非小细胞肺癌胸腔积液与配对肿瘤组织中EGFR基因突变检测的比较

目的:探讨非小细胞肺癌胸腔积液与配对肿瘤组织标本中EGFR基因突变检测结果的一致性,评价胸腔积液标本检测EGFR基因突变的应用价值.方法:收集非小细胞肺癌患者胸腔积液与配对肿瘤组织样本72例,采用ARMS方法,检测样本中EGFR基因第18~21外显子突变情况.结果:细胞学样本和组织学样本中EGFR基因突变阳性率分别为48.61%和51.39%,两者差异无统计学意义(P>0.05),二者一致率为92.11%,不一致率为7.89%.结论:二者的一致率较高,恶性胸水可以作为无法获得肿瘤组织的晚期非小细胞肺癌EGFR基因检测的有效样本.     

扩增耐突变系统对非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变的检测

目的:探讨扩增耐突变系统检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者肿瘤组织EGFR基因突变的应用价值.方法:选取70例NSCLC患者的病理切片,提取基因组DNA,分别使用EGFR外显子19和21突变检测试剂盒检测EGFR外显子19和21的突变情况,并结合临床资料进行分析.结果:70例肺癌组织中检出EGFR基因突变29例,基因突变检出率为41.4％,其中外显子19突变20例(69.0％),外显子21突变9例(31.0％);腺癌基因突变23例(79.3％),检出率为51.1％;鳞癌基因突变6例(20.7％),检出率为24.0％;肺泡癌基因突变4例(13.8％),检出率为66.7％.女性、不吸烟和肺腺癌患者的EGFR 2个外显子基因突变率均较高,P＜0.01.结论:NSCLC患者EGFR基因突变主要表现为外显子19和21的突变,女性、肺腺癌和不吸烟的患者多见.     

维吾尔族肺腺癌患者的EGFR基因突变分析

背景与目的 表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)是一种跨细胞膜糖蛋白,属于受体型酪氨酸激酶家族.以吉非替尼为代表的EGFR酪氨酸激酶抑制剂对于EGFR突变的肺癌患者显示出良好的治疗效果,然而EGFR的突变率在不同民族和不同种族的人群中表现出较大差异.本研究旨在分析维吾尔族中肺腺癌患者肿瘤组织的EGFR基因突变情况,同时比较维吾尔族与汉族肺腺癌患者肿瘤组织EGFR基因突变率的差异性.方法 收集临床肺腺癌患者石蜡包埋组织标本138例,包括68例维吾尔族和70例汉族肺腺癌的样本,采用ARMS(amplification refractory mutation system,ARMS)PCR扩增方法检测EGFR基因外显子18、19、20及21的突变,x2分析对比维吾尔族和汉族肺腺癌EGFR基因突变差异.结果 138例肺腺癌患者中有43例EGFR基因突变,总突变率为31.2％,其中维吾尔族突变11例,突变率为16.2％,汉族突变32例,突变率为45.7％,维吾尔族肺腺癌EGFR突变率与汉族肺腺癌EGFR突变率比较有明显差异(P＜0.001),突变以外显子19-del和L858R为主要突变点.结论 维吾尔族中肺腺癌EGFR基因突变率为16.2％,汉族中EGFR基因突变率为45.7％,维吾尔族肺腺癌EGFR突变率明显低于我国汉族EGFR基因突变.     

肺腺癌恶性胸水中外泌体来源双链DNA的鉴定及其在EGFR突变检测中的意义

目的 探索肺腺癌恶性胸水中外泌体来源DNA(exoDNA)用于表皮生长因子受体(EGFR)突变检测的可行性。方法 采用沉淀法收集胸水外泌体，透射电镜和Western blot对外泌体进行鉴定；同时对exoDNA的稳定性和物理特征进行鉴定。收集28例初诊肺腺癌患者的胸水及对应癌组织，采用扩增阻滞突变系统方法对胸水脱落癌细胞、exoDNA及对应癌组织的EGFR基因突变进行检测，比较外泌体用于EGFR基因突变检测的敏感性、特异性和一致性。结果 电镜证实提取的外泌体符合外泌体的大小特征；Western blot印证了外泌体富含的特征蛋白CD63。exoDNA含有大片段DNA且纯度符合要求、适合EGFR突变分析；在肺腺癌初治患者的恶性胸水exoDNA中含有EGFR突变，与配对的组织和胸水脱落癌细胞相比，敏感性和特异性为100%和92.9%,符合率为96.4%(Kappa=0.929,P<0.001)。结论 肺腺癌胸水exoDNA质量好，稳定性高，是EGFR基因突变检测的另一全新的、重要的DNA来源。     

肺腺癌患者外周血中外泌体EGFR突变检测及其临床意义北大核心

目的:探讨肺腺癌患者外周血中外泌体检测EGFR的临床意义。方法:采用PCR方法检测肺腺癌患者外周血中外泌体、ctDNA和癌组织中EGFR突变情况,分析肺腺癌患者外周血外泌体中EGFR突变及其与临床病理特征的关系,比较外周血中外泌体、ctDNA和癌组织中检测EGFR突变的一致性。结果:肺腺癌患者外周血外泌体中检测EGFR突变型肺腺癌21例,EGFR野生型肺腺癌23例。肺腺癌外泌体中EGFR突变与性别、年龄、肿瘤大小、TNM分期、组织学类型及淋巴结转移情况比较差异无统计学意义(P>0.05)。肺腺癌组织检测25例EGFR突变中,外泌体中检测出EGFR突变19例,一致率为76%;19例肺腺癌组织EGFR野生型中,外泌体检测出EGFR突变2例。25例肺腺癌组织EGFR突变中,ctDNA中检测出EGFR突变16例,一致率为64%。kappa分析显示,外泌体、ctDNA与癌组织检测一致性较好,前者一致性优于后者。结论:外泌体可用于肺腺癌血浆中EGFR突变检测,对指导临床用药具有一定意义。     

HRM方法检测肺腺癌患者癌性胸水上清液EGFR基因突变的临床意义

目的:探讨应用HRM方法检测肺腺癌患者癌性胸水上清液EGFR基因突变状况及EGFR酪氨酸激酶受体抑制剂治疗的可行性。方法:收集43例肺腺癌患者癌性胸水上清液标本,提取DNA,应用HRM方法检测EGFR基因第18、19、20、21外显子突变状况。统计分析HRM方法与基因测序法检测EGFR突变率的差异。结果:43例肺腺癌患者癌性胸水上清液中,HRM法检测EGFR基因突变共17例,总突变率为39.53%,其中第19外显子突变14例,第21外显子突变3例。基因测序结果显示:EGFR突变14例,总突变率为32.56%,均为第19外显子突变。HRM方法检测第21外显子突变阳性的患者其基因测序结果均为阴性。这可能与HRM方法检测的灵敏度优于测序方法有关。两者突变率差异无统计学意义（P>0.05）。结论:对难以获取组织标本的肺腺癌患者而言,应用HRM方法检测其癌性胸水上清液,是了解其EGFR基因突变状况的可靠途径,对临床筛查靶向治疗药物具有一定的参考价值。     

中国肺腺癌患者上皮生长因子受体基因突变的研究

目的:分析我国肺腺癌患者上皮生长因子受体(EGFR)基因突变的发生率和突变类型。方法:在上海、杭州和昆明等地收集61例肺腺癌及其正常肺组织,采用PCR扩增和基因测序方法对组织DNA中EGFR外显子19~21基因突变进行分析。结果:正常肺组织中EGFR基因均为野生型,肺腺癌组织中EGFR基因突变检测率为47.5%(29/61),其中外显子19和21突变分别占突变总数的55.2%(16/29)和44.8%(13/29),外显子20未检测到突变。外显子19突变发生在第746~752位密码子,均为碱基缺失突变,有6种不同类型。外显子21突变全部是第858位密码子碱基替换突变。EGFR基因突变与患者性别和年龄无显著相关性。但昆明和上海等地患者的基因突变存在明显差异。结论:EGFR基因突变是一种肿瘤特异性的体细胞遗传改变,突变发生率约占肺腺癌总数的一半,其中以外显子19和21突变为主。我国EGFR基因突变存在地域差异。     

非小细胞肺癌患者血清EGFR基因突变循环DNA检测的临床研究

目的:探讨非小细胞肺癌患者血清EGFR基因突变循环DNA检测的临床意义。方法:选取2011年1月-2014年5月于我院接受治疗的124例非小细胞肺癌患者为研究对象,收集血清及组织标本DNA,检测DNA EGFR基因突变情况。结果:124例非小细胞肺癌患者血清EGFR基因检测结果显示:19号外显子突变11例,21号外显子突变8例,血清总检出19例,检出率为15.3%。组织样本中EGFR基因检测结果显示:19号外显子突变27例,21号外显子突变13例,血清总检出40例,检出率为32.3%。在组织样本中,79例男性EGFR基因突变检出14例,比例为17.7%;45例女性EGFR基因突变检出26例,比例为57.8%,相比具有显著性差异(P<0.05)。76例吸烟史患者检出突变16例,比例为21.1%;48例无吸烟史者检出突变24例,比例为50.0%,两者相比差异显著(P<0.05)。血清样本检测中结果与组织样本基本吻合,在性别和吸烟史方面患者基因突变有显著性差异(P<0.05),在癌症分期及类型方面无显著性差异(P>0.05)。结论:非小细胞肺癌患者血清循环DNA检测EGFR基因突变与肿瘤组织检测具有高度的一致性,这对肺癌患者的诊断、筛查和治疗有着重要的意义,为临床检测提供方便、有效的诊断方法。     

肺癌组织样本和血液样本EGFR基因检测对比研究

目的：研究肺腺癌患者不同样本EGFR基因检测结果的异同,以更精准地反映患者体内EGFR突变情况。方法：收集2016年7月—2017年12月收治的Ⅲ～Ⅳ期经病理确诊为肺腺癌患者175例,175例均有血浆样本,其中119例同时有活检组织样本,12例同时有胸水沉渣细胞样本。采用突变扩增系统(ARMS)-聚合酶链式反应(PCR)方法对收集到的活检组织样本、胸水沉渣细胞样本和血液样本进行EGFR基因检测,分析不同类型样本间结果的差异,以及与患者临床病理指标的关系。结果：联合检测的EGFR基因突变总阳性率较单纯血液样本阳性率提高了8.6%,较单纯组织样本提高了3.1%。EGFR突变在不同的性别(χ²=3.451,P=0.045)、肿瘤直径(χ²=8.911,P=0.002)、T分期(χ²=17.567,P=0.000)、淋巴结转移(χ²=18.511,P=0.000)、转移站数(χ²=3.341,P=0.047)和远处转移(χ²=10.874,P=0.001)组间的差...     

肺腺癌患者EGFR和KRAS基因突变与预后的相关性研究

目的 探讨肺腺癌患者表皮生长因子受体(EGFR)和KRAS基因突变与预后的相关性.方法 选取134例肺腺癌患者的肺腺癌组织标本,应用探针扩增阻滞突变系统在PCR仪上进行EGFR和KRAS基因突变检测,分析EGFR和KRAS基因突变与肺腺癌患者临床病理特征及预后的关系.结果 134例患者中,EGFR基因突变53例,突变率为39.55%,KRAS基因突变6例,突变率为4.48%.肺腺癌患者EGFR基因突变率与年龄、吸烟史有关(P﹤0.01).EGFR基因突变型患者的KRAS基因突变率低于EGFR基因野生型患者(P﹤0.05).EGFR基因突变型患者的无进展生存期(PFS)长于EGFR基因野生型患者(P﹤0.05),KRAS基因野生型患者的PFS长于KRAS基因突变型患者(P﹤0.05).结论 EGFR基因突变的肺腺癌患者KRAS基因更倾向于野生型,EGFR基因突变型或KRAS基因野生型的肺腺癌患者PFS更长.     

联合检测EGFR、CEA对恶性胸腔积液的诊断价值

目的:评价联合检测胸腔积液患者的胸水细胞块表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）基因拷贝数,以及胸水、血清CEA水平对良恶性胸腔积液鉴别诊断的价值。方法:应用荧光原位杂交技术（Fish法）检测恶性胸腔积液（n=35）、良性胸腔积液（n=30)组患者胸水细胞块EGFR基因拷贝数水平。采用电化学发光全自动生化分析仪检测胸水及血清中CEA水平,根据受试者工作特性曲线（ROC）选取最佳灵敏性和特异性的点作为临界值,评价CEA及联合检测EGFR基因拷贝数对良恶性胸腔积液的诊断价值。结果:35例恶性胸腔积液完成Fish检测。恶性胸腔积液中15例阴性,20例阳性,阳性率为57.1％。其中13例为EGFR基因高度多体性,7例为EGFR基因扩增。肺腺癌16例中,EGFR基因高度多体性、扩增14例,肺腺癌扩增率为87.5％;肺鳞癌14例中,EGFR基因簇状扩增3例(21.4％),点状扩增3例(21.4％),无扩增8例(57.1％),肺鳞癌扩增率为42.9％。腺癌Fish阳性率(87.5％)高于鳞癌(42.9％）,P<0．01。30例良性胸腔积液中有1例脓胸患者EGFR Fish检测阳性,阳性率为3.3%,余检测结果均阴性。恶性胸腔积液患者胸水及血清CEA分别为（220.9±71.65）ng/ml、(18.11±11.38）ng/ml,显著高于良性胸腔积液组（2.31±1.29)ng/ml、(1.67±1.06）ng/ml,差异有统计学意义（P<0.01）。其中,恶性胸腔积液胸水CEA明显高于血清CEA,而良性胸腔积液组中,胸水CEA与血清CEA无明显差异。肺腺癌所致胸水及血清CEA分别为（441.02±102.65)ng/ml、(32.87±28.66）ng/ml,鳞癌所致胸水及血清CEA分别为（28.75±21.39）ng/ml、（5.99±5.32）ng/ml,腺癌显著高于鳞癌,差异有统计学意义（P<0.01）。比较胸水EGFR、CEA对良恶性胸腔积液诊断的效能,两者之间无明显差异（P=0.453＞0.05）。Spearman相关性分析胸水EGFR同CEA之间存在显著正相关。结论:EGFR在恶性胸腔积液的形成中起重要作用,通过Fish技术检测胸水细胞块EGFR基因拷贝数可行,其敏感性为57.1%。对肺腺癌导致恶性胸腔积液的诊断敏感性为87.5%。CEA（临界值5.0ng/ml）在恶性胸腔积液及血清中显著高于良性,其中胸水CEA检测诊断敏感性为65.7%,而在腺癌中为87.5%,其在胸水及血清中的比值＞1.5有助于恶性胸腔积液的诊断。EGFR基因突变阳性与肿瘤标记物CEA阳性表达呈正相关,尤见于肺腺癌患者,两者联合检测可提高诊断性试验的准确性。     

EGFR突变与肺癌伴恶性胸腔积液患者生物学行为的相关性研究

目的 探讨表皮生长因子受体(EGFR)基因突变与肺癌伴恶性胸腔积液患者生物学行为之间的关系.方法 选取肺癌患者100例,其中伴恶性胸腔积液者43例作为观察组,不伴胸腔积液者57例作为对照组,观察两组患者EGFR基因突变情况.结果 观察组EGFR总突变率为72.09%,高于对照组的19.30%(P﹤0.05);观察组高分化、中分化和低分化患者的EGFR突变率分别为69.23%、71.43%和77.78%,均高于对照组高分化、中分化和低分化患者(P﹤0.05);不同性别、年龄、吸烟情况及分化程度的观察组患者EGFR基因突变率比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05);胸腔积液与活检组织标本EGFR基因检测结果的Kappa值为0.466(P﹤0.05),一致性中等.结论 肺癌伴恶性胸腔积液患者EGFR突变率较高,但EGFR突变与肺癌伴恶性胸腔积液患者的性别、年龄、吸烟情况及分化程度无关.     

ADx-ARMS方法检测晚期非小细胞肺癌患者胸水标本癌细胞基因突变的临床意义

目的:探讨应用ADx-ARMS方法检测非小细胞肺癌患者胸水标本癌细胞基因突变应用于指导小分子EGFR酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKIs）治疗的可行性与临床意义。方法:ADx-ARMS检测24例非小细胞肺癌患者胸水标本EGFR基因第19、20和21外显子突变与KRAS基因第2外显子突变。统计分析胸水标本与前期检测过的非小细胞肺癌组织中的EGFR、KRAS突变率差异。结果:24例胸水标本中,EGFR突变与KRAS突变分别为14例（58.3%）和1例（4.2%）。前期检测过的非小细胞肺癌组织EGFR和KRAS突变率分别为47.6%和4.5%。EGFR和KRAS突变率在胸水标本与前期肺癌组织中差异无统计学意义（P>0.05）。结论:对失去手术机会而难以获得组织标本的晚期非小细胞肺癌患者,可应用ADx-ARMS方法选择胸水标本筛查EGFR、KRAS基因突变,从而指导EGFR-TKIs的临床应用。     

EGFR mutations predict a favorable outcome for malignant pleural effusion of lung adenocarcinoma with Tarceva therapy

The aim of the present study was to evaluate the therapeutic effects and adverse reactions of Tarceva treatment for malignant pleural effusion (MPE) caused by metastatic lung adenocarcinomas. One hundred and twenty-eight patients who failed first-line chemotherapy drug treatment were divided into a mutation and a non-mutation group according to the presence or absence of epidermal growth factor receptor (EGFR) mutations. Each patient received closed drainage combined with simple negative pressure suction after thoracoscopic talc poudrage pleurodesis and oral Tarceva treatment. Short-term and long-term clinical therapeutic effects of Tarceva were evaluated. The EGFR mutation rate in pleural metastatic tissues of lung adenocarcinoma acquired through video-assisted thoracoscopic surgery was higher compared to that in surgical resection specimens, plasma specimens and pleural effusion specimens compared to previously reported results. There were significant statistical differences in the average extubation time (p<0.01), drainage volume of pleural effusion (p<0.05), Karnofsky score and formation of encapsulated pleural effusion 4 weeks after surgery (p<0.05) between these two groups. The number of patients with mild pleural hypertrophy in the mutation group was significantly higher compared to the non-mutation group (p<0.01), while the number of patients with severe pleural hypertrophy was significantly reduced (p<0.05). There was significant statistical discrepancy between these two groups in terms of improvement of peripheral blood carcinoembryonic antigen and tissue polypeptide antigen after 4 weeks of therapy. The complete remission rate and the efficacy rate were higher in the mutation group compared to that in the non-mutation group (p<0.05). There was a longer overall survival time after Tarceva treatment in patients with EGFR mutations than those without EGFR mutation. EGFR mutations predict a favorable outcome for malignant pleural effusion of lung adenocarcinoma with Tarceva therapy. Detection of EGFR mutations may determine the responsiveness of malignant pleural effusion to Tarceva treatment.     

A molecular diagnostic test for distinguishing lung adenocarcinoma from malignant mesothelioma using cells collected from pleural effusions.

PURPOSE: Patients with malignant mesothelioma or adenocarcinoma of the lung often present with respiratory complications associated with a malignant pleural effusion. Distinguishing between these malignancies is frequently problematic, as many of the clinical, cytologic, and histologic features of the diseases overlap. Following cytologic analysis of pleural effusions, subsequent confirmatory tissue biopsies involve increased patient morbidity and expense. We have therefore designed a gene expression-based test to classify the primary tumor causing a malignant pleural effusion, using cells collected from the effusion itself. EXPERIMENTAL DESIGN: We have used microarray data for 190 lung adenocarcinomas and 33 malignant mesotheliomas to identify genes differentially expressed between the two diseases. Genes expressed in normal mesothelial cells were removed, allowing the development of a PCR-based test to measure the expression of genes that discriminate between mesothelioma and lung adenocarcinoma from cytology specimens. RESULTS: Applying an real-time PCR-based assay involving 17 genes to 13 independent samples from biopsy-proven malignant mesothelioma and lung adenocarcinomas resulted in the correct identification of all samples. CONCLUSIONS: We have developed a test that is able to distinguish between lung adenocarcinoma and mesothelioma in cells collected from pleural effusions.     

胸腔积液肺腺癌细胞中CXCR4、Ki67、MDM2、N-cadherin的表达及其与EGFR突变状态的关系

目的：研究胸腔积液肺腺癌细胞中趋化因子受体4(CXCR4)、增殖细胞核抗原Ki67、鼠双微体2(MDM2)和N-钙黏蛋白(Ncadherin)的表达与表皮生长因子受体(EGFR)突变状态的相关性。方法：收集46例晚期肺腺癌患者的胸腔积液,采用HE染色联合免疫细胞化学染色(ICC)法检测胸腔积液中是否含肿瘤细胞,突变扩增系统(ARMS)检测胸腔积液中癌细胞的EGFR基因突变状态,将癌细胞分为EGFR-TKI敏感突变组和EGFR野生型组。采用ICC法检测胸腔积液中肺腺癌细胞CXCR4、Ki67、MDM2和Ncadherin的表达,分析这些蛋白的表达阳性率和EGFR突变状态的相关性。结果：46例肺腺癌患者的恶性胸腔积液细胞中,31例(67.4%)存在EGFR-TKI敏感突变。CXCR4、Ki67、MDM2、N-cadherin表达阳性率与EGFR突变状态相关(r分别为0.452、0.428、0.417、0.524,均为P<0.05),且EGFR-TKI敏感突变组细胞CXCR4、Ki67、MDM2、N-cadherin表达的阳性率明显高于EGFR野生型组(P<0.05)。结论：EGFR突变状态与CXCR4、Ki67、MDM2和N-cadherin的表达相关,EGFR突变状态下,胸腔积液肺腺癌细胞的CXCR4、Ki67、MDM2和N-cadherin的表达阳性率高于非突变状态下的表达阳性率。     

K-ras and rho A mutations in malignant pleural effusion

Mutations of the Kristen ras (K-ras) gene have been implicated in the pathogenesis of human lung cancer, especially adenocarcinoma, and have been proposed to be a prognostic factor. The K-ras mutation in codon 12 is detectable even in cell-free fluids by using the enriched polymerase chain reaction (PCR) technique. On the other hand, based on experimental results, the rho A mutation in codon 14 is also proposed to be oncogenic as observed in the K-ras mutation. Malignant pleural effusion is a common complication of lung cancer. We studied the point mutation of K-ras codon 12 and rho A codon 14 using enriched PCR in specimens of pleural effusion. Forty patients with pleural effusion were enrolled in this study. The causes of pleural effusion were non-small cell lung cancer (18 cases), small cell lung cancer (6 cases), malignant mesothelioma (2 cases), metastatic lung tumor (5 cases), thymoma (1 case), malignant lymphoma (1 case), and pleuritis tuberculosa (7 cases). The K-ras mutation was detected in 4 of 14 cases with adenocarcinoma, 1 of 3 cases with squamous cell carcinoma, 1 of 1 case with large cell carcinoma, and 1 of 5 cases with metastatic lung tumor, respectively. The rho A mutation was not detected in any pleural effusion examined in this study. Our study demonstrates the usefullness of pleural effusion as a clinical specimen for a search of point mutation of oncogenes. The K-ras codon 12 mutation is readily detected in pleural effusion, and the demonstration of this mutation has potentially important implications for the diagnosis of malignant pleural effusion.     

检测糖链抗原CA242对恶性胸液的诊断价值

目的 评价新型肿瘤标记物糖链抗原(CA242),以及联合检测CA242、组织多肽抗原（TPA）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）和癌胚抗原（CEA）对诊断肺癌合并胸腔积液的临床价值。方法 应用ELISA法对57例肺癌合并胸腔积液及30例结核性胸膜炎患者血清及胸液进行检测。结果 肺癌患者血清及胸液四项肿瘤标志物平均浓度均高于结核性胸膜炎（P＜0．01）。血清及胸液CA242对诊断肺癌胸腔积液敏感性分别为53．6％（31／57）、61．4％（35／57），肺腺癌为65．7％（23／36）、66．7％（24／36）、特异性90．0％（27／30）。联合检测二项及二项以上阳性者。血清及胸液诊断肺癌特异性分别为96．7％（29／30）、100．0％（30／30），敏感性分别为75．4％（43／57）、77．2％（44／57）。结论 检测血清及胸液CA242有助于诊断肺癌合并胸腔积液，四项标志物联合检测可以显著提高肺癌合并胸腔积液诊断的敏感性和特异性。