siRNA靶向沉默COX-2对宫颈癌细胞VEGF、EGFR表达的影响

目的 探讨siRNA靶向沉默环氧合酶-2(COX-2)基因对宫颈癌HeLa细胞血管内皮生长因子(VEGF)和表皮生长因子受体(EGFR)表达的影响.方法 以人宫颈癌HeLa细胞为研究对象,采用COX-2 siRNA转染HeLa细胞作为转染组,以未转染的HeLa细胞作为空白对照组,以阴性对照siRNA转染HeLa细胞作为阴性对照组.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测COX-2、VEGF、EGFR基因的表达水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测COX-2、VEGF、EGFR蛋白的表达水平,MTT法检测细胞的增殖情况,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,Tran-swell小室检测细胞的迁移和侵袭能力.结果 RT-PCR结果显示,转染组的COX-2、VEGF、EGFR基因表达水平均低于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).Western blot结果显示,转染组的COX-2、VEGF、EGFR蛋白表达水平均低于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).MTT检测结果显示,转染组的细胞增殖抑制率高于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).流式细胞仪检测结果显示,转染组的细胞凋亡率高于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).Transwell小室检测结果显示,转染组的细胞穿透率低于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).结论siRNA靶向沉默COX-2基因能够抑制HeLa细胞中VEGF和EGFR的基因及蛋白表达水平,促进HeLa细胞凋亡,抑制HeLa细胞增殖,降低HeLa细胞的迁移及侵袭能力.     

下调Rab11基因对宫颈癌HeLa/SiHa 细胞侵袭迁移的影响及机制探讨

背景与目的：Rab11基因在宫颈癌细胞中高表达,可能与细胞恶性转化相关。本研究采用RNA干扰技术下调Rab11基因表达,并探讨其对宫颈癌HeLa/SiHa细胞侵袭迁移的影响及可能的相关机制。方法：将HeLa/SiHa细胞分为2组：阴性对照组(转染阴性对照的小干扰RNA)和Rab11 siRNA干扰组(转染小干扰Rab11siR-NA)。蛋白[质]印迹法(Western blot)检测Rab11干扰效果,检测转染Rab11 siRNA后,侵袭相关蛋白Rac1、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)和MMP9表达的变化;细胞划痕损伤实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;细胞免疫荧光实验从形态学角度探索在小干扰Rab11后Rac1蛋白在细胞膜上聚集位置的变化。结果：转染小干扰Rab11siRNA到HeLa/SiHa细胞后,Rab11蛋白表达受到高效抑制(P<0.01);细胞迁移、侵袭能力受到抑制(P<0.05),Rac1蛋白表达明显下调(P<0.01),MMP2、MMP9蛋白表达下调(P<0.05), Rab11 siRNA处理组细胞运动前端细胞膜下Rac1蛋白聚集量减少。结论：Rab11基因表达下调可以抑制HeLa/SiHa细胞的迁移和侵袭,其机制可能与Rac1、MMP2和MMP9蛋白表达量下降及Rac1定位的改变有关。     

MYB基因沉默抑制子宫颈癌细胞侵袭、迁移及其作用机制探讨

目的:探究沉默转录因子MYB对子宫颈癌细胞侵袭、迁移的影响以及可能的作用机制。方法:将携带MYB目的片段的siRNA转染入人子宫颈癌HeLa细胞中。实验分为对照组、阴性对照组和siRNA-MYB组。采用荧光定量PCR（qPCR）和蛋白质印迹法（Western Blot）检测转染效果。细胞划痕实验和Transwell法检测细胞的迁移、侵袭能力。Western Blot检测各组细胞中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、钙黏蛋白E（E-cadherin）、钙黏蛋白N（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）水平。结果:与对照组相比,阴性对照组细胞中MYB的表达量、细胞侵袭、迁移均无显著变化,差异不具有统计学意义;siRNA-MYB组细胞中MYB的表达量显著降低（P<0.05）,沉默MYB显著抑制子宫颈癌细胞的侵袭、迁移（P<0.05）,并下调细胞中MMP-2、N-cadherin、Vimentin蛋白的表达量（P<0.05）,上调E-cadherin蛋白的表达量（P<0.05）。结论:沉默宫颈癌细胞中MYB的表达量可通过抑制EMT、下调MMP-2蛋白水平,从而降低细胞的侵袭、迁移能力。     

CrkⅡ表达水平对喉癌细胞Hep-2增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨CrkⅡ表达水平对喉癌细胞Hep-2增殖、迁移及侵袭的影响。方法采用免疫组化法检测CrkⅡ在108例喉癌患者喉癌组织及癌旁正常组织中的表达情况,分析不同临床特征喉癌患者喉癌组织中CrkⅡ蛋白的阳性表达情况。构建并验证CrkⅡRNA干扰质粒,将培养后的Hep-2细胞分为空白对照组(未转染质粒)、阴性对照组(转染阴性对照质粒)和实验组(转染CrkⅡ干扰质粒),细胞转染后行实时聚合酶链反应(PCR)扩增。采用蛋白质印迹法(Western blot)检测转染后Hep-2细胞中CrkⅡ的表达水平,噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖情况,Transwell实验检测细胞的侵袭和迁移能力,细胞划痕实验检测细胞的迁移情况。结果喉癌组织中CrkⅡ蛋白的阳性表达率明显高于癌旁正常组织(P﹤0.01)。临床分期为Ⅲ~Ⅳ期、组织分化程度为中低分化、有淋巴结转移喉癌患者喉癌组织中CrkⅡ蛋白的阳性表达率均高于临床分期为Ⅰ~Ⅱ期、组织分化程度为高分化、无淋巴结转移的喉癌患者(P﹤0.05)。实验组喉癌细胞Hep-2中CrkⅡmRNA和蛋白的相对表达量均低于阴性对照组、空白对照组(P﹤0.05)。实验组穿过基质膜至下室的细胞数目低于阴性对照组和空白对照组(P﹤0.05)。转染48 h时,实验组细胞的迁移率低于阴性对照组、空白对照组(P﹤0.05)。细胞培养24、48、72 h时,实验组Hep-2细胞的光密度(OD)值均低于空白对照组和阴性对照组(P﹤0.05)。结论喉癌细胞Hep-2中CrkⅡ的表达下调可降低细胞的增殖、迁移和侵袭能力,CrkⅡ有可能成为喉癌临床治疗的新靶点。     

小干扰RNA沉默基质金属蛋白酶-2基因对卵巢癌细胞恶性行为的影响

 目的　探讨靶向基质全属蛋白酶-2（MMP-2）基因的RNA干扰（RNAi）技术对卵巢癌OVCAR-3细胞MMP-2的沉默作用,以及沉默MMP-2基因对OVCAR-3细胞生长、黏附、侵袭和迁移能力的影响。方法　合成特异性靶向MMP-2基因的小干扰RNA（siRNA）并转染卵巢癌OVCAR-3细胞,以非特异性序列转染细胞作为阴性对照组,以培养液代替siRNA转染细胞作为空白对照组,采用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测转染后24 、48 和72 h MMP-2 mRNA和蛋白的表达水平,通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）法绘制细胞生长曲线,利用Transwell、划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力。结果　与阴性对照组相比,OVCAR-3细胞在转染siRNA-MMP-2后24 、48 和72 h MMP-2 mRNA表达量分别下降了73.8 %、78.8 %和78.4 %（均P＜0.05）,蛋白表达量分别下降了72.6 %、81.2 %和76.4 %（均P＜0.05）,以48 h作用最强;细胞生长曲线显示细胞生长无明显变化（P＞0.05）;60 min和90 min时的黏附抑制率分别为55.0 %和44.8 %（均P＜0.05）;细胞的侵袭和迁移能力分别下降29.7 %和35.8 %（均P＜0.05）。结论　siRNA介导的MMP-2基因沉默能明显抑制OVCAR-3细胞的黏附、侵袭和迁移能力,而对其生长无明显影响,MMP-2基因有可能成为卵巢癌基因治疗的重要靶点。     

沉默高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ表达对人胃癌BGC-823细胞侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨RNA干扰沉默高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(Golgi a-mannosidase Ⅱ,GM Ⅱ)基因表达对人胃癌BGC-823细胞侵袭和迁移的影响.方法:为沉默GM Ⅱ基因,构建了4个分别针对不同靶位点的短发夹RNA (short hairpin RNA,shRNA)质粒表达载体,同时合成阴性对照质粒表达载体.应用LipofectAMINE2000将质粒转染入BGC-823细胞.分别采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染后GM Ⅱ mRNA和蛋白表达的变化,选出沉默效果最佳的质粒.应用Transwell侵袭实验和划痕损伤实验分别检测GM Ⅱ基因沉默对人胃癌细胞BGC-823侵袭和迁移能力的影响.结果:质粒载体pGPU6/GFP/Nco-1303沉默GM Ⅱ基因的效果最好.转染pGPU6/GFP/Neo-1303组穿透小室基质的细胞数明显少于空白对照组和转染阴性对照组(P＜0.05).无血清培养液培养24 h后,转染pGPU6/GFP/Neo-1303组细胞的迁移能力较空白对照组和转染阴性对照组明显降低(P＜0.05).结论:RNA干扰技术可沉默人胃癌BGC-823细胞中GMⅡmRNA和蛋白的表达,从而抑制BGC-823细胞的侵袭和迁移能力.GM Ⅱ可能成为胃癌治疗的新靶点之一.     

RBMS3-AS3对宫颈癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及作用机制

目的：探讨RNA结合基序单链相互作用蛋白3反义链3（RBMS3-AS3）对宫颈癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及作用机制。方法：培养人宫颈永生化细胞Ect1/E6E7和宫颈癌HeLa、Caski和SiHa细胞,实时荧光定量PCR检测细胞中RBMS3-AS3表达水平,Western blot法检测RNA结合基序单链相互作用蛋白3（RBMS3）蛋白水平。将HeLa细胞分为对照组（细胞正常培养）、si-RBMS3-AS3组（转染RBMS3-AS3小干扰RNA）、阴性序列组（转染乱序无意义阴性序列）、si-RBMS3-AS3+si-RBMS3组（共转染RBMS3-AS3和RBMS3的小干扰RNA）和si-RBMS3-AS3+阴性序列组（共转染RBMS3-AS3与乱序无意义阴性序列）,四甲基噻唑蓝染色法（MTT）检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell检测细胞侵袭能力,Western blot检测各组HeLa细胞中细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白（Bax）和基质金属蛋白酶2（MMP-2）蛋白表达水平。结果：宫颈癌细胞系HeLa、Caski和SiHa中RBMS3-AS3表达水平均高于Ect1/E6E7细胞（P < 0.05）,而RBMS3蛋白表达低于Ect1/E6E7细胞（P < 0.05）。与对照组或阴性序列组相比,si-RBMS3-AS3组HeLa细胞的活性、侵袭细胞数、Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白表达水平降低（P < 0.05）,细胞凋亡率及RBMS3和Bax蛋白表达水平升高（P < 0.05）。与si-RBMS3-AS3+阴性序列组比较,si-RBMS3-AS3+si-RBMS3组HeLa细胞活性、侵袭细胞数及Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白表达水平升高（P < 0.05）,细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平降低（P < 0.05）。结论：抑制RBMS3-AS3表达可抑制宫颈癌细胞增殖和侵袭,并促进细胞凋亡,这可能与上调RBMS3表达有关。     

RBMS3-AS3对宫颈癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及作用机制

目的：探讨RNA结合基序单链相互作用蛋白3反义链3（RBMS3-AS3）对宫颈癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及作用机制。方法：培养人宫颈永生化细胞Ect1/E6E7和宫颈癌HeLa、Caski和SiHa细胞，实时荧光定量PCR检测细胞中RBMS3-AS3表达水平，Western blot法检测RNA结合基序单链相互作用蛋白3（RBMS3）蛋白水平。将HeLa细胞分为对照组（细胞正常培养）、si-RBMS3-AS3组（转染RBMS3-AS3小干扰RNA）、阴性序列组（转染乱序无意义阴性序列）、si-RBMS3-AS3+si-RBMS3组（共转染RBMS3-AS3和RBMS3的小干扰RNA）和si-RBMS3-AS3+阴性序列组（共转染RBMS3-AS3与乱序无意义阴性序列），四甲基噻唑蓝染色法（MTT）检测细胞增殖率，流式细胞术检测细胞凋亡率，Transwell检测细胞侵袭能力，Western blot检测各组HeLa细胞中细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白（Bax）和基质金属蛋白酶2（MMP-2）蛋白表达水平。结果：宫颈癌细胞系HeLa、Caski和SiHa中RBMS3-AS3表达水平均高于Ect1/E6E7细胞（P < 0.05），而RBMS3蛋白表达低于Ect1/E6E7细胞（P < 0.05）。与对照组或阴性序列组相比，si-RBMS3-AS3组HeLa细胞的活性、侵袭细胞数、Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白表达水平降低（P < 0.05），细胞凋亡率及RBMS3和Bax蛋白表达水平升高（P < 0.05）。与si-RBMS3-AS3+阴性序列组比较，si-RBMS3-AS3+si-RBMS3组HeLa细胞活性、侵袭细胞数及Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白表达水平升高（P < 0.05），细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平降低（P < 0.05）。结论：抑制RBMS3-AS3表达可抑制宫颈癌细胞增殖和侵袭，并促进细胞凋亡，这可能与上调RBMS3表达有关。     

TAGLN基因过表达对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的 研究TAGLN基因过表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移能力和侵袭能力的影响及其分子机制.方法 对MDA-MB-231细胞采用慢病毒表达系统构建TAGLN基因稳定过表达细胞株,将MDA-MB-231细胞正常培养设为空白对照组,空载体慢病毒包装感染MDA-MB-231细胞后获得的稳定转染细胞株设为空载体对照组.Real time PCR和Western blot检测TAGLN mRNA和蛋白表达,划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测TAGLN基因过表达后基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-9蛋白表达变化.结果 MDA-MB-231细胞感染TAGLN基因过表达慢病毒载体后,细胞中TAGLN mRNA表达和蛋白表达升高(均P＜0.01),成功构建TAGLN基因过表达稳定细胞株(231-TAGLN).231-TAGLN细胞的体外迁移能力和侵袭能力下降,与空载体对照组和空白对照组细胞比较,差异均具有统计学意义(均P＜0.01),同时伴有MMP-2和MMP-9表达水平降低(均P＜0.01).结论 TAGLN基因过表达可以抑制乳腺癌细胞的迁移和侵袭,MMP-2和MMP-9基因表达下降可能参与这一过程.     

LINC00511过表达促进宫颈癌HeLa细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:研究长链非编码RNA(LncRNA)LINC00511过表达对宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响并探索其潜在机制。方法:利用荧光定量PCR（qRT-PCR）及Western blotting检测宫颈癌HeLa细胞中LINC00511 mRNA和蛋白表达;利用细胞转染试验过表达宫颈癌细胞中的LINC00511,利用CCK-8检测法、Transwell实验探究过表达LINC00511对宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和侵袭的影响;通过Western blotting检测HeLa细胞中EMT相关蛋白的表达情况,探究潜在作用机制。结果:HeLa细胞中LINC00511 mRNA和蛋白表达水平显著高于正常宫颈内皮细胞（P＜0.001）;CCK-8法及Transwell实验显示,过表达LINC00511促进了宫颈癌HeLa细胞的增殖、迁移和侵袭能力（P＜0.01）;Western blotting检测显示,过表达LINC00511后宫颈癌HeLa细胞中E-cadherin蛋白表达水平显著下调,而Vimentin 和 α-SMA蛋白表达水平显著上调（P＜0.05）。结论:宫颈癌HeLa细胞中LINC00511显著高表达,可能是宫颈癌潜在的癌基因,LINC00511过表达可促进宫颈癌HeLa细胞的增殖、迁移和侵袭,可能通过调控 EMT过程来调控宫颈癌细胞的生物学行为。     

XIAP基因对食管癌细胞黏附、侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨沉默X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）基因表达对食管癌细胞黏附、侵袭和迁移能力的影响及机制。方法:参照LipofectamineTM2000说明将设计合成的XIAP特异性siRNA（si-XIAP）转染人食管癌EC9706细胞,将转染阴性对照siRNA(NC组）和仅加入脂质体的空白细胞作为两个对照组,siRNA转染48 h,通过Western blotting检测XIAP、AKT、p-AKT、E-cadherin和MMP-2蛋白表达;通过MTT法、Transwell法分别检测细胞黏附、侵袭和迁移能力;MTT法检测转染siRNA后24 h、48 h和72 h的细胞增殖。结果:XIAP特异性siRNA转染后,EC9706细胞XIAP表达明显降低,与空白组比较差异有统计学意义（P<0.05）。与空白组比较,si-XIAP组细胞增殖明显降低,黏附率明显升高,侵袭和迁移能力明显降低,p-AKT和MMP-2表达明显降低,E-cadherin表达明显升高（P<0.05）。结论:沉默XIAP基因可增强食管癌细胞黏附率,抑制侵袭和迁移能力,机制与抑制PI3K/AKT信号通路有关。     

miR-429在鼻咽癌细胞中的表达及其对细胞增殖、迁移的影响

目的:探讨微小RNA-429（miR-429）在鼻咽癌细胞中的表达及其对细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法:选取本院收治的78例鼻咽癌患者为鼻咽癌组,另选取同期因其他疾病需进行鼻内镜手术患者33例为对照组。采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测两组组织中miR-429的表达。体外培养人鼻咽上皮细胞NP69与鼻咽癌细胞株CNE-2,将miR-429阴性对照质粒、miR-429 mimics质粒分别转染至CNE-2细胞,分别命名为阴性转染组、miR-429过表达组,未经处理的细胞命名为空白组,采用qRT-PCR技术检测各转染组细胞中miR-429表达。MTT法检测各转染组细胞增殖情况;平板克隆细胞形成实验检测细胞菌落形成情况;Transwell检测细胞迁移及侵袭能力;蛋白免疫印迹（Western blot）检测E盒结合锌指蛋白（ZEB1）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、钙黏附蛋白E（E-cadherin）蛋白表达量。结果:鼻咽癌组织中miR-429表达水平显著低于对照组（P＜0.05）,且CNE-2细胞中miR-429表达水平显著低于NP69细胞（P＜0.05）;miR-429过表达组miR-429表达水平显著高于空白组、阴性转染组（P＜0.05）;miR-429过表达组细胞增殖能力显著低于空白组、阴性转染组（P＜0.05）;miR-429过表达组细胞菌落形成、迁移细胞及侵袭细胞数量均显著低于空白组、阴性转染组（P＜0.05）;miR-429过表达组细胞中ZEB1、MMP-2蛋白表达水平显著低于空白组、阴性转染组,而E-cadherin蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。结论:鼻咽癌细胞中miR-429呈低表达,miR-429过表达后可显著抑制鼻咽癌细胞增殖、迁移及侵袭。     

载脂蛋白E对结直肠癌细胞侵袭迁移能力的影响

目的 观察载脂蛋白E（apolipoprotein E, ApoE）对结直肠癌细胞侵袭迁移能力的影响。方法 在结直肠癌细胞系SW48中转染ApoE过表达质粒及其特异性siRNA,实时荧光定量PCR（Real timeqPCR）检测转染ApoE的表达,利用Transwell小室观察ApoE对细胞侵袭迁移能力的影响,通过免疫印迹检测ApoE对基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase, MMP）家族蛋白表达的影响。结果 RTPCR检测结果显示：过表达ApoE组细胞中ApoE mRNA水平显著高于空白对照白组和阴性对照组,差异有统计学意义（P=0.008）,ApoE沉默组中ApoE mRNA水平与阴性对照组比,差异有统计学意义（P=0.013）;Transwell侵袭实验结果显示,穿膜细胞数：空白对照组、阴性对照组、过表达ApoE组、si-ApoE组依次为：（209±17）、（228±11）、（67±9）、（428±15）个/视野,过表达ApoE组和si-ApoE组与阴性对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）;Transwell迁移实验结果显示,空白对照组（326±18）个/视野,阴性对照组（338±21）个/视野,过表达ApoE组（133±11）个/视野,与阴性对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）,si-ApoE组（518±13）个/视野与阴性对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）。同时免疫印迹实验显示,过表达ApoE组细胞中MMP-2及MMP-9的表达下降,组织基质金属蛋白酶抑制剂2（tissue inhibitors of metalloproteinase-2, TIMP-2）的表达升高,而si-ApoE组MMP-2及MMP-9表达升高,TIMP-2的表达降低。结论 ApoE可影响结直肠癌细胞的侵袭、迁移能力,并且可能通过影响TIMP-2、MMP-2及MMP-9的表达发挥上述功能。     

IL-17RA基因过表达对人肺腺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨白介素-17受体A（interleukin-17 receptor A,IL-17RA）对人肺腺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响及其可能的机制。方法:构建IL-17RA基因过表达慢病毒载体并感染A549细胞,采用RT-qPCR法和Western blot方法检测IL-17RA、MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白的表达。MTT实验、划痕实验及Transwell侵袭实验检测IL-17RA过表达对A549细胞增殖、迁移及侵袭的影响。结果:IL-17RA过表达A549细胞中IL-17RA mRNA和蛋白表达显著上调。IL-17RA过表达细胞的增殖活性同对照组无明显变化,但过表达组细胞的迁移距离较空载病毒组及空白对照组明显增多（P<0.05）,过表达组穿膜细胞数较空载病毒组及空白对照组明显增多（P<0.05）。IL-17RA高表达可明显上调MMP-2和MMP-9蛋白的表达。结论:成功构建IL-17RA过表达A549细胞,IL-17RA具有增强A549细胞迁移及侵袭的作用,其机制可能与上调MMP-2和MMP-9表达有关。     

miR-182激活PI3K/AKT信号通路促进肝癌HepG2细胞增殖、侵袭和迁移的机制研究

目的:探讨miR-182通过PI3K/AKT信号通路对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制。方法:将体外培养的HepG2细胞分为对照组(未转染)、阴性组(转染阴性对照)、模拟物组(转染miR-182模拟物)和模拟物+抑制剂组(转染miR-182模拟物后,加入PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002),采用RT-PCR检测各组细胞中miR-182的表达水平,Western blot检测各组细胞中PI3K/AKT信号通路相关蛋白PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT和MMP-9、c-Myc、VEGF蛋白的表达,采用MTT法、克隆形成实验和Transwell小室分别检测各组细胞的增殖、侵袭和迁移能力。结果:与对照组相比,模拟物组细胞的存活率、克隆形成率和侵袭细胞数、迁移细胞数均明显升高,细胞中p-PI3K、p-AKT和MMP-9、c-Myc、VEGF蛋白的表达水平也均明显上升(P<0.05);而阴性组和对照组细胞相比无显著性差异(P>0.05)。与模拟物组相比,模拟物+抑制剂组细胞的存活率、克隆形成率和侵袭细胞数、迁移细胞数明显降低,细胞中p-PI3K、p-AKT和MMP-9、c-Myc、VEGF蛋白的表达水平也均明显下降(P<0.05)。结论:miR-182可通过激活PI3K/AKT信号通路上调MMP-9、c-Myc、VEGF蛋白的表达促进肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移。     

沉默CHD1L对前列腺癌PC3细胞恶性生物学行为的影响及其可能机制

目的:探讨染色质解旋酶DNA结合蛋白1样基因(chromodomain helicase/ATPase DNA binding protein 1-like gene,CHD1L)对前列腺癌细胞侵袭、迁移能力的影响及其可能的作用机制.方法:采用实时荧光定量PCR技术检测前列腺癌细胞株LNCAP、PC3、DU145以及前列腺上皮细胞株RWPE-1中CHD1L mRNA表达水平;转染siRNA干扰前列腺癌PC3细胞CHD1L的表达,并用Transwell侵袭实验和划痕实验分析沉默CHD1L对前列腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响;Western blotting 检测PC3细胞MMP-9、N-钙黏蛋白和E-钙黏蛋白的表达水平.结果:CHD1L mRNA在前列腺癌细胞中的表达水平明显高于前列腺上皮细胞(P＜0.01),其中以前列腺癌PC3细胞的表达水平最高.侵袭实验中,干扰组的穿膜细胞数明显低于阴性对照组和空白对照组[(49.67 ±6.67)vs(113.67 ±5.69)和(112.00±12.49)个,P＜0.05).划痕实验中,干扰组48 h伤口愈合率也低于阴性对照组和空白对照组[(21.27 ±3.27)％ vs(48.47±5.72)％和(49.93±3.35)％,P＜0.05].干扰组细胞MMP-9和N-钙黏蛋白表达下调,E-钙黏蛋白表达上调.结论:沉默CHD1L可降低前列腺癌PC3细胞的侵袭迁移能力,该作用可能是通过调控MMP-9和EMT相关蛋白表达实现的.     

siRNA沉默STMN1基因抑制肺癌细胞增殖与侵袭的机制探讨

目的:观察下调肺癌细胞中STMN1基因的表达对癌细胞增殖、侵袭及PI3K/AKT信号通路的影响。方法:以人正常肺细胞MRC-5作为对照,通过Western bloting检测人肺癌A549、SPC-A1和H322细胞中STMN1的蛋白表达;STMN1的siRNA转染A549细胞为实验组,另设空白组和阴性组,转染48 h后,Western bloting检测转染效果;CCK8法及Transwell小室分别检测细胞的增殖及侵袭能力;Western bloting检测增殖细胞核抗原（PCNA）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶（p-AKT）的蛋白表达。结果:STMN1在肺癌A549、SPC-A1和H322细胞中的蛋白表达均显著高于在MRC-5细胞中的表达（P<0.05）,选择A549细胞为研究对象。转染STMN1 siRNA的A549细胞STMN1的蛋白表达显著低于空白组（P<0.05）。与空白组比较,实验组细胞增殖及侵袭能力均显著降低,PCNA、MMP-2、PI3K、p-AKT蛋白表达均显著降低（P<0.05）。结论:siRNA沉默STMN1的表达通过下调PI3K/AKT信号通路降低肺癌细胞增殖及侵袭能力。     

shRNA沉默HMGA2对食管癌ECA109细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨shRNA沉默HMGA2对食管癌ECA109细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响,并探究所涉及的相关机制.方法 构建针对人HMGA2基因的shRNA表达载体,瞬时转染至人食管癌细胞系ECA109中,24 h后应用蛋白免疫印迹法(WB)检测转染效率;应用MTT法比较转染后sh-HMGA2组与sh-NC组细胞增殖情况;应用流式细胞术检测HMGA2沉默对细胞凋亡的影响;应用Transwell测定评估HMGA2沉默对细胞迁移和侵袭能力的影响;应用WB检测HMGA2沉默对ECA109细胞内HMGA2、TGF-βRⅡ、Vimentin、Smad2、Smad3、磷酸化Smad2/3、E-cadherin、N-cadherin、Bax、Bcl-xl、MMP-2、MMP-9蛋白表达的影响.结果 与sh-NC组相比,sh-HM-GA2组中HMGA2的蛋白表达水平降低(P﹤0.05).MTT结果显示,与sh-NC组相比,sh-HMGA2组细胞增殖率明显降低(P﹤0.01).流式细胞术结果显示,与sh-NC组相比,sh-HMGA2组细胞凋亡率增加(P﹤0.05).Tran-swell测定结果显示,与sh-NC组相比,sh-HMGA2组中ECA109细胞迁移和侵袭数量均减少(P﹤0.05).WB结果显示,与sh-NC组相比,sh-HMGA2组细胞内Bax和E-cadherin表达水平增加,而Bcl-xl、Vimentin、N-cadherin、MMP-2、MMP-9、TGF-β、Smad2、Smad3、p-Smad2/3蛋白表达水平均降低(P﹤0.05).结论 shRNA沉默HMGA2基因通过下调Bcl-xl表达、上调Bax表达水平来抑制食管癌细胞系ECA109细胞增殖并促进细胞凋亡,并通过抑制MMP及上皮间质转化来抑制细胞迁移和侵袭,这一过程涉及TGF-β/Smad信号通路.     

miR-34a对结肠癌细胞SW480增殖、迁移和侵袭能力的影响及机制探讨

目的 探讨miR-34a对结肠癌细胞株SW480增殖、侵袭和迁移能力的影响及可能的作用机制。方法将miR-34a过表达慢病毒、空病毒载体转染SW480细胞,未做处理细胞作为空白对照组。Real-time PCR检测各组细胞内miR-34a的表达;CCK8法检测细胞增殖能力;划痕实验、Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot实验检测细胞内E-cadherin和Vimentin蛋白表达。结果 与空病毒载体组及空白对照组相比,转染组细胞中miR-34a的表达增高,且细胞增殖效率、侵袭和迁移能力降低(P＜0.05),miR-34a使E-cadherin蛋白表达增加、Vimentin蛋白表达降低。结论 miR-34a可抑制结肠癌细胞SW480增殖、侵袭和迁移能力,并能影响E-cadherin和Vimentin的表达,miR-34a有望成为干预结肠癌转移和复发的分子靶点。