小鼠牙本质磷蛋白cDNA的克隆和部分序列分析

目的：克隆小鼠牙本质磷蛋白（ＤＰＰ）ｃＤＮＡ。方法：用异硫氰酸胍一步法从小鼠牙胚组织中抽提总ＲＮＡ,用ｏｌｉｇｏ（ｄｔ） 作引物逆转录合成牙胚ｃＤＮＡ,然后利用ＰＣＲ 方法,从ｃＤＮＡ 中扩增出小鼠ＤＰＰｃＤＮＡ基因片段（ 约１ ．６ｋｂ）,将所得基因片段插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ 质粒载体,转化到大肠杆菌ＸＬ１ － Ｂｌｕｅ 后挑选阳性克隆,提取重组质粒ＤＮＡ,通过酶切分析和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果：酶切图谱和部分序列分析结果与国外文献报道一致。结论：克隆到小鼠ＤＰＰｃＤＮＡ 基因片段。     

小鼠牙本质涎蛋白成熟肽编码区cDNA克隆和部分序列分析

目的：克隆小鼠牙本质涎蛋白（ＤＳＰ）成熟肽编码区基因。方法：用异硫氰酸胍一步法从昆明新生小鼠磨牙牙胚组织中抽提总ＲＮＡ,用Ｏｌｉｇｏ（ｄｔ）作引物逆转录合成牙胚ｃＤＮＡ,然后利用ＰＣＲ方法,从ｃＤＮＡ中扩增出小鼠ＤＳＰ成熟区的基因片段（约１．４ｋｂｐ）,将所得基因片段插入ｐＢＳ质粒载体,转化到大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ后挑选阳性克隆,提取重组质粒ＤＮＡ,通过限制性酶切和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果：重组质粒ｐＢＳ－ＤＳＰ的酶切图谱和部分序列分析结果与国外文献报道一致。结论：克隆到小鼠ＤＳＰ成熟肽编码区基因,正在进行该基因的表达和活性鉴定。     

小鼠牙本质涎蛋白成熟肽编码区cDNA 隆和部分序列分析

目的：克隆小鼠牙本质涎蛋白（ＤＳＰ）成熟肽编码区基因。方法：用异硫氰酸胍一步法从昆明新生小鼠磨睡胚组织中抽提总ＲＮＡ,用Ｏｌｉｇｏ（ｄｔ）作引物逆转录合成牙胚ｃＤＮＡ,然后利用ＰＣＲ方法,从ｃＤＮＡ中扩增出小鼠ＤＳＰ成熟区的基因片段（约１．４ｋｂｐ）,将所得基因片段插入ｐＢＳ质粒载体,转化到大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ后挑选阳性克隆,提取重组质粒ＤＮＡ,通过限制性酶切和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果     

小鼠釉丛蛋白成熟肽编码区cDNA克隆

克隆小鼠釉丛蛋白成熟肽编码区基因。方法：设计引物,以小鼠牙胚ｃＤＮＡ文库为模板,利用ＰＣＲ方法,扩增出小鼠釉丛蛋白成熟区的基因片段,将所得基因片段插入ｐＢＳ质粒载体,转化到大肠杆菌ＸＬ－１－Ｂｌｕｅ后挑选阳性克隆,提取重组质粒ＤＮＡ,通过限制性酶切和部分核苷酸序列分析鉴定性克隆。结果：重组质粒ｐＢＳ－ｔｕｆｔｅｌｉｎ的酶切图谱和序列分析结果与国外文献报道一致。结论：克隆到小鼠釉丛蛋白成熟编码区基因     

小鼠牙本质涎磷蛋白基因上游启动子的克隆和序列测定

目的　克隆并测定小鼠牙本质涎磷蛋白(DSPP)基因上游启动子的序列。方法　提取成年Balb/c鼠基因 组DNA,设计引物,通过聚合酶链反应(PCR)得到小鼠牙本质涎磷蛋白基因上游启动子的序列。再将目的片段定向 连入T载体,酶切鉴定并测序。结果　将小鼠牙本质涎磷蛋白基因上游启动子序列分3段克隆,分别得到997 bp、 1 004 bp及674 bp大小的目的片段。连入载体后,酶切结果测定重组质粒成功。其测序结果与小鼠基因组染色体 位置5q21处的相应序列99%一致。结论　成功克隆到牙本质涎磷蛋白基因上游启动子的序列,为进一步研究 DSPP基因的转录调控机制奠定了基础。     

小鼠釉原蛋白成熟肽编码区cDNA的克隆和部分序列分析

目的：克隆小鼠釉原蛋白（ＡＭＧ）成熟肽编码区基因。方法：用异硫氰酸胍一步法从昆明新生小鼠磨牙牙胚组织中抽提总ＲＮＡ,用Ｏｌｉｇｏ（ｄｔ）作引物逆转录合成牙胚ｃＤＮＡ,然后利用ＰＣＲ方法,从ｃＤＮＡ中扩增出小鼠釉原蛋白成熟区的基因片段（约６７０ｂｐ）,将所得基因片段插入ｐＢＳ质粒载体,转化到大肠杆菌ＤＨ５α后挑选阳性克隆,提取重组质粒ＤＮＡ,通过限制性酶切和部分核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果：重组质粒ｐＢＳ－ＡＭＧ的酶切图谱和序列分析结果与国外文献报道一致。结论：克隆到小鼠釉原蛋白成熟肽编码区基因。     

小鼠成釉蛋白成熟肽编码区cDNA序列的克隆

目的：克隆小鼠成釉蛋白（ＡＭＢＮ）成熟肽编码区基因。方法：用异硫氰酸胍一步法从昆明新生小鼠磨牙牙胚组织中抽提总ＲＮＡ,用Ｏｌｉｇｏ（ｄｔ）作引物逆转录合成牙胚ｃＤＮＡ,然后利用ＰＣＲ方法,从ｃＤＮＡ中扩增出小鼠成釉蛋白成熟区的基因片段（约１．１ｋｂｐ）,将所得基因片段插入ｐＴＺ１８质粒载体,转化到大肠杆菌ＤＨ５α后挑选阳性克隆,提取重组质粒ＤＮＡ,通过限制性酶切和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果：重组质粒ｐＴＺ－ＡＭＢＮ的酶切图谱和部分序列分析结果与国外文献报道一致。结论：克隆到小鼠成釉蛋白成熟肽编码区基因     

小鼠牙本质涎磷蛋白(DSPP)特异性启动子的克隆和序列分析

目的 :获得小鼠牙本质涎磷蛋白 (DSPP)编码序列上游约 1.6kb的特异性启动子。方法 :按Mac Dougall报道设计一对引物 ,提取小鼠胚胎干细胞基因组DNA作为模板 ,PCR获得大小约为 1.6kb的DNA片段 ,将该片段克隆并进行序列分析。结果 :所得到的片段是DSPP的特异性启动子 ,其序列与文献报道有一定差异 ,但转录因子的结合位点均未发生突变。结论 :成功获得小鼠DSPP的特异性启动子 ,为进一步的研究打下基础。     

小鼠牙本质涎磷蛋白基因启动子的克隆与序列分析

目的 克隆小鼠牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein，DSPP)基因启动子片段。方法 培养MDPC一23细胞，从培养的细胞中提取基因组DNA，利用设计的上下游引物，进行PCR反应。将扩增得到的DSPP基因启动子片段克隆到pMD18-T栽体，酶切鉴定后，进一步进行DNA序列测定。结果 酶切结果表明成功构建重组质粒，序列分析结果与国外报道一致。结论 成功克隆获得小鼠DSPP基因的启动子片段。     

小鼠牙本质涎磷蛋白5′端非编码区启动子报告基因载体的构建和分析

目的：克隆小鼠牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphopmtein，DSPP)基因启动子，构建含DSPP启动子不同片段的报告基因载体，在小鼠成牙本质细胞系MDPC-23中分析各种载体中DSPP启动子活性：方法：PCR、报告基因载体构建、瞬时转染和报告基因检测。结果：PCR获得DSPP启动子的3个不同片段，将它们克隆到萤火虫荧光素酶报告基因载体pG13-Enhancer，构建出3种含DSPP启动子不同片段的报告基因载体，将这些报告基因载体瞬时转染至MDPC-23细胞，载体中的启动子具有不同的活性。结论：成功构建了含小鼠DSPP启动子片段的报告基因载体，为以后研究DSPP基因表达调控的分子机制提供了实验工具。     

小鼠PeriostinC端编码区cDNA克隆及其序列分析

目的：从小鼠牙周膜组织中克隆PerostinC末端编码区基因。方法：用异硫氰酸胍一步法从昆明成年小鼠牙周膜组织中抽提总RNA,用Oligo(dt)作引物逆转录合成cDNA,然后利用PCR技术,从cDNA中扩增出小鼠PeriostinC末端编码区的基因自然（约940bp）,将所得基因片段插入p RSET-B载体,转化大肠杆菌DH5α后随机挑选数个克隆,提取质粒DNA,通过限制性酶切和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果：重组质粒pRSET-B-Periostin的酶切图谱和序列分析结果与国外文献报道一致。结论：克隆到小鼠该蛋白C端编码区基因。     

人牙本质基质蛋白1 cDNA序列的克隆

目的：克隆人牙本质基质蛋白１（ＤＭＰ１）成熟肽编码区基因片段。方法：用异硫氰酸胍一步法从引产胎儿牙乳头组织中抽提总ＲＮＡ,用Ｏｌｉｇｏ（ｄｔ）作引物逆转录合成牙乳头ｃＤＮＡ,然后利用ＰＣＲ方法,从ｃＤＮＡ中扩增出人ＤＭＰ１成熟区的基因片段（约１．８ｋｂｐ）,将所得基因片段插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ质粒载体,转化到大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ后挑选阳性克隆,提取重组质粒ＤＮＡ,通过酶切分析和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果：酶切图谱和部分序列分析结果与国外文献报道一致。结论：克隆到人ＤＭＰ１成熟肽编码区基因片段。     

小鼠釉基质丝氨酸蛋白酶成熟肽编码区cDNA的克隆和序列分析

目的：克隆小鼠釉基质丝氨酸蛋白酶（EMSP）成熟肽编码区的基因。方法：设计引物,以小鼠牙胚总RNA为模板,利用RT-PCR方法,扩增出小鼠EMSP的基因片段,将所得基因片段插入pBS质粒载体。转化到大肠杆菌XL-1-Blue后挑选阳性克隆,提取重组质粒DNA,通过限制性酶切和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果：重组质粒pBS-EMSP的酶切图谱和序列分析结果与国外文献报道一致。结论：克隆到小鼠EMSP成熟肽编码区基因。     

成骨蛋白—1成熟蛋白编码区cDNA克隆与序列分析

目的：克隆成骨蛋白－１（ＯＰ－１）成熟蛋白编码区基因。方法：用一步酸酚法从中国健康人胎盘组织中提取总ＲＮＡ，用Ｏｌｉｇｏ（ｄｔ）作引物逆转录合成胎盘ｃＤＮＡ文库，然后利用ＰＣＲ的方法，从ｃＤＮＡ文库中扩增出编码人ＯＰ－１成熟区的基因片段，将所得基因片段插入ｐＧＥＭ－３ｚｆ（＋）载体，转化大肠杆菌后挑选阳性克隆，提取双链ＤＮＡ模板，用ＡＢＩＤＮＡ自动测序仪进行序列测定分析。结果：克隆和测序结果与国外文献报道一致。结论：在国内第一次克隆到ＯＰ－１的成熟蛋白编码区基因。     

小鼠牙胚、软骨组织中牙本质涎磷蛋白基因的克隆

目的：从小鼠牙胚、软骨组织中克隆牙本质涎磷蛋白基因（dentin sialophosphoprotein,DSPP)。方法：采用RT-PCR方法,从小鼠牙胚及软骨组织中克隆DSPP基因片段,将所得片段装入载体pGEM-TEasyVector进行序列测定。结果：从两种组织中均获得719bp的特异性片段,序列分析表明,与已发表的DSPP序列99.7%同源。结论：成功地从小鼠牙胚。软骨中克隆到DSPP基因部分序列。结果提示：除牙齿组织外,DSPP还可在软骨中表达,它可能并非是检测成牙本质细胞的特异性指标。     

小鼠釉基质丝氨酸蛋白酶成熟肽编码区

目的克隆小鼠釉基质丝氨酸蛋白酶(EMSP)成熟肽编码区的基因。方法设计引物,以小鼠牙胚总RNA为模板,利用RT-PCR方法,扩增出小鼠EMSP的基因片段,将所得基因片段插入pBS质粒载体,转化到大肠杆菌XL-1-Blue后挑选阳性克隆,提取重组质粒DNA,通过限制性酶切和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果重组质粒pBS-EMSP的酶切图谱和序列分析结果与国外文献报道一致。结论克隆到小鼠EMSP成熟肽编码区基因。