miRNA-221和miRNA-222在肝细胞肝癌中的表达及临床意义

目的:研究miRNA-221、miRNA-222在人肝癌细胞株及肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达,探讨二者与患者临床病理特征间的关系.方法:从体外培养的人肝癌细胞株HepG2、Huh7、MHCC-97和46例手术切除的HCC组织及毗邻癌旁组织中提取总的RNA,用微小RNA的引物反转录后,用miRNA-221、miRNA-222特异性引物做荧光定量聚合酶链反应,并分析miRNA-221、miRNA-222表达水平与各临床病理参数间的关系.结果:肝癌细胞株MHCC-97中miRNA-221、miRNA-222的表达较肝癌细胞株HepG2、Huh7显著升高;HCC组织中miRNA-221、miRNA-222的平均表达水平较癌旁组织分别上调1.72±1.17,1.76±1.14倍,差异均有统计学意义(P＜0.05).miRNA-221、miRNA-222表达水平与HCC肿瘤TNM分期和包膜浸润有关,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:miRNA-221、miRNA-222显著高表达可能在HCC发生、发展中发挥重要作用,尤其与肝癌细胞的侵袭、转移有关.     

miRNA-451在宫颈癌中的表达及对宫颈癌Hela细胞增殖与凋亡影响的作用机制研究

目的 探讨miRNA-451在宫颈癌中的表达及对宫颈癌Hela细胞增殖与凋亡影响的作用机制.方法 取60例宫颈癌患者的宫颈癌组织和相应的癌旁正常组织,定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miRNA-451的相对表达量,分析其与宫颈癌患者临床特征的关系.将宫颈癌Hela细胞随机分为miRNA-451-mimics组、miR-NA-451-mimics-NC组,分别转染miRNA-451模拟物(miRNA-451-mimics)、miRNA-451-mimics阴性对照,对照组未进行转染.采用CCK-8法检测3组宫颈癌Hela细胞的增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡情况,蛋白质印迹(Western blot)法检测磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白的相对表达量.结果 癌旁正常组织中miRNA-451的相对表达量明显高于宫颈癌组织(P﹤0.01).不同国际妇产科联盟(FI-GO)分期、淋巴结转移情况、分化程度宫颈癌患者宫颈癌组织中miRNA-451相对表达量比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05).随着转染时间的增长,宫颈癌Hela细胞中miRNA-451的相对表达量均明显升高(P﹤0.05),细胞存活率逐渐降低,miRNA-451过表达能够将宫颈癌Hela细胞的周期阻滞于G0/G1期并明显促进细胞凋亡.miR-NA-451-mimics组宫颈癌Hela细胞p-AKT、Bcl-2蛋白的相对表达量均明显低于对照组(P﹤0.01).结论 miR-NA-451在宫颈癌组织中低表达,且与宫颈癌患者FIGO分期、淋巴结转移、分化程度有关,miRNA-451过表达能通过阻断AKT/Bcl-2信号通路来抑制宫颈癌细胞的增殖并诱导其凋亡.     

siRNA靶向沉默COX-2对宫颈癌细胞VEGF、EGFR表达的影响

目的 探讨siRNA靶向沉默环氧合酶-2(COX-2)基因对宫颈癌HeLa细胞血管内皮生长因子(VEGF)和表皮生长因子受体(EGFR)表达的影响.方法 以人宫颈癌HeLa细胞为研究对象,采用COX-2 siRNA转染HeLa细胞作为转染组,以未转染的HeLa细胞作为空白对照组,以阴性对照siRNA转染HeLa细胞作为阴性对照组.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测COX-2、VEGF、EGFR基因的表达水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测COX-2、VEGF、EGFR蛋白的表达水平,MTT法检测细胞的增殖情况,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,Tran-swell小室检测细胞的迁移和侵袭能力.结果 RT-PCR结果显示,转染组的COX-2、VEGF、EGFR基因表达水平均低于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).Western blot结果显示,转染组的COX-2、VEGF、EGFR蛋白表达水平均低于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).MTT检测结果显示,转染组的细胞增殖抑制率高于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).流式细胞仪检测结果显示,转染组的细胞凋亡率高于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).Transwell小室检测结果显示,转染组的细胞穿透率低于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).结论siRNA靶向沉默COX-2基因能够抑制HeLa细胞中VEGF和EGFR的基因及蛋白表达水平,促进HeLa细胞凋亡,抑制HeLa细胞增殖,降低HeLa细胞的迁移及侵袭能力.     

miRNA-137在膀胱癌中的表达情况及对膀胱癌细胞侵袭和迁移的影响

目的探讨miRNA-137在膀胱癌中的相对表达量及其对膀胱癌细胞侵袭和迁移能力的影响。方法选取30例膀胱癌患者的膀胱癌组织和癌旁组织标本。实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测膀胱癌组织和癌旁组织中的miRNA-137的相对表达量,检测不同病理分级膀胱癌患者膀胱癌组织中miRNA-137的表达量及其与膀胱癌病理分级的相关性。将mimic-NC、miRNA-137 mimic、miRNA-137 inhibitor质粒转染至膀胱癌T24细胞,并分别作为空白组、过表达组和低表达组,RT-PCR法检测3组细胞miRNA-137的相对表达量,Transwell小室检测3组细胞的迁移和侵袭能力。结果浸润性膀胱癌组织中miRNA-137的相对表达量明显高于非浸润性膀胱癌组织和癌旁组织(P﹤0.01);病理分级为Ⅳ级的膀胱癌患者膀胱癌组织中miRNA-137的相对表达量明显高于病理分级为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级的患者(P﹤0.01)。过表达组迁移和侵袭细胞数目均高于空白组细胞(P﹤0.05);低表达组迁移和侵袭细胞数目均低于空白组细胞(P﹤0.05)。结论浸润性膀胱癌组织和病理分级为Ⅳ级的膀胱癌组织中miRNA-137的相对表达量较高,上调miRNA-137的表达可以促进膀胱癌细胞侵袭和迁移,抑制其表达可以抑制膀胱癌细胞的迁移和侵袭。     

血清miRNA-1296联合表皮生长因子受体检测对非小细胞肺癌患者预后评估价值的分析

目的 研究血清miRNA-1296联合表皮生长因子受体(EGFR)检测对非小细胞肺癌(NSCLC)患者的预后评估价值.方法 选取61例NSCLC患者为NSCLC组,选取同期61例健康体检者为对照组.检测血清miRNA-1296、EGFR水平,分析两者在NSCLC患者中的相关性,观察两者对NSCLC患者预后的评估价值.结果 NSCLC组患者血清miRNA-1296水平明显低于对照组(P﹤0.01),EGFR水平明显高于对照组(P﹤0.01).死亡组NSCLC患者的血清miRNA-1296水平明显低于生存组(P﹤0.01),EGFR水平明显高于生存组(P﹤0.01).受试者工作特征(ROC)曲线分析结果显示,血清miRNA-1296与EGFR联合预测NSCLC预后的曲线下面积(AUC)、灵敏度、特异度均高于二者单独预测结果.NSCLC患者血清miRNA-1296水平与EGFR水平呈负相关(P﹤0.01).随访期间,miRNA-1296高表达组患者累积生存率明显高于低表达组(P﹤0.01),EGFR高表达组累积生存率明显低于低表达组(P﹤0.05).多因素Cox比例风险回归模型分析表明,血清EGFR水平高表达是NSCLC患者预后的独立危险因素(P﹤0.01),血清miRNA-1296水平高表达是NSCLC患者预后的保护因素(P﹤0.01).结论 血清miRNA-1296水平低表达、EGFR水平高表达均与NSCLC的发生和预后有关,二者联合检测能够对患者预后进行更有效的评估,从而对患者进行针对性的治疗,可能是NSCLC患者潜在治疗靶点.     

miR-451下调MIF的表达并抑制其促鼻咽癌细胞浸润和转移的作用

目的:研究巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)在鼻咽癌细胞浸润转移过程中的作用.方法:采用免疫印迹实验观察鼻咽癌细胞株HONE1、5-8F、CNE-1、CNE-2中MIF的表达水平.检验过表达MIF后鼻咽癌细胞株HONE1中黏附蛋白的表达水平以及miR-451对5-8F和293A细胞中MIF表达水平的影响,Transwell实验观察鼻咽癌细胞侵袭迁移能力,荧光报告系统验证miR-451对MIF的调控作用.结果:MIF在鼻咽癌高转移细胞株5-8F中表达量增高,MIF通过降低黏附蛋白的表达,减弱鼻咽癌细胞间黏附性,提高鼻咽癌细胞侵袭迁移能力.MIF的表达受miR-451的调控,miR-451能够抑制MIF的表达.结论:MIF能降低鼻咽癌细胞间的黏附性,在鼻咽癌的浸润转移过程中具有重要的促进作用,并且MIF的表达受miR-451的直接调控.     

miRNA-27a靶向SPRY2调控Wnt/β-catenin信号通路对人卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 探讨miRNA-27a靶向SPRY2调控Wnt/β-catenin信号通路对人卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响.方法 采用荧光定量RT-PCR和Western blot法检测卵巢癌组织、癌旁正常上皮结缔组织和HO-8910细胞、正常卵巢上皮细胞的miRNA-27a和SPRY2表达水平;MTT法检测转染细胞的增殖情况;Transwell实验检测细胞侵袭情况;荧光素酶分析验证miRNA-27a对SPRY2的靶向调控能力;免疫荧光染色检测miRNA-27a与SPRY2对Wnt/β-catenin信号通路的调控能力.结果 卵巢癌组织、HO-8910细胞中miRNA-27a的表达水平分别高于癌旁正常上皮结缔组织、卵巢正常上皮细胞(P﹤0.05),而SPRY2的mRNA和蛋白表达水平均低于癌旁正常组织及卵巢正常上皮细胞(P﹤0.05).与B组相比,C组和E组HO-8910细胞增殖及侵袭能力均下调(P﹤0.05).F组的荧光素酶活性明显高于G组(P﹤0.01).C组的HO-8910细胞中,β-catenin表达上升,且进入细胞核.结论 miR-NA-27a通过靶向抑制SPRY2激活Wnt/β-catenin信号通路,从而促进人卵巢癌细胞的增殖和侵袭能力.     

miiRNA-186上调Diicer1的表达影响胃癌细胞侵袭和迁移的作用机制研究

目的 探讨miRNA-186上调Dicer1的表达影响胃癌细胞侵袭和迁移的作用机制.方法 取40例胃癌患者的胃癌组织及相应的癌旁组织;将转染pLVTHM-mimic-miRNA-186和pLVTHM-mimic-NC的慢病毒感染液分别转染BGC-823细胞,得到过表达BGC-823-mimics-miRNA-186细胞、阴性对照BGC-823-mimics-NC细胞.定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测不同组织和细胞中miRNA-186的相对表达量;Transwell小室检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力;间接免疫荧光法(IFA)检测Dicer1相关分子神经型钙黏蛋白(N-cad-herin)的阳性表达情况,双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-186和Dicer1的靶向关系,Western blot检测各细胞Dicer1的相对表达量.结果 胃癌组织中miRNA-186的相对表达量明显低于癌旁组织(P﹤0.01).胃癌细胞BGC-823和BGC-823-mimics-NC中miRNA-186的相对表达量均明显低于正常胃黏膜上皮细胞RGM-1,且BGC-823-mimics-miRNA-186细胞中miRNA-186的相对表达量明显高于胃癌细胞BGC-823及BGC-823-mimics-NC,差异均有统计学意义(P﹤0.01).BGC-823-mimics-miRNA-186细胞侵袭数目少于胃癌细胞BGC-823和BGC-823-mimics-NC,细胞迁移率低于胃癌细胞BGC-823和BGC-823-mimics-NC,差异均有统计学意义(P﹤0.05).过表达miRNA-186的BGC-823-mimics-miRNA-186细胞中N-cadherin阳性表达率低于胃癌细胞BGC-823和BGC-823-mimics-NC(P﹤0.05).mimics-miRNA-186能明显抑制野生型psi-CHECK-Dicer1-wild的荧光素酶活性,而对突变型psi-CHECK-Dicer1-mutant的荧光素酶活性无明显影响.胃癌细胞BGC-823和BGC-823-mimics-NC中Dicer1蛋白的相对表达量均明显低于正常胃黏膜上皮细胞RGM-1,且BGC-823-mimics-miRNA-186细胞中Dicer1的相对表达量明显高于胃癌细胞BGC-823和BGC-823-mimics-NC,差异均有统计学意义(P﹤0.01).结论 miRNA-186通过靶向正调控Dicer1的表达,下调N-cadherin的表达可抑制胃癌细胞的侵袭和迁移能力.     

RNA干扰FAK表达抑制宫颈癌细胞侵袭、迁移能力的研究

目的 探讨黏着斑激酶(FAK)表达量降低对宫颈癌细胞侵袭、迁移能力的影响以及机制研究.方法以宫颈癌HeLa细胞为研究对象,转染RNA干扰载体,实验分3组:空白对照组(未做任何处理的细胞)、阴性对照组(细胞转染对照载体FAK-pGenesil-Ctrl)、干扰组(细胞转染重组质粒FAK-pGenesil-siRNA).Transwell法检测细胞的迁移、侵袭能力,Western blot法检测细胞中的FAK、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)、上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)的蛋白表达量.结果 干扰组细胞中FAK蛋白的表达量低于空白对照组和阴性对照组(P﹤0.05);干扰组细胞的迁移、侵袭数少于空白对照组和阴性对照组(P﹤0.05);干扰组细胞中MMP-2、MMP-9蛋白的表达量低于空白对照组和阴性对照组,但E-cadherin蛋白的表达量高于空白对照组和阴性对照组(P﹤0.05).结论 RNA干扰FAK的表达量可以降低宫颈癌HeLa细胞的侵袭、迁移能力,其作用机制可能是通过影响细胞上皮间质转化相关因子MMP-2、MMP-9、E-cadherin蛋白的表达量.     

ANGPTL4 基因对不同肝癌细胞株生长的影响

目的:观察血管生成素样蛋白4(angiopoietin-like 4, ANGPTL4 )基因对不同肝癌细胞株生长的影响. 方法:用RT-PCR和Western印迹法检测9种不同肝癌细胞及永生化肝细胞中ANGPTL4的表达水平;选择ANGPTL4低表达的Huh-7、MHCC-LM3 和中度表达的MHCC-97L共3个肝癌细胞株,以pEGFP-N1质粒为载体,用Lipofectamine 2000脂质体转染 ANGPTL4 基因,用G418筛选结合FCM法对转染阳性细胞进行筛选,建立过表达ANGPTL4的稳定细胞株.制备细胞芯片,用 Ki-67 荧光免疫细胞化学技术检测3个稳定细胞株的体外增殖率,用裸小鼠体内成瘤实验观察ANGPTL4对这3个细胞株在裸小鼠体内生长的影响.结果:ANGPTL4 mRNA在未转染肝癌细胞Huh-7和MHCC-LM3中低表达,在MHCC-97L细胞中中度表达,在Hep3B细胞中高表达.细胞芯片检测结果表明,与空载体组相比,稳定过表达ANGPTL4的Huh-7细胞体外增殖率较低( P=0.000 74),而稳定过表达ANGPTL4的MHCC-LM3( P =0.073 08)和MHCC-97L( P=0.011 52)细胞株的体外增殖率则较高.体内实验证实,ANGPTL4可以明显抑制Huh-7细胞的裸鼠体内成瘤( P ＝0.001 10),而促进MHCC-LM3细胞( P＝0.057 50) 和MHCC-97L细胞( P＝0.018 91)的裸鼠体内成瘤.结论:ANGPTL 4对不同肝癌细胞株的生长有不同影响,而对同一种细胞株体内和体外生长的影响基本一致.     

Twist overexpression correlates with hepatocellular carcinoma metastasis through induction of epithelial-mesenchymal transition.

PURPOSE: Hepatocellular carcinoma (HCC) is a rapidly growing tumor associated with a high propensity for vascular invasion and metastasis. Epithelial-mesenchymal transition (EMT) is a key event in the tumor invasion process. Recently, Twist has been identified to play an important role in EMT-mediated metastasis through the regulation of E-cadherin expression. However, the actual role of Twist in tumor invasiveness remains unclear. The purpose of this study is to investigate the expression and possible role of Twist in HCC. EXPERIMENTAL DESIGN: We evaluated Twist and E-cadherin expression in HCC tissue microarray of paired primary and metastatic HCC by immunohistochemical staining. The role of Twist in EMT-mediated invasiveness was also evaluated in vitro in HCC cell lines. RESULTS: We first showed that overexpression of Twist was correlated with HCC metastasis (P=0.001) and its expression was negatively correlated with E-cadherin expression (P=0.001, r=-0.443) by tissue microarray. A significant increase of Twist at the mRNA level was also found in metastatic HCC cell lines MHCC-97H, MHCC-97L, and H2M when compared with nonmetastatic Huh-7, H2P, and PLC cell lines. The MHCC-97H cell line, which has a higher metastatic ability, was found to have a higher level of Twist than MHCC-97L. Accompanied with increased Twist expression in the metastatic HCC cell lines when compared with the nonmetastatic primary ones, we found decreased E-cadherin mRNA expression in the metastatic HCC cell lines. By ectopic transfection of Twist into PLC cells, Twist was able to suppress E-cadherin expression and induce EMT changes, which was correlated with increased HCC cell invasiveness. CONCLUSION: This study shows that Twist overexpression was correlated with HCC metastasis through induction of EMT changes and HCC cell invasiveness.     

MIF重组质粒转染人宫颈癌SiHa细胞及其对CyclinD1表达的影响

目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子（Macrophage migration inhibitory factor, MIF）重组质粒转染人宫颈癌SiHa细胞后MIF的表达及其对CyclinD1表达的影响。方法 构建并鉴定重组真核表达质粒pEGFP-N1-MIF,转染人宫颈癌SiHa细胞;ELISA法检测细胞上清液中MIF的表达;real-time PCR及免疫细胞化学法检测细胞中MIF、CyclinD1 mRNA及蛋白的表达水平;MTT法及Boyden小室法分别检测细胞增殖和体外迁移能力。结果 重组质粒pEGFP-N1-MIF成功构建并转染至SiHa细胞;ELISA证实转染pEGFP-N1-MIF的实验组细胞上清液中MIF表达均高于各对照组（P<0.01）;real-time PCR及免疫细胞化学法证实实验组细胞中MIF、CyclinD1 mRNA和蛋白的表达水平均高于各对照组（P<0.01）;MTT法和Boyden小室法检测到转染pEGFP-N1-MIF后细胞体外增殖、迁移能力明显高于各对照组（P<0.01）。结论 转染重组质粒pEGFP-N1-MIF后SiHa细胞中MIF表达水平增高,MIF过表达可增强SiHa细胞体外增殖、迁移能力,并上调 CyclinD1的表达。     

靶向miRNA-214反义核酸对白血病U937细胞的生长抑制作用

 【摘要】　目的　探讨以miRNA-214为靶点的反义核酸对白血病U937细胞的生长抑制作用及可能的作用机制。方法　人工合成miRNA-214的反义核酸序列,硫代修饰,以Lipofectamine 2000为介导转入U937细胞。MTT细胞毒性检测U937细胞的增殖活性,流式细胞术检测细胞的凋亡水平,荧光定量PCR检测miRNA-214的表达水平。结果　MTT检测结果显示,转染反义核酸后24 、48、72 h,U937细胞的增殖活性显著下降（0.812 ±0.001、0.770±0.002、0.541±0.001）,与随机对照组（1.011±0.002、1.112±0.003、1.111±0.003）、空白对照组（1.112±0.001、1.023±0.001、1.101±0.001）相比较差异均有统计学意义（F＝2.782、3.659、2.735,P＝0.021、0.018、0.036）。流式细胞术检测结果表明,在转染反义核酸48 h后细胞的凋亡水平随时间延长而提高（48、72 h分别为15.12±0.02、19.14±0.01）,与随机对照组（2.04±0.02、2.45±0.03）、空白对照组（1.19±0.02、2.02±0.01）相比较差异均有统计学意义（F＝3.683、3.762,P＝0.013、0.015）。荧光定量PCR结果证实,在反义核酸作用后,U937细胞内miRNA-214的相对表达水平明显下降（31.1±0.2）,与随机对照组、空白对照组的25.8±0.1、25.6±0.2相比较,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论　以miRNA-214为靶点的反义核酸可抑制U937细胞的增殖活性,并明显促进细胞的凋亡。     

lncRNA BCAR4在肝癌细胞系中的表达及对增殖、凋亡和迁移的影响

目的:观察肝癌细胞系中长链非编码RNA BCAR4（lncRNA BCAR4）的表达,及对肝癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响,并探讨其机制。方法:采用荧光定量PCR技术（qRT-PCR）检测肝癌细胞系Huh7、HepG2、SMMC-7721和正常肝细胞系L02中lncRNA BCAR4的表达。将Huh7细胞系分为BCAR4-siRNA组、NC-siRNA组和Blank组,BCAR4-siRNA组和NC-siRNA组经LipofectamineTM 2000分别转染BCAR4-siRNA序列和NC-siRNA序列,Blank组以PBST为阴性对照。CCK-8法和流式细胞数测定细胞增殖和凋亡,细胞划痕实验测定迁移能力。Western blot测定细胞周期相关蛋白（Cyclin D1）和凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。结果:肝癌细胞系Huh7、HepG2、SMMC-7721中lncRNA BCAR4的表达显著高于正常肝细胞系L02(P<0.05)。转染BCAR4-siRNA后,Huh7的lncRNA BCAR4表达下调（P<0.01）。CCK-8示:转染72 h及96 h后,BCAR4-siRNA组 vs NC-siRNA组的OD450 nm值分别为0.71±0.07 vs 0.92±0.10（P<0.05）及0.93±0.08 vs 1.37±0.11（P<0.01）。BCAR4-siRNA组和NC-siRNA组细胞凋亡率分别为（17.52±3.21）%和（4.69±1.56）%（P<0.01）。BCAR4-siRNA组细胞划痕愈合率为（19.65±2.41）%,显著低于NC-siRNA组的（47.50±5.88)%(P<0.05)。与NC-siRNA组比较,BCAR4-siRNA组Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达下调,分别为0.27±0.03 vs 1.0±0.05(P<0.01)、0.48±0.04 vs 1.0±0.04(P<0.05),Bax蛋白表达上调,为2.83±0.19 vs 1.0±0.03(P<0.01)。结论:lncRNA BCAR4高表达于肝癌细胞系,敲低lncRNA BCAR4的表达可抑制肝癌细胞增殖、迁移,并促进凋亡,其机制可能与Cyclin D1和Bcl-2蛋白下调表达,Bax蛋白表达上调表达有关。     

TC21/R-Ras 2在肝癌中的表达、亚细胞定位及意义

目的:探讨TC21基因在肝癌细胞、肝癌及癌旁组织中的表达、亚细胞定位及意义。方法:用RT-PCR检测TC 21在肝癌细胞系及人肝癌及癌旁组织中mRNA水平的表达,用免疫组化及Western印迹检测TC21蛋白在肝癌相关组织中的表达差异,用组织芯片技术结合免疫组化检测TC21蛋白的亚细胞定位。结果:RT-PCR检测结果表明TC21 mRNA在SMMC-7721、BEL-7402、Huh-7、Hep3B、HepG2、MHCC-97L、MHCC-LM3 7个肝癌细胞系及L-02和Chang liver 2株永生化人肝细胞系、7对肝癌及对应癌旁肝组织中均有较高表达;Western印迹结果表明上述细胞系中TC21蛋白表达与mRNA表达一致,TC21在4对肝癌及癌旁组织中均呈较高水平的表达;免疫组化检测结果表明TC21在人原发性肝癌、癌旁组织、硬化肝组织与正常肝组织中的表达阳性率分别为84.2%、77.2%、41.7%、0%,肝癌与肝硬化、正常肝相比显著高表达(P<0.05,P<0.01),与癌旁组织比无统计学意义(P>0.05);统计学分析结果表明TC21蛋白表达与肿瘤大小呈正相关(P<0.05),与是否肝硬化呈负相关(P<0.05);肝癌组织中TC21主要定位于肝癌细胞核,部分定位于胞质,膜定位不明显,TC21蛋白在肝癌细胞中的核定位显著高于癌旁肝细胞(P<0.001)。结论:本研究首次揭示TC21蛋白在肝癌组织中的高表达及核定位预示其在肝细胞恶性转化及肝癌发生发展中发挥重要作用。     

全反式维甲酸增强顺铂对A549 细胞化疗敏感性及对Survivin mRNA 和COX-2 mRNA表达的影响

目的:体外观察全反式维甲酸（all-trans retinoic acid ,ATRA）增强顺铂（cisplatin,DDP ）对人类非小细胞肺癌细胞株A549 细胞的增殖抑制及对凋亡抑制蛋白Survivin mRNA和环氧化酶-2（cyclooxygenase- 2,COX-2）mRNA 表达的影响。方法:应用不同浓度组DDP（0.5、5、50mg/L）、ATRA（0.1、1、10μ mol/L）以及联合用药组（ATRA 1 μ mol/L,DDP 5mg/L）,处理肺腺癌细胞株A549 细胞,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法观察不同浓度DDP 组、不同浓度ATRA 组及联合用药组对A549 细胞生长的影响;应用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time polymerase chain reaction ,RT-PCR）检测DDP 组、ATRA 组及联合用药组处理前后A549 细胞中Survivin mRNA和COX-2 mRNA 表达变化;应用流式细胞术观察DDP 组、ATRA 组及联合用药组处理前后细胞凋亡率。结果:与空白对照组相比,单独应用DDP 、ATRA 处理A549 细胞均诱导细胞凋亡,且呈浓度依赖性。与单独应用DDP 的作用相比,联合用药组可更显著抑制A549 的增殖,增加细胞的凋亡率（P<0.05）,并增强对A549 细胞Survivin mRNA和COX-2 mRNA表达的抑制作用（P<0.05）;并且,流式细胞术测定结果显示联合用药组的早期凋亡率（7.37± 3.83）% 、中晚期凋亡率（34.37±2.08）% 、继发性坏死率（7.44± 0.46）% 均较单独应用DDP 组高（3.55± 0.75）% 、（6.62± 0.33）% 、（3.03± 0.05）% ,P 均<0.05。结论:全反式维甲酸能够明显提高非小细胞肺癌对顺铂的敏感性,其机制可能与抑制非小细胞肺癌细胞Survivin mRNA和COX-2 mRNA 的表达有关。      

纤维支气管镜检标本微小RNA-21在非小细胞肺癌诊断中的临床应用价值

目的 探讨纤维支气管镜检标本微小RNA-21(miRNA-21)在非小细胞肺癌(NSCLC)诊断中的临床应用价值.方法 选取80例NSCLC患者作为NSCLC组,选取同期接受镜检筛查的80例肺炎或肺结核患者作为对照组.检测两组患者的镜检物miRNA-21表达水平,比较两组患者的细胞因子和肿瘤标志物水平,分析NSCLC患者镜检物miRNA-21水平与细胞因子和肿瘤标志物水平的相关性.结果 NSCLC组患者的镜检物miRNA-21水平为(8.29±1.15),明显高于对照组的(1.35±0.41),差异有统计学意义(P﹤0.001).NSCLC组患者的γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.001).NSCLC组患者的癌胚抗原(CEA)、神经元特异烯醇化酶(NSE)和角蛋白CYFRA21-1水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.001).NSCLC患者的镜检物miRNA-21表达水平与细胞因子IFN-γ、IL-1β、IL-4、IL-6、TNF-α和肿瘤标志物CEA、NSE、CYFRA21-1水平均呈正相关(P﹤0.05).结论 NSCLC患者纤维支气管镜检标本中miRNA-21的表达水平较高,且与细胞因子和肿瘤标志物水平密切相关.     

Expression and Clinical Significance of REGy in Gastric Cancer Tissue and Variously Differentiated Gastric Cancer Cell Lines

OBJECTIVE To evaluate the REGy expression in gastric cancer tissue and gastric cancer cell lines of various differentiation levels and its clinical significance.METHODS Immunohistochemistry was used to detect the expression of REGy protein in 70 specimens of gastric cancer and 30 specimens of normal gastric mucosa. The relationship between the expression of REGy protein and the biological behaviors of gastric cancer was analyzed. RT-PCR and Western blot were used to detect the mRNA level and the protein expression of REGγ in normal gastric cell line GES-1, well differentiated gastric cancer cell line MKN-28, moderately differentiated gastric cancer cell line SGC-7901 and poorly differentiated gastric cancer cell line BGC-823.RESULTS The expression rate of REGγprotein in gastric cancer tissue (52/70, 74.29%) was significantly higher than that in normal gastric tissue (12/30, 40%) (P<0.01). The expression rate of REGywas correlated with tumor size (P<0.01), lymph node metastasis (P<0.05), differentiation degree (P<0.01), infiltration depth (P<0.01)and distant metastasis (P<0.05). RT-PCR analysis showed that theexpression of REGγ mRNA was 0.459±0.079 in the normal gastric mucosa cell line, 0.588±0.118 in the well differentiated gastric cancer cell line, 0.715±0.066 in the moderately differentiated gastric cancer cell line, and 0.873±0.099 in the poorly differentiated gastric cancer cell line, showing a negative correla- tion between REGγmRNA expression and differentiation level (P <0.05). Western blot analysis showed that the expression of REGy protein was 0.712±0.065 in the normal gastric mucosa cell line, 1.176±0.185 in the well differentiated gastric cancer cell line, 1.533 ±0.127 in the moderately differentiated gastric cancer cell line, and 2.061±0.398 in the poorly differentiated gastric cancer cell line, showing a negative correlation between REGγprotein expression and differentiation level (P<0.05).CONCLUSION REGγ is expressed in gastric cancer tissue and normal gastric tissue. In gastric cancer tissues, REGγexpression is positively correlated with the tumor size, lymph node metastasis,differentiation degree, infiltration depth and distant metastasis. Detecting the expression of REGy mRNA and protein is helpful for early diagnosis and predicting prognosis of gastric cancer.     

STUDY ON THE EXPRESSION OF CYCLOOXYGENASE-2 IN HEPATOCELLULAR CARCINOMA CELL LINES AND ON THE GROWTH INHIBITION EFFECT OF NS-398

Objective： To investigate the expression of cyclooxygenase -2 （COX-2） in hepatocellular carcinoma cell lines and to explore the effect of NS-398, a selective inhibitor for COX-2, on HepG-2 cell line. Methods： lmmunohistochemistry and RT-PCR were used to investigate COX-2 expression in 6 HCC cell lines. MTT and Flowcytometry were used to evaluate the effect of the selective inhibitor of COX-2, NS-398, on HepG-2 cell lines. Results： All six HCC cell lines showed COX-2 expression at protein level. Five out of 6 cell lines showed COX-2 expression at mRNA level. NS-398 could suppress the growth of HepG-2 cell line, in a time and dose dependant manner. Conclusion： NS-398, a selective inhibitor of COX-2, showed inhibition effect on HepG-2 HCC cell line. The efficacy of inhibition was time and dose dependent, providing a new evidence for chemoprovention of hepatocellular carcinorma with COX-2 selective inhibitors.