RNA干扰沉默神经型钙黏素基因对人食管 癌细胞系EC9706侵袭能力的影响

 探讨RNAi沉默N-cadherin基因表达对人食管癌细胞系EC9706体外侵袭能力的影响。方法 将N-cadherin基因的RNA干扰载体pMSCVneo/N-cadherin质粒通过脂质体转染法转染人食管癌细胞系EC9706,运用G418进行抗性克隆的筛选和扩增,进而得到稳定转染的人食管癌细胞系EC9706,通过RT-PCR和Western blot检测稳定转染后的人食管癌细胞系EC9706中N-cadherin的mRNA和蛋白表达水平的变化,同时检测转染前后食管癌细胞系EC9706中MMP-9基因表达水平的变化,并通过Transwell小室体外侵袭实验检测转染前后人食管癌细胞系EC9706体外侵袭能力的变化。结果 通过G418加压筛选法得到稳定转染的人食管癌细胞系EC9706,RT-PCR和Western blot检测结果显示,稳定转染后的人食管癌细胞系EC9706中N-cadherin的mRNA和蛋白表达水平均下调,同时MMP-9基因的mRNA表达水平也随之下调;Transwell小室体外侵袭实验结果显示,伴随着N-cadherin和MMP-9表达水平的下调,人食管癌细胞系EC9706的体外侵袭能力也降低（P＜0.05）。结论 RNA干扰沉默神经型钙黏素基因可以使人食管癌细胞系EC9706的体外侵袭能力降低。     

RACK1对食管鳞癌细胞侵袭转移能力的抑制作用

目的:探讨RACK1表达水平与食管鳞状细胞癌不同转移潜能细胞侵袭转移能力的关系.方法:Transwell实验检测食管鳞癌EC9706-H、EC9706-L和EC109-H、EC109-L细胞的转移潜能;利用RT-PCR和Western blot方法,检测食管鳞癌高低转移细胞系EC9706-H、EC9706-L和EC109-H、EC109-L中RACK1的mRNA和蛋白表达水平.利用慢病毒转染技术上调RACK1低表达细胞中RACK1的表达后,采用Transwell实验检测其侵袭和迁移能力的变化.结果:EC9706-H细胞和EC109-H细胞的体外侵袭和迁移能力显著高于EC9706-L和EC109-L细胞系.RT-PCR和Western blot实验结果显示,RACK1在EC9706-H细胞和EC109-H细胞中呈低表达;而在EC9706-L细胞和EC109-L细胞中呈高表达.通过慢病毒转染技术上调EC9706-H和EC109-H细胞系中RACK1的表达,二者的侵袭转移能力明显降低.结论:RACK1表达水平与食管鳞癌细胞的侵袭转移能力负相关,过表达RACK1能够抑制食管鳞癌细胞的侵袭转移能力.这提示,RACK1在食管鳞癌的侵袭转移中发挥重要作用,有可能成为其诊断、治疗及预后评估的新靶点.     

特异性下调CXCR4表达对食管鳞癌细胞迁移侵袭能力的影响

目的:探讨特异性下调CXCR4分子的表达对食管鳞癌细胞系TE-1迁移侵袭能力的影响。方法:根据CXCR4基因序列,设计合成CXCR4特异性小干扰RNA,采用siRNA技术下调CXCR4的表达,转染48h后,RT-PCR和Western blot检测各组细胞CXCR4在mRNA水平和蛋白质水平表达,通过Traswell小室实验检测细胞系迁移侵袭能力的差异。结果:小干扰RNA下调CXCR4表达后,Western blot和RT-PCR证实TE-1细胞中CXCR4表达明显下调,Traswell小室实验证实,下调CXCR4表达后,TE-1细胞的体外迁移侵袭潜能显著降低。结论:小干扰RNA下调CXCR4基因后,降低了食管鳞癌细胞TE-1的迁移侵袭能力,CXCR4表达水平与食管鳞癌的迁移侵袭能力呈正相关,抑制CXCR4表达能够使食管鳞癌细胞迁移侵袭能力明显降低。     

MALAT -1对胃癌细胞系 SGC7901侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨MALAT-1对胃癌细胞系SGC7901侵袭和迁移能力的影响。方法:用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)的方法在mRNA水平测定MALAT-1在20对胃癌组织及癌旁正常组织的表达,以及在GES和SGC7901细胞中的表达。RNA干扰(RNAi)技术下调胃癌细胞系SGC7901中MALAT-1的表达后,以高内涵细胞运动试验检测其运动能力,Transwell实验检测其侵袭和迁移能力。结果:RT-PCR结果显示MALAT-1在胃癌组织中的表达高于癌旁正常组织;相比GES,MALAT-1在SGC7901中的表达升高。下调MALAT-1在SGC7901中的表达后,高内涵细胞运动试验和Transwell实验结果显示SGC7901的运动、侵袭和迁移能力均明显减弱。结论:MALAT-1能够促进胃癌细胞SGC7901的侵袭和迁移能力。     

下调PRDX6对食管癌EC9706细胞增殖、迁移、侵袭及放射敏感性的影响

目的:探讨PRDX6表达水平对食管癌细胞增殖、迁移、侵袭及放射敏感性的影响。方法:应用GEPIA数据库分析食管癌组织PRDX6表达情况;将抑制基因PRDX6表达的“PRDX6-shRNA”质粒转染到EC9706细胞(sh-PRDX6组)。qRT-PCR和Western Blot检测转染效果。CCK8法检测增殖活力。划痕实验检测迁移能力。Transwell实验检测侵袭能力。克隆形成实验检测克隆形成能力。Western Blot检测AKT、p-AKT的蛋白表达量。结果:食管癌组织中PRDX6表达水平明显高于癌旁组织。qRT-PCR和Western Blot证实“PRDX6-shRNA”质粒有效抑制PRDX6基因表达。与对照组相比,sh-PRDX6组的细胞增殖、迁移、侵袭能力显著下降,放射敏感性增强。sh-PRDX6组细胞中AKT的表达水平无明显变化,而p-AKT表达水平明显下降。结论:PRDX6促进食管癌细胞EC9706的增殖、迁移、侵袭及放射抵抗。     

下调IKKα表达能够抑制胃癌细胞的迁移和侵袭能力

目的:研究降低IKKα的表达对人胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响。方法:利用Western blot 检测胃癌细胞系中IKKα蛋白的表达水平,选择IKKα表达较高的细胞系MKN28,转染下调IKKα的慢病毒,建立稳定转染细胞株(标记为MKN28-LV-shcontrol和MKN28-LV-shIKKα),并利用Western blot、RT-PCR验证病毒转染效果。采用Transwell实验和划痕实验检测低表达IKKα对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:Western blot结果显示胃癌细胞系中MKN28细胞IKKα蛋白表达水平相对较高,转染慢病毒干扰载体成功后利用Western blot 及RT-PCR实验证实实验组MKN28-LV-shIKKα较对照组MKN28-LV-shcontrol中IKKα蛋白及mRNA水平明显降低。利用Transwell及划痕实验证实实验组MKN28-LV-shIKKα较对照组MKN28-LV-shcontrol细胞迁移及侵袭能力明显降低。结论:IKKα 与胃癌的迁移及侵袭密切相关,降低IKKα的表达水平能显著抑制胃癌细胞的迁移和侵袭能力,提示IKKα在胃癌的转移中可能发挥着重要作用。     

microRNA-10b对人食管癌细胞系EC9706迁移和侵袭的影响

目的:探讨微小RNA-10b(microRNA-10b,miR-10b)对食管癌细胞系EC9706迁移和侵袭能力的影响。方法:构建pEGFP-miR-10b真核表达载体,在食管癌细胞系EC9706中稳定表达miR-10b,利用real-time PCR检测其表达水平,应用划痕试验,Transwell小室实验分析迁移和侵袭能力的改变。结果:转染miR-10b载体后,real-time PCR检测其表达水平显著高于对照组(P<0.05),miR-10b的表达能够显著促进EC9706细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05)。结论:miR-10b能够促进食管癌细胞系EC9706的迁移和侵袭,可作为评价食管癌转移能力的指标。     

siRNA 靶向沉默 KIF20A 基因对人肝癌 SMMC -7721细胞体外增殖和侵袭迁移的影响

目的：研究 KIF20A 对肝癌 SMMC -7721细胞系增殖和侵袭迁移能力的影响。方法：利用 RNA 干扰技术下调肝癌细胞系 SMCC -7721中 KIF20A 的表达。qRT - PCR 和 Western blot 分别检测细胞 KIF20A 在mRNA 和蛋白水平表达中的变化。CCK -8实验检测增殖能力的改变。Transwell 实验检测迁移、侵袭能力的改变。结果：qRT - PCR 和 Western blot 结果显示 KIF20A - siRNA 能够成功下调 KIF20A 的表达,CCK -8和Transwell 实验分别证实肝癌 SMMC -7721细胞增殖和侵袭迁移能力下降。结论：抑制 KIF20A 的表达能够降低肝癌细胞的增殖和侵袭迁移能力。     

丹参酮IIA 通过调控上皮间质转化抑制食管癌EC9706 和KYSE70 细胞的凋亡、侵袭和迁移

目的:探讨丹参酮IIA 对食管癌EC9706 和KYSE70 细胞侵袭和迁移的影响及其调控机制。方法:食管癌细胞系EC9706 和KYSE70 培养完成后分为4 组：对照组（加DMSO）和2、4、6 μg/ml 丹参酮组。采用CCK-8 法检测EC9706 和KYSE70 细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell 实验检测细胞侵袭能力,划痕愈合实验检测细胞迁移能力,qRT-PCR和Western blotting 实验检测EMT相关蛋白E-cadherin、Snail-2、Vimentin 和N-cadherin mRNA和蛋白表达水平。结果：小于6 μg/ml的丹参酮IIA 不影响食管癌EC9706 和KYSE70 细胞增殖活力;4、6 μg/ml 丹参酮IIA 组细胞凋亡率明显高于对照组（均P<0.01）;2、4、6 μg/ml 丹参酮组每个视野下的侵袭细胞数及划痕愈合率明显低于对照组（均P<0.01）,且EC9706 和KYSE70 细胞形态由纺锤状的间充质形态转变为上皮形态。与对照组相比,2、4、6 μg/ml 丹参酮组E-cadherin 表达明显升高,Snail-2、Vimentin 和N-cadherin表达明显下降（均P<0.01）。结论：丹参酮IIA 通过抑制EMT促进食管癌EC9706 和KYSE70 细胞凋亡,并减弱其侵袭和迁移能力。     

KIF20A对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭、凋亡及细胞周期分布的影响

目的:研究KIF20A对胶质瘤U87细胞系增殖、侵袭、迁移、凋亡及细胞周期分布的影响。方法:利用 RNA干扰技术下调胶质瘤细胞系 U87中 KIF20A 的表达。RT-qPCR 和 Western blot 分别检测 KIF20A 在mRNA 和蛋白水平上的表达。CCK-8 实验检测 U87细胞增殖能力的变化,Transwell 实验检测U87细胞迁移及侵袭能力的变化,流式细胞术检测 U87细胞凋亡及细胞周期的变化。结果:RT-qPCR和Western blot 结果显示 siRNA-KIF20A显著下调 KIF20A 的表达,CCK-8和Transwell 实验显示下调 KIF20A 的表达显著抑制了U87细胞的增殖、迁移及侵袭能力,流式细胞术结果显示下调 KIF20A 的表达显著促进了U87细胞的凋亡,诱导细胞周期阻滞在G0/G1期。结论:下调KIF20A的表达抑制胶质母细胞瘤细胞的增殖、迁移及侵袭,促进胶质母细胞瘤细胞的凋亡并诱导细胞周期G0/G1期阻滞。     

热休克蛋白 HSP27 抑制食管鳞癌细胞的侵袭转移能力简

目的：探讨HSP27分子的表达水平与食管鳞癌高、低转移潜能细胞系侵袭转移能力的关系。方法：选用EC9706-H、EC9706-L和EC109-H、EC109-L两对食管鳞癌高、低转移潜能细胞系,利用细胞划痕实验检测不同细胞侵袭转移能力的差异;利用Western blot检测HSP27在不同转移潜能细胞中的表达水平;利用慢病毒转染技术上调HSP27低表达细胞中HSP27的表达,采用细胞划痕实验检测其侵袭转移能力的变化。结果：细胞划痕实验证实,EC9706-H细胞和EC109-H细胞的体外侵袭转移能力高于EC9706-L细胞和EC109-L细胞;Western blot实验结果显示,HSP27在EC9706-H细胞和EC109-H细胞中呈低表达,在EC9706-L细胞和EC109-L细胞中呈高表达;通过慢病毒转染技术上调EC9706-H细胞和EC109-H细胞中HSP27的表达,二者的侵袭转移能力明显降低。结论：HSP27与食管鳞癌的侵袭转移能力呈负相关,即HSP27高表达的食管鳞癌细胞其侵袭转移能力受到抑制。     

lncRNA NORAD促进食管鳞状细胞癌EC9706 细胞的增殖和迁移

目的：探讨长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）DNA损伤激活的非编码RNA（non-coding RNA-activated by DNA damage,NORAD）对食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）细胞株EC9706 增殖和迁移能力的影响及其机制。方法：采用RT-PCR 法检测不同ESCC细胞（EC9706、TE1、YES-2、KYSE150）中NORAD mRNA表达水平,通过RNA干扰技术将NORAD的小干扰RNA（siRNA）转染到EC9706 细胞（si-NORAD组）以建立NORAD低表达细胞,另设置空白对照组（Ctrl 组,不转染任何序列）及阴性对照组（NC组,转染siRNA 阴性对照序列）,qPCR验证其转染效果。用MTT、平板克隆形成和划痕愈合实验检测敲低NORAD前后EC9706 细胞增殖和迁移能力的变化,Western blotting 检测敲低NORAD前后EC9706 细胞中上皮钙黏蛋白（E-cadherin）、神经钙黏蛋白（N-cadherin）和锌指转录因子Snail 的表达变化。结果：在4 种ESCC 细胞中NORAD mRNA 均呈高表达状态,同时与TE1、YES-2、KYSE150 细胞相比,EC9706 细胞中NORAD mRNA 呈显著高表达（P<0.01）。与Ctrl 组和NC 组比较,转染NORAD-siRNA 后,si-NORAD 组EC9706 细胞中NORAD 表达水平显著降低（均P<0.01）,EC9706 细胞的增殖和迁移能力显著降低（均P<0.05）;敲低NORAD 表达后,EC9706 细胞中E-cadherin 表达升高而N-cadherin 和Snail 表达降低（均P<0.05）。结论：NORAD 在EC9706 细胞中呈高表达状态,敲低NORAD 表达可通过上调E-cadherin、下调N-cadherin 和Snail表达而抑制EC9706 细胞的增殖和迁移能力。     

组蛋白去乙酰化酶在食管鳞癌中的表达及其表达下调对EC9706细胞生物特性的影响

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase2,HDAC2)在食管鳞癌组织中的表达,并研究其表达下调对食管鳞癌EC9706细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响,以及分析其相关的分子机制。方法:采用免疫组织化学法检测食管鳞癌组织中HDAC2蛋白的表达。将特异性针对HDAC2基因的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)和对照siRNA分别转染食管鳞癌EC9706细胞,实验分3组:未处理组、对照siRNA组和HDAC2siRNA组。蛋白质印迹法检测各组EC9706细胞中HDAC2蛋白的表达。CCK-8计数法检测转染前后细胞的增殖情况。FCM法检测细胞周期和细胞凋亡的变化。蛋白质印迹法检测与细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡相关蛋白的表达变化。结果:HDAC2蛋白在食管鳞癌组织中表达的阳性率为79.71%,显著高于癌旁不典型增生组织的51.11%和正常食管黏膜组织的23.19%,3者之间差异具有统计学意义(χ2=44.121,P=0.000);此外,HDAC2蛋白表达与患者的年龄和性别无关(P均>0.05),但是与组织学分级、浸润深度、TNM分期和淋巴结转移均显著相关(P均<0.05)。HDAC2siRNA能有效下调食管鳞癌EC9706细胞中HDAC2蛋白的表达,明显抑制食管鳞癌EC9706细胞的增殖,促使细胞周期静止在G0/G1期,并诱导细胞凋亡。蛋白质印迹法检测结果显示,HDAC2表达下调能明显提高p21和凋亡相关蛋白bax的表达量,同时降低细胞周期蛋白cyclin D1和bcl-2的表达量。结论:HDAC2可能在食管鳞癌的发生、发展中具有重要作用,其表达下调介导的食管鳞癌细胞增殖抑制、细胞周期静止以及细胞凋亡可能与p21、bax的表达升高和cyclin D1、bcl-2表达降低密切相关。     

SRSF1通过调控VEGFA mRNA可变剪接促进食管鳞状细胞癌Eca9706细胞增殖、侵袭和迁移

背景与目的:丝氨酸/精氨酸富集剪接因子1(serine/arginine-rich splicing factor 1,SRSF1)与肿瘤的发生、发展密切相关.食管癌是常见的消化系统恶性肿瘤,但SRSF1在食管癌中的作用罕有报道.检测SRSF1在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carc...     

人食管癌相关基因4在食管癌细胞系EC9706中表达缺失的机制

目的 探讨人食管癌相关基因4(ECRG4)在食管癌中表达缺失的机制.方法 采用聚 合酶链反应-单链构象多态(PCR-SSCP)和DNA测序的方法检测80对配对食管鳞状细胞癌(ESCC)肿瘤组织和癌旁正常上皮中ECRG4的外显子突变;采用DNA亚硫酸氧盐修饰和序列特异性聚合酶链反应(ssPCR)检测EC9706细胞系ECRG4基因启动子CpG岛甲基化状态;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测去甲基化药物5-氮杂-2-脱氧胞苷或三氧化二砷(As2O3)处理后ECRG4 mRNA的重新表达.结果 80对ESCC配对标本中,ECRG4的4个外显子编码区均未发现突变.EC9706细胞系ECRG4基因核心启动子区16个CpG岛中,有11个呈高甲基化状态,ECRG4 mRNA不表达.EC9706细胞处理前ECRG4 mRNA不表达,去甲基化药物处理后,ECRG4 mRNA均重新表达.结论 甲基化表观遗传学机制是导致ECRG4基因在食管癌细胞系EC9706中表达缺失的一个机制.

Abstract：

Objective To investigate the mechanism of loss of human esophageal cancer-related gene 4 (ECRG4) expression in esophageal squamous cell carcinoma (ESCC.) Methods PCR-SSCP and DNA sequencing analysis were used to detect the mutation of ECRG4 exons in esophageal cancer and matched adjacent normal tissues of 80 patients. DNA bisulfite-modifying ssPCR sequencing assay was used to examine the methylation status of ECRG4 promoter in human esophageal squamous cell carcinoma EC9706 cells. The re-expression of ECRG4 mRNA was examined by RT-PCR in EC9706 cells, after treatment with either demethylation drug 5-aza-2'-deoxycytidine or arsenic trioxide. Results No mutation in the four ECRG4 exons was found in all the ESCC and matched normal adjacent tissues. RT-PCR showed that 11 of 16 CpG islands of ECRG4 promoter were hypermethylated, while ECRG4 mRNA expression level was undetectable in the EC9706 cells. The ECRG4 mRNA was re-expressed after treatment with either demethylation drug 5-aza-2'-deoxycytidine or arsenic trioxide. Conclusion The epigenetic mechanism of methylation is a reason of loss of ECRG4 gene expression in the ESCC cell line EC9706.     

Notch1基因在食管鳞癌细胞株EC9706中的表达及其对细胞凋亡的影响

背景与目的:早期的研究显示,Notch1信号途径与肿瘤的发生密切相关,在细胞的生长、增殖、分化和凋亡中起着十分重要的作用.本研究旨在研究Notch1基因在食管鳞癌EC9706细胞中的表达及其对EC9706细胞凋亡的影响.方法:通过免疫细胞化学方法检测Notch1基因在EC9706细胞中的表达.采用RT-PCR技术扩增Notch1基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-Notch1(命名为pcNICD),转染EC9706细胞,利用RT-PCR及Western blot检测稳定转染pcNICD 载体、转染pcDNA3.1空载体及未处理的EC9706细胞中Notch1的表达,另通过流式细胞仪检测未处理、转染pcDNA3.1和转染pcNICD的EC9706细胞的凋亡.结果:EC9706细胞中发现Notch1基因的表达.与未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞相比,转染pcNICD的EC9706细胞中Notch1基因的mRNA和蛋白表达水平均明显增加,大约增加3倍(P＜0.05);但未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞中Notch1的表达差异无统计学意义(P＞0.05).流式细胞检测结果显示,在未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞中,细胞凋亡率差异无统计学意义(P＞0.05);但与与未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞相比.转染pcNICD的EC9706细胞转染后24 h、48 h和72 h时细胞凋亡率明显增加(P＜0.01).结论:Notch信号途径的激活引起食管鳞癌EC9706 细胞的凋亡.提示Notch1基因有可能成为治疗食管鳞癌的新靶点.     

胰岛素样生长因子1受体在食管鳞癌组织中的表达及RNA干扰沉默其表达对EC9706细胞增殖能力的影响

目的 探讨胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)在食管鳞癌组织中的表达及其与患者临床特征之间的关系,以及RNA干扰沉默其表达对人食管癌EC-9706细胞体外增殖能力的影响.方法 采用免疫组化法,检测80例食管鳞癌组织和18例正常食管上皮组织中IGF-1R的表达,通过RNA干扰技术沉默EC9706细胞中IGF-1R的表达,通过绘制生长曲线、四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验和平板克隆形成试验,观察IGF-1R对细胞体外增殖能力的影响.结果 食管鳞癌组织中IGF-1R表达的总阳性率为86.3%,强阳性率为51.3%;正常食管上皮组织中IGF-1R表达的总阳性率为61.1%,强阳性率为11.1%.食管鳞癌组织中IGF-1R表达的总阳性率和强阳性率均高于正常食管组织(P＜0.01).有淋巴结转移患者组织中IGF-1R表达的总阳性率和强阳性率均高于无淋巴结转移患者(P＜0.01).IGF-1R的表达随肿瘤组织分化程度的增高而降低,差异均有统计学意义(均P＜0.05).不同年龄组间IGF-1R表达差异无统计学意义(均P＞0.05).Ⅲ～Ⅳ期患者组织中IGF-IR表达的总阳性率和强阳性率均高于Ⅰ～Ⅱ期患者(P＜0.01).稳定干扰后的EC9706细胞IGF-1R蛋白表达下降,生长缓慢,细胞倍增时间较实验对照组和空白对照组延长.培养48 h后,稳定转染细胞抑制率为17.3%,高于实验对照组(2.7%,P＜0.01).稳定转染细胞较实验对照组和空白对照组细胞克隆形成能力减弱(P＜0.05).结论 IGF-1R在食管鳞癌组织中呈高表达,与食管鳞癌的发生、转移、分化程度和临床分期相关;RNA干扰沉默IGF-IR的表达,可以使EC9706细胞的体外增殖能力降低.

Abstract：

Objective To explore the correlation of IGF-1R expression with clinical features of esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) and to investigate the effect of silencing IGF-1R by siRNA on the proliferation of esophageal cancer cell line EC9706 cells. Methods Immunohistochemistry was used to detect the expresion of IGF-1R in 80 specimens of ESCC and 18 specimens of normal esophageal mucosa.IGF-I R siRNA was transfected into esophageal squamous cell carcinoma EC9706 cells, and the effect of RNAi was assessed by Western blot. The proliferation of EC9706 cells was determined by drawing growth curve, MTT assay and plate colony-forming assay. Results The total and strong positive rates of IGF-1R expression were 86.3% and 51.3% in ESCC, and 61.1% and 11.1% in normal esophageal epithelium,respectively. The total and strong positive rates of IGF-1 R expression in patients with lymph node metastasis were 94.4% and 74.1%, significantly higher than 69.2% and 3.9%, respectively, in those without lymph node metastasis (P ＜ 0. 01 ). A significantly higher IGF-1 R expression was associated with lower histological grade ( P ＜ 0.05 ). The total and strong rates of IGF-1 R expression in 39 patients of stages Ⅲ and Ⅳ were 97.4% and 71.8%, significantly higher than the 75.6% and 31.7%, respectively, in 41 cases of stages Ⅰ and Ⅱ (P ＜ 0. 01 ). IGF-1 R RNAi significantly inhibited IGF-1R expression and the growth of EC9706cells. The clone formation rate of RNAi-IGF-1R transfected cells was 19.1%, significantly lower than that of 52. 3% in non-transfected cells and 49.0% in empty vector-transfected EC9706 cells ( P ＜ 0.05 ).Conclusions The overexpression of IGF-1R is colerated with lymph node metastasis, differentiation and clinical stage. Down-regulation of IGF-1R can inhibit the proliferation of esophageal cancer EC9706 cells in vitro.     

lncRNA DGCR5通过上调EGFR表达促进食管鳞状细胞癌TE1细胞的恶性生物学行为

目的：探讨长链非编码 RNA（long non-coding RNA,lncRNA）DiGeorge 综合征临界区基因 5（digeorge syndrome critical region gene 5,DGCR5）对食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）TE1细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法：采用qPCR检测ESCC细胞系 TE1、Yes-2、KYSE150 和 Eca9706 中 DGCR5 的表达水平。将siRNA-DGCR5（si-DGCR5）和阴性对照组（si-NC）质粒转染进TE1细胞,用CCK-8、划痕愈合、Transwell小室法分别检测TE1细胞增殖、迁移和侵袭能力。依据GEPIA数据库资料分析食管癌组织中 DGCR5 表达与细胞表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）的相关性,并用qPCR和Western blotting（WB）检测ESCC细胞系中EGFR mRNA和蛋白表达水平,进一步用WB实验检测转染 si-DGCR5 前后 TE1细胞中EGFR蛋白的表达水平。结果：DGCR5 在 ESCC 细胞系中均高表达（均 P<0.01）,转染siDGCR5组TE1细胞中DGCR5的表达水平明显低于si-NC组（P<0.01）。敲低DGCR5后,TE1细胞的增殖、侵袭和迁移能力显著低于si-NC组细胞（均 P<0.01）。GEPIA 数据库的分析显示,食管癌组织中 DGCR5 表达水平与 EGFR 的表达呈正相关（P<0.01）。敲低DGCR5后TE1细胞中EGFR蛋白表达水平明显下降（P<0.01）。结论：lncRNA DGCR5在ESCC细胞中呈高表达,可能通过上调EGFR表达来促进TE1细胞的增殖、侵袭和迁移等恶性生物学行为。     

RNAi干扰食管癌EC9706细胞MTA1基因表达对侵袭和迁移的影响

Objective  To observe the effect of MTA1 gene silencing by RNA interference on invasion and migration of esophageal carcinoma 9706 cells. Methods  siRNA expression vector targeting MTA1 gene was transfected into EC9706 cells by Lipofectamine method. MTA1 mRNA and protein expressions were detected through quantitative RT-PCR and Western Blot, respectively. The invasion and migration of EC9706 cells were evaluated by scrape wound healing assay and cell invasion assay in vitro. Results  MTA1 gene expression decreased significantly. The scrape wound of EC9706 cells healed more slowly and the cell population that cut through Matrigel were less in the EC9706 cells transfected with siRNA expression vector than non-transfected EC9706 cells and EC9706 cells transfected with blank vector (P < 0.05). Conclusion  MTA1 gene silencing by RNAi can inhibit the invasion and migration of esophageal carcinoma effectively. It is supposed that MTA1 gene may be a prospective molecule target in tumor therapy. Supported by a grant from the “Tenth Five-Year Plan” Research Foundation for the Key Construction Project (211 Projects) by Ministry of Education of China (2002).