缺氧对肺腺癌细胞HIF-α1、GLUT-1、MMP-2表达影响的研究

目的探讨人肺腺癌细胞株A549在缺氧条件下HIF-1α、GLUT-1、MMP-2的表达变化情况.方法对肺腺癌细胞A549分别进行常规和氯化钴模拟缺氧培养,采用MTY法检测缺氧对A549细胞增殖的影响;Transwell侵袭小室测定法评价缺氧下A549细胞的侵袭力;分别采用RT-PCR法和western blot、免疫组化法测定缺氧不同时间HIF-1α和GLUT-1、MMP-2 mRNA和蛋白表达水平的变化.结果A549细胞在缺氧条件下增殖能力和侵袭力较正常时增强.正常氧条件下的A549细胞即有一定水平的HIF-1α、GLUT-1、MMP-2的表达,随着缺氧时间的延长,HIF-1α和、GLUT-1、MMP-2 mRNA和蛋白水平呈升高趋势,与正常对照组比较,各缺氧组差异有统计学意义(P＜0.01).结论氯化钴诱导缺氧可以上调HIF-1α、GLUT-1、MMP-2蛋白在肺腺癌细胞中的表达水平,加速肺癌细胞的生长和转移,使之进一步耐受缺氧.     

不同氧浓度下Notch1-4受体亚型在肺腺癌细胞A549中的表达与机制

目的探讨不同氧浓度下Notch1-4受体亚型在肺腺癌细胞A549中的表达及其机制。方法分别在正常氧浓度和低氧条件下培养肺腺癌A549细胞,采用Western blotting及RT-PCR方法分别检测Notch1-4、HIF-1α蛋白和mRNA表达。结果 Notch1-4受体各亚型在A549细胞中均有表达,Notch1蛋白在低氧浓度较正常氧浓度下表达偏高,差异有统计学意义(P <0. 05)。Notch2、3和4蛋白在不同氧浓度下表达比较,差异均无统计学意义(P> 0. 05)。Notch1-4受体各亚型在A549细胞中均有表达,Notch1 mRNA在低氧浓度较正常氧浓度表达偏高(P <0. 05),Notch2、3和4 mRNA不同氧浓度下表达比较,差异均无统计学意义(P> 0. 05)。HIF-1αmRNA及蛋白在1%O2及21%O2环境下在A549细胞中均有表达,且在低氧浓度较正常氧浓度下表达偏高,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。结论低氧条件下,Notch1和HIF-1α在A549细胞中高表达,HIF-1α可能通过调节Notch1参与肺腺癌增殖。     

缺氧对肺腺癌细胞HIF-1α、GLUT-1、MMP-2表达影响的研究

目的：探讨人肺腺癌细胞株A549在缺氧条件下HIF-1α、GLUT—1、MMP-2的表达变化情况。方法：对肺腺癌细胞A549分别进行常规和氯化钴模拟缺氧培养，采用MTT法检测缺氧对A549细胞增殖的影响；Transwell侵袭小室测定法评价缺氧下A549细胞的侵袭力；分别采用RT—PCR法和western blot、免疫组化法测定缺氧不同时间HIF—1α和GLUT—1、MMP-2 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果：A549细胞在缺氧条件下增殖能力和侵袭力较正常时增强。正常氧条件下的A549细胞即有一定水平的HIF—1α、GLUT—1、MMP-2的表达，随着缺氧时间的延长，HIF—1α和、GLUT—1、MMP-2 mRNA和蛋白水平呈升高趋势，与正常对照组比较，各缺氧组差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：氯化钴诱导缺氧可以上调HIF—1α、GLUT—1、MMP-2蛋白在肺腺癌细胞中的表达水平，加速肺癌细胞的生长和转移，使之进一步耐受缺氧。     

人肺腺癌细胞株A549中HIF-1α对survivin的表达调控

背景与目的:survivin是一种重要的抗凋亡基因,在肿瘤组织中特异性高表达,并参与调控细胞周期和细胞凋亡,其高表达与肿瘤进展、药物抵抗以及预后关系密切。但survivin在肺癌中高表达的转录调控机制研究甚少。课题组前期研究成功构建含有survivin核心启动子的荧光报告载体pGL3-SVP230-luc,并发现核心启动子区存在缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)的潜在位点。本研究拟通过免疫荧光双标记法、电泳迁移率实验(EMSA)、共转染等方法探讨缺氧条件下人肺腺癌细胞株A549中HIF-1α调控survivin转录的确切机制。方法:⑴运用免疫荧光双标记检测缺氧A549细胞中HIF-1α与survivin的表达;⑵HIF-1α表达质粒和HIF-1αsiRNA分别转染A549细胞,30 h后RT-PCR、Western blot和免疫荧光双标法检测survivin mRNA和蛋白表达;⑶pGL3-SVP230-luc(含有survivin核心启动子的荧光报告载体)与HIF-1α表达质粒和HIF-1αsiRNA分别共转染A549细胞,测定萤光素酶的表达活性;⑷...     

低氧条件下HIF-1α对HGF表达影响的观察

目的:探讨在体外缺氧环境下缺氧诱导因子1α(HIF-1α)对肝细胞生长因子(HGF)的影响.方法:选择人前列腺癌LNCaP细胞为研究对象,对其进行低氧培养,以常氧培养为对照,在HIF-1α抑制剂YC-1作用后,检测培养液上清HGF的水平.在低氧培养条件下,应用YC-1抑制HIF-1α表达后,观察低氧对HGF水平的影响,并进行比较.结果:人前列腺癌LNCaP细胞在低氧条件下HGF的表达水平为(465.37±59.61) ρg/mL,显著高于常氧培养(240.52±47.52) ρg/mL,P＜0.01.在低氧培养条件下,应用YC-1抑制HGF表达后,HGF表达水平为(438.62±61.93) ρg/mL,未见明显变化,P＞0.05.结论:低氧条件下,人前列腺癌细胞LNCaP细胞HGF表达上调可能不受HIF-1α的影响.因此,在低氧条件下,可能存在其他调节通路影响HGF表达.     

雷帕霉素联合缺氧诱导肺腺癌A549细胞凋亡及其分子机制

目的:探讨哺乳动物雷帕霉素靶向(mammalian target of rapamycin, mTOR)通路抑制剂雷帕霉素联合缺氧诱导人肺腺癌细胞株A549细胞凋亡的分子机制.方法:应用雷帕霉素联合缺氧处理人肺腺癌细胞株A549后,Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡情况,实时定量PCR和Western印迹法分别检测A549细胞中survivin mRNA和蛋白的表达变化,Western印迹法检测缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α, HIF1α)表达的改变.结合染色质免疫共沉淀技术,探讨雷帕霉素通过诱导细胞凋亡而发挥抗肺癌效应的分子机制.结果:雷帕霉素联合缺氧可在体外诱导A549细胞凋亡,雷帕霉素联合缺氧可诱导A549细胞中survivin mRNA(P＜0.01)和蛋白的表达水平明显下调.雷帕霉素通过抑制缺氧条件下诱导的HIF-1α表达增加,进而抑制survivin的表达.结论:雷帕霉素通过抑制缺氧条件下A549细胞中HIF-1α的表达,降低HIF-1α与survivin核心启动子的结合,下调缺氧引发的凋亡抑制基因survivin表达,进而发挥抗肿瘤的生物学效应.     

缺氧对肺癌细胞CCR7表达及其侵袭力的影响

背景与目的缺氧可通过多种机制促进肿瘤的侵袭和转移,但缺氧与CCR7的关系目前未见报道。本研究探讨缺氧对人肺癌细胞趋化因子受体CCR7(Chemokine receptor7)表达及其侵袭能力的影响。方法将A549细胞分为常氧组和缺氧组,分别置于常氧(37℃,5%CO2,21%O2)和低氧(37℃,5%CO2,1%O2)条件下培养4h、12h、24h,应用RT-PCR和Westernblotting方法对CCR7mRNA和蛋白表达水平进行检测;同时采用Transwell侵袭实验检测各组细胞侵袭能力的变化。结果RT-PCR和Western blotting结果显示:人肺腺癌A549细胞有CCR7表达,随着培养时间的延长,常氧及缺氧状态下A549细胞CCR7相对表达量依次升高,此外,不同时间点的常氧组与缺氧组CCR7mRNA和蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(P<0.01);Transwell侵袭实验结果表明,缺氧组侵袭细胞数与常氧组相比明显增加,差异有统计学意义(t=0.006,P<0.01),加入CCR7抗体后细胞侵袭力降低(t=0.09,P<0.01)。结论缺氧可显著上调A549细胞CCR7表达及其侵袭能力,其侵袭力的增加可能与CCR7表达水平增高有密切关系。     

雷帕霉素对食管癌细胞缺氧诱导因子-1α和糖酵解途径的影响

目的:观察雷帕霉素(Rapamycin)对人食管癌细胞TE1、TE13中HIF-1 α的抑制作用及糖酵解途径相关基因表达的影响;分析mTOR信号通路与糖酵解途径的关系.方法:分别取TE1、TE13细胞株,常氧及缺氧条件下分别予以Rapamycin作用后,将两株细胞各分为四组:①正常对照组,即未处理组(N);②缺氧处理组(H);③常氧Rapamycin处理组(N+R);(④缺氧Rapamycin处理组(H+R)(即雷帕霉素预处理1小时后缺氧培养).采用实时定量PCR检测细胞中缺氧诱导因子-1α(Hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)蛋白及己糖激酶Ⅱ(HK-Ⅱ)、葡萄糖载体蛋白1(GLUT-1)、乳酸脱氢酶A(LDHA)等糖酵解相关基因mRNA的表达,Western印迹检测HIF-1α及HK-Ⅱ、GLUT-1、LDHA等糖酵解相关基因蛋白的表达.结果:缺氧处理后与正常对照组相比,HIF-1α、HK-Ⅱ、GLUT-1蛋白表达及mRNA明显增强,而LDHA表达无明显变化;Rapamycin预处理后,正常对照组及缺氧处理组HIF-1 α、HK-Ⅱ、GLUT-1的表达均明显降低,LDHA无明显变化.结论:常氧及缺氧条件下,雷帕霉素可抑制食管癌细胞HIF-1 α及糖酵解相关基因的表达,提示阻断mTOR通路可抑制食管肿瘤细胞的糖酵解途径.     

miR-200a抑制YAP1基因表达对肺癌细胞增殖的影响

  目的   研究微小RNA-200a（miR-200a）对肺癌细胞增殖的影响,并探讨其分子机制。   方法   采用Real-time PCR检测15例非小细胞肺癌组织和对应癌旁组织、人肺癌细胞株（A549、NCI-H520、SK-MES-1）及人正常肺支气管上皮细胞株16HBE中miR-200a的表达水平。用CCK-8法检测miR-200a对A549肺癌细胞增殖活性的影响。通过生物信息学方法预测miR-200a可能的靶基因,双荧光素酶报告基因实验结合Real-time PCR和Western blot验证miR-200a对靶基因YAP1的调控作用。CCK-8法检测下调靶基因YAP1对A549肺癌细胞株增殖活性的影响。   结果   miR-200a在非小细胞肺癌组织和肺癌细胞系中表达明显降低（P < 0.01）。上调miR-200a表达后明显抑制A549肺癌细胞的增殖活力（P < 0.01）。双荧光素酶报告基因显示miR-200a可以直接作用于靶基因YAP1的3'-UTR区域抑制荧光素酶活性（P < 0.01）,Real-time PCR和Western blot检测显示上调miR-200a的表达能够明显下调A549肺癌细胞YAP1 mRNA和蛋白的表达水平（P < 0.01）。CCK-8法显示下调YAP1的表达能够明显抑制A549肺癌细胞的增殖活性（P < 0.01）。   结论   miR-200a通过靶向作用于YAP1基因来抑制肺癌细胞的增殖,从而在肺癌中发挥抑癌基因的功能。      

乏氧对多柔比星诱导肺腺癌A549细胞凋亡的影响

背景与目的：乏氧是恶性肿瘤中常见的现象。乏氧时肿瘤细胞对化疗抗拒，细胞凋亡减少：本实验通过研究乏氧对肺腺癌A549细胞（野生型P53）多药耐药蛋白表达及细胞凋亡的影响，探讨乏氧在多柔比旱诱导细胞凋亡巾的作用。方法：乏氧条件下（2％O，）人肺腺癌细胞株A549体外培养24h，免疫组化法榆测乏氧诱导因子-1d（HIF-1α）、P-糖蛋白（P-gP）和P53蛋白的表达；MTT法检测乏氧条件下A549细胞在多柔比星作用下的存活率；应用流式细胞仪检测细胞凋亡i结果：①乏氧条件下A549中HIF-1α、P-gp和P53蛋白的表达明显较正常氧浓度下增高，HIF-1α蛋白的表达与P-gP和P53蛋白的表达存在明显的相关性、名乏氧条件下A549细胞对多柔比星的耐药性明显增强，多柔比旱诱导细胞凋亡率明显减低：结论：乏氰情况下，A549细胞能够通过HIF-1仅上调P-gp和P53蛋白的表达；A549细胞住乏氧条件下多柔比星诱导细胞凋亡存在非P53依赖途径？     

JAK2/STAT3信号通路对A549细胞株中HIF-1α、VEGF蛋白表达的影响

目的:研究人肺腺癌细胞A549细胞中JAK2/STAT3信号通路对HIF-1α、VEGF蛋白表达的影响.方法:AG490处理在氧含量正常及缺氧条件下(CoCl2 200μmol/L)48h后Western blot法测定A549细胞中HIF-1α、VEGF蛋白表达变化(分组为对照组、AG490 50μmol/L、AG490 100μmol/L、CoCl2、CoCl2+AG49050μmol/L和CoCl2+AG490 100μmol/L组).IL-6 (3.85nmol/L)处理A549细胞24h后,检测细胞中STAT3、p-STAT3、HIF-1α、VEGF蛋白表达变化(分组为对照组,IL-6组).结果:JAK2特异性抑制剂AG490作用48h后,相对于对照组AG490能够下调HIF-1α、VEGF的蛋白表达,且呈浓度依赖性;随浓度的升高,抑制作用更明显.缺氧条件下(CoCl2200μmol/L)能够上调HIF-1α、VEGF的蛋白表达.AG490也能够下调CoCl2诱导的HIF-1α、VEGF的蛋白表达,且呈浓度依赖性,随浓度的升高,抑制作用更显著.IL-6能够上调HIF-1α、VEGF的蛋白表达.结论:在人肺腺癌细胞A549细胞中,缺氧可上调HIF-1α和VEGF蛋白表达.JAK2/STAT3信号通路对HIF-1α和VEGF蛋白的表达具有调节作用.     

低氧环境下肺腺癌A549细胞对顺铂化疗抵抗的实验研究

目的:探讨低氧对肺癌A549细胞顺铂化疗抵抗作用,并分析可能机制.方法:将A549细胞分为常氧、常氧顺铂、低氧、低氧顺铂组.在常氧顺铂组和低氧顺铂组,加入不同浓度顺铂(10、40、80、100、200 μmol/L)后,采用CCK8法测定半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)和抑制率.流式细胞仪检测各组细胞周期和凋亡率.RT-PCR和Western Blot检测各组缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及切除修复交叉互补基因1(excision repair cross complementation group 1,ERCC1)的转录和蛋白表达变化.结果:常氧顺铂组IC50为25.82nmol/L,低氧顺铂组为39.98 nmol/L,常氧顺铂组和低氧顺铂组之间各个浓度顺铂抑制率有统计学差异(P＜0.05).低氧顺铂组的细胞凋亡和G2/M期细胞阻滞较常氧顺铂组减少.RT-PCR和Western Blot显示,低氧组HIF-1α、VEGF、ERCC1转录和表达水平较常氧组明显上升(P＜0.01),顺铂作用后表达均下降,在常氧顺铂组和低氧顺铂组之间有显著差异性(P＜0.01).相关分析显示HIF-1α、VEGF、ERCC1之间有显著正相关关系(P＜0.01).结论:低氧诱导A549细胞对顺铂化疗抵抗,与低氧激活HIF-1α、VEGF及ERCC1高表达有关.     

低氧下丹参酮ⅡA对人胃癌SGC7901细胞HIF-1α与c-Met表达的影响

目的 观察低氧下丹参酮ⅡA(Tan ⅡA)对人胃癌SGC7901细胞c-Met蛋白表达的影响及其与低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的关系.方法 用氯化钴(CoCl2)创建低氧模型,设常氧对照组、低氧对照组和低氧加不同浓度Tan ⅡA组.分别取0.5、2.0、10.0mg/L Tan ⅡA干预低氧胃癌细胞48 h后,免疫细胞化学二步法检测HIF-1α和c-Met蛋白表达的变化.结果 免疫细胞化学法显示,TanⅡA呈剂量依赖性地抑制低氧诱导的HIF-1α和c-Met蛋白表达,且二者呈高度正相关(n=4,r=0.996,P<0.01).结论 低氧条件下,Tan ⅡA可能通过抑制HIF-1α的表达进而抑制c-Met蛋白的表达,提示Tan ⅡA可能对防治低氧导致的肿瘤侵袭转移具有重要作用.     

缺氧诱导因子1α和血管内皮生长因子表达及其与肺癌生物学行为的相关性研究

目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)表达及其与肺癌生物学行为的相关性。方法采用免疫组织化学方法对68例肺癌组织和50例正常肺组织的HIF-1α及VEGF进行检测。结果肺癌组织中HIF-1α阳性率为69.1%,显著高于正常肺组织(P<0.01);肺癌组织与正常肺组织中VEGF阳性率分别为70.6%和4.0%,差异有统计学意义(P<0.01);HIF-1α和VEGF表达与肺癌组织的临床分期、组织分化及淋巴转移密切相关(P<0.05);肺癌组织HIF-1α和VEGF的表达显著相关(P<0.05)。结论 HIF-1α和VEGF参与了肺癌的发生发展,与肿瘤组织分化、侵袭转移等生物学行为密切相关,可作为反映肺癌预后的重要指标。     

microRNA-130a在非小细胞肺癌中的表达和功能

目的:探讨microRNA-130a（miR-130a）在非小细胞肺癌中的表达情况,并对其功能和分子机制进行研究。方法:收集50例非小细胞肺癌肿瘤组织和相对应的正常肺组织,采用RT-PCR方法检测miR-130a的相对表达量,并分析其与临床病理资料的相关性。采用体外转染法将miR-130a抑制剂瞬时转染到A549细胞后,应用real-time PCR检测A549细胞中miR-130a的表达情况。CCK8实验检测细胞转染后的增殖变化。Western blot检测转染后细胞中Smad4的表达变化。结果:肺癌组织中miR-130a的表达水平明显高于正常肺组织（P<0.05）;miR-130a的表达水平与肿瘤大小、淋巴结转移和临床分期明显相关（P<0.05）。与对照组比较,A549细胞转染miR-130a抑制剂后miR-130a表达水平明显下调,细胞增殖率明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05);转染miR-130a抑制剂后,肺癌细胞中Smad4的表达水平明显上调。结论:miR-130a在NSCLC组织中表达上调,可能部分通过下调Smad4的表达来促进肺癌细胞的增殖和转移。     

低氧对人肺腺癌A549多细胞球体上皮-间质转化促转移的影响

目的:探讨低氧对人肺腺癌A549细胞来源的A549多细胞球体上皮-间质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)促转移机制的影响.方法:采用无血清培养(serum-free medium,SFM)的方法培养A549细胞,诱导A549多细胞球体形成;随后将亲本A549细胞和A549多细胞球体在低氧环境下培养24 h,分别检测2种细胞中EMT标志物E-钙黏着素(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)的表达水平,并与它们在常氧条件下的表达情况进行比较.结果:在常氧和低氧条件下,A549多细胞球体中E-cadherin mRNA和蛋白的表达水平均较亲本A549细胞降低,而vimentin的表达水平升高;与常氧条件相比,低氧培养的亲本A549细胞及A549多细胞球体中E-cadherin mRNA和蛋白的表达水平均下调,且以A549多细胞球体下调更为明显,而vimentin的表达水平则升高.结论:A549多细胞球体比亲本A549细胞具有更强的转移能力,低氧条件下A549多细胞球体比常氧条件下的A549多细胞球体具有更强的转移能力.     

羟基喜树碱对缺氧诱导的SiHa细胞HIF-1α及VEGF基因表达的影响

目的:研究羟基喜树碱(hydroxycamptothecin,HCPT)对缺氧诱导的宫颈癌SiHa细胞HIF-1α和VEGF基因表达的影响。方法:在缺氧条件下(37℃,5%CO2,1%O2饱和度)体外培养宫颈癌SiHa细胞株,经不同浓度HCPT处理24 h后,用半定量RT-PCR法和Western印迹法分别检测细胞HIF-1α和VEGF mRNA及蛋白表达变化,并设立药物处理常氧组和缺氧对照组进行比较。结果:HCPT对常氧组与缺氧组细胞的细胞毒性作用无明显差异。在常氧条件下,SiHa细胞内无HIF-1α蛋白表达,VEGF有低水平表达,HCPT处理对SiHa细胞HIF-1α和VEGF基因表达无影响;但缺氧可诱导细胞HIF-1α和VEGF基因表达明显上调;HCPT对缺氧细胞HIF-1α蛋白和VEGF mRNA及蛋白表达有明显抑制作用,其效应呈剂量依赖性,而对HIF-1αmRNA表达无明显抑制作用。结论:HCPT可抑制缺氧诱导的SiHa细胞内HIF-1α蛋白及其下游VEGF基因的高表达。     

缺氧对人乳腺癌细胞系MCF-7生物学行为的影响

目的:研究缺氧对人乳腺癌细胞系MCF-7的生物学行为,增殖、侵袭能力的影响。通过影响缺氧诱导因子1α(hypoxic-induciblefactor1α,HIF-1α)的表达,检验其在这一过程中的作用,并进一步探讨作用机制。方法:慢病毒感染细胞,干扰乳腺癌细胞系MCF-7中HIF-1α的表达,得到HIF-1α表达正常的乳腺癌细胞系MCF-7-NC和HIF-1α表达受干扰的细胞系MCF-7-HIF△。分别低氧培养及化学药物诱导缺氧,用MTT法检测2组细胞系在缺氧和正常培养条件下的增殖能力,ANOVA检验检测其增殖能力的区别。Transwell实验检验缺氧和正常培养条件下人乳腺癌细胞的侵袭能力,计数通过Transwell小室的细胞,ANOVA检验检测细胞侵袭能力的区别。共聚焦免疫荧光法检测缺氧后2组乳腺癌细胞的上皮和间质标记物的表达,检验细胞系是否发生了上皮-间质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)。结果:MTT实验结果:正常表达HIF-1α的MCF-7-NC的增殖能力在缺氧后与正常培养条件下相比明显减弱,其差别具有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α表达受干扰的MCF-7-HIF△的增殖能力在缺氧和正常培养条件下相比无显著区别。Transwell实验检测细胞的侵袭能力,缺氧后正常表达HIF-1α的MCF-7-NC的侵袭能力较正常培养的细胞明显增强,其差别具有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α表达受干扰的MCF-7-HIF△侵袭能力在缺氧和正常培养下无显著区别。缺氧后,正常表达HIF-1α的细胞系MCF-7-NC发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)。共聚焦荧光染色显示:在诱导缺氧后,正常表达HIF-1α的MCF-7-NC细胞极性发生变化,呈长梭形改变,上皮标志物人广谱角蛋白(pan-cytokeratin,P-CK)表达下调,间质标志物人α平滑肌动蛋白(α-SMA)表达上调;而HIF-1α表达受干扰的MCF-7-HIF△无明显EMT变化。结论:在体外条件下,缺氧可以引起乳腺癌细胞系MCF-7增殖能力减弱、侵袭能力增强,可以诱导乳腺癌细胞MCF-7发生EMT,干扰缺氧诱导因子亚基HIF-1α的表达,则缺氧对乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响消失。     

缺氧对人乳腺癌细胞系MCF-7生物学行为的影响

目的:研究缺氧对人乳腺癌细胞系MCF-7的生物学行为,增殖、侵袭能力的影响。通过影响缺氧诱导因子1α(hypoxic-induciblefactor1α,HIF-1α)的表达,检验其在这一过程中的作用,并进一步探讨作用机制。方法:慢病毒感染细胞,干扰乳腺癌细胞系MCF-7中HIF-1α的表达,得到HIF-1α表达正常的乳腺癌细胞系MCF-7-NC和HIF-1α表达受干扰的细胞系MCF-7-HIF△。分别低氧培养及化学药物诱导缺氧,用MTT法检测2组细胞系在缺氧和正常培养条件下的增殖能力,ANOVA检验检测其增殖能力的区别。Transwell实验检验缺氧和正常培养条件下人乳腺癌细胞的侵袭能力,计数通过Transwell小室的细胞,ANOVA检验检测细胞侵袭能力的区别。共聚焦免疫荧光法检测缺氧后2组乳腺癌细胞的上皮和间质标记物的表达,检验细胞系是否发生了上皮-间质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)。结果:MTT实验结果:正常表达HIF-1α的MCF-7-NC的增殖能力在缺氧后与正常培养条件下相比明显减弱,其差别具有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α表达受干扰的MCF-7-HIF△的增殖能力在缺氧和正常培养条件下相比无显著区别。Transwell实验检测细胞的侵袭能力,缺氧后正常表达HIF-1α的MCF-7-NC的侵袭能力较正常培养的细胞明显增强,其差别具有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α表达受干扰的MCF-7-HIF△侵袭能力在缺氧和正常培养下无显著区别。缺氧后,正常表达HIF-1α的细胞系MCF-7-NC发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)。共聚焦荧光染色显示:在诱导缺氧后,正常表达HIF-1α的MCF-7-NC细胞极性发生变化,呈长梭形改变,上皮标志物人广谱角蛋白(pan-cytokeratin,P-CK)表达下调,间质标志物人α平滑肌动蛋白(α-SMA)表达上调;而HIF-1α表达受干扰的MCF-7-HIF△无明显EMT变化。结论:在体外条件下,缺氧可以引起乳腺癌细胞系MCF-7增殖能力减弱、侵袭能力增强,可以诱导乳腺癌细胞MCF-7发生EMT,干扰缺氧诱导因子亚基HIF-1α的表达,则缺氧对乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响消失。