原发性胃癌中MRE11基因的突变筛查

目的:研究染色体不稳定性相关基因MRE11(meiotic recombination 11 homolog A)突变与原发性胃癌的相关性。方法:收集27例原发性胃癌病人的胃癌组织和对应的正常胃黏膜组织,并通过显微切割方法从胃癌组织中获取较纯胃癌细胞。设计扩增MRE11基因外显子的引物共20对,采用PCR产物直接测序方法在胃癌细胞和对应正常胃黏膜组织中对MRE11基因编码区进行突变检测,并运用CGH方法对存在突变的胃癌细胞进行染色体分析。结果:在27例原发性胃癌中,4例存在MRE11基因共4个体细胞水平的错义突变,其中3例为肠型胃癌。CGH显示该4例胃癌均存在5个以上基因组片断的获得或丢失事件。结论:MRE11基因突变可能在某些原发性胃癌的发生发展中起着重要作用,尤其是显示染色体不稳定性的肠型胃癌。     

胃癌的基因异常及其意义

现代分子生物学研究证实 ,从正常上皮细胞发展到临床所见的肿瘤是一个复杂的过程 ,与多种基因异常的积蓄有关。胃癌也呈现出多基因的改变 ,其中包括基因的不稳定性、细胞周期调节蛋白、肿瘤抑制基因与细胞粘附因子、原癌基因、生长因子及转移相关基因等。本文就其中有代表性的研究进展作一回顾。一、基因不稳定性基因不稳定性可能是胃癌发生过程中众多步骤的基础。微卫星座位的不稳定性包括简单重复序列的扩大与缩小 ,它可能源于肿瘤发生过程中ＤＮＡ复制错误。Ｈａｙｄｅｎ等[1] 发现3 9 %的胃癌有微卫星不稳定性 ,64%的低分化胃癌、17%的…     

胃癌中突变表型和染色体17p和18q等位子缺失的临床意义

癌肿的发生和恶性发展是累及控制细胞增强与死亡的基因改变积累引起的多步骤过程 ,近期资料表明两种分子途径涉及了散发性胃癌病变发病机制。大部分癌肿有大染色体改变为特点和一般在至少2 5 %随机选择的 DNA片段上有等位基因丧失 (异合子缺失 ,LOH)。特定癌肿上的 L OH共同区域确定含有肿瘤抑制因子的染色体区域 ,它们的失活在癌肿类型发生或发展上起重要作用。一项近来异位移植癌肿的等位基因型研究表明在染色体臂 17p13和 18q2 1染色体臂上的 LOH,此位点包括或紧密联系 P5 3和DCC/ DPC4 (结肠癌上缺失 /胰腺癌上缺失 )肿瘤抑制基…     

人类胃癌8号染色体等位基因缺失的研究

本研究应用从８号染色体上分离出的克隆Ｄ８Ｓ７作为探针，采用ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ技术检测了２０例胃癌病员的癌组织标本，发现２５％（５／２０）的胃癌组织有８ｑ上等位基因的丢失或缺失，提示人类８号染色体短臂上存在肿瘤抑制基因，它涉及胃癌的演化和进程。     

胃癌错配修复基因表达与微卫星不稳定性的关系

我们采用免疫组织化学方法检测胃癌组织错配修复基因hMLH1和hMSH2的表达情况，研究错配修复基因在胃癌发生发展过程中的作用，评价错配修复基因表达与胃癌微卫星不稳定性的关系，探讨用免疫组织化学法预测错配修复基因缺陷引起微卫星不稳定性的可行性、灵敏度和特异性。     

用基因芯片筛选胃黏膜癌变相关基因

目的 用基因芯片技术筛选与胃黏膜癌变相关的基因。方法 利用Affymetrix公司生产的U133A基因芯片，对癌旁黏膜和切缘正常胃黏膜基因表达谱进行检测，并利用生物信息学方法对检测结果进行分析。结果 （1）癌旁黏膜与正常胃黏膜比较差异3倍以上共有150个基因，其中表达上调[SLR（信号比的对数值）〉1．5]有130个，表达下调（SLR〈-1．5）有20个。从表达差异的基因功能分类看，以酶和酶调控子活性改变最多（28，占18．7％）；其次是与核酸结合活性相关基因（17，占11．3％）；第三是与信号传导活性相关基因（15，占10％）；第四是与蛋白结合活性相关基因（13，占8．7％）。除了40个功能未知的基因占总数26．7％外，以上4大类共占基因总数的48．7％。（2）癌旁黏膜（P）和胃癌（T）同时与正常胃黏膜比较，有71个相同的基因表达差异。其中表达上调（癌旁上皮SLR〉1．5）有61个，表达下调（癌旁上皮SLR〈-1．5）有10个。71个同时出现癌旁黏膜和胃癌的基因在染色体定位，发现19号染色体异常基因最多有11个；其次是1、2、16、17号染色体，分别是6个；5、14、22号和Y染色体未发现异常的基因。结论 71个癌旁黏膜与胃癌同时出现、表达相同的基因可能与早期胃癌的演化有关。酶和酶调控子活性、核酸结合活性、信号传导活性和蛋白结合活性4大类相关基因是研究胃癌发生的重要基因。19号染色体及1、2、16、17号染色体是研究胃癌发生的重要基因位点。     

胃癌BRCA1基因D17S579位点遗传不稳定性与临床病理关系的研究

研究表明基因的微卫星不稳定性（microsatelliteinstability,MSI）和杂合性缺失（loss of heterozygosity,LOH）可能是引起肿瘤发生的重要因素.中国人胃癌BRCA1基因.的遗传不稳定性研究鲜见报道.本实验对中国人胃癌患者17号染色体D17S579位点的MSI、LOH和BRCA1蛋白表达进行检测,为揭示BRCA1基因作用机制提供实验依据.     

睾丸肿瘤染色体杂合性丢失及微卫星不稳定性研究

目的　探讨睾丸肿瘤的发生、发展与微卫星不稳定性（ ＭＳＩ） 及染色体杂合性丢失（ＬＯＨ）的关系。　方法　利用ＰＣＲＭＩＡ技术,选用８ 种微卫星标记位点,分析２２ 例睾丸肿瘤ＬＯＨ及ＭＳＩ的变化。　结果　２２ 例中１４ 例出现ＬＯＨ（６４％ ）。定位于第９ 号染色体上的Ｄ９Ｓ６３ 位点的ＬＯＨ 发生率最高为４５％ ,次为第５ 号染色体上的ＡＰＣ位点（４３ ％） 及第１８ 号染色体上的ＤＣＣ位点（２５ ％） ;８ 例表现为ＭＳＩ（３６ ％） ,１７ 例表现为ＬＯＨ 或（ 和）ＭＳＩ,总阳性率为７７％ 。　结论　染色体９ｑ 及５ｑ 上存在的抑癌基因的失活以及微卫星不稳定性改变可能在睾丸肿瘤的发生发展中起重要作用。     

比较基因组杂交研究原发性胃癌的遗传学变异

目的研究原发性胃癌发生、发展过程中遗传学变异情况。方法采用比较基因组杂交分析23例原发性胃癌基因组DNA拷贝数变化情况。结果原发性胃癌患者平均每例肿瘤染色体臂变化数为7.52,扩增数要明显多于丢失数(5.38∶2.14)。DNA拷贝数扩增常见于8q(9/21,42.9%)、20q(9/21,42.9%)、17q(8/21,38.1%)、3q(7/21,33.3%)、7q(7/21,33.3%)、11q(6/21,28.6%)、13q(6/21,28.6%)、1q(5/21,23.8%)、20p(5/21,23.8%);DNA拷贝数缺失常见于17p(7/21,33.3%)、18q(6/21,28.6%)、5q(5/21,23.8%)、8p(5/21,23.8%)、9p(5/21,23.8%)。结论原发性胃癌中存在多条染色体拷贝数的变化,由此引起相应癌基因的扩增和抑癌基因的丢失可能参与了胃癌的发生和发展。     

遗传性弥漫型胃癌

1964年Jones报告新西兰Maori族的一个家族几代人中胃癌高发病率,他推测其中可能有遗传因素,这种推测在1998年得到了证实。Guilford等在对一个含25例胃癌患者的Maori血统的家系进行遗传学连锁分析中首次发现:胃癌的发生为常染色体显性遗传;同时在人类第16号染色体长臂,介于D16S3019和D16S313之间的,一个长约9分摩的片段始终伴随着疾病的表型出现,由此找到了一个与家族性胃癌相关的基因——E-Cadherin基因。这些突变的发现进一步证实了E-Cadherin基因与胃癌家系的相关性。这种由于基因突变遗传发生的胃癌即遗传性弥漫型胃癌(hereditary d…     

胃癌相关新基因GDDR的研究

目的 明确胃癌下调全长新基因GDDR cDNA的特性、GDDR染色体DNA的结构及其基因调控区,判断其转录因子及结合部位,探讨GDDR的功能作用。方法 地高辛标记行GDDR mRNA的胃黏膜原位杂交定位,多种组织cDNA文库中扩增GDDR的表达;分析GDDR基因结构、染色体定位;研究GDDR基因DNA 5’侧翼区调控GDDR cDNA的启动子区和转录因子及其结合部位。观察GDDR对胃癌7901细胞系的影响。结果 GDDR位于正常胃黏膜上皮细胞胞内,GDDR仅在胃组织中表达;GDDR的基因组DNA总长7739bp,启动子在转录起始位点的 96bp,和-419bp;GDDR与胃组织特异、胃癌相关基因CA11在染色体DNA相差仅仅21701bp,即均位于2pl 3．3,其基因组DNA结构与cDNA结构极为相似,但其调控区序列不同,转录因子及其结合部位区别较大。编码蛋白前有一跨膜肽区结构的GDDR,与分泌蛋白CA11为同源蛋白,均为新的BRICHOS家族成员。生长曲线及MTT检测均表明,GDDR显著抑制胃癌7901细胞的生长。结论 具有胃组织特异性的胃癌下调全长新基因GDDR位于正常胃黏膜细胞,能显著抑制胃癌细胞的生长,是人类除CA11外又一与胃癌相关的新基因。     

Familial and sporadic renal oncocytomas--a comparative molecular-genetic analysis.

OBJECTIVES: Genetic causes of sporadic and familial renal oncocytomas are not known. We analyzed these tumors genetically in order to detect tumor-specific chromosome alterations. METHODS: DNA from 26 sporadic and 31 familial renal oncocytomas were screened by comparative genomic hybridization according to standard protocols including degenerate oligonucleotide-primed PCR. RESULTS: Chromosome alterations were detected in 19/26 sporadic (73%) and in 4/31 familial renal oncocytomas (13%). Partial or complete losses of chromosome 1 were most frequently found in both sporadic (15/26) and familial tumors (2/4). Less frequently, loss of chromosome 14 (3/26) was detected in sporadic renal oncocytomas as well as losses of 2p, 2q, 4q, 10 and 18 and gains of 1q and 17q in individual sporadic tumors. Inter-tumor variation of chromosome aberrations was prominent in 1 patient, where 1 tumor showed gains of chromosomes 5, 6q, 7, 10p, 12 and 13q, whereas the second tumor exhibited gains of chromosomes 5 and 7 and loss of 10q. In contrast to sporadic renal oncocytomas, most familial tumors (87%) were devoid of chromosome instabilities. CONCLUSION: Our results demonstrate that partial or complete loss of chromosome 1 is the most common alteration in renal oncocytomas, sporadic and familial. However, chromosome changes are much rarer in familial than in sporadic renal oncocytomas.     

WIF-1基因启动子区甲基化在胃癌组织中的检测

目的检测胃癌组织及正常胃黏膜组织中WIF-1基因启动子区甲基化情况,并结合临床病理资料,探讨WIF-1基因甲基化状态与胃癌发生、发展的相关性。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应（methylation—specinc PCR,MSP）检测30例胃癌组织、30例癌旁组织及10例正常胃黏膜组织中WIF-1基因启动子区甲基化情况。结果胃癌组织、癌旁组织及正常对照组WIF-1基因启动子甲基化阳性率分别为76．6％（23／30）、13．3％（4／30）和0．0％（0／10）,胃癌组织甲基化率明显高于后两组,差异有统计学意义（均P〈0．05）。胃癌组织中不同年龄、性别、分化程度的WIF-1基因甲基化阳性率差异均无统计学意义;有淋巴结转移组甲基化率（90％）高于无淋巴结转移组甲基化率（50％）,差异有统计学意义（P〈0．05）;而Ⅲ～Ⅳ期和Ⅰ～Ⅱ期胃癌组织中WIF-1基因甲基化阳性率分别为90．5％与44．4％,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论WIF-1基因启动子区发生高甲基化导致其表达下调或缺失与胃癌的发生、发展以及临床病理特征有着密切的关系,通过MSP法检测胃癌组织及正常组织的甲基化率,为胃癌的早期诊断及综合治疗寻找新的靶点。     

miR-124a基因甲基化状态在人胃癌组织中的作用

目的探讨人胃癌组织中hsa-miR-124a基因启动子区的DNA甲基化状态与Rb和CDK6蛋白表达及临床病理因素的关系。方法用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测手术切除的30例胃癌及相应癌旁组织的hsa-miR-124aDNA甲基化状态：采用免疫组织化学染色研究Rb和CDK6蛋白在胃癌组织中的表达情况。结果胃癌组织中hsa-miR-124a总体甲基化率为73．3％（22／30）,明显高于癌旁组织的10．0％（3／30）（P〈0．05）,其甲基化状态与肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移、侵犯程度等临床病理因素有关（P〈0．01）。hsa-miR-124a甲基化与Rb蛋白和CDK6蛋白表达之间呈正相关（P〈0．05）。结论胃癌组织中hsa-miR-124a处于高甲基化状态,这种高甲基化可能通过增强Rh及CDK6蛋白的表达来促进胃癌的恶性增殖。     

Evidence for a new tumor-suppressor gene involved in gastrointestinal malignancies

Inactivation or loss of tumor-suppressor genes is believed to lead to the development or progression of malignancies. To determine whether a tumor-suppressor gene is located on chromosome 8, DNA was extracted from tumor and normal tissue of colorectal, gastric, and pancreatic specimens, and allele loss was investigated by Southern hybridization techniques with the chromosome 8 probe D8S7. Twenty-five percent of pancreatic carcinomas, 50% of gastric carcinomas, and 50% of colorectal carcinomas were found to have lost an allele on chromosome 8. These findings suggest the presence of a tumor-suppressor gene on chromosome 8, which is involved in colorectal carcinoma, gastric carcinoma, and pancreatic carcinoma. Definition of the frequency with which this tumor-suppressor gene is involved in gastrointestinal malignancies will await the study of many patients who are classified as informative and the use of multiple probes for chromosome 8.     

DCC基因201密码子突变与胃癌相关性的研究

目的 :研究胃癌组织中是否存在大肠癌缺失 (deletedincolorectalcancer,DCC)基因 2 0 1密码子点突变及其与胃癌临床病理因素的相关性。方法 :取 5 4例胃癌病人的胃癌组织和癌旁黏膜组织及非胃癌病人的正常胃黏膜组织标本 30份 ,行PCR +限制性片段长度多态性 (restrictionfragmentlengthpolymorphism ,RFLP)分析。 结果 :胃癌组织、癌旁黏膜及正常胃黏膜中DCC基因 2 0 1密码子点突变率分别为 5 9.3%、5 3.7%和 10 %,胃癌组织与癌旁黏膜两者的突变率都明显高于正常胃黏膜 (P     

胃癌DNA甲基化和组蛋白H3K27三甲基化基因修饰的相关性

目的 探讨DNA甲基化和组蛋白H3K27三甲基化在胃癌肿瘤细胞对多基因修饰的相关性.方法 收集我科2007年10月至2008年01月间8例胃癌患者肿瘤组织和正常胃黏膜组织,采用染色质免疫共沉淀联合芯片技术(ChIP-chip)对两种组织细胞在全基因组范围内的组蛋白H3K27三甲基化检测后挑选出4个阳性基因.随后采用染色质免疫共沉淀-实时定量聚合酶联反应(ChIP-qPCR)验证芯片结果,采用MeDIP-qPCR方法检测阳性基因的DNA甲基化水平.结果 ChIP-qPCR验证4个阳性基因结果与CpG岛芯片检测结果一致,胃癌肿瘤细胞4个基因DNA甲基化水平与正常胃壁细胞比较差异有统计学意义(P值均<0.05).结论 和正常胃黏膜组织细胞比较,胃癌肿瘤细胞多个基因DNA甲基化和组蛋白H3K27三甲基化存在显著改变,DNA甲基化和组蛋白H3K27三甲基化基因修饰存在相互作用.     

胃癌DNA甲基化和组蛋白H3K27三甲基化基因修饰的相关性

目的 探讨DNA甲基化和组蛋白H3K27三甲基化在胃癌肿瘤细胞对多基因修饰的相关性.方法 收集我科2007年10月至2008年01月间8例胃癌患者肿瘤组织和正常胃黏膜组织,采用染色质免疫共沉淀联合芯片技术(ChIP-chip)对两种组织细胞在全基因组范围内的组蛋白H3K27三甲基化检测后挑选出4个阳性基因.随后采用染色质免疫共沉淀-实时定量聚合酶联反应(ChIP-qPCR)验证芯片结果,采用MeDIP-qPCR方法检测阳性基因的DNA甲基化水平.结果 ChIP-qPCR验证4个阳性基因结果与CpG岛芯片检测结果一致,胃癌肿瘤细胞4个基因DNA甲基化水平与正常胃壁细胞比较差异有统计学意义(P值均<0.05).结论 和正常胃黏膜组织细胞比较,胃癌肿瘤细胞多个基因DNA甲基化和组蛋白H3K27三甲基化存在显著改变,DNA甲基化和组蛋白H3K27三甲基化基因修饰存在相互作用.     

胃癌DNA甲基化和组蛋白H3K27三甲基化基因修饰的相关性

目的 探讨DNA甲基化和组蛋白H3K27三甲基化在胃癌肿瘤细胞对多基因修饰的相关性.方法 收集我科2007年10月至2008年01月间8例胃癌患者肿瘤组织和正常胃黏膜组织,采用染色质免疫共沉淀联合芯片技术(ChIP-chip)对两种组织细胞在全基因组范围内的组蛋白H3K27三甲基化检测后挑选出4个阳性基因.随后采用染色质免疫共沉淀-实时定量聚合酶联反应(ChIP-qPCR)验证芯片结果,采用MeDIP-qPCR方法检测阳性基因的DNA甲基化水平.结果 ChIP-qPCR验证4个阳性基因结果与CpG岛芯片检测结果一致,胃癌肿瘤细胞4个基因DNA甲基化水平与正常胃壁细胞比较差异有统计学意义(P值均<0.05).结论 和正常胃黏膜组织细胞比较,胃癌肿瘤细胞多个基因DNA甲基化和组蛋白H3K27三甲基化存在显著改变,DNA甲基化和组蛋白H3K27三甲基化基因修饰存在相互作用.