miR-145对人乳腺癌MCF-7/ADR细胞耐药逆转的作用机制研究

目的:探讨miR-145对人乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7/ADR阿霉素耐药的影响及可能的作用机制。方法:采用实时定量PCR方法检测miR-145在乳腺癌细胞株MCF-7及MCF-7/ADR中的表达差异;脂质体转染法将构建好的miR-145 mimics,miR-145inhibitor成功转染进MCF-7/ADR细胞中,MTT法检测转染后MCF-7/ADR细胞对阿霉素的敏感性,流式细胞仪检测耐药细胞对阿霉素诱导凋亡的影响,Western blot检测转染前后抗凋亡蛋白Bcl-2、多药耐药基因MDR1表达蛋白P-gp的表达差异。结果:miR-145在人乳腺癌细胞株MCF-7/ADR中表达下降;上调miR-145可以增强MCF-7/ADR细胞对阿霉素的敏感性,显著抑制MCF-7/ADR细胞增殖,并促进阿霉素诱导的细胞凋亡,同时显著抑制了耐药细胞中Bcl-2和P-gp的表达。结论:miR-145通过抑制Bcl-2和P-gp蛋白的表达来增加MCF-7/ADR细胞对阿霉素的敏感性和凋亡。     

miR-144通过影响TLR/MyD88通路抑制肝癌SMMC-7721细胞侵袭

目的 探讨miR-144基因过表达对肝癌SMMC-7721细胞侵袭及Toll样受体（TLR）/髓样分化因子88（MyD88）免疫通路的影响。方法 培养人正常肝细胞HL-7702,肝癌细胞系SMMC-7721,采用荧光实时定量PCR法检测两组细胞miR-144基因表达差异,将SMMC-7721细胞分为空白组、miR-144 NC组、miR-144 mimics组,倒置荧光显微镜检测转染效率,qRT-PCR法检测转染后各组miR-144基因表达情况,通过细胞计数试剂盒（CCK8）法各组SMMC-7721细胞存活情况,通过Transwell法检测各组SMMC-7721细胞侵袭情况,应用免疫印迹法检测各组侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）以及TLR/MyD88通路相关蛋白表达情况,观察添加40 μmol/L MyD88抑制剂TJ-M2010-2组对SMMC-7721细胞TLR/MyD88通路相关蛋白表达情况。结果 与正常组相比,SMMC-7721组miR-144基因相对表达量显著降低（P<0.05）;与空白组、miR-144 NC组相比,miR-144 mimics组miR-144基因表达显著升高（P<0.05）;CCK-8实验显示,与对照组、miR-144 NC组相比,miR-144 mimics组转染48、72、96 h后细胞存活率显著降低（P<0.05）;与空白组、miR-144 NC组相比,miR-144 mimics组侵袭细胞数、MMP-2、MMP-9蛋白表达显著降低（P<0.05）;与空白组、miR-144 NC组相比,miR-144 mimics组、TJ-M2010-2组Toll样受体4（TLR4）、MyD88、磷酸化核因子-κB（p-NF-κB）/核因子-κB（NF-κB）蛋白表达显著降低（P<0.05）,miR-144 mimics组与TJ-M2010-2组TLR4、MyD88、p-NF-κB/NF-κB蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）。结论 miR-144过表达可能通过抑制TLR/MyD88通路转导降低SMMC-7721细胞存活、抑制SMMC-7721细胞侵袭。     

SMMC-7721细胞诱导耐药培养中电镜形态的改变

目的研究SMMC-7721细胞诱导耐药培养中电镜形态的改变.方法用流式细胞仪检测SMMC-7721及SMMC-7721/ADM 细胞P-糖蛋白表达;用电镜观察SMMC-7721及SMMC-7721/ADM细胞的超微结构. 结果随着培养液中阿霉素浓度的递增,P-糖蛋白表达有逐步增加的趋势,培养液中阿霉素达一定浓度时,与SMMC-7721细胞相比SMMC-7721/ADM细胞结构发生改变:多核巨细胞增多,内质网增多.结论随着P-糖蛋白表达量的增加 , 细胞内质网明显增加,说明SMMC-7721细胞形成耐药细胞株SMMC-7721/ADM后结构形态发生改变.     

survivin反义寡核苷酸对肝癌耐药细胞的作用及与化疗的关系

目的研究survivin反义寡核苷酸对人肝癌耐药细胞株的增殖和凋亡情况,以及对阿霉素化疗敏感性的影响。方法将人肝癌耐药细胞系SMMC-7721/ADM分为脂质体转染组、阿霉素组、正义寡核苷酸转染组、正义寡核苷酸转染 阿霉素组、反义寡核苷酸转染组、反义寡核苷酸转染 阿霉素组共6组。MTT法检测细胞相对存活率,流式细胞仪分析细胞凋亡率变化,RT-PCR和Westernblot印迹法检测细胞survivinmRNA和蛋白表达。结果survivin-ASODN作用后的人肝癌耐药细胞SMMC-7721/ADM的细胞凋亡率明显增高(P<0.05)。survivinmRNA和survivin蛋白表达:脂质体转染对照组、阿霉素组、正义寡核苷酸转染对照组、正义寡核苷酸转染对照 阿霉素组之间survivin蛋白表达无明显差异(P>0.05)。400ng/mlsurvivingASODN组和400ng/mlASODN 阿霉素组survivinmRNA较其他4组显著降低(P<0.05),但其两组之间表达无明显差异(P>0.05)。结论survivin反义寡核苷酸能降低肝癌耐药细胞survivin表达,增强人肝癌耐药细胞对阿霉素的化疗敏感性。     

SRC激酶在人乳腺癌细胞对阿霉素耐药及侵袭转移中的作用

目的 探讨SRC激酶抑制剂PP2在乳腺癌细胞对阿霉素（adriamycin, ADM）耐药及侵袭转移过程中的作用。 方法 采用MTT法检测不同浓度ADM对乳腺癌细胞敏感株（MCF-7）和耐药株(MCF-7/ADM)细胞的增殖抑制作用,计算半数抑制浓度（50% inhibitory concentration, IC₅₀）及耐药指数(resistance index, RI);Western blot检测MCF-7和MCF-7/ADM细胞内多药耐药蛋白MDR1、SRC及缝隙连接蛋白43（Cx43）蛋白表达;Transwell和细胞划痕实验检测MCF-7、MCF-7/ADM细胞、不同浓度PP2（1、2、4 μmol/L）预处理MCF-7/ADM 24 h细胞的侵袭和迁移能力;采用标准集落形成分析法观察4 μmol/L PP2预处理对ADM细胞毒性的影响。 结果 ADM对MCF-7的增殖抑制作用大于MCF-7/ADM细胞（P<0.01）;ADM对MCF-7细胞IC₅₀为24.55 μmol/L, 对MCF-7/ADM细胞IC₅₀为770.57 μmol/L,RI为31;与MCF-7细胞比较,MCF-7/ADM细胞MDR1、SRC蛋白表达增高（P<0.01）,且MCF-7/ADM细胞具有更强的侵袭迁移能力（P<0.01）,采用SRC抑制剂后,MCF-7/ADM细胞侵袭转移能力被抑制（P<0.01）,细胞集落形成率下降,即对ADM的敏感性提高（P<0.01）。 结论 人乳腺癌细胞MCF-7在对ADM耐药的过程中伴随着SRC蛋白表达增多, SRC抑制剂可以降低细胞耐药性以及侵袭转移能力。     

人肝癌多药耐药细胞系BEL-7402/ADM的建立及耐药相关基因表达检测

目的：建立人肝癌多药耐药细胞系,研究其耐药特性及机制。 方法：应用人肝癌细胞株BEL-7402,采用阿霉素（ADM）大剂量间歇诱导法,建立多药耐药细胞系BEL-7402/ADM。相差显微镜观察细胞,用MTT法检测该耐药细胞株对多种化疗药物的多药耐药性,采用流式细胞术检测该耐药细胞表面多药耐药基因(MDR)的表达产物P糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)及谷胱甘肽硫转移系统(GSH／GST)的表达情况,应用RT-PCR检测MDR、MRP基因表达水平。 结果：BEL-7402/ADM对多种抗癌药物产生耐药,对ADM的耐药性(半数抑制浓度,IC₅₀)提高了17.31倍。流式细胞仪分析发现（65.5±5.8）%的BEL-7402/ADM细胞表面P-gp 表达阳性,而对照细胞BEL-7402表达仅为（31.3±4.3）%;（32.4±3.5）%的BEL-7402/ADM细胞表面MRP表达阳性,而对照细胞BEL-7402表达仅为（23.4±3.1）%,二者差异有显著性(P<0.01);BEL-7402/ADM和BEL-7402细胞的GSH／GST表达无明显变化（P>0.05）。RT-PCR检测发现BEL-7402/ADM中MDR及MRP mRNA高表达。 结论：BEL-7402/ADM具有明确的多药耐药性,其多药耐药相关基因MDR及MRP mRNA表达升高。     

miR-143-5p靶向AGR2在肝癌细胞增殖和凋亡中的作用

目的 探讨miR-143-5p在肝癌细胞增殖和凋亡中的作用及其机制。方法 qRT-PCR检测正常肝细胞HL-7702和肝癌细胞(BEL-7402、HepG2、SMMC-7721、MHCC-97H和Hep3B)中的miR-143-5p表达。选取肝癌细胞BEL-7402和HepG2,将每株肝癌细胞分别分为：mimics-NC组(转染阴性对照mimics-NC)和miR-143-5p mimics组(转染miR-143-5p mimics)。采用MTT法、克隆形成实验、流式细胞术和Western blot分别检测mimics-NC组和miR-143-5p mimics组细胞增殖能力、克隆形成能力、凋亡率和凋亡相关基因(Bax、Caspase-3和Bcl-2)的表达。通过靶基因预测网站RNA22预测miR-143-5p的靶基因。双荧光素酶报告基因验证miR-143-5p和靶基因前梯度蛋白2(AGR2)关系。qRT-PCR和Western blot检测mimics-NC组和miR-143-5p mimics组肝癌细胞BEL-7402和HepG2中AGR2的表达水平。再将肝癌细胞BEL-7402和...     

miR-196a在肝癌细胞中的表达及其促增殖作用

目的: 探讨miR-196a在肝癌组织的表达水平和对肝癌Hep3B细胞增殖的影响,阐明其促进肝癌细胞增殖的可能机制。方法: 收集20例肝癌组织及对应癌旁组织,培养人正常肝细胞株L02及肝癌细胞株SMMC-7721、HepG2和Hep3B,采用qRT-PCR法检测miR-196a mRNA在肝癌组织和对应癌旁组织及肝癌细胞株中的表达水平。取处于对数生长期人肝癌Hep3B细胞随机分为对照组、miR-196a mimics转染组和miR-196a inhibitors转染组,MTT法检测各组Hep3B细胞增殖活力,qRT-PCR法检测各组Hep3B细胞miR-196a的表达,流式细胞术检测各组Hep3B细胞周期变化,qRT-PCR和Western blotting法检测各组Hep3B细胞miR-196a潜在靶点叉头转录因子(FOXO1)的表达水平。结果: 肝癌组织中miR-196a mRNA表达水平明显高于相应癌旁组织(P<0.05);miR-196a mRNA在人肝癌SMMC-7721、HepG2和Hep3B细胞中的表达水平明显高于人正常肝L02细胞(P<0.05)。与对照组比较,miR-196a mimics转染组Hep3B细胞中miR-196a mRNA表达水平明显升高(P<0.05),而miR-196a inhibitors转染组Hep3B细胞中miR-196a mRNA的表达水平明显降低(P<0.05)。与对照组比较,miR-196a mimics转染组Hep3B细胞增殖率明显升高(P<0.05), miR-196a inhibitors转染组Hep3B细胞增殖率明显降低(P<0.05),且呈时间依赖性。与对照组比较,转染24 h时,miR-196a inhibitors转染组Hep3B细胞G₀/G₁期细胞百分率明显升高(P<0.05),S期细胞百分率明显降低(P<0.05)。与对照组比较, miR-196a mimics转染组FOXO1 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论: miR-196a可能通过FOXO1促进肝癌细胞的增殖,提示miR-196a可能成为肝癌诊断和治疗的新靶点。     

结直肠癌中microRNA-451部分逆转MDR1/P-gp途径介导的多药耐药

目的 研究microRNA-451在结直肠癌组织与细胞中的表达及其在MDR1/P-gp途径介导的多药耐药中的作用.方法 收集68例新鲜结直肠癌及癌旁组织,RT-qPCR检测其miR-451表达情况,Western blot检测P-gp蛋白是否表达,并分析其关系;RT-qPCR检测结直肠癌耐奥沙利铂细胞HCT116/L、耐阿霉素细胞LoVo/adr及对应亲本细胞中miR-451的表达;利用脂质体将miR-451 mimics(模拟物)、NC RNAs转染2组耐药细胞,RT-qPCR和Western blot分别检测转染后其MDR1 mRNA和P-gp的表达;MTT检测转染细胞在不同浓度奥沙利铂、阿霉素下的增殖并计算其半数抑制浓度(IC50);流式细胞术进一步比较NC转染组和mimics转染组耐药细胞在同一浓度奥沙利铂、阿霉素下凋亡率.结果 相对于癌旁组织,miR-451在结直肠癌组织中低表达,其表达下调与P-gp阳性表达存在相关性(r=-0.404,P=0.002);与亲本细胞相比,miR-451在2组耐药细胞中表达明显降低(P＜0.01);mimics转染组细胞MDR1 mRNA、P-gp相对表达量明显下降,IC50及凋亡率与NC组均有显著差异(P＜0.05).结论 miR-451在结直肠癌中通过MDR1/P-gp途径参与多药耐药,耐药细胞转染miR-451mimics后,可部分逆转耐药.     

肝细胞癌中microRNA-1469表达及其对肝癌细胞生物学行为的影响

目的探讨microRNA-1469(miR-1469)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其对肝癌细胞生物学行为的影响。方法选取2010年1月至2012年12月于西安交通大学第一附属医院手术切除的HCC组织和对应的癌旁组织(距肿瘤边缘> 2 cm)标本各76例,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测HCC组织及癌旁组织中miR-1469的表达水平,分析miR-1469表达与HCC临床病理特征的关系,Kaplan-Meier生存曲线分析miR-1469表达与HCC患者3 a总体生存率的关系。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测HCC细胞系Hep G2、Hep3B、SMMC-7721、Huh7、Bel-7402及正常肝细胞系LO2中miR-1469的表达水平;培养Hep3B和SMMC-7721细胞,当细胞融合度达到70%时,分别应用miR-1469mimics和相应的阴性对照脂质体转染Hep3B细胞,应用miR-1469 inhibitors和相应的阴性对照脂质体转染SMMC-7721细胞。转染48 h后,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组细胞中miR-1469的表达水平,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和平板克隆形成实验观察miR-1469对Hep3B和SMMC-7721细胞增殖及克隆形成能力的影响,流式细胞术检测miR-1469对Hep3B和SMMC-7721细胞周期的影响,Transwell实验观察miR-1469对Hep3B和SMMC-7721细胞侵袭及迁移能力的影响,Western blot法检测Hep3B和SMMC-7721细胞中NDRG1蛋白表达。结果 miR-1469在HCC组织和癌旁组织中的相对表达量分别为0. 71±0. 03、5. 49±0. 04,HCC组织中miR-1469相对表达量显著低于癌旁组织(P <0. 05)。miR-1469表达与肿瘤直径、肿瘤数目、TNM分期、组织分化程度及微血管侵犯相关(P <0. 05),而与患者的年龄、性别、血清甲胎蛋白水平、静脉侵犯、Edmondson病理分级、肿瘤部位无相关性(P> 0. 05)。KaplanMeier生存分析显示,miR-1469高表达HCC患者的3 a总体生存率显著高于低表达者(P <0. 05)。miR-1469在LO2、Hep G2、Hep3B、SMMC-7721、Huh7、Bel-7402细胞中的相对表达量分别为1. 01±0. 02、0. 45±0. 01、0. 05±0. 01、0. 61±0. 02、0. 14±0. 01、0. 29±0. 02; miR-1469在Hep G2、Hep3B、SMMC-7721、Huh7、Bel-7402细胞中的相对表达量显著低于LO2细胞(P <0. 05);其中Hep3B细胞中miR-1469表达量最低,SMMC-7721细胞中miR-1469表达量最高。miR-1469mimics组和miR-1469 control mimics组Hep3B细胞中miR-1469相对表达量分别为4. 47±0. 15、0. 05±0. 01,miR-1469mimics组Hep3B细胞中miR-1469相对表达量显著高于miR-1469 control mimics组(P <0. 05)。miR-1469 inhibitors组和miR-1469 control inhibitors组SMMC-7721细胞中miR-1469相对表达量分别为0. 20±0. 11、1. 00±0. 00,miR-1469inhibitors组SMMC-7721细胞中miR-1469相对表达量显著低于miR-1469 control inhibitors组(P <0. 05)。MTT结果显示,培养24、48、72 h时,miR-1469 mimics组Hep3B细胞增殖能力显著低于miR-1469 control mimics组,miR-1469inhibitors组SMMC-7721细胞增殖能力显著高于miR-1469 control inhibitors组(P <0. 05)。平板克隆实验结果显示,miR-1469 mimics组和miR-1469 control mimics组Hep3B细胞的克隆数分别为17. 00±1. 73、65. 67±2. 33,miR-1469mimics组Hep3B细胞的克隆形成能力显著低于miR-1469 control mimics组(P <0. 05); miR-1469 inhibitors组和miR-1469 control inhibitors组SMMC-7721细胞的克隆数分别为93. 00±2. 08、27. 67±1. 45,miR-1469 inhibitors组SMMC-7721细胞的克隆形成能力显著高于miR-1469 control inhibitors组(P <0. 05)。流式细胞术结果显示,与miR-1469control mimics组比较,miR-1469 mimics组G1期Hep3B细胞显著增多,S期Hep3B细胞显著减少(P <0. 05),但2组G2期细胞比例比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。与miR-1469 control inhibitors组比较,miR-1469 inhibitors组G1期SMMC-7721细胞显著减少,S期SMMC-7721细胞显著增多(P <0. 05);但2组G2期SMMC-7721细胞比例比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。Transwell实验结果显示,miR-1469 mimics组Hep3B细胞迁移数和侵袭数分别为59. 00±2. 08、29. 00±2. 08,miR-1469 control mimics组Hep3B细胞迁移数和侵袭数分别为35. 00±1. 53、20. 33±1. 45; miR-1469 mimics组Hep3B细胞的迁移和侵袭能力显著高于miR-1469 control mimics组(P <0. 05)。miR-1469 inhibitors组SMMC-7721细胞迁移数和侵袭数分别为26. 00±1. 16、17. 33±0. 88,miR-1469 control inhibitors组SMMC-7721细胞迁移数和侵袭数分别为56. 33±3. 18、44. 67±1. 45; miR-1469 inhibitors组SMMC-7721细胞的迁移和侵袭能力显著低于miR-1469 control inhibitors组(P <0. 05)。Western blot结果显示,miR-1469 mimics组和miR-1469 control mimics组Hep3B细胞中NDRG1蛋白相对表达量分别为0. 23±0. 04、1. 00±0. 00,miR-1469 mimics组Hep3B细胞中NDRG1蛋白相对表达量显著低于miR-1469 control mimics组(P <0. 05); miR-1469 inhibitors组和miR-1469 control inhibitors组SMMC-7721细胞中NDRG1蛋白相对表达量分别为3. 90±0. 17、1. 00±0. 00,miR-1469 inhibitors组SMMC-7721细胞中NDRG1蛋白相对表达量显著高于miR-1469 control inhibitors组(P <0. 05)。结论 MiR-1469在HCC中表达下调,且其表达与肿瘤数目、肿瘤直径、TNM分期、组织分化程度、微血管侵犯及患者预后密切相关; miR-1469可能通过靶向结合NDRG1并抑制其表达而抑制HCC细胞的增殖、周期、侵袭和迁移。     

Down-regulation of lung resistance related protein by RNA interference targeting survivin induces the reversal of chemoresistances in hepatocellular carcinoma

Background Both survivin and lung resistance related protein （LRP） are hepatocellular carcinoma （HCC）. But the relationship between survivin and LRP is investigate the effects of down-regulation of survivin on LRP expressions and the both in vitro and in vivo. related to the chemoresistances in ndefinite. The aim of this study was to reversal of chemoresistances in HCC Methods The expressions of survivin were detected by RT-PCR and Western blotting in HCC cell line SMMC-7721 and SMMC-7721/ADM. The sensitivities of these two cell lines to ADM were evaluated by MTT assays. SiRNA which targeted survivin was transfected into SMMC-7721/ADM cells, then the sensitivity of SMMC-7721/ADM cells to ADM and the expressions of survivin and LRP were detected respectively. SMMC-7721/ADM cells were transplanted subcutaneously into nude mice to establish xenograft tumors. Antitumor activities of RNA interference （RNAi） targeting survivin, various doses of ADM and combination therapies were observed respectively. Possible toxicities were evaluated. LRP expression changes were tested. Student＇s ttest was used for evaluating statistical significance. Results The expressions of survivin in SMMC-7721/ADM cell line showed significant elevation compared to those in SMMC-7721 cell line （P 〈0.05）. Positive siRNA down-regulated the expressions of survivin significantly （P 〈0.05）. SiRNA targeting survivin could sensitize SMMC-7721/ADM cells to ADM and down-regulate the expressions of LRP significantly （P 〈0.05）. Growths of the tumors were significantly inhibited in positive siRNA group as compared with those in the control group from the 8th day （P 〈0.05）. Combination therapies caused significant tumor inhibitions compared with tumors of nude mice in the other three groups respectively （P 〈0.05）. No toxicities were found in nude mice treated by siRNA and combination therapies. The expressions of LRP were markedly reduced in tumors treated with siRNA targeting survivin （P 〈0.05）. Conclusions Down regulation of survivin gene by RNAi can increase chemosensitivity of HCC both in vitro and in vivo. The reversal of drug resistance may be reduced through the inhibitions of LRP.     

阿霉素免疫毫微粒对多药耐药肝癌的体内杀伤作用

目的 探讨阿霉素免疫毫微粒对多药耐药(MDR)肝癌的体内杀伤作用及其可能的机制.方法 用人肝癌细胞株耐阿霉素亚株(SMMC-7721/ADM)制成肝癌裸鼠模型,分别使用阿霉素免疫毫微粒、阿霉素毫微粒及阿霉素,检测三者的肿瘤抑制率:同时检测三者在肿瘤组织中的药物浓度.结果 阿霉素免疫毫微粒有比普通阿霉素毫微粒及阿霉素更强的体内逆转MDR的功能:阿霉素免疫毫微粒比阿霉素毫微粒及阿霉素在肿瘤中的药物浓度明显高.结论 免疫毫微粒有体内逆转MDR的功能,其可能机制是免疫毫微粒在体内可与肿瘤细胞紧密结合,所载药物释放后形成肿瘤组织内有较高的药物浓度.

Abstract：

Objective To observe the effect of the immunonanoparticles loaded with adriamycin in reversing multidrug resistance (MDR) in liver cancer in a nude mouse model and explore the possible mechanisms. Methods The cytotoxicity of adriamycin, adriamycin-loaded nanoparticles, and adriamycin-loaded immunonanoparticles was assessed in a nude mouse model bearing implant tumors of adriamycin-resistant hepatoma cell line SMMC-7721/ADM. The concentration of adriamycin in the tumor tissue was determined. Results Adriamycin-loaded immunonanoparticles showed significantly stronger cytotoxicity against the implant tumors of SMMC-7721/ADM than adriamycin-loaded nanoparticles and adriamycin.Administration of adriamycin-loaded immunonanoparticles resulted in significantly higher drug concentrations in the tumor tissue than adriamycin-loaded nanoparticles and adriamycin. Conclusion Adriamycin-loaded immunonanoparticles may reverse the MDR of liver cancers in vivo probably resulting from the close binding of the particles with the tumor cells to produce a high local concentration of adriamycin in the tumors.     

蝙蝠葛碱逆转K562/ADM细胞多耐药性的研究

目的：研究具有钙拮抗作用的中药蝙蝠葛碱对多耐药性的逆转作用。方法：选用异搏定作阳性对照，观察其对多药耐药细胞株K562/ADM多药耐药性的逆转作用。结果：蝙蝠葛碱在非细胞毒性剂量下能使K562/ADM对阿霉素的浓度升高，但对细胞表面的糖蛋白P-170却没有影响。结论：蝙蝠葛碱具有逆转白血病细胞株K562/ADM多药耐药性的作用。     

Lin28与肝癌细胞紫杉醇耐药关系的研究

[目的]Lin28是一种重编程因子和保守的RNA结合蛋白,存在Lin28A和Lin28B两种同源基因,两者结构和功能类似。本研究旨在探讨Lin28与肝癌细胞对紫杉醇耐药的关系。[方法]MTT法检测紫杉醇对HepG2、Hep3B、SMMC-7721肝癌细胞的IC50;用荧光定量PCR法（简称RTPCR）在RNA水平检测Lin28A和Lin28B在Hep3B、HepG2、SMMC-7721中的表达,蛋白质印迹法分析Lin28A和Lin28B蛋白在Hep3B、HepG2、SMMC-7721细胞中的表达情况。[结果]Hep3B、HepG2、SMMC-7721细胞株对紫杉醇的IC50分别为：Hep3B为0.194μM、HepG2为19.54μM、SMMC-7721为0.444μM。HepG2、SMMC-7721细胞株中的Lin28A基因表达量分别是Hep3B的5.06、3.10倍;HepG2、SMMC-7721细胞株中的Lin28B基因表达量分别是Hep3B的7.16、3.16倍。Hep3B、HepG2、SMMC-7721细胞株中Lin28A和Lin28B蛋白的表达量与从荧光定量数据显示的趋势一致。[结论]Lin28与肝癌细胞对紫杉醇耐药密切相关,肝癌细胞中Lin28表达与肝癌细胞对紫杉醇的耐药性成正比,暗示Lin28表达可能是肝癌细胞紫杉醇耐药的潜在机制并有望成为逆转肝癌紫杉醇耐药的靶点。     

索拉非尼联合5-氮杂-2′-脱氧胞苷对肝癌SMMC-7721细胞DNMT3B基因表达的影响

目的:探讨索拉非尼联合5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人肝癌细胞SMMC-7721的作用及其调控DNMT3B基因表达可能的分子 机制.方法:单独及联合给药后以MTT法测定SMMC-7721的增殖,Transwell检测其侵袭,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot法观 察DNMT3B、p-Akt-Ser473及ERK蛋白的表达.结果:索拉非尼、5-Aza-CdR对肝癌SMMC-7721细胞半数抑制浓度(IC50)分别为11、6 μmol/L,联合用药选取(6+4)μmol/L作为后续用药浓 度.与对照组比较单药及联合用药均能抑制细胞侵袭、促进细胞凋亡、减少p-Akt-Ser473和DNMT3B蛋白的表达(P<0.05~P<0.01).结论:索拉非尼和5-Aza-CdR联合用药能有效降低索拉非尼用药浓度,降低肝癌SMMC-7721细胞DNMT3B蛋白表达水平.     

HBx抑制RXRα表达对肝细胞癌DNMT3a表达的影响及初步机制研究

目的 探讨维甲酸X受体α(retinoid X receptor α,RXRα)在乙肝病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)上调肝细胞癌DNA甲基转移酶3a(DNA methyltransferases 3a,DNMT3a)表达中的作用及机制.方法 采用RT-PCR和Western blot检测12例正常肝组织、56例HBV阳性的肝细胞癌和癌旁组织中DNMT3a、RXRα的基因和蛋白表达变化;在培养的SMMC-7721细胞中,转染HBx基因和RXRα基因,观察对其DNMT3a表达的影响;在转染HBx基因的SMMC-7721细胞中,分别加入信号通路阻断剂,观察何种信号通路在HBx调节RXRα的表达中发挥作用.结果 与正常肝组织相比,肝癌组织与癌旁组织中DNMT3a的基因和蛋白表达量显著升高(P＜0.01),肝癌组织与癌旁组织中RXRα的基因和蛋白表达量显著降低(P＜0.01);在SMMC-7721细胞中,HBx的过表达使RXRα的蛋白表达量显著降低(P＜0.01),DNMT3a的蛋白表达量显著升高(P＜0.01),而RXRα与HBx共转染,则可降低HBx升高的DNMT3a蛋白表达量(P＜0.01);MKK/MEK抑制剂PD98059和p38 MAPK抑制剂SB203580可显著升高HBx下调的RXRα基因和蛋白表达(P＜0.01).结论 HBV产生的HBx蛋白可能通过MAPK信号通路,降低RXRα表达,引起促癌基因DNMT3a蛋白含量增加.     

免疫毫微粒的内化作用及其逆转人肝癌细胞多药耐药性的研究

目的：观察免疫毫微粒能否内化进入人肝癌细胞及其多药耐药性(MDR)细胞，研究免疫毫微粒能否逆转MDR。方法：将抗人肝癌阿霉素白蛋白免疫毫微粒(HAbl8-ADR-HSA-NP)与人肝癌株SMMC-7721细胞及其MDR细胞(SMMC-7721／MDR^ )共同孵育，采用扫描电镜，激光共聚焦显微镜，透射电镜技术观察免疫毫微粒与靶细胞的结合及免疫毫微粒的内化过程；采用MTT比色分析法测定免疫毫微粒对靶细胞的杀伤率。计算免疫毫微粒对靶细胞的IC50和MDR细胞的耐药倍数(RF)。结果：激光共聚焦显微镜观察，SMMC-7721细胞表面和胞浆中均有许多荧光毫微粒；透射电镜观察。免疫毫微粒与SMMC-7721细胞及其MDR细胞在37℃孵育后，胞浆中可见有免疫毫微粒，随时间的延长细胞变性损伤越严重；当SMMC-7721及其MDR细胞预先经HAbl8抗体处理，再与HAbl8-ADR-HSA-NP孵育，则胞浆中未见免疫毫微粒；扫描电镜显示，多个HAbl8-ADR-HSA-NP紧密结合在SMMC-7721／MDR^ 表面。MDR细胞对于免疫毫微粒的耐药倍数(2.1)较其对于游离ADR(4．4)明显降低。结论：人肝癌特异性阿霉素白蛋白免疫毫微粒通过抗体介导能特异性内化进入人肝癌SMMC-7721细胞及其MDR细胞；该免疫毫微粒能增强MDR细胞对阿霉素杀伤的敏感性。有一定程度逆转MDR作用。     

舒尼替尼调控miR-143对人肾癌细胞增殖、侵袭的影响

目的:探讨miR-143在肾癌细胞中的作用、舒尼替尼对miR-143表达的影响及与细胞增殖、侵袭的关系.方法:培养人肾癌786-O细胞株,分为对照组、miR-143组、舒尼替尼组、共同作用组.对照组细胞转染阴性对照序列,miR-143组细胞转染miR-143序列,舒尼替尼组细胞用舒尼替尼处理48 h,共同作用组细胞转染...