As2O3在肿瘤治疗中的不良反应防治策略研究进展

三氧化二砷(As2O3)作为一种化疗药物,在多种肿瘤的治疗中取得了一定的疗效,被广泛应用于基础研究和临床研究中.然而不良反应限制了其在临床中的应用,因此如何减少不良反应是As2O3在肿瘤治疗中的研究重点.本文就As2O3在肿瘤治疗中的不良反应机制及减少不良反应的方法 做一综述.     

As2O3对多发性骨髓瘤细胞的细胞毒作用的机制研究

背景与目的:多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是恶性浆细胞疾病,目前仍难以治愈;已有研究证明三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)在体外能够抑制骨髓瘤细胞增殖并诱导其凋亡.本研究拟探讨As2O3对多发性骨髓瘤细胞的可能作用机制.方法:采用MTr法检测As2O3对5株骨髓瘤细胞U266、SKO-007、LP-1、HS-Sultan和KM3的抑制作用,求出其IC50,同时研究维生素K3(vitamine K3,VK3)、N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-cysteine,NAC)和还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)对As2O3的协同或拮抗作用;利用光学比色法测定不同浓度As2O3作用后的5株骨髓瘤细胞以及As2O3与VK3、NAC或外源性GSH共同作用后的U266细胞的GSH含量,对细胞GSH含量与IC50进行相关性分析.结果:As2O3对5株骨髓瘤细胞均有增殖抑制作用,但其敏感性不同,细胞内GSH含量与其IC50正相关(r=0.87,P＜0.05);氧化剂VK3与As2O3有明显协同作用,抗氧化剂NAC和GSH对As2O3具有拮抗作用.结论:As2O3可能是通过与细胞内的含巯基化合物结合,降低细胞内GSH含量,从而诱导骨髓瘤细胞凋亡.     

三氧化二砷注射液治疗中晚期原发性肝癌15例报告

目的 评价三氧化二砷（As2O3）治疗中晚期原发性肝癌的近期疗效和不良反应。方法 中晚期原发性肝癌共15例，采用单药三氧化二砷（As2O3）静脉滴注10mg/d,连续10天为1周期,间歇3周重复。结果 PR 3例,NC 8例,PD 4例，有效率20%,主要的不良反应为轻度的骨髓抑制和肝功能损害。结论 三氧化二砷（As2O3）治疗中晚期原发性肝癌确实有效,不良反应少,值得推广。     

As2O3诱导白血病细胞凋亡过程中活性氧自由基的变化

目的 研究As2O3对白血病细胞株NB4，K562，HL－60的活性氧自由基（ROS）的影响。方法 细胞内活性氧（ROS）用DCFH－DA标记，并用流式细胞仪检测。结果 0.6μmol/L As2O3作用72h能诱导NB4发生44.9%的凋亡，提高其浓度至2.7和8.1μmol/L，也能诱导K562和HL－60分别发生58.3％和62.3％。As2O3能显著降低三种细胞内ROS水平，且随浓度增加而降低。As2O3无论高浓度短时间作用或低浓度长时间作用对细胞内ROS抑制作用是相似的。结论 ROS水平下降在As2O3的诱导凋亡作用过程起了重要作用。     

As2O3与STI571单用及联用对K562细胞bcr-abl磷酸化的影响

目的 研究As2O3单用及联用ST1571对K562细胞bcr-abl蛋白酪氨酸磷酸化的影响。探讨其抗白血病的分子机制,为As2O3和ST1571联合应用治疗CML提供理论依据。方法 采用细胞增生实验检测细胞生长;采用Annexin-V／PI双染实验、DNA的PI染色及DNA电泳等方法检测细胞凋亡：运用免疫沉淀和Western blot检测K562细胞bcr-abl蛋白酪氨酸磷酸化水平。结果 As2O3和ST1571明显抑制K562细胞生长。并检测出凋亡细胞群。DNA电泳出现“梯”状条带;bcr-Abl蛋白酪氨酸磷酸化水平出现时间剂量依赖性下调。结论 As2O3和ST1571能诱导K562细胞凋亡和抑制其增生．两药联用具有协同作用．机制似与下调K562细胞bcr-abl蛋白酪氨酸磷酸化有关。     

As2O3联合Aspirin对615小鼠移植性前胃癌淋巴道转移的影响

[目的]观察As2O3和Aspirin联合应用对615小鼠前胃癌侵袭、淋巴管生成及淋巴道转移的影响。[方法]建立小鼠前胃癌淋巴道移植瘤模型,用As2O3、Aspirin单独及联合作用后,测量各组小鼠体重、瘤重,计算肿瘤抑制率并计数瘤组织微淋巴管密度(LMVD)。[结果]与NS组相比,各治疗组615小鼠移植瘤生长均受抑制,Aspirin组抑瘤率为15.4%,As2O3组抑瘤率为43.8%,减半联合组为45.6%,联合组为60.4%,差异有统计学意义(P<0.05)。淋巴结内瘤组织转移抑制率As2O3组为22.4%,减半联合组和联合组分别为28.6%和50.0%。联合治疗组与减半联合组、Aspirin组、As2O3组及NS组相比,LMVD计数均显著减少,差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]As2O3与Aspirin联合应用可抑制小鼠前胃癌移植瘤的生长、侵袭和淋巴道转移。     

三氧化二砷联合TNP-470对裸鼠人肝癌移植瘤的影响

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）联合烟曲霉的提取物烟曲霉醇（TNP-470）对裸鼠人肝癌移植瘤生长的影响及其作用机制。方法：人肝癌转移模型（HCC）-LCI—D20原位移植瘤裸鼠32只，随机分4组（每组8只）给药：As2O3联合TNP-470组、As2O3组、TNP-470组、生理盐水（Ns）对照组，给药21天后，对裸鼠移植瘤大小、肿瘤微血管密度（MVD）、免疫组化、透射电镜结果进行观察。结果：As2O3组、TNP-470组及联合组的平均瘤重及平均瘤体积均低于对照组（P〈0．05）；计算两药相互作用系数（CDI）值：瘤重CDI（0．95）〈1，体积CDI（0．89）〈1，两药有协同抑制移植瘤生长的作用。As2O3组抑制移植瘤VEGF、EGFR的表达；TNP-470组抑制移植瘤EGFR的表达，对移植瘤VEGF的表达无影响；联合组明显抑制移植瘤EGFR的表达，抑制移植瘤VEGF的表达作用等同As2O3组。裸鼠原位移植瘤的光镜、电镜下观察结果有意义；各用药组裸鼠原位移植瘤的MVD值均低于对照组（P〈0．05）。结论：As2O3联合TNP-470协同抑制裸鼠人肝癌移植瘤的血管新生，能有效抑制移植瘤生长。     

三氧化二砷(As2O3)对蚕豆根尖微核率和果蝇发生量的影响

目的： 研究不同浓度As2O3对蚕豆胚根根尖微核率和果蝇发生量的影响作用。 方法： 以蚕豆根尖和果蝇为实验对象,均用不同浓度As2O3处理,采用蚕豆胚根根尖微核实验和果蝇培养实验。 结果： 不同浓度As2O3可使蚕豆根尖细胞微核率和果蝇发生量明显上升。 结论： 三氧化二砷(As2O3)对蚕豆根尖具有明显的毒性效应;在一定条件下,对果蝇发生量有促进作用。     

As2O3抑制人乳腺癌裸鼠移植瘤淋巴管生成相关基因表达的研究

目的：探讨As2O3抑制乳腺癌淋巴管生成的机制。方法：24只裸鼠复制成人乳腺浸润性导管癌模型,随机分成4组：阴性对照组（NS）、阳性对照组（5-FU30mg/kg）,实验组1（As2O31.5mg/kg）和实验组2（As2O33.0mg/kg）,采用免疫组织化学、RT-PCR技术分别检测COX-2、VEGF-C基因、蛋白的表达。结果：阴性对照组COX-2、VEGF-C基因、蛋白呈强阳性表达,实验组1、实验组2的COX-2、VEGF-C阳性表达随着As2O3用量的增加而下降（P〈0.05）,与阳性和阴性对照组的表达比较呈明显下降趋势（P〈0.05）。各组中COX-2与VEGF-C的基因、蛋白表达水平呈明显相关关系（r=0.725,r=0.915）。结论：As2O3可降低乳腺癌裸鼠移植瘤组织中VEGF-C和COX-2的表达,有可能减少肿瘤中淋巴管生成,抑制肿瘤生长及淋巴转移。     

小剂量As_2O_3联合化疗治疗急性早幼粒细胞白血病31例

[目的]探讨应用小剂量As2O3联合化疗治疗急性早幼粒细胞白血病（APL）的临床疗效、毒副反应及机制。[方法]31例初发APL患者,应用As2O35mg加入生理盐水500ml中静脉滴注,1次/d,每次持续3～5h,连续4周为1个疗程或连续用药直至完全缓解。治疗期间检测血常规,对WBC〉10×109/L患者同时加用小剂量化疗。[结果]29例达CR,总缓解率达93.5%,中位缓解时间23（17～33）d。1例因颅内出血死亡,1例未缓解。5例（16.1%）出现消化道反应,6例（19.4%）出现肝功能损害。[结论]小剂量As2O3联合化疗治疗APL缓解率高,毒副反应小。     

HA方案化疗与AS2O3合用治疗加速期/急变期慢性粒细胞白血病的临床观察

慢性粒细胞白血病(CML)是造血干细胞水平的恶性克隆性疾病,确诊后经过1年～4年的慢性期后,多数患者进入加速期和/或急变期,表现为对羟基脲耐药,肝脾进行性肿大,血小板持续增高,骨髓中原始幼稚细胞增多或出现附加染色体异常等.     

As2O3联合L-OHP对HepG2肝癌细胞株的体外抑制作用

目的探讨As2O3联合L-OHP对HepG2肝癌细胞株的体外抑制作用。方法采用MTT法（四唑盐比色法）动态观察As2O3联合L-OHP对HepG2肝癌细胞的生长抑制作用,并采用两药相互作用系数（CDI）来评价两药相互作用的性质;应用流式细胞术（FCM）检测凋亡率和细胞周期分布。结果 As2O3与L-OHP联合应用,对HepG2肝癌细胞株的生长抑制、诱导凋亡作用均较相应的单药增强。流式细胞直方图上可见明显的＂凋亡峰＂,且As2O3使肝癌细胞周期阻滞于G2/M期,L-OHP使细胞周期阻滞于S期和G2/M期,两药合用使细胞周期阻滞于S期和G2/M期。结论中低浓度As2O3与L-OHP联合作用具有显著的协同效益,其主要机制可能是As2O3联合L-OHP诱导肝癌细胞凋亡作用及增强细胞周期阻滞作用。     

三氧化二砷联合热疗对大鼠肝脏移植瘤模型凋亡相关基因表达的影响

目的 研究三氧化二砷(arsenic trioxide,As₂O₃)联合热疗对大鼠肝脏移植瘤细胞的凋亡、热休克蛋白70(Heat shock protein 70,HSP70)、p53和增殖细胞核抗原(Proliferation cell nuclear antigen,PCNA)表达的影响,探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的可能机制。方法 建立大鼠肝脏移植瘤模型,分别对荷瘤大鼠给予生理盐水、As₂O₃、热疗及As₂O₃联合热疗,观察肿瘤生长情况,用免疫组化法检测肿瘤细胞凋亡及肿瘤组织中HSP70、p53及PCNA的表达。结果 As₂O₃ 联合热疗的抗肿瘤作用最明显,坏死及凋亡细胞数量增加。对照组HSP70、p53及PCNA阳性细胞表达率分别为30.12%±3.60%,27.64%±4.90%和74.23%±6.35%,三氧化二砷联合热疗组HSP70、p53及PCNA阳性细胞表达率分别为87.4%1±5.70%,90.06%±6.42%和22.10%±6.17%。与对照组(仅给予As₂O₃或热疗处理)比较,经As₂O₃联合热疗处理后,HSP70、p53表达显著升高(P=0.000＜ 0.05),PCNA表达则显著降低(P=0.000 ＜0.05)。结论 As₂O₃与热疗联合应用治疗大鼠肝癌有明显的协同作用;As₂O₃联合热疗通过诱导HSP70及p53的表达和降低PCNA的表达抑制肝癌细胞增殖并促进细胞凋亡。     

乳腺癌耐药细胞中mdr-1与mrp基因的表达及As2O3对其表达的影响

目的: 探讨人乳腺癌阿霉素（ADM）耐药细胞系MCF7/ADM的mdr1基因和mrp基因表达，观察三氧化二砷（As2O3）对上述基因表达的影响。方法:采用MTT法检测As2O3的细胞毒性及非细胞毒性剂量，应用RTPCR检测mdr1基因和mrp基因的转录表达。结果: As2O3的非细胞毒性剂量为0.2 μmol/L,低毒计量为0.8 μmol/L。mdr1基因和mrp基因在MCF7/ADM细胞中均呈过表达，而且mdr1的基因表达强于mrp基因，在MCF7/S细胞中未见表达。As2O3可下调上述基因的表达，而且As2O3低毒剂量的下调作用强于无毒剂量。结论:人乳腺癌MCF7/ADM细胞获得阿霉素抗药性，与mdr1基因和mrp基因过表达有关，As2O3可通过多种机制部分逆转MCF7/ADM细胞的耐药性。     

TACE对肝癌组织中MMP-2和MMP-9表达及其预后的影响

目的 探讨TACE对肝癌MMP-2、MMP-9的表达及预后的影响.方法 选取肝癌患者80例,随机分为两组,分别为术前TACE组、直接手术组.采用酶联免疫吸附法检测两组患者术前静脉血中MMP-2、MMP-9的水平;采用免疫组织化学法检测两组患者术中所取肝癌及癌旁组织中MMP-2、MMP-9的表达;比较两组患者术后1、2、3年的生存情况,并分析其影响因素.结果 直接手术组患者血液中MMP-2、MMP-9水平明显高于术前TACE组患者,差异有统计学意义(P<0.05);两组肝癌组织中MMP-2、MMP-9表达阳性率均较癌旁组织高,且直接手术组肝癌组织中MMP-2、MMP-9的阳性率明显高于术前TACE组,差异有统计学意义(P<0.05);术前TACE组1、2、3年生存率及中位生存期明显优于直接手术组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);Child-Pugh分级、MMP-2、MMP-9表达、门静脉癌栓、行TACE术均是影响患者生存期的因素(P<0.05);与患者性别、年龄、AFP、肿瘤大小、肿瘤数目无关(P>0.05).结论 TACE术能够降低肝癌患者血液及组织中MMP-2、MMP-9的表达,延长患者术后生存期,且患者生存期的长短受Child-Pugh分级、MMP-2、MMP-9的表达、出现门静脉癌栓以及行TACE术的影响,MMP-2、MMP-9可能成为评价肝癌治疗效果及预后的新的指标.     

HDAC2在肝细胞肝癌中对MMP9表达的影响

目的:明确组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)在肝细胞肝癌(HCC)中对基质金属蛋白酶9（MMP9）表达的影响。方法:利用mRNA表达谱芯片数据进行统计分析,确定HDAC2和MMP9的mRNA在HCC组织中的表达情况及相关性;实时定量PCR检测HDAC2过表达对MMP9转录的影响;蛋白免疫印迹检测HDAC2过表达对MMP9蛋白表达的影响。结果:HDAC2和MMP9的mRNA在HCC肿瘤组织中均表达升高并呈正相关性;在HepG2细胞中,HDAC2促进MMP9的转录及蛋白表达。结论:HDAC2在HCC中促进MMP9的表达,可能在HCC转移过程中发挥作用。     

As2O3联合Ad-pml体外抗肝癌细胞作用的实验研究

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)联合腺病毒介导的早幼粒细胞性白血病基因(promyelocytic leukemia-adenovirus,Ad-pml)体外抗肝癌细胞作用。方法:同时设Ad-pml组、As2O3组、As2O3联合Ad-pml组以及正常细胞对照组,运用分子生物学和细胞生物学技术,观察联合应用As2O3和Ad-pml在体外治疗肝癌的效果,并进一步探讨其作用机制及特点。结果:Ad-pml与As2O3对肝癌细胞体外生长的影响:两因素析因设计分析结果表明,单用Ad-pml处理肝癌细胞,其抑制作用随Ad-pml MOI值的增加而增加(P<0.05),单独应用As2O3在浓度小于5μmol/L时,未发现有明显的肿瘤抑制作用(P>0.05);As2O3和Ad-pml联合应用具有协同抗肿瘤作用,二者之间存在着交互作用(P<0.05)。流式细胞仪检测细胞凋亡结果:用Ad-pml和As2O3共同作用肝癌细胞24小时后,早期细胞凋亡率明显增高。RT-PCR结果表明,联合治疗组p53表达最高,而Bcl-2表达最低,相反,肝癌细胞对照组p53表达最低,而Bcl-2表达最高。结论:As2O3和Ad-pml联合应用有协同抗肝癌细胞作用,其机制与增强肝癌细胞凋亡及控制凋亡相关基因的表达有关。     

NDRG2在热疗抗肝癌细胞作用中的影响

目的：探讨 NDRG2对热疗诱发的热应激抗肝癌细胞作用的影响。方法：分别给予肝癌HepG-2和Huh-7细胞37℃、39℃、41℃、43℃、45℃水浴30min的热刺激后,采用细胞划痕、Transwell和Western blot方法对各组细胞的迁移、侵袭能力和NDRG2、MMP-2/9蛋白表达量进行检测,同时应用流式细胞技术检测肿瘤细胞的坏死和凋亡情况。结果：与37℃（对照组）相比,45℃组HepG2和Huh-7细胞的迁移和侵袭能力均有显著降低 （P〈0.05）,细胞内MMP-2及MMP-9分泌量明显下降,同时伴随NDRG2表达量明显上升。通过比对NDRG2联合热作用对肝癌细胞的治疗效果,发现在正常表达NDRG2的对照组细胞（Cherry-HepG-2）的凋亡率会随着加热温度的增加而增加,同时坏死率显著增高 （P〈0.05）。然而,给予NDRG2过表达组细胞（NDRG2-HepG2）43℃热处理后,细胞凋亡率和抗细胞侵袭能力可高达45℃热作用于对照组细胞的水平,而细胞坏死率却没有增加。结论：45℃的热应激可明显抑制肝癌细胞的迁移和侵袭能力;NDRG2联合热作用可对肝癌细胞产生较好的促凋亡和抗侵袭效果。     

MMP-9和MMP-2基因多态性与原发性肝癌侵袭转移的关系

目的探讨原发性肝癌中MMP-9和MMP-2基因多态性表达与原发性肝癌侵袭转移的关系。方法用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性技术,检测MMP-2和MMP-9启动子基因型在28例原发性肝癌患者（其中8例有转移）和42例健康者中的频率。结果与携带MMP-9－1562CC和CT基因型相比,携带MMP-9－1562TT基因型者早期发生侵袭转移的风险增加1.25倍（95％CI：3.64~5.69）,且这种风险增高与研究对象的年龄和性别无关,同时携带MMP-9－1562TT和MMP-2 -1306CC或CT基因型的个体,患肝癌的风险性较单一携带的个体显著增高（P<0.5）。结论MMP-2 -1306T/C多态性单独与原发性肝癌风险无关,但与MMP-9－1562C/T多态性可能有基因-基因交互作用。MMP-2和MMP-9基因多态性与原发性肝癌侵袭转移可能相关。     

小剂量三氧化二砷治疗复发APL15例

急性早幼粒白血病 (ＡＰＬ)是以异常早幼粒细胞增生为特征的一种疾病 ,初治时对维甲酸较为敏感 ,缓解率可达85 %以上 ,但多次复发的ＡＰＬ往往对维甲酸耐药。既往的报道证实砷剂治疗复发性ＡＰＬ疗效较佳[1] ,因此本文对应用小剂量三氧化二砷治疗的 15例复发ＡＰＬ患者 ,进行疗