机体保护多肽对大鼠重复给药毒性研究

目的检测机体保护多肽（HuBPP）对大鼠产生的毒性反应,为临床提供无毒性反应剂量,从而为临床更安全地用药以及不良反应的监控提供参考信息。方法80只SD大鼠单次静脉和肌内注射给药以确认给药剂量。选择0.2 mg/kg、1 mg/kg和4 mg/kg为本次实验的低、中、高剂量,并设置溶媒对照组,每组30只大鼠,雌雄各半。连续肌内注射给药一个月,实验期间观察大鼠质量、摄食量等指标,给药末期和恢复期采血检测各临床指标,病理学检测各主要脏器毒性变化。结果急性毒性实验表明,20 mg/kg给药剂量下,实验组与对照组相比各观察指标未发现明显改变。长期毒性实验结果表明,与对照组相比,各剂量组大鼠质量、摄食量、主要脏器指标均未发现明显毒性反应（P>0.05）。长期毒性实验给药结束后,高剂量组雌鼠MCHC高于溶媒对照组,MPV低于溶媒对照组（P < 0.01和P < 0.05）;中剂量对照组雌鼠TG高于溶媒对照组,Na+浓度低于溶媒对照组（P < 0.05）;雄鼠高、中剂量组活化部分凝血活酶时间显著低于溶媒对照组（P < 0.05）,高剂量组Cl-浓度显著高于溶媒对照组（P < 0.05）。恢复期结束后高剂量组雄鼠红细胞体积分布宽度值低于溶媒对照组（P < 0.05）,低剂量组雌鼠丙氨酸氨基转移酶、血糖、三酰甘油显著高于溶媒组（P < 0.05~P < 0.01）,但均处于文献报道正常变化范围内;其他指标差异无统计学意义。结论在本实验条件下,HuBPP对大鼠的相对安全剂量为4 mg/kg及其以下剂量。     

全三七片单次和重复给药毒性评价研究

目的 在GLP条件下开展单次给药和重复给药毒性实验，观察全三七片的毒性作用和可逆性，推测毒性靶器官或靶组织，预测临床试验的安全剂量范围，为全三七片的安全性提供试验依据。方法 采用SD大鼠为实验系统，通过观察一般临床体征，称量体质量，评价摄食、饮量，检测血液学、血凝、血清生化学指标和生物标志物，称量脏器重量，计算脏器系数及对主要脏器组织进行病理学检查等方法，评价全三七片24 h内大剂量给药和连续13周持续给药对动物可能产生的毒性及其严重程度。结果 (1)全三七片24 h内2次灌胃的最大给药量为20.0 g·kg-1，给药后动物体质量正常增长，观察期内未见动物死亡和出现异常体征。(2)分别以1.5、2.6、6.8 g·kg-1(简称：低、中、高剂量组)重复灌胃给予全三七片13周，可使SD大鼠出现稀便和/或软便及周平均摄食量和饮水量增加，中、高剂量组大鼠体质量增长略缓慢，高剂量组雌鼠血小板膜蛋白-140(GMP140)和雄鼠的红细胞(RBC)、网织红细胞(Retic)计数及百分比、甘油三酯(TG)轻微降低，高剂量组雌鼠肝系数(脏体比)和中、高剂量组雄鼠肝、肾系数(脏体比)增大，上述指标停药后...     

人工饲养恒河猴、食蟹猴的繁殖性能初报

目的 探索北京地区人工饲养恒河猴与食蟹猴的繁殖性能,为温带地区猕猴的人工饲养和繁殖方式提供借鉴.方法 对军事医学科学院实验动物中心饲养的317只恒河猴繁殖群(30只雄猴,287只雌猴)和78只食蟹猴繁殖群(8只雄猴,70只雌猴)近两年的繁殖性状进行观察和统计分析.结果 恒河猴母猴妊娠率、繁殖率和成活率分别为60.73%、54.45%和96.89%.食蟹猴母猴妊娠率、繁殖率和成活率分别为79.86%、56.12%和75.00%.结论 食蟹猴和恒河猴可以成功的在温带地区饲养和繁殖,但人工饲养食蟹猴的妊娠率与产仔率较恒河猴高,而仔猴成活率则低于恒河猴.     

局部脑缺血食蟹猴动物模型的建立

目的:构建局部脑缺血食蟹猴动物模型,从而为局部脑缺血的研究提供必要的条件.方法:选择10只健康的食蟹猴,采用血管介入法从股动脉插管,将微导管超选至大脑中动脉(middle cerebral artery,MCA)M1分支,注入自体血栓堵塞其血管、阻断其血流.结果:栓塞后,通过数字影像血管造影系统(DSA)照影MCA M1分支血管显影不良;栓塞1 h后CT灌注成像可见急性局部脑缺血病灶;48 h后进行CT平扫可见低密度陈旧性局部脑缺血病灶.对2例尸体进行解剖,取出大脑组织TTC染色呈阳性;其余动物清醒后均表现出不同程度的脑缺血症状与体征.结论:用超选MCA自体白色血栓可建立稳定的猴局部脑缺血模型,因该动物模型是目前最接近临床病例的模型,对脑卒中的发生发展机制的研究、诊断及治疗,特别是溶栓治疗有着切实的临床前期应用价值.     

食蟹猴自发性高血压及患病危险性的相关性研究

目的建立各年龄段食蟹猴血压参考值。方法采用美国Beckman-CX4全自动生化分析仪和北京松下电工有限公司的腕式电子血压计,检测521只食蟹猴血压及血脂指标,对测定结果进行统计检验。结果经统计分析,不同年龄段的食蟹猴血压值差异显著,老年组食蟹猴血压值高于其它年龄组;老年组食蟹猴高血压的发病率高于其他年龄组,高血压组食蟹猴身体质量指数(body mass index,BMI)高于同年龄组血压正常的食蟹猴;老年组高脂血症食蟹猴高血压发病率高于其他年龄组。Logistic回归分析显示,年龄、BMI及高脂血症在预测高血压组的患病危险性的预测能力分别为血压正常组的1.435、1.218、2.337倍。结论初步建立不同年龄段食蟹猴的血压参考值。年龄、BMI、高脂血症为食蟹猴自发性高血压的危险因素,基础血压值测量为食蟹猴自发性高血压模型筛选及其相关研究提供了依据。     

四种麻醉药物对食蟹猴麻醉效果分析和选择应用

目的分析比对速眠新、氯胺酮、异氟烷和利多卡因4种不同麻醉药对食蟹猴的麻醉效果。方法总结实际工作中分别使用四种不同麻醉药物对食蟹猴作用的麻醉特点。结果速眠新、氯胺酮、异氟烷均能获得较好的麻醉效果,能满足不同手术、采样需要;局麻药利多卡因对食蟹猴麻醉的实际应用不理想。结论食蟹猴的手术及其他侵犯性操作等都应该考虑生物安全和动物福利要求,实行麻醉,但应根据食蟹猴实验内容要求和不同麻醉药特点选择合适的麻醉方法,确保人员和动物安全,实验结果不受影响。     

精神分裂症患者脑脊液对食蟹猴行为的影响

目的 研究精神分裂症患者脑脊液对食蟹猴行为的影响.方法 根据大脑CT检查结果,将入组精神分裂症患者分为脑结构异常组和脑结构正常组,留取脑脊液样本3ml;将食蟹猴随机排序后经腰椎穿刺在其腩脊髓腔内注入两组精神分裂症患者、健康志愿者脑脊液标本或生理盐水,形成实验组Ⅰ(脑结构异常组脑脊液处理组)、实验组Ⅱ(脑结构正常组脑脊液处理组)、对照组(健康志愿者脑脊液处理组)和生理盐水组,其后行为观察13周,利用自编食蟹猴行为评估量表进行评定,取基线,处理后第2,4,6,8,10,12周末评估数据进行分析.结果 (1)处理后实验组Ⅰ[(31.00±3.83)分]、实验组Ⅱ[(28.20±4.92)分]的行为量表总分较处理前[(21.67±1.94)分,(22.33±0.47)分]增高,对照组处理后[(17.00±4.24)分]较处理前[(22.17±0.24)分]明显下降,生理盐水组在处理前后无明显变化;实验组Ⅰ、Ⅱ在处理后6个观测点的行为量表总分均高于对照组和生理盐水组;处理前后量表总分的方差分析表明,处理和时间的交互效应具有统计学意义(F=21.67,P<0.01);(2)处理后各观测点8个行为指标的秩和检验表明,实验组Ⅰ、Ⅱ的行为改变以躁动(P=0.026)、攻击性(P=0.046)、一般活动(P=0.039)三个因子分增高为主,并随时间而明显.结论 将精神分裂症患者脑脊液注射入食蟹猴脑脊髓腔可使食蟹猴出现活动增加、攻击性增强、躁动等行为异常.     

食蟹猴在登革热及其疫苗研究中的应用进展

登革热是由登革病毒引起、伊蚊传播的一种严重传染性疾病,广泛流行于全球热带和亚热带地区,人感染后会突发高热、严重头痛、肌肉和关节痛以及出疹,有时伴发登革出血热等致命并发症.食蟹猴是登革热病毒的自然宿主,且又是生物医学研究最重要的实验动物之一,因此,探索食蟹猴在登革热病研究中的应用可以很好地促进对登革热发病机制的认识及登革热疫苗研发与治疗方法的研究.本文简要介绍食蟹猴在登革热研究中的应用和最新研究进展,为登革热动物模型的研究提供更多参考.     

小鼠抗食蟹猴IgG单克隆抗体的制备

目的 制备抗食蟹猴、恒河猴等非人灵长类实验动物免疫球蛋白二级抗体,开展对其传染病血清学快速诊断方法的建立.方法 采用饱和硫酸铵盐析、Agarose-Protein G亲和层析技术,从食蟹猴血清中提纯IgG.经SDS-PAGE电泳鉴定,采用常规法免疫C57BL/6小鼠,三次免疫后取脾细胞与Sp2/0-Agl4骨髓瘤细胞通过PEG4000融合制备杂交瘤细胞,利用间接ELISA、Western blot等方法进行筛选、鉴定.结果 得到5株阳性杂交瘤,分别命名为2B6、2B7、2D9、3B2、5E4,并且5株杂交瘤分泌的抗体均与恒河猴的IgG或血清发生交叉反应,而与其他物种如东北虎、犬等动物的IgG或血清无交叉反应.结论 5株杂交瘤产生的单克隆抗体(McAb)具有较好免疫活性,且能长期、稳定地分泌抗体.此项研究工作为后续研究食蟹猴、恒河猴传染病血清学诊断方法奠定基础.     

北京地区食蟹猴的室内试验性繁殖初报

目的 食蟹猴在北京地区的适应性驯养与繁殖.方法 从2004年底开始,建立了一个20只雄猴,140只雌猴的食蟹猴室内生产繁殖种群.每个室内饲养单元内包括两只雄猴,14只雌猴,采取自由交配的方式进行繁殖.同时对室内饲养食蟹猴繁殖的季节性、妊娠期、月经周期、仔猴出生体重等进行了观察、记录和统计.结果 从2005年4月到2008年3月的3年时间,母猴怀孕305例,流产59例,生产仔猴246只.平均妊娠率、产仔率分别为74.0%和59.7%.室内饲养食蟹猴的繁殖没有明显的季节性,平均月经周期为(28.5±3.3)d(n=30).平均妊娠期为(167±12)d(n=30),仔猴的平均出生体重为(350±120)g(n=30).结论 食蟹猴能够在温带地区的室内进行成功的驯养和繁殖.     

低剂量氯胺酮对食蟹猴行为、海马和前额叶皮质超微结构的影响

目的    研究新型毒品氯胺酮长期低剂量应用对食蟹猴行为学、海马和前额皮质超微结构的影响。方法    12只食蟹猴随机分为氯胺酮组（8只）和对照组（4只）。氯胺酮组每日静脉注射氯胺酮（1mg/kg）,对照组每日静脉注射生理盐水（1mL/kg）,定期对12只猴进行行为学分析,6个月后处死取材,透射电镜下观察海马及前额皮质超微结构的变化。结果    与对照组相比,氯胺酮组运动行为无统计学意义（P﹥0.05）;海马区出现神经细胞坏死,胶质细胞凋亡及大量脂褐素堆积;前额皮质区呈现大量自噬体,粗面内质网数量明显减少,神经元坏死和胶质细胞凋亡,而对照组两区域电镜超微结构正常。结论    氯胺酮低剂量长期应用可导致海马及前额皮质超微结构的变化,主要表现为神经细胞的变性、坏死和凋亡,这一变化较行为学变化更为敏感。     

PCNA 、CDK4及 p16INK4a在外阴上皮内非瘤样病变中的表达及意义

目的：探讨增殖细胞核抗原（PCNA）、细胞周期依赖性激酶（CDK4）及其抑制蛋白p16INK4a在外阴上皮内非瘤样病变（NNEDV）发病中的作用及关系。方法收集 NNEDV 患者外阴病变皮肤（病变组）及病变旁皮肤（病变旁组）标本各52例;同时收集行会阴修补术患者的外阴正常皮肤标本25例（对照组）。免疫组织化学法检测 PCNA 、CDK4及 p16INK4a 在各组中的表达。结果 PCNA 的表达,病变组显著高于病变旁组和对照组（P ＜0．05）,病变组3种组织学类型间表达差异无统计学意义（P ＞0．05）;病变旁组略高于对照组（P＞0．05）。 CDK4的表达,病变组和病变旁组均显著高于对照组（P＜0．05）,病变组3种组织学类型间表达差异无统计学意义（P＞0．05）;病变组略高于病变旁组（P＞0．05）。 p16INK 4a 的表达,病变组显著低于病变旁组和对照组（P＜0．05）,病变组3种组织学类型间表达差异无统计学意义（P＞0．05）;病变旁组略低于对照组（P＞0．05）。 PCNA 和 CDK4的表达在病变组3种组织学类型中均呈正相关（P＜0．05）,在病变旁组和对照组中均无相关性（P＞0．05）;PCNA 和 p16INK4a 的表达在病变组3种组织学类型中均呈负相关（P＜0．05）,在病变旁组及对照组中均无相关性（P＞0．05）;CDK4和 p16INK4a的表达在各组中均呈不相关（P＞0．05）。结论 PCNA 、CDK4及 P16INK4a的表达与 NNEDV 细胞增殖和细胞增殖周期的调控相关,很可能成为治疗 NNEDV 的分子靶点。     

Survivin、P16INK4a在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的:探讨新的凋亡抑制基因survivin在非小细胞肺癌(Non-small cell lung carcinoma,NSCLC)中的表达,及其与抑癌基因P16INK4a表达的相关性.方法:用免疫组化的方法检测survivin和P16INK4a在56例NSCLC组织中的表达,同时抽取12例非肺癌的肺部良生病变手术标本作为对照组.结果:NSCLC组织中survivin阳性率64.3%、明显高于肺良性病变组织(8.3%)(P＜0.01),P16INK4a在NSCLC组织和肺良性病变组织中的失表达率分别为51.8%、16.7%(P＜0.01).NSCLC组织中survivin阳性率和P16INK4a失表达率均与NSCLC的病理分级、临床分期和淋巴结转移密切相关(P＜0.01).Survivin在NSCLC组织中P16INK4a表达阳性和阴性病例,阳性率分别为40.8%(11/27)和86.2%(25/29)(P＜0.01),且表达呈负相关(r=-0.459,P＜0.01).结论:在NSCLC中survivin的过表达和P16INK4a的失表达提示二者可能通过抑制细胞凋亡和促进细胞增殖在非小细胞肺癌的发生发展中起协同作用,同时检测survivin、P16INK4a的表达状态对非小细胞肺癌的诊断和预后有一定的参考价值.     

ELISA检测宫颈液基细胞p16~(INK4a)、p21及p27表达的研究

目的探讨不同级别宫颈病变液基细胞学标本中p16INK4a、p21和p27的表达区别及变化趋势。方法 212例高危HPV感染患者,因宫颈细胞学检测结果异常行阴道镜活检病理学明确病变级别。阴道镜活检前取宫颈液基细胞标本,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测该液基细胞标本中p16INK4a、p21和p27蛋白表达数量,对比研究不同病变级别上述3种蛋白值的不同。结果 p16INK4a在正常宫颈上皮中呈现低表达,随宫颈病变级别升高,p16INK4a逐渐升高,差异显著(P<0.01);而p21及p27下调不具有显著性差异(P>0.05),只有宫颈癌中,p21及p27下调显著(P<0.05)。p16INK4a达到12 ng/L以上,宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅱ以上及CINⅢ以上病变诊断敏感度分别为89%和88%;当p16INK4a达到24 ng/L以上,CINⅡ以上及CINⅢ以上病变诊断灵敏度分别为82%和91%。结论 ELISA方法检测宫颈液基细胞p16INK4a对CINⅡ及以上宫颈病变诊断具有意义。p16INK4a上调与宫颈癌发生及演进密切相关。p21、p27下调对判断CIN进展不具有意义。