二十二碳六烯酸介导MAPK途径抗房颤的作用及机制研究

目的:探讨二十二碳六烯酸(DHA)通过影响P38 MAPK途径调控胶原表达发挥抗房颤作用可能的机制。方法:将80只对乙酰胆碱(66μg/mL)-氯化钙(50 mg/mL)混合液敏感的SD大鼠随机分为对照组(CON组)、对照DHA处理组(DHA组)、房颤组(AF组)和房颤DHA处理组(DHA+AF组),每组20只复制大鼠房颤模型。BL-420F描记心电图、连续双刺激法测定心房有效不应期(effective refractory period, ERP)、全细胞膜片钳技术记录心房肌细胞动作电位时程(action potential duration, APD)变化,酶免疫吸附法(ELISA)检测大鼠心房肌组织Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达情况,蛋白印迹检测P38、P-P38及MKP-1表达情况。结果:大鼠房颤持续时间随实验时间增加而逐渐延长,而DHA可以缩短房颤持续时间(P<0.05～P<0.01)。AF组大鼠心房ERP、APD明显缩短、DHA可明显延长大鼠心房ERP、APD(P<0.01);各组P38表达无明显变化,与CON组相比,AF组大鼠P-P38表达水平明显升高,MKP-1表...     

心房颤动患者心房组织SIRT1表达与心房纤维化的相关性

目的 观察心房颤动患者心房组织Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶1(SIRT1)的表达及其与心房纤维化的关系。方法 选择38例行心脏手术的风湿性心脏病患者,按照是否合并房颤分为两组：持续性房颤组25例(AF组),窦性心律组13例(SR组),于心脏手术时切取小块右心耳组织,采用实时荧光定量PCR法检测SIRT1mRNA的表达量,采用免疫组化法检测SIRT1蛋白表达量,行心脏超声评价心房结构情况,采用masson染色评价心房纤维化程度,比较两组患者SIRT1表达及评价SIRT1表达与心房纤维化的关系。结果 AF组患者SIRT1mRNA表达量高于SR组(P<0.05),AF组SIRT1蛋白表达量高于SR组(P<0.05), AF组SIRT1mRNA及蛋白表达量与心房内径无相关性(左房：r=0.198, r=0.047;右房：r=0.027, r=0.096,P均>0.05), AF组SIRT1mRNA及蛋白表达量与心房胶原容积分数呈负相关 (r=-0.643,r=-0.721,P＜0.05)。结论 房颤患者心房组织SIRT1表达增加,与心房纤维化呈负相关,提示SIRT1可通过抑制心房纤维化在房颤中起作用。     

微纤维蛋白1在瓣膜性心房颤动患者心房组织中的表达及其与心房纤维化的关系

目的：观察微纤维蛋白1（FBN-1）在风湿性心脏瓣膜病并发心房颤动（AF）患者心房组织中的表达,探讨FBN-1与心房纤维化的关系。方法：选择因风湿性心脏瓣膜病住院并行瓣膜置换手术的患者84例,分为AF组39例和窦性心律（SR）组45例;收集整理患者的临床资料,并于手术中获取右心房组织（0.3~0.5 mm³）。Masson 染色观察2组患者右心房纤维化程度;Western blotting法测定各组患者心房组织中FBN-1蛋白的表达,相关分析探讨FBN-1与心房纤维化的关系。结果：2组患者在性别构成比、年龄、血压、血常规和生化指标等方面比较差异无统计学意义（P>0.05）。AF组患者左和右心房直径明显大于SR组（P<0.05）;Masson 染色,AF组患者心房组织存在明显纤维化,AF组患者胶原容积分数和胶原水平明显高于SR组（P<0.05）;AF组患者心房组织中FBN-1的蛋白表达水平明显高于SR组（P<0.05）;瓣膜性AF患者右心房组织FBN-1蛋白表达水平与胶原水平呈正相关关系（r=0.544,P=0.021）。结论：瓣膜性AF患者心房组织存在明显的心房纤维化,与FBN-1基因转录水平上调有关联。     

心房颤动心房纤维化及血小板源生长因子受体β亚型表达的研究

目的 探讨心房颤动(房颤)心房纤维化发生的相关机制.方法 杂种犬15条,随机分3组:正常对照组、单纯房颤组和房颤+Miberfradil组.采用Van Gieson染色、免疫组织化学方法 ,结合高清晰彩色图像分析系统,观察正常对照组、单纯房颤组和房颤+Miberfradil组心房组织总胶原、Ⅲ型胶原及血小板源生长因子受体β亚型(PDGFK-β)的表达.结果 ①单纯房颤组和房颤+Mibeffradil组心房组织总胶原均明显高于正常对照组(P<0.05).房颤+Miberfradil组的总胶原表达低于单纯房颤组,差异有显著性(P<0.05).②单纯房颤组Ⅲ型胶原的表达明显高于正常对照组(P<0.05).房颤+Miberfradil组Ⅲ型胶原的表达低于单纯房颤组,差异有显著性(P<0.05).③单纯房颤组与正常对照组相比PDGFK-β蛋白的表达下降(P<0.05),房颤+Miberfradil组与单纯房颤组相比,PDGFR-β蛋白的表达明显下降(P<0.05).结论 ①持续性房颤心房组织有明显的心房纤维化改变,T型钙通道阻滞剂能够减轻心房纤维化的程度.②持续性心房颤动6个月犬心房组织PDGFK-β蛋白的表达减少.     

MicroRNA-155/FOXO3a 在心脏手术后心房颤动 患者心房组织中的表达及与心房纤维化的关系

目的 探讨microRNA-155/ 叉头框蛋白O 3a（miR-155s/FOXO3a）在心脏手术后心房颤动（以 下简称房颤）患者心房组织中的表达情况,及其与心房纤维化的关系。方法 选取2018 年2 月—2019 年4 月 青海省心脑血管病专科医院收治的风湿性心脏瓣膜病并行心脏手术治疗的患者92 例。根据患者病史、心电 图及24 h 动态心电图检查结果分为房颤组和窦性心律组。于心脏手术中采集患者右心房组织,采用qRTPCR 检测心房组织中miR-155、FOXO3a mRNA 相对表达量;采用免疫印迹法检测心房组织中FOXO3a 和 p-FOXO3a 蛋白相对表达量;采用Masson 染色法及计算机成像分析系统计算心房组织胶原容积分数,评价心 房组织纤维化程度;采用Pearson 法分析心房组织miR-155、p-FOXO3a 蛋白水平与心房纤维化程度的相关 性。结果 房颤组左心房内径、右心房内径高于窦性心律组（P <0.05）。房颤组胶原容积分数较窦性心律组 高（P <0.05）。窦性心律组miR-155 mRNA 相对表达量低于房颤组（P <0.05）,FOXO3a mRNA 相对表达量 高于房颤组（P <0.05）。房颤组p-FOXO3a 蛋白相对表达量低于窦性心律组（P <0.05）。房颤组患者心房组 织miR-155 水平与p-FOXO3a 蛋白水平呈负相关（r =-0.485,P <0.05）,与胶原容积分数呈正相关（r =0.490, P <0.05）,心房组织p-FOXO3a 蛋白水平与胶原容积分数呈负相关（r =-0.471,P <0.05）。结论 心脏手术后房 颤患者心房组织中miR-155高表达,p-FOXO3a蛋白低表达,均与心房纤维化有关,共同影响房颤的发生与维持。     

ACEI对风湿性心脏病心房颤动患者心房ACE、ERK表达和纤维化改变的影响

目的:研究风湿性心脏病(风心病)心房颤动(房颤,AF)患者用血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)时心房组织血管紧张素转换酶(ACE)、细胞外信号调节激酶(ERK)表达与心房纤维化改变.方法:35例风心病二尖瓣狭窄接受外科手术患者,手术时取右心耳处心房组织400mg,通过逆转录-聚合酶链反应技术,以GAPDH为内参照,测量ACE,ERK2 mRNA变化,用Western Blotting观察ACE、磷酸化ERK(pERK)在蛋白水平表达的差异,经Masson染色研究胶原纤维容积分数(CVF)改变情况.结果:与窦性节律患者比较,慢性房颤患者在mRNA水平上ACE、ERK2表达上调,在蛋白水平上ACE、pERK表达上调(P＜0.01或P＜0.05),CVF也显著增加(P＜0.01);与未应用ACEI组比较,用ACEI组ERK2 mRNA、pERK蛋白表达下调(P＜0.05),ACE表达无差异,CVF虽有减少趋势,但无统计学意义(P＞0.05).结论:风心病慢性房颤患者较窦性节律患者ACE、ERK表达增加,纤维化加重;而在应用ACEI的慢性房颤患者,ERK2,pERK表达有显著下降,纤维化减轻,说明在房颤时,局部激活的肾素-血管紧张素系统(RAS)经ERK途径介导了心房纤维化,ACEI在一定程度上减轻心房的纤维化.     

心脏瓣膜病房颤患者左右心房纤维化机制比较

目的 探讨心脏瓣膜病(瓣膜病)慢性房颤患者左右心房肌间质纤维化的分子生物学机制是否存在差异.方法 接受开胸换瓣的手术患者45例,慢性房颤患者27例,窦性心律患者18例,术中分别取左、右心耳组织.采用半定量逆转录-聚合酶链反应(KT-PcR)测定Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶-1、9(MMP1、MMP9))以及基质金属蛋白酶抑制剂-1(TMP1)的mRNA表达水平.结果 ①与窦性心律组相比,慢性房颤组患者左、右心房肌组织中Ⅰ型胶原、MMP1、MMP9的mRNA表达水平均上调(P<0.05),TMP1的表达水平均下调(P<0.01).②窦性心律组患者左右心房肌组之间I型胶原、Ⅲ型胶原、MMP1、MMP9、TMP1的mRNA表达水平差异均无显著性(P>0.05).③慢性房颤组患者MMP1的mRNA在右心房肌组织中表达水平较左心房上调(P<0.05).MMP9的mRNA在左心房肌组织中表达水平较右心房上调(P<0.01).④无论左心房还是右心房.MMP1、MMP9的mRNA表达水平均与Ⅰ型胶原的mRNA表达水平呈正相关,与TMP1的mRNA表达水平呈负相关.结论 心房肌组织中MMP1/TMP1以及MMP9/TMP1的mRNA表达水平失衡引起Ⅰ型胶原转录水平的改变,可能是瓣膜病慢性房颤患者心房肌间质纤维化的分子基础,而左、右心房间质纤维化是被MMP1和MMP9差异化调控的.     

心房颤动患者增殖细胞核抗原基因表达的研究

目的检测风湿性心脏病（风心病）心房颤动（房颤）患者心房组织纤维化程度,Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、增殖细胞核抗原的基因表达和蛋白水平,探讨房颤患者心房组织纤维化的分子机制。方法75例风心病接受换瓣手术者分为三组,其中窦性心律组34例;阵发性房颤组11例;持续性房颤组30例,于术中获取右心耳组织约250mg,采用半定量逆转录-聚合酶链反应（1KT—PCR）技术测定心房组织中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和增殖细胞核抗原（PCNA）的mRNA含量,采用苦味酸天狼猩红染色法对心房组织胶原沉积量及分布情况进行分析,采用免疫组织化学方法对PCNA蛋白水平及分布情况进行分析。结果与窦性心律纽比较,阵发性房颤患者患者心房组织中PCNA基因的mRNA及蛋白表达水平均明显增加p〈0.001;P〈001）;与窦性心律组比较慢性房颤患者心房组织中PCNA基因的mRNA及蛋白表达水平均明显增加∞〈0．001;P〈0．001）;与阵发性屠颤患者比较,慢性颤患者心房组织中PCNA基因的mRNA及蛋白表达水平明显增加（P〈0．01;p〈0．05）。结论心房组织中PCNA基因表达上调可能是导致房颤患者心房纤维化的分子机制之一,可能与房颤的发生和维持有关。     

丹参多酚酸对心房颤动大鼠心肌组织中VCAM-1和ICAM-1水平及ERK1/2-NF-κB信号通路的影响

目的：研究丹参多酚酸对心房颤动（房颤）大鼠心肌组织中血管细胞黏附分子1（VCAM-1）和细胞间黏附分子1（ICAM-1）水平及细胞外信号调节酶1/2-核转录因子-κB（ERK1/2-NF-κB）信号通路的影响,探讨丹参多酚酸防治房颤的可能机制。方法：48只SD大鼠随机分为对照组、房颤组和丹参多酚酸组,每组16只。舌下静脉注射氯化钙-乙酰胆碱混合液建立房颤大鼠模型。丹参多酚酸组大鼠用丹参多酚酸（4 mg·kg^-1·d^-1）灌胃,对照组和房颤组大鼠用等量生理盐水灌胃,每天1次,共4周。采用苏木精-伊红（HE）染色观察大鼠心肌组织病理形态表现,Masson染色观察心肌纤维化情况,免疫组织化学染色检测各组大鼠心肌组织中基质金属蛋白酶2（MMP-2）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）蛋白表达水平,Western blotting法检测各组大鼠心肌组织中VCAM-1、ICAM-1、ERK1/2、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2（p-ERK1/2）、NF-κB和磷酸化核转录因子κB（p-NF-κB）蛋白表达水平。结果：HE染色,对照组大鼠心肌细胞未见明显异常;房颤组大鼠心肌组织间质增多,可见炎性细胞浸润;与房颤组比较,丹参多酚酸组大鼠心肌组织间质稍多,炎性细胞浸润不明显。Masson染色,对照组大鼠心肌间质胶原纤维正常;房颤组大鼠心肌间质胶原纤维明显增多;与房颤组比较,丹参多酚酸组大鼠心肌间质胶原纤维较房颤组明显减少。与对照组比较,房颤组和丹参多酚酸组大鼠心肌组织中MMP-2、MMP-9、VCAM-1、ICAM-1、p-ERK1/2和p-NF-κB蛋白表达水平升高（P<0.05）;与房颤组比较,丹参多酚酸组大鼠心肌组织中MMP-2、MMP-9、VCAM-1、ICAM-1、p-ERK1/2和p-NF-κB蛋白表达水平降低（P<0.05）。房颤组大鼠心肌组织中MMP-2和MMP-9蛋白表达水平与VCAM-1（r=0.435,P<0.01;r=0.512,P<0.01）和ICAM-1（r=0.486,P<0.01;r=0.579,P<0.01）蛋白表达水平呈正相关关系。结论：丹参多酚酸可通过抑制房颤大鼠心房组织ERK1/2-NF-κB信号通路激活,降低VCAM-1和ICAM-1水平,抑制心肌纤维化,从而发挥对房颤的治疗作用。     

转化生长因子β1在风湿性心脏病心房颤动患者心房纤维化中的作用

目的 观察转化生长因子β1(TGF-β1)在风湿性心脏病(风心病)心房颤动(房颤)患者心房组织中的表达情况,探讨其在风心病房颤心房纤维化中的作用及意义.方法 38例风心病接受换瓣手术者于术中获取的右心耳分为3组,其中窦性心律组8例,阵发性房颤组10例,持续性房颤组20例.对各组心房组织,应用羟脯氨酸含量测定法及Masson染色检测胶原含量及分布;应用免疫组化技术检测TGF-β1蛋白表达及分布;应用RT-PCR检测TGF-β1 mRNA水平,应用Western blot检测TGF-β1的蛋白表达.结果 TGF-β1主要表达在心肌细胞的细胞质;与风心病窦性心律组相比,TGF-β1的mRNA和蛋白表达及胶原含量在阵发性房颤组(P<0 05)和持续性房颤组均显著增加(P<0 01);与阵发性房颤组相比,持续性房颤组中TGF-β1 mRNA和蛋白表达及胶原含量继续明显增加(P<0 05).相关分析发现TGF-β1的mRNA、蛋白表达程度与心房胶原含量均呈正相关(r=0.37, P<0 05; r=0.45, P<0 01).结论 风心病患者心房组织中TGF-β1的mRNA和蛋白表达上调可能是心房纤维化发生的分子机制之一,在风心病房颤的发生和维持中起一定的作用.     

TRPM7与风湿性心脏病心房颤动患者心房纤维化的关系

目的:检测风湿性心脏病心房颤动患者心房组织中瞬时受体电位通道亚族M7(TRPM7)的mRNA及蛋白水平,探讨TRPM7与房颤心房纤维化的关系.方法:19例风湿性心脏病患者于换瓣术中获取约200 mg的右心房肌组织,分为窦律(SR)组9例和房颤(AF)组10例.HE病理染色观察心肌细胞横截面积,Masson染色及心肌纤维化标志物观察心房纤维化,Western blotting和实时定量PCR测定心房肌组织中TRPM7的mRNA及蛋白水平.结果:与SR组比较,心肌细胞横截面积、胶原容积分数、心肌纤维化标志物CTGF、Collagen Ⅰ和CollagenⅢ的mRNA水平、TRPM7的mRNA及蛋白水平在AF组显著增加,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:风湿性心脏病房颤患者心肌组织中TRPM7的表达增加,可能通过促心房纤维化,参与房颤的发生与维持.     

耐力训练对兔心房颤动的影响及机制探索

  目的  通过耐力运动训练兔动物模型探索运动相关性心房颤动(AF)的发生机制。  方法  36只新西兰大耳兔随机分为对照组、中强度耐力训练组、高强度耐力训练组（每组12只）:对照组不做任何耐力训练处理;耐力运动训练组每周训练5 d,每天1 h或一次性力竭（不足1 h）,共持续16 周（中强度耐力训练组:坡度0度,速度15 m/min;高强度耐力训练组:坡度0度,速度30 m/min）。训练完成后,各组随机各取6只,共18只兔采用离体心脏Langendorff系统进行灌流,将1 μmol/L乙酰胆碱（Ach）+不同浓度的氯化钡（BaCl₂）溶液（0、0.1、0.5、1、3、6 μmol/L）灌入冠脉内,开始持续给药过程中电生理指标的测定及记录。在左心耳置入的电极分别记录相应的心房有效不应期（AERP）及90%动作电位时程（APD90）、并给予心脏期前程序刺激（S1S2）诱发房颤,记录并计算房颤发生率。灌流完后剪取兔左心房,经实时荧光定量（qRT）-PCR 技术检测心房肌组织内向整流钾电流/通道（IK₁）kir2.1、kir2.2、胶原蛋白Ⅰ和胶原蛋白Ⅲ的mRNA表达量。取各组剩余6只实验兔,共18只取左心房组织标本, 应用Masson 染色进行组织学检查,测定心肌组织胶原容积分数。  结果  长期高强度的运动训练16周后,不同组间,Ach背景相同,BaCl₂剂量相同作用下,随着运动强度的增加,APD90、AERP相应缩短, 房颤发生率增加,BaCl₂ 取0～6 μmol/L时,高强度耐力训练组与其余两组间比较差异均有统计学意义（P<0.001）,而其余两组之间差异无统计学意义。同一组内,Ach背景相同,随着BaCl₂剂量的增加,APD90、AERP相应延长,房颤发生率降低,3组组内比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。随着运动量的增加,兔左心房kir2.1、kir2.2、胶原蛋白Ⅰ和胶原蛋白Ⅲ的 mRNA表达量均增加,胶原容积分数增加,高强度耐力训练组>中强度耐力训练组>对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。  结论  长期的高强度耐力运动训练可通过增加实验兔心房组织纤维化程度、心肌细胞IK₁数量和（或）功能,改变心电传导,促使实验兔房颤发生和维持。     

Expression of Extracellular Signal-regulated Kinase and Angiotensin-convetting Enzyme in Human Atria during Atrial Fibrillation

Severalstudieshaveshownthatatrialfibrillation(AF)isalwayscompaniedwithchangesintheelec trophysiologicpropertiesofatrialmyocytesandalter nationsinthestructureoftheatrialtissue[1— 4 ] .Atri alfibrosisisoneoftheimportantalternationsinthestructureoftheatrial…     

双氢青蒿素对甲型流感病毒H1N1诱导人支气管上皮细胞TNF-α和IL-6表达的影响及机制研究

  目的  探讨双氢青蒿素（dihydroartemisinin,DHA）对甲型流感病毒（influenza A virus,IAV）A/PR/8/34（H1N1）诱导人支气管上皮细胞（BEAS-2B）促炎症因子和细胞外信号调节蛋白激酶（extracellular signal regulated kinase,ERK）信号通路蛋白表达的影响。  方法  采用不同浓度的DHA（即0、12.5、25、50和100 μmol/L）作用BEAS-2B细胞24 h ,CCK8法检测DHA对BEAS-2B细胞活性的影响。IAV吸附BEAS-2B细胞1 h ,分别采用不同浓度的DHA（低、中、高浓度DHA ,即12.5、25和50 μmol/L）作用24 h,同时设置正常对照组和IAV组。采用实时荧光定量PCR法（real time quantitative PCR, RT-qPCR）和酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）分别检测肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）和白细胞介素-6（interleukin 6,IL-6）的mRNA和蛋白表达水平,蛋白质印迹法（Western blot）检测磷酸化ERK（phospho-ERK, p-ERK）蛋白表达水平。采用特异性ERK激动剂（ERK agonist,20 ng/mL）作用BEAS-2B细胞（分组为正常对照、IAV、DHA、DHA+IAV、ERK agonist、DHA+IAV+ERK agonist组）24 h,观察对DHA抑制IAV诱导BEAS-2B细胞TNF-α、IL-6和p-ERK表达的影响。  结果  DHA浓度在12.5、25、50 μmol/L时,BEAS-2B细胞存活率与正常对照组比较差异无统计学意义;与正常对照组比较,IAV组细胞TNF-α、IL-6 mRNA和蛋白及p-ERK蛋白表达水平增高 (P<0.05),与IAV组比较,IAV+ DHA低、中、高浓度组细胞TNF-α、IL-6 mRNA和TNF-α、IL-6、p-ERK蛋白表达水平呈剂量依赖性的下降(P<0.05);而ERK激动剂减弱了DHA抑制IAV诱导BEAS-2B细胞ERK信号通路蛋白p-ERK表达和促炎症因子TNF-α、IL-6的分泌。  结论  DHA可通过ERK信号通路抑制IAV诱导BEAS-2B细胞TNF-α和IL-6的表达。     

风湿性心瓣膜病心房颤动患者心房组织纤维化重构与TGF-β1表达的相关性研究

目的 探讨风湿性心脏病(风心病)心房颤动(房颤)患者心房组织纤维化重构及其可能机制.方法 收集四川省宜宾市第二人民医院2013年10月至2015年10月风湿性心瓣膜病行二尖瓣置换术或先天性心脏病开胸修补术患者的临床资料和右心房组织标本,分为窦性心律组(RHD-SR组)、阵发性房颤组(RHD-pAF组)、持续性房颤组(RHD-cAF组),以行先天性心脏病开胸修补术且为窦性心律组(CHD-SR组).普通光镜下观察各组患者心房组织结构,苦味酸天狼猩红染色偏振光显微镜分析各组Ⅰ、Ⅲ型胶原容积分数(CVF)及Ⅰ/Ⅲ型CVF比值,Western blot及逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测各组TGF-β1的表达.结果 RHD-cAF组患者左心房内径(LAd)明显大于RHD-SR组(P＜0.05),其余临床资料各组比较差异无统计学意义(P＞0.05).苦味酸天狼猩红染色提示胶原分布于心肌间质中,Ⅰ、Ⅲ型CVF及其比值在CHD-SR组、RHD-SR组、RHD-pAF组和RHD-cAF组逐渐升高,差异有统计学意义(P＜0.05).TGF-β1蛋白和mRNA的表达在CHD-SR组、RHD-SR组、RHD-pAF组和RHD-cAF逐渐增加.结论 心房组织纤维化重构是风湿性心瓣膜病患者房颤的重要机制,TGF-β1高表达可能参与心组织房纤维化重构.