高效毛细管电泳法测定尿液中柠檬酸盐、草酸盐的含量

目的以高效毛细管电泳法测定尿液中柠檬酸盐、草酸盐的含量。方法以毛细管区带电泳分离分析尿样中的柠檬酸盐、草酸盐,以铬酸钠为紫外吸收剂进行间接紫外检测。结果柠檬酸根、草酸根阴离子在5 min内得到很好的分离,迁移时间分别为3.76、3.14 min,柠檬酸根在4.00~40.00 μg/ml浓度范围内、草酸根在2.00~40.00 μg/ml浓度范围内线性关系良好,柠檬酸根阴离子最低检测限为2 μg/ml、草酸根阴离子的最低检测限为1 μg/ml。加样回收率分别为97.53%、99.11%。结论该方法简单,准确,成本低,可为尿液中柠檬酸盐、草酸盐的直接测定提供参考。     

HPLC法同时测定尿液中草酸和枸橼酸含量的方法学评价及临床应用

【目的】建立高效液相色谱法同时测定尿液中草酸和枸橼酸含量,并应用于临床。【方法】采用LC—C18（250mm×4．6mm,5μm）色谱柱;LC—C18（4．6mm×12．5mm,5μm）为预柱;流动相为0．25％磷酸二氢钾（含2．5mmol／L四丁基硫酸氢铵和2．65×10^-5mol／L乙胺四乙酸二钠,pH2．0）;检测波长210nm,流速1．0ml／min;柱温25℃;进样量20μl。72例草酸钙结石患者及40例健康志愿者,分为一水草酸钙组（40例）、二水草酸钙组（32例）和对照组（40例）,收集上述112例24h尿液处理后取上清液进行HPLC分析,测得尿中草酸和枸橼酸含量后进行统计学分析。【结果】草酸与枸橼酸的标准曲线分别为：Aoxa=12528．4Coxa-641．9（r=0．9990,n=5）和Acit=1607．5Ccit-13．8（r=0．9990,n=5）;最低检测限分别为0．4μg／ml和0．8μg／ml;线性范围分别为1．563～100μg／ml和3．125—200μg/ml;平均回收率分别为96．6％和95．7％;日内及日间精密度RSD分别小于13．5％和8．3％。二水草酸钙组结石患者的尿草酸高于一水草酸钙组和对照组（P〈0．05）,一水草酸钙组患者的尿枸橼酸低于二水草酸钙组和对照组（P〈0．05）。【结论】高效液相色谱法用于检测人24h尿液中的草酸和枸橼酸,方法简单,灵敏。对临床草酸钙结石患者尿液中草酸和枸橼酸测定结果统计发现一水草酸钙结石的形成与结石抑制物枸橼酸的缺乏有关,二水草酸钙结石的形成与高尿草酸有关。     

高效液相色谱法测定草酸钙结石大鼠尿中草酸含量

目的建立高效液相色谱法(HPLC)检测大鼠尿液中草酸含量。方法将SPF级雄性健康Wistar大鼠24只采用随机数字表法分为空白对照组(n=12)和乙二醇组(n=12)。空白对照组给予去离子水喂养,每天以1 ml生理盐水灌胃;乙二醇组给予1%乙二醇自由饮水喂养,每天2%氯化铵2 ml灌胃。造模28 d后收集两组大鼠24 h尿液,采用HPLC法测定尿中草酸含量,并与铬酸钾氧化甲基红催化光度法的结果进行比较。HPLC法采用色谱柱Aglient 5TC-C18(250×4.6 mm,5μm),以甲醇(0.1 mol/L)、醋酸铵水溶液(15∶85)为流动相,流速为1.2 ml/min,紫外检测波长为314 nm,柱温20℃。结果大鼠尿液中高、低浓度草酸标准曲线分别为y=5909.1x+378730,R2=0.9984和y=7810.5x-16635,R2=0.9967;最低检测浓度为5μg/ml,大鼠尿液中草酸高浓度线性范围为62.50~2000.00μg/ml,低浓度线性范围为6.25~100.00μg/ml。平均回收率为95.1%,日内及日间精密度分别为3.4%~10.8%和3.8%~9.4%。HPLC法和铬酸钾氧化甲基红催化光度法均显示乙二醇组大鼠尿草酸浓度和24 h尿草酸含量显著高于空白对照组[尿草酸浓度:(736.35±254.52)μg/ml比(51.56±36.34)μg/ml,(687.35±234.53)μg/ml比(50.24±42.34)μg/ml;24 h尿草酸含量:(11.23±4.12)mg比(0.87±0.45)mg,(9.89±3.55)mg比(0.77±0.65)mg;P均<0.01];两种方法检测出的尿草酸浓度和24 h尿草酸含量差异无统计学意义(P均>0.05)。结论 HPLC法简单快速、回收率高、精密度好,与铬酸钾氧化甲基红催化光度法检测结果一致,适用于大鼠尿中草酸含量的测定。     

马来酸罗格列酮缓释片有关物质的测定

目的：建立RP-HPLC法测定马来酸罗格列酮缓释片的有关物质。方法：采用ODS Diamonsil^TM C18（250mm×4．6mm，5μm）色谱柱，流动相为乙腈-0．01mol／L醋酸钠水溶液（冰醋酸调pH=6．0）（57：43）。检测波长为247nm，流速为1．0ml／min。结果：罗格列酮与各杂质及降解产物分离良好，在10-60μg／ml浓度范围内线性关系良好（r=0．9999），平均回收率为99．9％，RSD为0．68％，最低检测限为10ng，最低定量限为70ng。结论：该方法简便、快速、准确、灵敏度高、重复性好，可用于马来酸罗格列酮缓释片有关物质的测定。     

大鼠尿中木兰碱高效液相色谱测定法的建立

目的建立高效液相色谱测定法测大鼠尿中木兰碱浓度。方法采用Agilent ODS C18柱（4．6mm×250mm,5μm）,柱温25℃,流动相为甲醇：KH2P04溶液（0．05mol·L^-1）=24：76（v：v）,流速：0．8mL·min^-1。尿液样品用生理盐水稀释后与甲基叔丁基醚混合,上清液用40％氮气吹干,残渣用流动相溶解进样。结果标准曲线在0．05—6．00μg·mL^-1范围内线性良好,最低检测限为0．01μg·mL^-1,木兰碱及内标盐酸小檗碱的保留时间分别为7．95min和11．02min,日内和日间精密度RSD均小于11％,提取回收率在92％以上。结论本法简便可靠,适用于大鼠尿液中木兰碱的测定及其药物动力学研究。     

反相高效液相色谱法测定人尿拉米夫定浓度

目的建立测定人体口服阿米洛利尿液中含量的方法。方法采用RP-HPLC法,色谱条件为GeminiC18柱（250mm×4．6mm,5μm）;流动相0．02mol／L磷酸盐缓冲液-甲醇（90：10）;流速1．0ml／min;检测波长274nm;柱温30℃。结果拉米夫定在0．0067mg／ml-0．0733mg／ml浓度范围内线性关系良好（r=0．9997）,加样回收率分别为96．00％、94．00％、97．67％,RSD为1．91％（n=5）。结论该方法能灵敏、准确的测定尿液中拉米夫定的含量。     

RP-HPLC法测定自制尼美舒利分散片含量及有关物质

目的：建立RP—HPLC法测定尼美舒利分散片的含量及有关物质。方法：采用DiamonsilTMC18（250mm×4．6mm，5μm）色谱柱，乙腈-0．01mol／L磷酸二氢钾（三乙胺调pH=6．5）（55：45）为流动相。检测波长254nm，流速1．0ml／min。结果：尼美舒利与各杂质及降解产物分离良好，在150—350μg／ml范围内线性关系良好（r=0.9999），平均回收率99．75％，RSD为0．82％，最低检测限为35ng，最低定量限为110ng。结论：该方法简便、快速、准确、灵敏度高、重复性好，可用于尼美舒利含量及有关物质的测定。     

紫外分光光度法测定替硝唑棒剂中替硝唑的含量

为研究替硝唑棒剂中替硝唑的含量和有关物质，作者采用紫外分光光度法测定替硝唑的含量。结果替硝唑的测定线性范围在1．97～39.4μg／ml，回收率101．5％，RSD为0.62％。用TLC法对有关物质进行检查，最低检测限为1．8μg。方法简便，结果可靠。     

HPLC—MS法测定克拉霉素浓度

目的建立快速、简便的HPLC—MS法测定人血浆中克拉霉素浓度的方法。方法以罗红霉素为内标,采用Shim—packODSC18柱（250mm×2．0mm5m）甲醇-水溶液（含0．1％甲酸）（60：40v／v）为流动相,流速0．2mL／min,柱温30℃。采用质谱电喷雾离子源正源（ESI＋）将样品离子化,选择性离子监涮（SIM）准分子离子峰。结果克拉霉素在0．025～6．4μg／ml范围内线性关系良好（r=0．999）,最低定量限为0．025μg／ml,提取回收率均大干85％,批内与批间RSD均小于15％。结论该方法简单,快速、灵敏度高、专属性强．可较好应用于临床克拉霉素血浆浓度检测。     

高效液相色谱法测定胞磷胆碱钠注射液的有关物质

目的:建立胞磷胆碱钠注射液中有关物质的HPLC测定方法。方法:HPLC法：色谱柱为phenomener ODS2，流动相：0．05mol／L磷酸盐缓冲液，检测波长为280nm，流速为1．0ml／min。结果:样品中最相邻两杂质峰R＝1．8，胞苷酸回收率99．2％，胞磷胆碱钠线性范围为2．06--14．4μg，最低检测浓度为0．06μg/ml，胞苷酸线性范围为0．02—0．18μg，最低检测浓度为0．002μg/ml。结论：该方法简单、准确、灵敏度高。     

高效液相色谱法测定草酸钙结石大鼠尿中草酸含量

目的 建立高效液相色谱法(HPLC)检测大鼠尿液中草酸含量。方法 将SPF级雄性健康Wistar大鼠24只采用随机数字表法分为空白对照组(n=12)和乙二醇组(n=12)。空白对照组给予去离子水喂养,每天以1 ml生理盐水灌胃;乙二醇组给予1%乙二醇自由饮水喂养,每天2%氯化铵2 ml灌胃。造模28 d后收集两组大鼠24 h尿液,采用HPLC法测定尿中草酸含量,并与铬酸钾氧化甲基红催化光度法的结果进行比较。HPLC法采用色谱柱Aglient 5TC-C₁₈(250×4.6 mm,5 μm),以甲醇(0.1 mol/L)、醋酸铵水溶液(15∶85)为流动相,流速为1.2 ml/min,紫外检测波长为314 nm,柱温20 ℃。结果 大鼠尿液中高、低浓度草酸标准曲线分别为y=5909.1x+378730,R²=0.9984和y=7810.5x-16635,R²=0.9967;最低检测浓度为5 μg/ml,大鼠尿液中草酸高浓度线性范围为62.50~2000.00 μg/ml,低浓度线性范围为6.25~100.00 μg/ml。平均回收率为95.1%,日内及日间精密度分别为3.4%~10.8%和3.8%~9.4%。HPLC法和铬酸钾氧化甲基红催化光度法均显示乙二醇组大鼠尿草酸浓度和24 h尿草酸含量显著高于空白对照组[尿草酸浓度:(736.35±254.52)μg/ml比(51.56±36.34)μg/ml,(687.35±234.53)μg/ml比(50.24±42.34)μg/ml;24 h尿草酸含量:(11.23±4.12)mg比(0.87±0.45)mg,(9.89±3.55)mg比(0.77±0.65)mg;P均＜0.01];两种方法检测出的尿草酸浓度和24 h尿草酸含量差异无统计学意义(P均＞0.05)。结论 HPLC法简单快速、回收率高、精密度好,与铬酸钾氧化甲基红催化光度法检测结果一致,适用于大鼠尿中草酸含量的测定。     

高密度脂蛋白对氧化型低密度脂蛋白诱导内皮细胞凋亡的影响

目的　探讨高密度脂蛋白 (HDL)对氧化型低密度脂蛋白 (ox L DL)诱导体外培养的人血管内皮细胞凋亡的影响及相关机制。方法　 ox L DL 单独或与 HDL 共同处理体外培养的人脐静脉内皮细胞株 (ECV- 30 4 )后 ,通过流式细胞仪、DNA电泳检测细胞凋亡并测定 Caspase- 3酶活性。结果　 10 0 μg/ml和 2 0 0 μg/m l浓度 ox L DL 作用内皮细胞后 ,其细胞凋亡率分别为 2 8.4 0± 5 .30 %、34.72± 4 .6 4 % ,DNA电泳呈典型的梯状图谱 ,Caspase- 3酶活性达到 16 6 .0 1± 16 .4 4、2 6 3.74± 4 6 .6 2 pmd/(m in· mg protein) ,与空白组比较均有显著性差异 (P<0 .0 1)。HDL(2 0 0 μg/ml)与 ox L DL(10 0 μg/ml、2 0 0 μg/m l)共同作用后 ,凋亡率降至 8.0 6± 2 .35 %及 9.4 0± 2 .5 8% ,未出现梯状图谱 ,Caspase- 3酶活性减低 (分别为 6 7.73± 14 .83、111.2 6± 2 7.13min· m g protein) ,与对应的 ox L DL 组比较均差异显著 (P<0 .0 1)。结论　 HDL 能减少 ox L DL 所致体外培养的内皮细胞凋亡 ,这一作用可能与降低Caspase- 3酶活性有关     

枸橼酸钾预防舰艇人员尿草酸钙结石复发的疗效观察

目的：探讨枸橼酸钾预防尿草酸钙结石形成的机制及其对尿草酸钙结石复发的影响。方法选择72例舰艇人员经过门诊体外震波碎石治疗后肾结石患者,按治疗方法分为对照组34例和枸橼酸钾组38例。对照组碎石后要求多饮水、多运动、少吃富含高钙、高草酸、高尿酸食品;枸橼酸钾组碎石后口服12．5％枸橼酸钾液10 ml,每日3次,在服用前和服用7 d后测定血、尿生化指标,每3个月1次肾脏B超,随访12个月,观察肾结石复发情况。结果7 d后枸橼酸钾组尿pH值、钾和枸橼酸明显升高,尿钙显著降低。随访12个月,对照组结石复发5例（14．7％）,枸橼酸钾组结石复发1例（2．6％）,经χ2检验,2组复发率比较差异有统计学意义（ P＜0．01）。结论枸橼酸钾可降低尿钙,有效预防尿草酸钙结石复发。     

HPLC法测定大鼠肺组织中双(对-氟苄基)三硫醚及其降解产物的浓度

目的建立一种测定大鼠肺组织中双(对-氟苄基)三硫醚(BFTS)及其降解产物双(对-氟苄基)二硫醚(BFDS)的RP-HPLC分析方法.方法在0.2 g大鼠肺组织中加入正己烷-异丙醇(955,v/v)5.0 ml,11.50 μg/ml内标(苄基二硫醚)溶液20 μl,制成匀浆,离心后取上清液4.0 ml,真空抽干,残渣加流动相(乙腈∶水＝65∶35,v/v)150 μl复溶,离心后取上清液进行HPLC分析.HPLC分析条件为SB-C18柱,流动相为乙腈-水(65∶35,v/v);流速1.0 ml/min;柱温30℃;检测波长220 nm;进样量100 μl.结果BFTS和BFDS在0.04712～14.78 μg/g(r=0.999)及0.04831～23.96 μg/g(r=0.999) 范围内呈线性关系,定量限分别为0.04712 μg/g和0.04831 μg/g,回收率分别为95.71%～107.2%和90.00%～110.5%,精密度RSD均小于10%.该方法已成功地用于大鼠静脉注射12.5 mg/kg BFTS后,肺组织中BFTS及BFDS的含量测定.结论该法准确、灵敏、可靠,可用于BFTS及BFDS的组织分布研究.     

毛细管区带电泳法测定枸橼酸昔多芬的含量

目的 :建立适合测定治疗男性性功能障碍新药枸橼酸昔多芬 (商品名伟哥 )的毛细管区带电泳分析法 (CZE)。方法 :采用 40 cm× 75μm (i.d)毛细管柱来分离测定样品 ,以粉防己碱为内标 (IS) ,2 5 mm ol/ L硼砂 (p H=7.89)为缓冲溶液 ,电压 14k V、虹吸进样 1s,紫外检测器检测波长 2 14nm。 结果 :在 4m in内可完成枸橼酸昔多芬与内标物的分离和测定 ,该法最低检测浓度为 5 μg/ ml;在 2 4～ 480 μg/ ml范围内线性关系良好 (r=0 .9998,n=5 ) ;日内 RSD<1.5 8%、日间 RSD<2 .46 % ,回收率为 95 %～ 10 5 %。 结论 :CZE法用于枸橼酸昔多芬含量的监测 ,方法准确、可靠、简便、易行。     

高效毛细管电泳法检测尿液中痕量纤维蛋白肽A、B

目的 建立高效毛细管电泳测定尿液中反应体内微血栓形成的特异分子标志物纤维蛋白肽A(FPA)和纤维蛋白肽B(FPB)的方法.方法 采用25 cm×50 μm涂层毛细管柱,0.1 mol/L pH2.5的磷酸缓冲液,27.58 kPa压力进样,190nm紫外检测.用比FPB多一个酪氨酸的合成肽(FPB-Tyr)作内标,加内标后的尿样用Sep-Pak C18柱预处理.结果 采用本法,尿样中的FPA、FPB和内标可在16min内得到很好的分离,三者的迁移时间分别为:7.28、14.31、15.22min;将内标和一系列浓度的FPA、FPB标准品加入空白尿样,用Sep-Pak C18柱预处理后,毛细管电泳进样分析,在FPA和FPB浓度为0-40 mg/L的范围内,用FPA(FPB)同内标的校正峰面积比值对添加的相应的FPA(FPB)浓度得到校正工作曲线,线性关系良好,R均>0.99.未预处理的尿样中FPA、FPB的最低检出浓度分别为30μg/L、40μg/L(信噪比为3:1);本法FPA和FPB测定的日内、日间精密度好,平均回收率高.结论 本方法可靠,特异性好,可为开展纤维蛋白肽类及其它的痕量肽类分析提供参考.     

高效液相色谱法测定新西兰兔血浆中硫辛酸浓度

目的 建立高效液相色谱法测定新西兰兔血浆中硫辛酸的浓度.方法 新西兰兔采血后离心得血浆经酶水解化后,用Bakerphenyl固相萃取小柱提取血浆中硫辛酸,采用HPLC法紫外检测器检测.色谱柱为HYPERSIL BDS C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为磷酸二氢钾∶乙腈(50∶50,v/v),流速1.0 ml/min,检测波长230 nm.结果 测定方法在硫辛酸浓度为5～100 μg/L范围内具有良好线性关系,萃取回收率在77.4%～82.1%之间.日内、日间RSD在1.5%～8.9%之间.新西兰兔单剂量口服硫辛酸片300 mg0.5 h后测定血浆中硫辛酸浓度为11.08±1.79 μg/L.结论 本测定方法适用于口服硫辛酸的动物体内硫辛酸含量测定研究.     

HPLC-MS法测定人体血浆中的奥美沙坦

目的 建立测定人体内血浆中奥美沙坦浓度的HPLC-MS方法.方法 采用三氟乙酸沉淀法处理血浆,HyPurity C18柱(150 mm 2.1 mm,5μm),柱温40℃,流动相为水-甲醇-乙腈(14:60:26),流速为0.22 mL·min-1,质谱条件采用正离子检测的电喷雾电离方式,喷雾电压4.5 kV,正离子模式,用于定量分析的离子(m/z)分别为447(奥美沙坦),376(内标,加替沙星).结果 奥美沙坦检测下限为25 μg·L-1,线性范围25～3200 μg·L-1(r=0.9998),日内和日间RSD均低于15%.结论 该方法灵敏度高、快速、简便、无杂质干扰,适合于奥美沙坦的药代动力学及生物等效性研究.     

Clinical investigation on gastric oxalate absorption

Objective To study the stomach role in exogenous oxalate absorption.Methods The kinetic variation of urinary oxalate excretion (mg/min) in 10 healthy adults and 8 patients who underwent total gastrectomy was investigated before and after an oral spinach oxalate load. The bioavailability of the oxalate load in the healthy adults was calculated and compared with that in the patients.Results The oxalate content in the oral spinach load was 2567-2670 mg. The urinary oxalate excretion (mg/min) in the 10 healthy adults increased significantly 20 minutes after loading (this increase was compared against their basic oxalate excretion level of 0.0331±0.0203). Further observations after loading include: a first peak of oxalate excretion 40 minutes after loading; an oxalate excretion level double that of the basic level after 60 minutes (0.0732±0.0294) and a second peak appearing at 3 hours (P&lt;0.01). A “first peak” (0.063%±0.062%) was not in any of the patients who underwent a total gastrectomy. Furthermore, a bioavailability of oxalate, which was 50% lower than that in the healthy subjects, appeared 60 minutes after loading (0.098%±0.071%, P&lt;0.01). Conclusions The stomach is a powerful oxalate absorption organ under normal physiological conditions. Further investigation on the relationship between stomach dysfunction and urinary calcium oxalate formation is needed.