二烯丙基二硫下调uPA和MMP9抑制乳腺癌细胞侵袭迁移

目的 研究大蒜提取物二烯丙基二硫(DADS)对MCF-7和MDA-MB-231两种人乳腺癌细胞侵袭迁移的作用。方法采用不同浓度(0,0,200,0 μmol/L)DADS处理MCF-7和MDA-MB-231两种人乳腺癌细胞24 h,Transwell侵袭实验检测DADS对细胞侵袭能力的影响;划痕愈合实验观察DADS对细胞迁移能力的改变;western blot检测两种细胞中尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达。结果Transwell实验发现DADS呈浓度依赖性抑制MCF-7和MDA-MB-231两种乳腺癌细胞的侵袭,划痕愈合实验则发现DADS呈浓度依赖性抑制两种乳腺癌细胞的迁移。与此同时,Western blot结果显示DADS可浓度依赖性下调侵袭迁移相关蛋白uPA和MMP9的表达。结论DADS可下调uPA和MMP9表达,抑制乳腺癌细胞侵袭迁移。     

HIF-1a对人乳腺癌细胞生物学行为的影响

目的探讨低氧诱导因子-1a(hypoxia-inducible factor-1a,HIF-1a)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MCF-7生物学行为的影响,为临床提高乳腺癌患者的生存率提供新思路。方法前期实验已经通过慢病毒转染敲除人乳腺癌细胞MDA-MB-231、MCF-7中的HIF-1a基因,HIF-1a空载慢病毒载体构建成功。1. Cell Counting Kit-8(CCK-8)实验检测细胞生长情况。2.Transwell小室侵袭实验检测细胞的侵袭能力。3.划痕损伤实验检测细胞的迁移能力。结果敲除HIF-1a的乳腺癌细胞MDA-MB-231、MCF-7的增殖、迁移侵袭能力均降低。结论 HIF-1a可能促进了人乳腺癌细胞MDA-MB-231、MCF-7的增殖,增强了细胞的迁移和侵袭能力。     

瞬时受体电位通道蛋白6在人乳腺癌细胞中的表达及其对乳腺癌细胞侵袭能力的影响

目的：探讨瞬时受体电位通道蛋白6（TRPC6）在人乳腺癌细胞中的表达,阐明TRPC6与乳腺癌细胞侵袭能力的关联性。方法：常规培养的不同侵袭能力乳腺癌细胞株分为MCF-7（低侵袭组）和MDA-MB-231（高侵袭组）,采用Western blotting法和RT-PCR法检测2组中TRPC6蛋白和mRNA的表达;将MDA-MB-231细胞分为空白对照组和SKF96365组,不同浓度SKF96365（5、25和40 μmol/L）预处理MDA-MB-231细胞,阻滞TRPC6通道,采用Transwell实验和细胞划痕实验检测细胞侵袭能力。结果：Western blotting和RT-PCR法检测,高侵袭组MDA-MB-231细胞中TRPC6蛋白及mRNA表达水平均高于低侵袭组MCF-7细胞（P<0.05);划痕实验, 5、25和40　 μmol/LSKF96365组迁移细胞数(76.24±7.54、45.33±4.50和25.12±1.57)均少于空白对照组(130.48±9.55)（P<0.05);Transwell体外侵袭实验,不同浓度SKF96365（5、25和40 μmol/L）组迁移细胞数明显低于对照组(P<0.05)。 结论：高侵袭乳腺癌细胞MDA-MB-231可通过上调TRPC6表达提高乳腺癌细胞的侵袭能力,提示TRPC6在乳腺癌转移中可能起作用。     

二烯丙基二硫下调p38活性抑制乳腺癌MCF-7细胞侵袭和转移

目的探讨大蒜提取物二烯丙基二硫(DADS)对乳腺癌MCF-7 细胞侵袭转移的作用及其机制。方法采用不同浓度（0, 100,200,400 μmol/L）DADS处理MCF-7人乳腺癌细胞24 h,Transwell侵袭实验检测DADS对细胞侵袭的作用,划痕愈合实验 观察DADS对细胞迁移的改变,Western blotting 检测细胞中上皮标志蛋白E-钙黏蛋白（E-cadherin）、间质标志蛋白波形蛋白 （Vimentin）和基质金属蛋白MMP-9的表达和p38活性;TGF-β1上调p-p38表达后上述作用的变化。结果Transwell和划痕愈 合实验发现DADS呈浓度依赖性抑制MCF-7 细胞的侵袭和迁移能力,Western blotting 结果表明DADS可抑制Vimentin 和 MMP-9 的蛋白表达,上调E-cadherin 的表达而下调p38 活性;TGF-β1 可上调p-p38 和MMP-9 表达,明显抵消DADS对MCF-7 细胞的抑制效果。结论DADS可下调p38活性,抑制MCF-7细胞的侵袭转移。     

miR-99a对乳腺癌细胞侵袭和迁移的负向调控机制研究

目的探讨miR-99a对乳腺癌细胞侵袭及迁移的影响,并初步分析其影响乳腺癌细胞侵袭及迁移的可能分子机制。方法利用荧光实时定量PCR检测乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MCF-7中miR-99a的表达。运用脂质体介导的转染方法分别将miR-99a模拟物（miR-99amimics）、miR-99a抑制物（miR-99ainhibitors）以及相应对照miRNA转染MDA-MB-231和MCF-7细胞,通过Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭力;采用Transwell迁移实验及划痕实验检测细胞的迁移能力;利用生物信息学方法预测miR-99a的靶基因,并对靶基因进行验证。结果（1）高转移潜能的MDA-MB-231细胞中miR-99a表达明显低于低转移潜能的MCF-7细胞,划痕实验中转染miR-99amimics的与转染controlmimics的MDA-MB-231细胞比较迁移能力显著减弱（P＜0.05）,而MCF-7细胞转染miR-99ainhibitors后迁移能力明显增强（P＜0.01）。（2）Transwell的侵袭及迁移实验显示,转染miR-99amimics后MDA-MB-231细胞的侵袭和迁移能力明显减弱（P＜0.01）;MCF-7细胞转染miR-99ainhibitors后迁移能力增强（P＜0.01）,而侵袭能力基本不变（P＞0.05）。（3）生物信息学方法预测微管相关蛋白（MTMR3）是miR-99a的靶点,实时定量PCR和3′UTR荧光素酶报告基因实验验证了该靶点。（4）干扰了MTMR3后MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力明显减弱。结论（1）miR-99a对乳腺癌细胞的侵袭及迁移发挥负向调控作用。（2）miR-99a可能通过靶向于MTMR3发挥其对乳腺癌细胞迁移和侵袭的调控作用。     

钙蛋白酶抑制剂Calpeptin对乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移的影响

目的:探讨钙蛋白酶抑制剂Calpeptin对乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移能力的影响,为治疗乳腺癌转移提供思路。方法:MTT法检测不同浓度Calpeptin对MDA-MB-231细胞增殖的影响;细胞划痕实验及Transwell迁移实验检测不同浓度的Calpeptin对MDA-MB-231细胞迁移的影响;Western blot法检测不同浓度Calpeptin对MDA-MB-231细胞基质金属蛋白酶-2表达的影响。结果:Calpeptin可抑制MDA-MB-231细胞的增殖,其增殖抑制作用随浓度的增大而增加（P<0.01）。Calpeptin作用MDA-MB-231细胞24 h后,细胞的迁移能力明显下降（P<0.01）。Western blot结果显示,Calpeptin可下调MDA-MB-231细胞中细胞基质金属蛋白酶-2的表达。结论:Calpeptin能够抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移,其机制可能与下调MMP-2的表达有关。     

罗勒多糖对乳腺癌细胞系MDA-MB-231侵袭的影响

目的 观察罗勒多糖对乳腺癌细胞系MDA-MB-231侵袭性的影响。方法 将体外培养的MDA-MB-231细胞分为实验组和对照组。实验组细胞用不同浓度罗勒多糖（100、300μg/mL）处理,对照组不加任何刺激因子。Transwell小室检测细胞侵袭能力,RT-PCR、Western blotting方法检测与侵袭相关的基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）和膜型基质金属蛋白酶1（MT1-MMP）的表达。结果 ①罗勒多糖可抑制MDA-MB-231细胞的侵袭力（P<0.01）;②罗勒多糖抑制MT1-MMP分子的mRNA表达（P<0.05）及下调其蛋白表达水平。③罗勒多糖对MMP-2及MMP-9分子的mRNA表达无影响。结论 罗勒多糖可通过下调MT1-MMP的表达抑制MDA-MB-231细胞的侵袭。     

Nimesulide对乳腺癌细胞株MMP-2、MMP-9基因表达的影响

目的:探讨环氧化酶-2选择性抑制剂nimesulide对乳腺癌细胞株MMP-2、MMP-9 mRNA表达的影响.方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,检测不同浓度nimesulide作用体外培养的MDA-MB-231、MCF-7人乳腺癌细胞株48 h,MMP-2、MMP-9 mRNA的变化.结果:50 μmol/L nimesulide明显抑制MDA-MB-231细胞MMP-2 mRNA的表达,100 μ mol/L时其几乎完全抑制;100 μ mol/L nimesulide显著抑制MCF-7细胞MMP-2 mRNA的表达,200 μ mol/L时完全抑制其基因的表达.50μmol/L nimesulide明显抑制MDA-MB-231、MCF-7细胞MMP-9 mRNA的表达,随着浓度的增加,MMP-9 mRNA逐渐被抑制.结论:nimesulide以剂量依赖性方式下调MDA-MB-231、MCF-7乳腺癌细胞株MMP-2、MMP-9 mRNA的表达,而MDA-MB-231细胞对nimesulide更敏感,这种作用是COX-2非依赖性途径,为nimesulide用于转移乳腺癌的治疗与预防提供了实验依据.     

赖氨酰氧化酶与乳腺癌侵袭转移相关因子的研究

目的探讨赖氨酰氧化酶(LOX)与乳腺癌侵袭转移相关因子基质金属蛋白酶(MMPs)及低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的相关性以及LOX在乳腺癌侵袭转移中的可能机制。方法构建LOX基因的特异性慢病毒干扰载体(LOX-RNAi-LV),稳定转染至乳腺癌细胞MDA-MB-231,实验设空白组、干扰组和阴性对照组,实时定量荧光PCR检测3组细胞中LOX、MMP-2、MMP-9和HIF-1α的表达,Western blot检测各组LOX蛋白的表达;构建乳腺癌细胞MDA-MB-231,MCF-7和LOX基因干扰的MDA-MB-231裸鼠移植瘤模型,6周后测定移植肿瘤的生长及转移情况,SP免疫组织化学技术检测移植瘤中LOX、MMP-2、MMP-9及HIF-1α蛋白的表达情况。结果转染LOX-RNAi-LV后乳腺癌细胞MDA-MB-231中的LOX mRNA和蛋白被明显抑制,抑制率为89.20%和82.97%,差异有统计学意义(P<0.05);干扰组的MMP-2、MMP-9及HIF-1α表达与阴性对照组及空白组比较差异有统计学意义(P<0.05);6周后裸鼠的MDA-MB-231组LOX、MMP-2、MMP-9及HIF-1α蛋白表达水平明显高于LOX基因干扰组及MCF-7组,相关分析显示,LOX蛋白与MMP-2(r=0.696,P=0.000)、MMP-9(r=0.735,P=0.000)、HIF-1α(r=0.737,P=0.000)蛋白呈显著正相关。结论 LOX-RNAi-LV可有效下调乳腺癌细胞MDA-MB-231中LOX mRNA和蛋白表达水平;LOX促进乳腺癌侵袭转移的机制可能与MMP-2、MMP-9及HIF-1α的异常表达相关。     

TSPAN15 mRNA在乳腺癌增殖侵袭转移中的作用研究

目的 探讨TSPAN15 mRNA在乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移中的作用。方法 选取正常乳腺上皮细胞MCF-10A（对照组1）、乳腺癌细胞系MCF-7(MCF-7组)和MDA-MB-231(231组),分别采用空白质粒psilencer 2.1和TSPAN15-ShR3质粒转染MCF-7组（对照组2和沉默组1）和231组细胞（对照组3和沉默组2）。采用细胞计数试剂盒、Transwell侵袭实验和划痕实验检测TSPAN15对乳腺癌细胞增殖、侵袭以及迁移能力的影响。采用实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real-time fluorescence polymerase chain reaction, RT-qPCR）和蛋白质印迹法（Western blotting, WB）比较不同组细胞转染后的TSPAN15 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果 RT-qPCR和WB实验结果显示,MCF-7组和231组的TSPAN15表达水平高于对照组1,差异有统计学意义（P <0.05）。沉默组1和沉默组2肿瘤细胞的增殖能力、侵袭能力、迁移能力、肿瘤N-cadherin的mRNA水平...     

稳定转染ERα基因抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞COX-2和VEGF-C的表达

Background Estrogen receptor （ER）-negative breast cancer cells are more aggressive than ER-positive cells. Elevated levels of cyclooxygenase-2 （COX-2） and vascular endothelial growth factor-C （VEGF-C） expression have been detected in cultured human breast cancer cells and are associated with negative hormone receptor status. In this study, we created ERα stable transfectants in MDA-MB-231 cells to explore the effect of ERα on cell growth and COX-2 and VEGF-C expression.Methods The green fluorescent protein （GFP）-ERα plasmids were stably transfected into ER-negative MDA-MB-231 cells. The proliferation and migration of untransfected MDA-MB-231 cells, ERα-transfected MDA-MB-231 cells and ER-positive MCF-7 cells were determined. The expression of COX-2, and the levels of VEGF-C mRNA and the VEGF-C secretion concentration were assayed in these cell lines.Results The proliferation and migration capacities of ERα-tranfected MDA-MB-231 cells were significantly decreased （P 〈0.05）. The expression of COX-2 was significantly lower in ERa-tranfected MDA-MB-231 cells than in untranfected MDA-MB-231 cells. The mRNA and protein levels of VEGF-C were lower in ERa-tranfected MDA-MB-231 cells than in untransfected MDA-MB-231 cells （P〈0.05）.Conclusions ERα stable transfection inhibits proliferation and migration capacities of MDA-MB-231 cells and decreases expression of COX-2 and VEGF-C. The decreases of proliferation and migration capacities may be related to suppression of COX-2 and VEGF-C expression.     

非分泌型CXCL16在乳腺癌细胞系中的表达及对其生物学特性的影响

目的 通过检测非分泌型CXCL16在不同侵袭性乳腺癌细胞系(SK-BR-3、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435S)及正常乳腺上皮细胞MCF-10A的表达,探讨非分泌型CXCL16表达对乳腺癌细胞生物学特性的影响。 方法 采用RT-PCR检测CXCL16 mRNA在MCF-10A、SK-BR-3、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435S细胞系的表达,将pEGFP-CXCL16真核表达质粒转染到低表达CXCL16的MDA-MB-231细胞,通过实时荧光定量PCR和Western blot验证CXCL16过表达,采用体外迁移、侵袭实验及甲基四唑蓝(MTT)法分别检测过表达CXCL16对MDA-MB-231细胞迁移、侵袭和增殖活性的影响。 结果 CXCL16 mRNA在高侵袭性的MDA-MB-231细胞低表达,在低侵袭性的MCF-7细胞高表达,过表达CXCL16使得MDA-MB-231细胞的迁移、侵袭减弱,而增殖未受到影响。 结论 非分泌型CXCL16表达与乳腺癌细胞系的侵袭性相关,其表达可以抑制乳腺癌细胞的体外迁移、侵袭。     

乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭转移中JAK抑制对ERK的作用及意义

目的:研究JAK激酶抑制剂AG490对乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)磷酸化的影响,探讨JAK激酶对ERK信号转导通路的作用以及在乳腺癌细胞侵袭转移中的调控意义.方法:以JAK激酶抑制剂AG490处理乳腺癌细胞MDA-MB-231,MTT法检测AG490对细胞的生长抑制作用;MTT法检测AG490处理后细胞对人工基底膜Matrigel的黏附能力变化;Transwell小室进行人工重组基底膜侵袭和迁移实验,检测AG490处理后细胞侵袭、迁移能力变化;Western印迹法检测AG490处理后细胞中磷酸化ERK(P-ERK)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白水平变化.结果:应用JAK酶抑制剂AG490后MDA-MB-231细胞生长受到抑制,作用呈时效-量效依赖关系;MDA-MB-231细胞黏附、侵袭、迁移能力降低,同时细胞中P-ERK、MMP-9蛋白减少.结论:JAK激酶可以通过改变ERK的磷酸化水平影响ERK信号转导通路的活化.JAK激酶抑制对ERK信号转导通路的激活有阻断作用,可以抑制MMP-9的表达及乳腺癌细胞的侵袭转移.     

HUVEC-EVs通过JAK2/STAT3通路促进乳腺癌细胞增殖和迁移

目的: 探讨人脐静脉内皮细胞来源胞外囊泡(human umbilical vein endothelial cell-derived extracellular vesicles, HUVEC-EVs)对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响及其作用机制。方法: 采用不同浓度(0、10、20、40 μg/mL) HUVEC-EVs分别处理乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞24 h，通过MTT实验和平板克隆形成实验检测乳腺癌细胞增殖能力，Transwell实验检测乳腺癌细胞迁移和侵袭能力，划痕实验检测乳腺癌细胞迁移能力，蛋白质印迹实验检测乳腺癌细胞JAK2/STAT3信号通路相关蛋白的表达。结果： 与0 μg/mL HUVEC-EVs空白对照组相比，10、20、40 μg/mL HUVEC-EVs处理组乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞增殖能力明显提高(P<0.05)，平板克隆形成能力、迁移和侵袭能力也明显增强(P<0.05)，总JAK2、STAT3蛋白无明显变化(P>0.05)，而p-JAK2、p-STAT3蛋白表达升高(P<0.05)。结论： HUVEC-EVs可能通过JAK2/STAT3信号通路的磷酸化促进乳腺癌细胞增殖及迁移。     

HPK1过表达对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的：构建造血祖细胞激酶1（HPK1）慢病毒载体,探讨HPK1过表达对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的作用,阐明其可能的机制。方法：通过过表达HPK1的慢病毒感染细胞,获得稳定表达HPK1的细胞系（MCF-7-HPK1和MDA-MB-231-HPK1）,将2个细胞系分别分为3组,即空白组、对照组（空载体组）和过表达组;分别采用RT-PCR法和Western blotting法检测乳腺癌细胞中HPK1 mRNA和蛋白表达水平,MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞周期和凋亡率,Transwell法分析细胞的迁移能力,Western blotting法检测caspase 3、PTEN、MMP-9、MMP-2、Ki-67和HPK1蛋白表达水平。结果：与空白组和对照组比较,乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞过表达组中HPK1 mRNA和蛋白表达水平升高（P < 0.05）,细胞增殖率明显降低（P < 0.05）,细胞凋亡率明显升高（P < 0.05）,穿越Matrigel的细胞数明显减少（P < 0.05）,MCF-7细胞周期阻断在G₁期;过表达组细胞中caspase 3、PTEN蛋白表达水平上调（P < 0.05）,MMP-9、MMP-2、Ki-67蛋白表达水平降低（P < 0.05）。结论：HPK1过表达可抑制乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231的增殖及迁移并诱导凋亡,其可能与caspase 3、PTEN蛋白的表达上调及MMP-9、MMP-2和Ki-67蛋白的表达降低有关。     

促红细胞生成素在人乳腺癌细胞株中的表达及作用

目的: 通过检测重组人促红细胞生成素（recombinant human erythropoietin,rh-EPO）对乳腺癌细胞株增殖、凋亡及转移等生物学行为的影响,探讨EPO/EPO-R在乳腺癌发生发展中的作用。方法： 运用RT-PCR、免疫细胞化学Envision法及蛋白质印迹法检测乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231中EPO、 EPO-R mRNA含量及蛋白表达;采用MTT比色试验、原位末端脱氧核糖核酸转移酶标记DNA链断端分析法(terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dutp-Biotin nick end-labeling assay,TUNEL)、Transwell小室法观察不同浓度rh-EPO 对这两种细胞增殖、凋亡和转移能力的影响。结果：MCF-7和MDA-MB-231细胞中均表达EPO及EPO-R;MTT比色试验和Transwell小室法显示,rh-EPO能增强两种细胞株的增殖活性和迁移侵袭能力,而且具有时间剂量依赖性;TUNEL法显示rh-EPO并没有抑制两株细胞凋亡的作用。rh-EPO对于MCF-7的作用效果强于MDA-MB-231细胞。结论：在不影响癌细胞凋亡的情况下,rh-EPO能够促进MCF-7和MDA-MB-231细胞的增殖活性,提高癌细胞的迁移和侵袭能力。     

miR-376c-3p通过靶向谷氨酸受体相互作用蛋白1影响乳腺癌细胞的增殖和迁移

目的:探讨miR-376c-3p在乳腺癌中的表达水平、生物学功能及分子调控机制.方法:通过实时荧光定量PCR检测乳腺上皮MCF-10A细胞及乳腺癌细胞中miR-376c-3p表达水平;然后,用miR-376c-3p mimic转染乳腺癌MCF-7与MDA-MB-231细胞,用平板克隆实验、划痕实验以及Transwell...     

联氨基姜黄素脂质体纳米颗粒对MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响

目的 探讨联氨基姜黄素（hydrazinocurcumin,HC）脂质体纳米颗粒（NPs）对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法 通过薄膜分散-超声法制备联氨基姜黄素脂质体纳米颗粒（HC-NPs）。用HC-NPs处理细胞后,MTT法检测细胞增殖,刘氏染色法检测细胞形态学改变,流式细胞术检测细胞周期与凋亡,Transwell检测细胞的侵袭和迁移,Western blotting检测与细胞周期、凋亡、侵袭及迁移相关蛋白分子的变化。结果 HC-NPs可抑制MDA-MB-231细胞的增殖,使细胞形态变圆,诱导细胞发生G₂/M期阻滞,使细胞凋亡率明显增加（P＜0.01）,抑制细胞的侵袭和迁移。HC-NPs可下调磷酸化-信号转导和转录激活因子（p-STAT3）以及下游分子Cyclin D1、Survivin、Bcl-2及MMP-9的表达,上调Bax的表达。结论 HC-NPs可能通过抑制STAT3的激活,抑制细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡。