肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在多种疾病中的生物学作用

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（Apo2L/TRAIL）是肿瘤坏死因子家族的一员,可以诱导表达特异性死亡受体TRAIL-R1 （DR4）或TRAIL-R2 （DR5）的细胞凋亡.TRAIL可诱导多种肿瘤细胞凋亡,对正常细胞无杀伤性,因此将其作为抗肿瘤靶向治疗候选药物之一,备受关注.近期研究发现,TRAIL既通过其受体介导细胞凋亡信号通路,又可传导非凋亡的信号通路,在自身免疫病和感染性疾病中发挥重要生物学作用.因而简单阐明TRAIL在人类多种疾病中生物学作用的研究进展,对今后TRAIL研究方向和治疗策略的选择具有指导意义.     

TRAIL及其受体DR5与动脉粥样硬化关系的初步研究

目的探讨肿瘤坏死因子(INF)相关的凋亡诱导配体(TRAIL)及其受体DR5与动脉粥样硬化(AS)之间的关系。方法冠心病(CAD)组61例,正常对照组22例。应用酶联免疫吸附法测定血浆可溶性TRAIL(sTRAIL)和可溶性DR5(sDR5)水平。免疫组织化学测定冠状动脉TRAIL和DR5蛋白表达情况。结果CAD组血浆sTRAIL和sDR5水平均显著性升高(P<0.001,P<0.05)。3支血管病变组和双支血管病变组血浆sTRAIL和sDR5水平均分别显著高于单支血管病变组和正常对照组(P<0.01,P<0.01,P<0.01,P<0.05)。TRAIL和DR5主要表达于平滑肌细胞的胞质,TRAIL还可表达于AS中的巨噬细胞。AS组冠状动脉的TRAIL和DR5表达明显高于非AS组(P<0.01,P<0.05)。结论TRAIL及其受体DR5可能参与了AS的进展,其浓度越高,冠状动脉病变越重。     

TRAIL受体在肿瘤细胞系上的表达及意义

目的 检测TNF相关凋亡诱导配体（TRAIL）的受体，在来源于血液系统、肝脏、肺脏和大肠的8个肿瘤细胞系中的表达，并探讨其意义。方法 采用半定量RT－PCR，对TRAIL受体的表达进行半定量检测。结果 TRAIL凋亡通路中，能够诱导凋亡反应的死亡受体DR4和DR5，在所检测的肿瘤细胞系中都有表达，其中DR5在所有肿瘤细胞系中的表达水平均显著高于DR4（P＜0．05）。而能够竞争性与TRAIL诱导的凋亡反应的诱骗受体DcR1和DcR2，在所有的肿瘤细胞中都呈低水平表达或不表达。结论 DR5可能在TRAIL诱导凋亡的通路中发挥最重要的作用。TRAIL死亡受体和诱骗受体在肿瘤细胞系中的表达具有差异性，这种差异性可在一定程度上解释不同细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感度。     

死亡受体的信号传导途径及其调节机制

细胞凋亡是多细胞生物保证个体正常发育成熟和维持正常生理过程所必需的。凋亡细胞表面有特定的感应器即死亡受体 ,死亡受体可以接受胞外的死亡信号而激活细胞内的凋亡机制。本文简要综述了死亡受体的信号传导途径及其调节机制的研究进展。死亡受体 CD95、TNFR1和 DR3的信号传导途径相似 ,均有死亡结构域结合蛋白 FADD和死亡效应蛋白 caspase- 8的参与 ,而 DR4和 DR5的信号传导途径研究得不是十分清楚 ,可能存在FADD依赖性和不依赖性两条不同的信号传导途径     

sDR5封闭TRAIL减少内毒素引起小鼠肝细胞凋亡

目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)在内毒素诱导小鼠肝细胞凋亡中的作用.方法 内毒素作用于可溶性死亡受体-5(sDR5)封闭TRAIL的小鼠,不同时间检测小鼠血清中的谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和乳酸脱氧酶(LDH)的含量;HE染色及Annexin V、PI双染法流式细胞术检测小鼠肝细胞凋亡;免疫组织化学法及流式细胞术检测小鼠肝细胞和肝细胞膜表面DR5的表达.结果 内毒素可以上调肝细胞DR5的表达.DR5封闭TRAIL可显著抑制内毒素引起的小鼠肝细胞凋亡和改善肝细胞损伤.结论 内毒素引起疾病过程中TRAIL起重要作用.     

TNF相关的凋亡诱导配体及其受体研究进展

TNF相关的凋亡诱导配体 (TNF- related apoptosis- induicing ligand,TRAIL ) ,属于 TNF超家族成员 ,与 Apo- 1 L (Fas L )有较高的同源性 ,又称为 Apo- 2 L。 TRAIL有两类受体 ,一类是死亡受体 ,如 DR4和 DR5 ,TRAIL与 DR4或 DR5结合可以诱导细胞凋亡 ;另一类是“诱骗”受体 ,如 Dc R1、Dc R2 ,可以竞争性地与 TRAIL结合 ,逃避或抑制 TRAIL诱导的正常细胞损伤。 TRAIL及其受体的发现为肿瘤的治疗提供了一个新的方向。     

DR5在TRAIL诱导Jurkat细胞凋亡中的作用

目的：研究DR5在介导TRAIL凋亡信号中的作用。方法：用含人DR5细胞外全长结构域重组DR5免疫BALB／C小鼠，制备抗DR5单克隆抗体；流式细胞仪检测Jurkat细胞表面DR5表达水平；采用TRAIL凋亡检测试剂盒，检测Jurkat细胞凋亡率及抗DR5单克隆抗体对TRAIL诱导细胞凋亡的阻断率。结果：DR5在Jurkat细胞表面的表达率为94．83％，TRAIL和抗TRAIL单克隆抗体能够诱导Jurkat细胞凋亡，呈现明显的剂量相关性，TRAIL浓度在50-100ng/ml时，杀伤率达90％以上。预先用抗DR5单克隆抗体与Jurkat细胞作用后，TRAIL对Jurkat细胞的杀伤功能几乎完全被mAb所阻断，其平均阻断率达90．49％。结论：DR5在TRAIL诱导Jurkat细胞凋亡中起着十分关键的作用。     

杭白菊增强TRAIL基因诱导大肠癌细胞凋亡及机制的实验研究

目的：探讨杭白菊提取液对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因（TRAIL）抑制人大肠癌细胞株DLD-1作用的影响及其可能机制。 方法： 杭白菊提取液联合重组腺病毒载体（Ad）介导的TRAIL基因作用于人大肠癌细胞株DLD-1，通过倒置显微镜、MTT比色法和流式细胞仪，研究分析其对DLD-1细胞抑制作用的效果。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和流式细胞术检测杭白菊提取液作用前后DLD-1细胞TRAIL、TRAIL受体（TRAIL-Rs）mRNA以及细胞表面TRAIL蛋白表达的变化。 结果： Ad/hTERT-gTRAIL对DLD-1细胞的生长抑制率和凋亡率分别为31.4%和13.5%；联合杭白菊提取液后，生长抑制率和凋亡率均显著提高，达93.1%和45.4%（P<0.05）。杭白菊提取液作用后DLD-1细胞TRAIL mRNA的表达量从作用前的0.46上调至1.01, 细胞表面TRAIL蛋白表达的百分率从作用前的2.2%升高到5.0%（P<0.05）。TRAIL死亡受体（DR4、DR5）mRNA的表达量分别从0.70和0.22上调至1.10和0.83（P<0.05），而TRAIL诱骗受体（DcR1、DcR2）mRNA的表达量从0.60和1.15下调至0.19和0.78（P<0.05）。 结论： 杭白菊提取液联合重组腺病毒载体（Ad）介导的TRAIL基因(Ad/hTERT-gTRAIL)能有效诱导DLD-1细胞的凋亡。杭白菊提取液上调TRAIL死亡受体表达以及下调TRAIL诱骗受体的表达可能在增强TRAIL诱导的凋亡作用中起着重要作用。     

检测可溶型DR5分子ELISA方法的建立及初步应用

<正> 在某些情况下凋亡参与许多病理损伤。肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)中的死亡受体(DR)参与了细胞凋亡的过程,其中包括Fas(APO-1或CD95),TNFR I,DR3,DR4,DR5等。以往研究表明,Fas对于外周淋巴细胞的凋亡有重要的意义,而TNFRI除了可诱导凋亡外,还通过调节NF-κB和AP-1转录因子的基因表达,参与免疫细胞活化和炎症应答。DR4和DR5是两种以TRAIL为配体的死亡受体,与TRAIL结合后可引起细胞凋亡。     

TRAIL诱导HBV转染肝癌细胞BEL-7402凋亡的作用及机制研究

目的　研究肝癌细胞BEL- 74 0 2感染HBV前后,TRAIL诱导其凋亡的敏感度变化及作用机制。方法　构建含1.1倍HBV全基因组的真核表达载体pcDNA3 1.1HBV ,转染人肝癌细胞BEL -74 0 2 ,G4 18稳定筛选,建立HBVadr亚型体外转染的细胞模型。原位末端标记(TUNEL)检测TRAIL诱导的凋亡反应,并通过设立TRAIL联合其可溶性受体sDR5 (sDR5与TRAIL结合后,可特异性阻断TRAIL诱导凋亡) ,以证实该凋亡是由TRAIL特异性诱导的。琼脂糖凝胶电泳(DNAladder)检测染色体DNA的断裂情况。流式细胞术、半定量逆转录聚合酶链反应检测HBV感染前后细胞表面TRAIL各受体的表达。双荧光素酶报告基因系统检测抑制凋亡的核转录因子NF κB的活性。结果　成功构建了包含HBV全基因组的真核表达载体pcDNA3 1.1HBV ,转染BEL 74 0 2、经G4 18稳定筛选后得到HBVadr亚型转染的细胞模型BEL 74 0 2 1.1HBV。TRAIL诱导BEL 74 0 2、BEL 74 0 2 pcDNA3及BEL 74 0 2 1.1HBV的凋亡率分别为30 .5 %、2 9.8%和76 % (P <0 .0 1) ;经sDR5特异性阻断后,凋亡率分别为0 .9%、0 .8%和0 .9% ,证明凋亡是由TRAIL特异性诱导的。TRAIL作用2 4h后,琼脂糖凝胶电泳可见BEL- 74 0 2 1.1H-BV较BEL- 74 0 2、BEL 74 0 2 pcDNA3染色体DNA断裂的现象更为明显。无论RNA水平还     

TNF-相关诱导凋亡因子及其受体在人胎盘组织中的免疫组织化学定位

目的 探讨TNF相关诱导凋亡因子(TRAIL)及其DR4、DR5受体在人胎盘组织的表达及其意义。方法 免疫组织化学结合图像分析定量方法观察TRAIL及其DR4、DR5受体在人胎盘组织的表达及其含量的周龄变化。结果 人胎盘滋养层细胞、绒毛基质细胞及毛细血管的内皮细胞均呈TRAIL及DR4、DR5受体免疫反应阳性，阳性反应物分布于胞膜及胞质，胞核阴性。在人胎盘绒毛的不同发育阶段中，TRAIL的含量相对稳定，而其受体DR4、DR5的含量随着周龄的增加而升高。结论 结果显示胎盘不仅能产生TRAIL，而且也是TRAIL的靶器官，TRAIL及其DR4、DR5受体系统可能参与胎盘的特免调节。     

七叶皂苷钠通过抑制Akt和ERK信号通路诱导HeLa细胞凋亡及对死亡受体表达的影响

 目的:探讨七叶皂苷钠诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用及其分子机制。方法:采用MTT法检测七叶皂苷钠对宫颈癌HeLa细胞的生长和增殖抑制作用;倒置显微镜观察细胞形态改变;利用annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡率;采用DAPI单染法荧光显微镜下观察细胞核变化情况; 利用Western blotting检测凋亡相关蛋白［聚(ADP-核糖)聚合酶（PARP）、cleaved caspase-8、cleaved caspase-9、pro-caspase-3］和细胞存活相关信号通路（Akt、ERK）以及TRAIL受体（DR4、DR5）的变化情况。结果:七叶皂苷钠以剂量依赖的方式显著抑制宫颈癌HeLa细胞的生长和增殖;七叶皂苷钠作用于HeLa细胞后,可见典型的凋亡细胞形态学特征,细胞凋亡率显著增加;随着七叶皂苷钠浓度升高,cleaved PARP、cleaved caspase-8和cleaved caspase-9明显增多,pro-caspase-3显著减少,p-Akt和p-ERK激活减少,细胞内DR4和DR5总蛋白水平上调。结论:七叶皂苷钠通过抑制细胞存活相关信号通路,上调死亡受体水平,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。     

交联抗人DR5单抗-YM366EC诱导Jurkat细胞凋亡机制研究

目的：探讨抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）的死亡受体5（DR5）单抗-YM366EC引起Jurkat细胞凋亡信号传导通路,阐明抗DR5抗体的抗肿瘤效应机制,为相关肿瘤治疗提供依据。方法：光镜下观察交联366EC作用下Jurkat细胞形态变化,并利用MTT法检测Jurkat细胞的增殖,利用FITC-AnnexinV及PI标记流式细胞仪检测交联YM366EC对Jurkat细胞凋亡率影响。进一步用Western blot法检测交联YM366EC作用于Jurkat细胞2、4、6、8、10、12小时时Bcl-2、Cyt-C、Bax、caspase3、caspase9的表达变化。结果：DR5抗体YM366EC单独应用无凋亡作用,但应用抗小鼠IgG交联366EC后可致Jurkat细胞染色质边集、断裂,细胞出芽,凋亡小体形成,并可直接诱导TRAIL敏感的Jurkat细胞凋亡改变。Western blot检测到随着抗体诱导时间的延长Jurkat细胞Bcl-2蛋白表达减少;Cyt-C、Bax、有活性的caspase3和caspase9蛋白的表达增加。结论：交联抗DR5抗体YM366EC对Jurkat细胞增殖有明显的抑制作用,诱导的Jurkat细胞凋亡的分子机制涉及到Cyt-C、Bax、caspase3、caspase9。     

IFN-γ、IFN-α和TNF对ECV304细胞TRAIL、DR4、DR5和Fas表达的调节作用

病毒感染常导致血管内皮细胞发生凋亡 ,引起机体出现发热、出血、休克等临床症状。TRAIL、DR4、DR5和Fas是肿瘤坏死因子及其受体超家族中参与细胞凋亡的重要分子。我们用IFN α、IFN γ和TNF刺激ECV30 4细胞 ,研究其对膜型TRAIL、DR4、DR5和Fas表达的调节作用 ,以此为模型 ,探讨急性病毒感染等疾病体内所诱导产生大量细胞因子与内皮细胞凋亡发生的关系。将ECV30 4细胞用 10 %FCSRPMI16 4 0培养基培养。调整细胞浓度为 5×10 4 /ml,铺于 2 5cm2 的细胞培养瓶中 ,培养 5h后分别加入IFN γ(5U/ml)、IFN α(2 0U/ml)和TNF…     

TRAIL联合水飞蓟素对人肝癌Huh7细胞凋亡的影响

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合水飞蓟素(Sili)对人肝癌Huh7细胞凋亡的影响。方法 CCK8法检测细胞增殖抑制;分光光度法检测细胞caspase-3、caspase-8、caspase-9相对活性;Western blot检测细胞表面死亡受体4(DR4)、死亡受体5(DR5)的表达。结果 Sili与TRAIL联合作用Huh7细胞后,联合用药组与对照组及单独用药组相比,Huh7细胞的增殖率明显下降;caspase-3、caspase-8、caspase-9的相对活性明显提高。Sili作用Huh7细胞后能明显提高DR4、DR5蛋白表达。结论 Sili可通过上调死亡受体DR4、DR5表达而促进TRAIL诱导的Huh7细胞凋亡,为肝细胞癌的临床治疗提供了新的思路和方法。     

TNF相关的凋亡诱导配体与肿瘤

TNF相关的凋亡诱导配体（TNF-related apoptosis-inducing ligand, TRAIL），属于TNF 超家族成员，又称为Apo-2L，TRAIL能诱导多种肿瘤细胞的凋亡，而正常的细胞却对其不敏感，TRAIL主要通过与其受体结合激活caspase-8，启动非线粒体和线粒体依赖途径导致细胞凋亡。部分肿瘤细胞对TRAIL的敏感性较差，其原因与TRAIL的受体、信号转导途径激酶以及相关蛋白存在密切联系。     

TRAIL在病毒损伤胰岛β细胞中的作用

目的：研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）在病毒诱导的人胰岛β细胞损伤中的作用。方法： 用Annexin-V法检测比较柯萨奇B病毒（CVB）和风疹病毒（RV）引起的人胰岛β细胞系CM细胞凋亡，再用可溶性TRAIL受体和抗TRAIL单克隆抗体进行阻断实验。结果： 5噬斑形成单位（PFU）CVB3和CVB4作用CM细胞5 h导致30%以上CM细胞凋亡；0.01 PFU CVB3和CVB4作用CM细胞24 h导致超过80%CM细胞凋亡；10 PFU RV作用CM细胞24 h导致25%CM细胞凋亡；4种可溶性TRAIL受体以及抗TRAIL单克隆抗体对CVB所致细胞凋亡有阻断作用。结论： CM细胞对CVB更为敏感，TRAIL参与CVB诱导的CM细胞凋亡。     

IFN-γ对TRAIL诱导HBV相关性肝癌细胞凋亡的调节作用

目的：以转染了HBV全基因组、并稳定表达HBV病毒颗粒的HepG2.2.15细胞为细胞模型，探讨IFN-γ对新型凋亡分子TRAIL（TNF相关的诱导凋亡配体）诱导凋亡的影响，并初步探索其发生机制。方法：以流式细胞仪检测IFN-γ和TRAIL作用前，HepG2.2.15细胞的凋亡率，分别用流式细胞术和半定量RT－PCR的方法检测IFN-γ用0、6、12和24h后，细胞表面膜结合型TRAIL和TRAIL受体mRNA的表达。用HBsAg和HBeAg ELISA检测试剂盒测定IFN-γ作用0、6、12和24h后，HBV病毒颗粒的分泌表达状况。结果：TRAIL单独作用、IFN-γ单独作用、TRAIL和IFN-γ联合作用后，HepG2.2.15细胞的凋亡率分别为9．12％、5．84％和46．68％，表明IFN-γ可以显著上调TRAIL诱导的细胞凋亡。IFN-γ作用后，细胞表面膜型TRAIL的表达有显著上调，而部分与TRAIL诱导凋亡相关的TRAIL受体的表达也有不同程度的上调，并且IFN-γ可以抑制HepG2.2.15细胞HBV病毒颗粒的分泌。结论：转染HBV全基因组的HepG2.2.15细胞对TRAIL诱导的凋亡相对耐受,而IFN-γ却可以逆转这种耐受，使其变得对TRAIL诱导的凋亡敏感，其发生机制可能是通过IFN-γ上调细胞表面TRAIL及其受体的表达，以及抑制HBV病毒颗粒的分泌实现的。     

Fas/FasL与妊娠免疫耐受及病理妊娠研究进展

Fas属于TNFR/NGFR（肿瘤坏死因子受体/神经生长因子受体）超家族的Ⅰ型跨膜蛋白,胞内区有一段80个氨基酸的序列与细胞的凋亡信号传递有关,称为死亡功能区。Fas蛋白有两种形式：膜结合型（mFas）和可溶型（sFas）,主要以膜受体形式存在,也可通过转录水平的不同拼接产生sFas，sFas对mFas诱导的凋亡有抑制作用；FasL是属于TNF家族的Ⅱ型膜蛋白，是Fas的天然配体，由四个外显子组成。