，将重组ＥＢＶ－ＬＭＰ表达质粒ｐＣＭＶａ－ＬＭＰ转染ＣＮＥ１细胞。用细胞体外增殖试验，免疫组化和流式细胞术等方法，观察细胞生长及ＨＬＡ表达的变化。结果 ＥＢＶ－ＬＭＰ在体外可明显促进ＣＮＥ１细胞的增殖，增殖吸光度比值试验组与空白组及阴性对照组比较有显著性差异；实验组细胞软     

不同来源潜伏膜蛋白1基因转染对鼻咽癌CNE1细胞生长的影响

目的:探讨不同来源的EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)基因转染对人高分化鼻咽癌(NPC)细胞系CNE1生长的影响。方法:采用脂质体介导法分别将含有来源于B95-8淋巴细胞标准株的LMP1基因(B95-8-LMP1)和来源于NPC组织的LMP1基因(CAO-LMP1)的质粒转染CNE1;RT-PCR和蛋白印迹法分别鉴定LMP1mRNA和蛋白表达;结晶紫法、流式细胞术和平板克隆形成法测定不同来源的LMP1对CNE1生长特性的影响。结果:成功建立稳定表达不同来源LMP1的CNE1细胞系。两种不同来源的LMP1均可促进CNE1细胞的生长(P<0.01);CAO-LMP1比B95-8-LMP1具有更强促进CNE1生长的作用(P<0.01)。结论:不同来源LMP1对CNE1的体外生长均有促进作用,CAO-LMP1比B95-8-LMP1具有更强的促增殖能力。     

良、恶性鼻咽活检组织中EB病毒DNA检测、EBNA的分型及表达

应用ＥＢ病毒ＤＮＡＢａｍＨＩＷ片段、ＥＢＮＡ一２Ａ、Ｂ型分了探针，检测我区鼻咽癌（包括鼻咽原位癌）、临床高度怀疑鼻咽癌（包括鼻咽上皮细胞非典型增生、颈淋巴结肿大及鼻咽结节）和慢性鼻咽炎等活检组织共９６例。各组均以Ａ型病毒感染为主：鼻咽癌组阳性为２７／３５（７７．１％）；临床疑癌组７／１０（７０．０％）；慢性鼻咽炎织１８／２７（６６．７％）。Ｗ和Ａ型均阳性的鼻咽癌组为２０／２９（６９．０％）；非癌组为８／２５（３２．０％）。同时用抗补体免疫荧光法检测ＥＢＮＡ的表达，鼻咽癌组阳性为１９／２０（９５．０％），而慢性炎组为１／１５（６．７％）。以ＥＢ病毒ＤＮＡＢａｍＨＩＷ片段、ＥＢＮＡ一２Ａ型片段和ＥＢＮＡ表达检测中任一项阳性作为ＥＢ病毒感染、整合或表达的依据，则鼻咽癌组与非癌组之间有明显的差别（Ｐ＜０．００１）。这从另一角度提示ＥＢ病毒（特别是ＥＢＮＡ一２Ａ型）感染与我区鼻咽癌病因、发病有密切关系。     

鼻咽癌中EB病毒LMP1基因的序列变异

目的 检测广州地区鼻咽癌中EB病毒LMP1基因N-和C-末端区序列变异的热点,并探讨其产生的机制。方法 收集中山大学肿瘤医院未经治疗的鼻咽癌患者鼻咽新鲜活检标本63例。采用巢式聚合酶链反应（PCR）扩增EB病毒LMP1基因N-和C-末端区,用XhoⅠ对N-末端区扩增产物进行酶切分析,并检测C-末端区扩增产物30bp缺失的情况。采用四色荧光末端终止法对4例患者N-和C-末端区的8份扩增产物进行序列分析。结果 63例鼻咽癌组织EB病毒LMP1基因N-和C-末端区有4种序列变异类型：wt-XhoⅠ／wt-LMP1（4例,6．3％）、wt-XhoⅠ＆XhoⅠ-loss／del-LMP1（4例,6．3％）、wt-XhoⅠ／del-LMP1（5例,7．9％）和XhoⅠ-loss／del-LMP1（50例,79．5％）。序列分析显示：与B95-8细胞相比较,所有检测的鼻咽癌组织中EB病毒LMP1基因均发生了错义点突变和无义点突变。错义点突变数与无义点突变数之间的比值为2．25（9／4）。结论 广州地区鼻咽癌中EB病毒LMP1基因的序列变异类型以XhoⅠ-loss／del-LMP1占主导。LMP1基因N-末端区XhoⅠ酶切位点的丢失很可能是在C-末端区30bp缺失的基础上发生的。LMP1基因的4种序列变异类型可能代表了鼻咽癌变过程中EB病毒在宿主内演变的4个时相。     

鼻咽癌组织中潜伏膜蛋白1的表达对癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨治疗前鼻咽癌组织中潜伏膜蛋白１（ＬＭＰ－１）的表达对癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 收集未经治疗的鼻咽癌活检组织标本５５例,采用原位分子杂交和免疫组化检测ＥＢＵ病毒编码的小ＲＮＡｓ和ＬＭＰ－１以及癌细胞增殖细胞核抗原指数和癌组织中凋亡要关基因产物ｂｃｌ－２的表达,以末端标记原位细胞死亡指数（ＴＵＮＥＬ ｉｎｄｅｘ ＴＩ）表示癌细胞的凋亡程度。结果（１）５５例末治疗鼻咽癌组织中２７例呈ＬＭＰ     

Immunohistochemical expression of latent membrane protein 1 (LMP1) and p53 in nasopharyngeal carcinoma: Moroccan experience

Background

Nasopharyngeal carcinoma (NPC) is a malignant epithelial tumor intimately associated with Epstein-Barr virus (EBV). NPC is a characteristic tumor displaying epidemiological, genetic and regional distribution properties that makes it unique by its natural behavior.

Objectives

To assess the expression pattern of LMP1 and p53 proteins in the different histological types of NPC in a sample of the Moroccan population and to define any association between the expression of those proteins with the sex, the age and the histological types of NPC.

Methods

Archival formalin-fixed, paraffin-embedded NPC biopsies were evaluated in 23 Moroccan patients for the presence of LMP1 and p53 using immunohistochemistry (IHC).

Results

No LMP1 expression was observed whereas 8 of 23 cases (34. 7%) had detectable p53 protein in the nuclei of tumor cells. After statistical analysis according to the Fisher''s exact probability test, no significant association between p53 expression and histological type, age and sex distributions was demonstrated (p>0.05).

Conclusion

This study confirms that p53 overexpression is present in a subset of Moroccan NPC patients. Our results are consistent with those reported by other studies concerning the same NPC endemic risk area and provide original data concerning Morocco.     

鼻咽癌组织中EB病毒潜伏相关基因的表达

目的： 通过检测鼻咽癌组织中EB病毒的潜伏膜蛋白LMP1的序列以及LMP1、EBNA1、EBNA2的mRNA表达来探讨EB病毒的感染状态及其表达产物与鼻咽癌的关系。方法: 应用PCR法检测鼻咽癌组织中LMP1 DNA的存在，并对鼻咽癌来源的LMP1和EB病毒永生化狨猴B淋巴细胞系B95-8来源的LMP1进行测序，比较序列的差异。利用巢式RT-PCR检测鼻咽癌组织中LMP1、EBNA1、EBNA2的mRNA表达。结果: 47例鼻咽癌组织均含有LMP1 DNA，所有鼻咽癌来源的LMP1 DNA与B95-8来源的LMP1 DNA序列比较均存在着多个单核苷酸变异，最明显的是XhoⅠ酶切位点的丢失。测序后显示鼻咽癌来源的LMP1 DNA有30个核苷酸的丢失。巢式RT-PCR显示LMP1、EBNA1、EBNA2在鼻咽癌中的mRNA表达率分别为76.6％、80.0％和74.5％。其中EBNA1的表达是由Qp启动的，而B95-8细胞中EBNA1的表达是由Cp启动的。结论: 鼻咽癌中EB病毒的作用途径比较复杂，LMP1、EBNA1、EBNA2等潜伏期基因还有早期裂解基因BARF1均可能参与鼻咽癌的发生发展过程。     

EB病毒感染对鼻咽癌细胞生长和凋亡的影响

目的:探讨EB病毒(EBV)感染对鼻咽癌细胞系生长和细胞凋亡的影响。方法:用EBV直接感染人鼻咽癌细胞系CNE1;用免疫组化(LSAB)法检测EBV-LMP1和bcl-2蛋白的表达;用MTT法测定鼻咽癌细胞系的生长能力;用流式细胞术和TUNEL法检测癌细胞凋亡。结果:感染EBV的鼻咽癌细胞系(E-CNE1)的EBV-LMP1表达阳性,生长能力较未感染EBV的CNE1明显增强(P<0.01),2种鼻咽癌细胞系均无凋亡发生,而均仅有2%~3%的细胞表达bcl-2蛋白。结论:EBV感染和LMP1表达可促进鼻咽癌细胞生长,但对鼻咽癌细胞的bcl-2表达和细胞凋亡无影响。     

EB病毒感染对鼻咽癌细胞生长和凋亡的影响

目的:探讨EB病毒(EBV)感染对鼻咽癌细胞系生长和细胞凋亡的影响。方法:用EBV直接感染人鼻咽癌细胞系CNE1;用免疫组化(LSAB)法检测EBV-LMP1和bcl-2蛋白的表达;用MTT法测定鼻咽癌细胞系的生长能力;用流式细胞术和TUNEL法检测癌细胞凋亡。结果:感染EBV的鼻咽癌细胞系(E-CNE1)的EBV-LMP1表达阳性,生长能力较未感染EBV的CNE1明显增强(P＜0.01),2种鼻咽癌细胞系均无凋亡发生,而均仅有2%~3%的细胞表达bcl-2蛋白。结论:EBV感染和LMP1表达可促进鼻咽癌细胞生长,但对鼻咽癌细胞的bcl-2表达和细胞凋亡无影响。