柠檬酸钠联合三氧化二砷体外抗人胃癌细胞及其作用机制

目的探讨柠檬酸钠（Citrate）与三氧化二砷（As2O3）联合应用对胃癌细胞的凋亡及其作用机制。方法用Citrate（终浓度为5 mmol/L）和（或）不同浓度的As2O3（终浓度依次为5、10 μmol/L）处理体外传代培养的胃癌细胞株SGC-7901和BGC-803。流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期的变化;RT-PCR法观察凋亡相关基因Bcl-2、Mcl-1表达的变化。结果Citrate与As₂O3联合应用相对于单用Citrate或As₂O3可显著提高诱导胃癌细胞凋亡率（P<0.05）;与空白组相比,用药后 G0／G₁期细胞比例下降,G₂/M期细胞比例上升,细胞周期阻滞于G₂/M期,抗凋亡基因Bcl-2、Mcl-1表达明显下降。结论Citrate与As2O3联合应用具有协同抗胃癌细胞的作用,其机制可能与细胞周期阻滞、增强诱导胃癌细胞凋亡以及调控凋亡相关基因的表达有关。     

外源性FHIT基因对多柔比星诱导胃癌MGC-803细胞凋亡的影响

目的：将脆性组氨酸三联体（fragile histidine triad,FHIT）基因导入该基因表达缺失的人胃癌细胞株MGC-803,探讨FHIT基因表达对多柔比星诱导胃癌细胞凋亡的影响。方法：将载有人外源性FHIT基因的真核表达质粒pRcCMV-FHIT用脂质体介导转入FHIT表达缺失的胃癌细胞MGC-803,筛选阳性克隆,同时以空载体pRcCMV转染的胃癌细胞及胃癌细胞株作为对照;以多柔比星作用于3组细胞,用MTT法测定细胞增殖的抑制率,倒置显微镜下观察细胞形态变化,用丫啶橙荧光染色与流式细胞术检测多柔比星处理前后各组胃癌细胞的凋亡率,流式细胞术检测细胞周期的变化。结果：通过流式细胞术检测,经多柔比星处理后,转染FHIT基因的MGC-803细胞凋亡水平（40.66%）与空质粒转染细胞（13.94%）及胃癌细胞（15.81%）相比明显增高,存在显著性差异（P〈0.01）,FHIT基因与多柔比星有轻度的协同促凋亡作用（P〈0.05）;同时FHIT基因转染后的胃癌细胞生长周期出现了明显的G0/G1期阻滞（74.43%vs56.30%、52.30%）;丫啶橙染色亦见转染FHIT基因的胃癌细胞凋亡数明显增多,且细胞的增殖抑制率存在浓度和时间依赖性。结论：外源性FHIT基因表达与多柔比星协同促进胃癌MGC-803细胞凋亡,FHIT基因可提高胃癌细胞对多柔比星的敏感性。     

抑制上游转录因子2的表达对胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨上游转录因子2（USF2）对人胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡的影响。方法 使用Lipofectamine?3000转染试剂将USF2 siRNA转染至BGC-823细胞（siRNA-USF2组）中,同时设空白对照组和阴性对照组（siRNA-NC组）。实时荧光定量PCR法检测转染后的BGC-823细胞中USF2mRNA的表达。Western blot实验检测转染后BGC-823细胞中USF2蛋白的表达。CCK-8和平板克隆实验检测每组BGC-823细胞的增殖能力和克隆形成能力。流式细胞术检测各组胃癌细胞的凋亡情况。Western blot实验检测各组BGC-823细胞增殖相关蛋白增殖细胞核抗原（PCNA）及凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达水平。结果 与空白对照组和siRNA-NC组相比,siRNA-USF2组细胞USF2 mRNA和蛋白表达显著降低（均P<0.05）。转染后72 h,siRNA-USF2组的吸光度值低于空白对照组（P<0.05）。与空白对照组和siRNA-NC组比较,siRNA-USF2组BGC-823细胞中的克隆数明显较少（P<0.05）。空白对照组、siRNA-NC组和siRNA-USF2组胃癌BGC-823细胞的凋亡率差异具有统计学意义（P<0.05）。与空白对照组和siRNA-NC组比较,siRNA-USF2组BGC-823细胞中PCNA和Bcl-2蛋白表达减少,Bax蛋白表达增加（P<0.05）。结论 抑制USF2表达能够抑制人胃癌细胞的增殖,诱导其凋亡。USF2抑制剂可能在胃癌治疗中具有重要价值。     

piR-9994对胃癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其机制

目的 探讨piR-9994对胃癌细胞生物学行为的影响及可能机制。方法 qRT-PCR检测piR-9994在胃癌细胞系（MGC803和AGS）和正常胃上皮细胞（GES-1）中的表达情况;构建过表达和敲低piR-9994的MGC803胃癌细胞株,MTT、克隆形成实验检测piR-9994表达变化对细胞增殖能力的影响,划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力。qRT-PCR和Western blot检测细胞增殖和EMT相关基因表达。结果 piR-9994在胃癌细胞MGC803中表达水平显著高于正常人胃黏膜上皮细胞GES-1（P<0.05）。piR-9994过表达促进胃癌细胞增殖、侵袭和转移,敲低则作用相反。piR-9994表达与细胞周期密切相关,特别是S期。piR-9994过表达促进增殖相关基因PCNA、CCND1、Bcl-2表达,抑制凋亡基因c-PARP表达,促进EMT相关基因N-cadherin、MMP7、Twist和Vimentin表达及抑制E-cadherin表达;敲低则作用相反。结论 piR-9994异常表达影响胃癌细胞增殖、侵袭、转移及EMT进程。piR-9994可能是胃癌新的标志物和治疗靶点。     

HMGB1基因沉默促进多柔比星诱导的胃癌BGC-823细胞自噬及调亡

目的 探讨高迁移率族蛋白l（high-mobility group box 1,HMGBl）基因沉默对化疗药物多柔比星（doxorubicin, DOX）诱导BGC-823胃癌细胞发生自噬和凋亡的影响。方法 MTT、Western blotting和激光共聚焦显微镜观察方法分别检测DOX对BGC-823细胞增殖及微管相关蛋白轻链3- I （microtubule light chain- I,LC3I）、LC3II表达和自噬小体形成的影响。构建靶向HMGB1的shRNA载体pSuper-shHMGBl及其对照载体pSuper-shNC并转染BGC-823胃癌细胞,建立HMGBl稳定沉默的细胞系。DOX处理不同质粒转染组的BGC-823胃癌细胞,激光共聚焦显微镜观察HMGBl沉默对DOX诱导的自噬小体形成的影响,MTT法、流式细胞术分别检测对细胞增殖和凋亡的影响,Western blot检测对自噬及凋亡相关蛋白（HMGB1, LC3, Bcl-2,Bcl-XL, Mcl-1 and cleaved caspase-3）表达的影响。结果 DOX可上调LC3-II蛋白的水平和促进细胞自噬体的形成(P<0.001)。与对照组相比,HMGBl基因沉默可降低DOX诱导的自噬作用(P<0.001),并促进胃癌细胞发生凋亡[12.37±2.84 % vs 46.12±3.15%, P<0.05],上调激活型caspase-3的表达水平。进一步分析发现,DOX诱导胃癌细胞发生自噬时,抗凋亡蛋白骨髓细胞白血病蛋白1（Mcl-1）的降解增加,而Bcl-2和Bcl-XL表达无明显变化;HMGBl基因沉默可抑制DOX诱导的Mcl-1降解。结论 DOX可诱导胃癌细胞发生自噬;HMGB1基因沉默有助于逆转BGC-823胃癌细胞对DOX耐药性,促进胃癌细胞发生凋亡。     

ELMOD2对胃癌细胞MGC803 恶性生物学行为的影响

［摘要］ 目的：探讨ELMOD2 过表达对胃癌细胞MGC803 恶性生物学行为的影响,并初步研究其相关的分子机制。方法：将GV141-ELMOD2 表达载体转染人胃癌MGC803 细胞,qPCR 及WB实验检测MGC803 细胞中ELMOD2 mRNA和蛋白的表达,CCK-8 法检测MGC803 细胞增殖能力,流式细胞术检测MGC803 细胞凋亡情况,Transwell 法检测MGC803 细胞迁移能力,WB实验检测细胞中PCNA、BAX 和Bcl-2 以及Vimentin 蛋白的表达。结果：ELMOD2 表达载体转染后,MGC803 细胞中ELMOD2 mRNA和蛋白表达水平均显著提高（P<0.05）。ELMOD2 过表达可使MGC803 细胞增殖、迁移能力显著提高,凋亡率显著降低（P<0.05 或P<0.01）;细胞中PCNA、Vimentin、Bcl-2 蛋白水平增高,BAX蛋白水平降低（P<0.05 或P<0.01）。结论：ELMOD2 过表达可促进MGC803 细胞增殖、迁移,抑制细胞凋亡,上述效应可能部分通过提高PCNA、Vimentin、Bcl-2 蛋白水平及降低BAX蛋白水平实现。     

HMGB1 基因沉默促进多柔比星诱导的胃癌BGC-823细胞自噬及凋亡

目的：探讨高迁移率族蛋白1（high-mobility group box 1, HMGB1 ）基因沉默对化疗药物多柔比星（doxorubicin, DOX）诱导BGC-823胃癌细胞发生自噬和凋亡的影响。方法：MTT、Western blotting和激光共聚焦显微镜分别检测DOX对BGC-823细胞增殖及微管相关蛋白轻链3-Ⅰ （microtubule light chain-3Ⅰ,LC3Ⅰ）、LC3Ⅱ表达和自噬小体形成的影响。构建靶向 HMGB1 的shRNA载体pSuper-shHMGBl及其对照载体pSuper-shNC并转染BGC-823胃癌细胞,建立 HMGB1 稳定沉默的细胞系。DOX处理不同质粒转染组的BGC-823胃癌细胞,激光共聚焦显微镜观察 HMGB1 沉默对DOX诱导的自噬小体形成的影响,MTT法、流式细胞术分别检测对细胞增殖和凋亡的影响,Western blotting检测对自噬及凋亡相关蛋白（HMGB1、LC3、Bcl-2、Bcl-XL、Mcl-1和激活型caspase-3）表达的影响。结果：DOX可上调BGC-823细胞中LC3-Ⅱ蛋白的水平和促进细胞自噬体的形成（ P <0.01 ）。与对照组相比, HMGB1 基因沉默可减少DOX诱导的胃癌细胞自噬\[(19.33±2.96)% v (71.67±3.38)%, P <0. 01 \],促进胃癌细胞发生凋亡\[（46.12±3.15）% vs （12.37±2.84）%, P <0.05\],上调激活型caspase-3的表达水平。进一步分析发现,DOX诱导胃癌细胞发生自噬时,Mcl-1的降解增加,而Bcl-2和Bcl-XL表达无明显变化; HMGB1 基因沉默可抑制DOX诱导的Mcl-1降解。结论：DOX可诱导BGC-823胃癌细胞发生自噬, HMGB1 基因沉默有助于逆转胃癌细胞对DOX的耐药性,促进胃癌细胞发生凋亡。     

复方苦参注射液诱导胃癌细胞株MGC803增殖抑制和细胞凋亡的实验研究

目的:观察复方苦参注射液在体外抑制人胃癌细胞株MGC803增殖和诱导其凋亡的生物学效应,并对其分子机制作初步探讨.方法:分别采用不同浓度梯度的复方苦参注射液干预胃癌细胞MGC803,通过MTT比色法检测复方苦参注射液对该细胞系生长增殖的影响.TUNEL法分析经1、2、4 mg/mL复方苦参注射液作用24 h后的MGC803细胞凋亡率.Western blot法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达情况.结果:复方苦参注射液在体外能明显抑制人胃癌细胞株MGC803的增殖,且呈浓度、时间依赖性(P<0.001).TUNEL法检测实验组细胞凋亡率均明显高于未加复方苦参注射液的空白对照组(P<0.05);West?ern blot分析表明复方苦参注射液能下调Bcl-2蛋白表达,降低蛋白Bcl-2/Bax比值,并且可以促使Caspase-3原蛋白发热活化(P<0.05).结论:复方苦参注射液具有体外抑制胃癌细胞增殖的作用,并能诱导其凋亡,其机制可能与Bcl-2/Bax比值降低导致Cas?pase-3活化相关.     

miR-421在胃癌中的表达及对BGC-823细胞增殖的作用

目的探讨miR-421在胃癌细胞中的表达水平及对BGC-823胃癌细胞增殖的作用。方法利用PCR方法分析miR-421在胃癌组织细胞及多种胃癌细胞株中的表达水平,并通过RNA转染技术将miR-421 mimics与miR-421 inhibitors转染BGC-823胃癌细胞;通过CKK-8试剂盒检测转染后BGC-823细胞的增殖情况。结果 miR-421在胃癌组织细胞及多种胃癌细胞株中均表达增强（P〈0.05）;miR-421 mimics转染BGC-823后,癌细胞增殖能力增强（P〈0.05）,而miR-421 inhibitors转染的BGC-823细胞则增殖力受到明显抑制（P〈0.05）。结论 miR-421在胃癌组织细胞及多种胃癌细胞株中均过表达,而miR-421可能直接或间接参与调控BGC-823胃癌细胞的增殖。     

4-1BB基因在不同分化胃癌细胞株中的表达

目的：研究共刺激因子4-1BB在人胃高分化腺癌细胞株MKN-28、人胃中分化腺癌细胞株SGC-7901、人胃低分化腺癌细胞株BGC-823、人胃粘液腺癌细胞株MGC-803中的表达及其生物学意义。方法：用RT-PCR法测定胃癌细胞株中4-1BB mRNA表达;免疫细胞化学法测定胃癌细胞株中4-1BB蛋白表达;MTT法测定人淋巴细胞对胃癌细胞的体外杀伤活性;ELISA法检测人淋巴细胞与胃癌细胞共培养上清液中IL-2、IL-10、TNF-α的含量。结果：RT-PCR结果示4-1BB mRNA表达率从高到低依次为：MGC-803（77.30%）、BGC-823（71.68%）、SGC-7901（40.06%）、MKN-28（37.65%）。免疫细胞化学结果显示4-1BB着色程度由深到浅依次为：MGC-803、BGC-823、SGC-7901、MKN-28。MTT结果显示各时间段（24、48、72h）不同效靶比（10∶1,20∶1,40,∶1）下,人淋巴细胞对胃癌细胞的体外杀伤活性由高到低的顺序为：MKN-28、SGC-7901、BGC-823、MGC-803。ELISA结果显示在各效靶细胞比下,人淋巴细胞与胃癌细胞共培养上清液中IL-2、TNF-α的含量由高到低的顺序均为：MKN-28、SGC-7901、BGC-823、MGC-803。而IL-10的含量由高到低的顺序为：MGC-803、BGC-823、SGC-7901、MKN-28。结论：人胃癌细胞株MKN-28、SGC-7901、BGC-823、MGC-803中4-1BB基因的mRNA和蛋白均有表达,且胃癌细胞株的恶性程度越高其4-1BB表达水平越高;淋巴细胞对低表达4-1BB胃癌细胞的杀伤力较高;提示4-1BB可能通过抑制细胞因子TNF-α、IL-2和促进细胞因子IL-10的产生调节肿瘤免疫。     

MEMO1共结合IGF-IR介导胃癌细胞侵袭转移

目的:探讨MEMO1（mediator of ErbB2-driven cell motility 1）调控IGF-IR（insulin-like growth factor-I receptor）介导胃癌侵袭转移的分子机制,为临床治疗提供潜在靶点。方法:选取五种不同分化程度胃癌细胞系（MKN-7、NCI-N87、MGC-803、BGC-823、MKN-74）,Western blot检测MEMO1、IGF-IR和E-cad表达差异;Transwell比较五种胃癌细胞系迁移能力;选取MEMO1/IGF-IR高表达细胞系MGC-803,瞬时敲除MEMO1或IGF-IR基因,Western blot检测EMT标志物表达差异;IP实验检测MEMO1与IGF-IR间相互作用;TCGA数据库分析胃癌组织MEMO1和IGF-IR mRNA表达水平与患者预后的关系。结果:基础状态下五种胃癌细胞IGF-IR与MEMO1的表达呈显著正相关,并且两种蛋白的表达强度与胃癌细胞EMT相关;五种胃癌细胞迁移能力MKN-7相似文献   

Bmi-1 在正常胃组织和胃癌及其癌前病变中的表达及意义*

目的:检测Bmi-1 在正常胃粘膜、胃癌及癌前病变中的表达,分析探讨Bmi-1 与核增殖抗原ki-67和凋亡抑制基因Bcl- 2 之间的关系,以及Bmi-1+细胞与Bcl- 2+/ki- 67-细胞分布之间的关系,探讨其与胃癌临床病理因素的关系及意义。方法:采用免疫组化Envision法检测162 例胃癌及配对正常胃粘膜中Bmi-1 和ki-67的表达,采用免疫组化双染法观察Bcl- 2+/ki- 67-细胞的分布。结果:胃癌组织中Bmi-1 表达（52.5%）明显高于正常胃粘膜（21.6%）,P<0.05;胃癌中Bmi-1 表达与Lauren 分型、Borrmann 分型和胃癌临床病理分期有关（P<0.05）。 胃癌中ki-67表达与Borrmann 分型有关（P<0.05）。 Bcl- 2 在胃癌中的表达与胃癌Lauren 分型有关（P<0.05）。 在胃癌组织和肠化生粘膜中,Bmi-1 与Bcl- 2 呈正相关（P<0.05）。 结论:胃癌及其癌前病变中Bmi-1 表达可能与细胞增殖、凋亡和癌变有关。在胃癌和肠化生粘膜中Bmi-1 和Bcl- 2 表达的相关性以及Bmi-1+细胞和Bcl- 2+/ki- 67-细胞分布之间的关系提示Bmi-1 与胃癌的发生密切相关。      

RNA干扰沉默Bmi-1基因对胃癌细胞BGC-823生长及顺铂敏感性作用的研究

目的:探讨Bmi-1基因对胃癌细胞BGC-823增殖、侵袭及顺铂耐药的作用及可能机制。方法:采用LipofectamineTM2000向胃癌细胞BGC-823随机转染成功构建靶向沉默Bmi-1表达的siRNA,分别利用Western Blot、CCK-8、Transwell小室等方法对转染Bmi-1 siRNA的BGC-823细胞的增殖、侵袭能力及顺铂耐药进行检测。结果:转染Bmi-1 siRNA后,BGC-823细胞的增殖、侵袭能力显著下降（P<0.05）,而且顺铂敏感性显著提高。结论:Bmi-1基因与胃癌BGC-823细胞系的增殖、侵袭及顺铂耐药相关,可能是胃癌治疗的靶点。     

异隐丹参酮对胃癌细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的 探讨异隐丹参酮（ICTS）对胃癌BGC-823和SGC-7901细胞增殖、周期、凋亡的影响及可能机制。方法 体外培养胃癌细胞系BGC-823、SGC-7901,采用0、5、10、20 μmol／L ICTS处理24、48、72 h后, CCK-8法检测细胞的增殖抑制率;确定ICTS抑制BGC-823和SGC-7901细胞的最佳浓度和最佳作用时间后,流式细胞术检测其细胞周期和凋亡率。Western blotting检测ICTS处理后胃癌细胞中Cyclin D1、Bcl-2、p53、p21蛋白的表达。结果 0、5、10、20 μmol／L ICTS处理BGC-823细胞24 h的增殖抑制率分别为（0.789±0.048）％、（16.74±1.55）％、（33.58±2.26）％、（54.62±2.61）％,差异具有统计学意义（P＜0.05）;0、5、10、20 μmol／L ICTS 处理SGC-7901细胞24 h的增殖抑制率分别为（-0.184±0.023）％、（12.76±1.73）％、（32.95±2.47）％、（53.80±2.65）％,差异具有统计学意义（P＜0.05）。20 μmol／L ICTS 处理BGC-823细胞24、48、72 h的增殖抑制率分别为（54.62±2.61）％、（55.08±2.35）％、（59.72±2.53）％,差异无统计学意义（P＞0.05）;20 μmol／L ICTS 处理SGC-7901细胞24、48、72 h的增殖抑制率分别为（53.80±2.65）％、（55.76±2.47）％、（61.83±2.82）％,差异无统计学意义（P＞0.05）。20 μmol／L ICTS处理BGC-823、SGC-7901细胞24 h后G0／G1期细胞比例为（78.34±7.13）％和（79.57±7.34）％,均高于对照组,差异具有统计学意义（P＜0.05）。ICTS处理组BGC-823、SGC-7901凋亡率分别为（24.78±3.42）％和（28.76±4.21）％,均高于对照组,差异具有统计学意义（P＜0.05）。20 μmol／L ICTS处理BGC-823、SGC-7901细胞24 h后Cyclin D1和Bcl-2蛋白表达量均显著低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;p53和p21蛋白表达量显著高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 ICTS通过增加p53、p21表达,降低Cyclin D1和Bcl-2表达,进而抑制细胞增殖,增加细胞G0／G1阻滞和凋亡,发挥抗胃癌的作用。     

沉默EZH2对胃癌MKN-28细胞增殖和侵袭的影响

目的:探讨EZH2对胃癌MKN-28细胞生物学的影响.方法:siRNA干扰EZH2;MTT法检测沉默EZH2后细胞的增殖情况;Transwell小室观察细胞的侵袭情况;Realtime-PCR检测细胞中相关基因的表达情况.结果:siRNA有效干扰了EZH2的表达;沉默EZH2细胞组的细胞增殖明显受到抑制(P<0.05);细胞的侵袭情况,沉默EZH2明显抑制了细胞的侵袭,与其他两组比较差异显著(P<0.05);siEZH2细胞组E-cadherin mRNA、β-catenin mRNA的表达水平高于其他两组,Bcl-2 mRNA的表达水平低于其他两组(P<0.05).结论:沉默EZH2抑制了胃癌MKN-28细胞的增殖,抑制了细胞的侵袭和抗凋亡基因的表达,可能是通过调控E-cadherin的表达水平和Wnt信号途径实现的,为寻找有效的靶点和肿瘤的靶向治疗提供一定的理论依据.