实时荧光定量PCR法检测卵巢良、恶性肿瘤中Id1 mRNA的表达

目的:检测Id1 mRNA在人卵巢良、恶性肿瘤组织中的表达及其意义。方法:用SYBR GreenI嵌合荧光法进行实时逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),检测Id1 mRNA在人良性卵巢囊肿和卵巢癌组织中的相对定量,分析Id1 mRNA的含量变化与卵巢良、恶性病变的关系。结果:Id1 mRNA在卵巢癌组织中的含量明显高于良性卵巢囊肿组织(P<0.01)。卵巢癌组织分化低和恶性度高的组织Id1mRNA的表达量明显高于分化高或恶性程度低的组织。高Id1mRNA表达和患者预后呈显著相关(P<0.001)。结论:卵巢癌组织中Id1 mR-NA表达显著高于良性囊肿组织,而且与癌组织恶性度和预后密切相关。Id1 mRNA实时定量检测有助于从基因转录水平对卵巢癌进行早期辅助诊断并初步判断预后。     

实时荧光定量PCR法检测卵巢良、恶性肿瘤中Id1 mRNA的表达

目的：检测Id1 mRNA在人卵巢良、恶性肿瘤组织中的表达及其意义。方法：用SYBR GreenI嵌合荧光法进行实时逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）,检测Id1 mRNA在人良性卵巢囊肿和卵巢癌组织中的相对定量,分析Id1 mRNA的含量变化与卵巢良、恶性病变的关系。结果：Id1 mRNA在卵巢癌组织中的含量明显高于良性卵巢囊肿组织（P〈0.01）。卵巢癌组织分化低和恶性度高的组织Id1mRNA的表达量明显高于分化高或恶性程度低的组织。高Id1mRNA表达和患者预后呈显著相关（P〈0.001）。结论：卵巢癌组织中Id1 mR-NA表达显著高于良性囊肿组织,而且与癌组织恶性度和预后密切相关。Id1 mRNA实时定量检测有助于从基因转录水平对卵巢癌进行早期辅助诊断并初步判断预后。     

沉默HMGB1 基因对裸鼠人上皮性卵巢癌移植瘤生长的抑制作用

目的：探讨高迁移率族蛋白B1（high mobility group box 1,HMGB1）基因对裸鼠人上皮性卵巢癌移植瘤生长的影响。方法：选取对数生长期的人上皮性卵巢癌细胞株SKOV3 细胞建立裸鼠人上皮性卵巢癌移植瘤模型,将造模成功的裸鼠随机分成对照组和HMGB1-siRNA 组,分别在接种细胞后第7、9、11、14、16 天于荷瘤鼠腋下注射等量的生理盐水和HMGB1-siRNA。3 周后颈椎脱臼法处死裸鼠、分离肿瘤组织,测量肿瘤的体积并绘制肿瘤生长曲线,以Tunel 染色法检测移植瘤细胞的凋亡情况,Western blotting 检测移植瘤组织中HMGB1、STAT3、p-STAT3 的表达水平,免疫组化染色技术检测移植瘤组织中VEGF-A的表达和微血管形成情况。结果：与对照组相比,HMGB1-siRNA组的肿瘤体积增长速度减缓,第21 天起HMGB1-siRNA组的肿瘤体积显著小于对照组（P<0.05）;HMGB1-siRNA 成功敲降了移植瘤组织细胞中HMGB1 mRNA的表达,移植瘤组织中HMGB1-siRNA组的细胞凋亡率较对照组显著升高[ （34±8）% vs（6±2）%,P=0.04],HMGB1 和p-STAT3 表达显著降低（P<0.05）,VEGF-A表达和微血管数均显著低于对照组（均P<0.05）。结论：敲降HMGB1 基因可能通过抑制HMGB1/STAT3 信号通路降低VEGF-A的表达和微血管形成,从而促进肿瘤组织细胞凋亡和减缓移植瘤生长。     

肺癌患者Id蛋白及基因的表达及其与临床参数的关系

 目的　探讨4种分化抑制因子Id蛋白和基因在肺癌的表达及其与临床参数的关系。方法　采用组织芯片和免疫组织化学方法研究69例肺癌和34例癌旁正常肺组织中Id1、Id2、Id3、Id4蛋白表达水平;应用RT-PCR方法研究30例肺癌标本中Id1、Id2、Id3、Id4基因的表达并探讨其与各项临床病理特征的关系。 结果　肺癌中4种Id蛋白和基因的表达水平均高于癌旁正常肺组织,差异有统计学意义（P＜0.05）;患者的性别、年龄、组织类型、临床分期与4种Id蛋白和基因的高表达无关（P＞0.05）;Id1、Id2、Id3蛋白在分化差与分化好的肺癌中的表达差异有统计学意义（P＜0.05）, Id1蛋白在有淋巴结转移与无淋巴结转移肺癌中的表达差异有统计学意义（P＜0.05）; Id1、Id3基因在有淋巴结转移与无淋巴结转移以及在分化程度差与分化程度好的标本中的表达差异有统计学意义（P＜0.05）。结论　4种Id基因作为癌基因在肺癌的发生、发展中发挥作用,其表达高低与肺癌的恶性程度有关,有可能成为肺癌的预后指标。     

Neu RNAi对卵巢癌细胞生长、凋亡及药物敏感性的作用

目的探讨nenRNAi对卵巢癌耐药细胞株SKOV3／DDP细胞生长、凋亡及药物敏感性的作用,寻找下调基因表达并逆转化疗耐药的方法,为卵巢癌的基因治疗探索新途径。方法应用含有u6启动子的pSilencer 1．0-U6表达载体构建neu基因的小干扰RNA（siRNA）表达载体（pSilencer—neu）,用脂质体方法将pSilencer—neu转染卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3／DDP,另设未转染组及转染pSilencer—control组为对照。显微镜下观察转染前后细胞的变化;用RT—PCR及Western Blot检测neu基因mRNA及蛋白的表达;MTT法检测细胞生长情况;流式细胞仪检测细胞凋亡及周期的变化;加入顺铂后检测RNAi对SKOV3／DDP顺铂药物敏感性的影响。结果neuRNAi可明显下调卵巢癌耐药细胞株SKOV3／DDP中neu的基因表达;使其细胞生长受到抑制,生长速度减慢,生长曲线低平;细胞凋亡增加且细胞周期发生变化,G1／G0期细胞增多,S期细胞则减少;顺铂耐药实验显示,转染RNAi的SKOV3／DDP细胞IC50明显下调,细胞凋亡率显著增加。结论应用RNAi可以部分阻抑neu基因在卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3／DDP中的表达,使SKOV3／DDP细胞生长减慢、凋亡增加,而且对顺铂的敏感性增强。     

MCUR1表达对卵巢癌细胞生长的影响及作用机制

 目的 探讨线粒体钙单向转运体调节分子1（mitochondrial calcium uniporter regulator 1,MCUR1）与卵巢癌患者预后的关系,及其对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响和可能的作用机制。方法 从TCGA（the cancer genome atlas）数据库下载372例卵巢癌患者数据集,采用Kaplan-Meier法分析MCUR1与卵巢癌患者预后的关系。采用免疫组织化学法检测MCUR1在卵巢癌组织中的表达水平。转染MCUR1干扰片段及过表达质粒至卵巢癌Ａ2780细胞（siMCUR1组和MCUR1组）,分别设置相应阴性对照（siCtrl组和EV组）。采用qRT-PCR和Western blot实验检测转染效果。采用MTS法、克隆形成实验检测细胞增殖情况。裸鼠皮下荷瘤后采用免疫组织化学法和组织TUNEL法检测增殖和凋亡情况,Western blot检测细胞增殖和凋亡相关分子的表达情况。结果 MCUR1高表达组中位生存期高于低表达组（53.7 个月 vs 41.3 个月,P=0.003）。与siCtrl组相比,siMCUR1组细胞增殖能力升高（P<0.01）,裸鼠皮下荷瘤生长速度加快（P<0.01）,Ki67表达升高（P<0.01）,细胞凋亡能力减弱（P<0.05）,p53、Caspase-3和Bax蛋白表达下调,而Bcl2、Cyclin D1和Cyclin E蛋白表达上调;与EV组相比,MCUR1组细胞增殖能力下降（P<0.01）,裸鼠皮下荷瘤生长速度减缓（P<0.01）,Ki67表达降低（P<0.01）,细胞凋亡能力增强（P<0.05）,p53、Ｃaspase-3和Bax蛋白表达上调,而Bcl2、Cyclin D1和Cyclin E蛋白表达下调。结论 MCUR1通过调控p53通路进而调控卵巢癌细胞的增殖与凋亡,MCUR1可能作为抑癌因子在卵巢癌中发挥作用,有望成为卵巢癌诊断及治疗靶点。     

内皮抑素抑制卵巢癌细胞生长的初步研究

目的：内皮抑素是一种特异性血管内皮生长抑制因子,本研究目的在于探讨人内皮抑素对卵巢癌SKOV3细胞生长的抑制作用及其机制。方法：MTT法观测内皮抑素对SKOV3细胞的生长抑制作用;透射电镜观察内皮抑素处理SKOV3细胞后细胞的凋亡情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期;RT-PCR法检测内皮抑素处理SKOV3细胞后凋亡调控基因bcl-2和baxmRNA的表达。结果：内皮抑素具有体外抑制SK-OV3细胞增殖的作用,15μg/ml内皮抑素组的A490值（0.454）明显低于PBS对照组（0.686）（P〈0.01）;内皮抑素能诱导SKOV3细胞凋亡;内皮抑素对SKOV3细胞中bcl-2和bax的表达无明显改变;结论：人内皮抑素具有抑制SKOV3细胞生长的作用,其机制可能与诱发细胞凋亡相关。     

MTA1在卵巢癌中的表达及其对卵巢癌细胞侵袭转移影响的研究

  目的  研究转移相关基因1(metastasis-associated-gene1, MTA1)表达与卵巢癌发生发展转移的关系, 研究MTA1对卵巢癌侵袭转移能力的影响, 并探讨抑制卵巢癌侵袭转移的潜在靶点。  方法  免疫组织化学法检测110例卵巢癌组织中MTA1的蛋白表达水平, 分析MTA1蛋白表达与卵巢癌分化程度、临床分期及与腹腔转移的关系。并通过脂质体介导方法, 将特异性siRNA表达载体psilenter2.0-MTA1-siRNA转染入人卵巢癌细胞系HO-8910PM, 采用RT-PCR以及Western blot检测特异性siRNA对MTA1mRNA及蛋白表达的抑制效果。应用划痕损伤实验及Transwell实验检测MTA1对卵巢癌细胞侵袭转移能力的影响。  结果  MTA1随卵巢癌组织学分化程度的升高而降低, 呈负相关, MTA1的表达随着FIGO分期期别的增加而增加, 呈正相关, MTA1的表达随卵巢癌腹腔转移而增加, 呈正相关。RT-PCR及Western blot结果显示, siRNA成功抑制卵巢癌细胞系HO-8910PM中MTA1的表达。划痕损伤实验显示转染后划痕损伤愈合明显减慢, 迁移率明显降低, Transwell体外侵袭实验结果显示, 转染后穿膜细胞百分率显著降低(P < 0.05)。  结论  MTA1表达水平的增高与卵巢癌的分化程度、临床分期及远处转移密切相关, 体外研究显示抑制MTA1在卵巢癌细胞中的表达, 使细胞生长、侵袭及转移能力均受到抑制, 提示MTA1在卵巢癌的远处侵袭转移过程中发挥重要作用, 可能成为卵巢癌基因治疗的潜在靶点。      

细胞分化抑制子Id1在前列腺癌中的表达及意义

目的:细胞分化抑制子Id1(inhibitor of differentiation or inhibitor of DNA binding)蛋白与肿瘤的发生、侵袭及远处转移有关。本研究主要观测人前列腺癌组织中Id1蛋白的表达,并分析其应用价值。方法:采用免疫组化SP法检测43例前列腺癌(prostate cancer,PC)、12例前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)和2例正常前列腺组织中Id1蛋白的表达。结果:Id1蛋白在正常前列腺组织中无表达;BPH组织中无或弱表达(5/12);所有前列腺癌组织都有阳性表达(43/43),而且大多数以中、高度表达为主(与BPH相比,P<0.01);前列腺癌中Id1的表达水平与Gleason分级成正比(rs=0.63P<0.01)。结论:人前列腺癌组织中,Id1蛋白有过度表达,且与前列腺癌的Gleason分级呈正相关,表明与癌组织的恶性程度有关。Id1蛋白有可能作为判断前列腺癌发展的一种新的肿瘤标志。     

Id1在人肺癌细胞系A549肿瘤细胞球中的表达

目的:探讨Id1在人肺癌细胞系A549肿瘤细胞球中的表达情况,为肺癌干细胞的基因靶向治疗提供理论依据。方法:应用干细胞无血清培养技术培养A549细胞肿瘤细胞球,采用克隆形成实验检测肺癌肿瘤球细胞增殖能力,流式细胞术检测ABCG2在肺癌肿瘤球细胞中的表达情况,Western blotting检测Id1在肺癌肿瘤球细胞中的表达情况。结果:与贴壁细胞相比,人肺癌细胞系A549肿瘤细胞球细胞具有较强的克隆能力,且高表达ABCG2,符合肺癌干细胞的特点,Id1在人肺癌细胞系A549肿瘤细胞球细胞中高表达。结论:Id1可能成为靶向肺癌干细胞肺癌治疗的靶点。     

分化抑制因子Id-1在卵巢癌中的表达及临床意义

目的:探讨Id-1在人卵巢癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法:采用免疫组织化学方法检测Id-1在50例卵巢癌组织中的表达,并分析其与临床病理特征的关系。结果:在卵巢癌组织中Id-1的表达率为80.4%,在交界性卵巢肿瘤表达率为30%,正常卵巢组织的表达率为5%,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。Id-1过表达与卵巢癌组织分化程度及淋巴结转移有关(P<0.05),而与患者年龄、临床分期无关(P>0.05)。结论:Id-1在卵巢癌组织中高表达并与卵巢癌组织分化程度及淋巴结转移有关,在卵巢癌的发生、发展中起重要作用。     

化学合成siRNA对卵巢癌SKOV3细胞中STAT3基因表达的抑制作用

目的:观察小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对卵巢癌SKOV3细胞STAT3表达的抑制作用及其诱导凋亡作用的机制。方法:将STAT3 siRNA经LipofectamineTM2000脂质体介导的方法将其转染到卵巢癌细胞株SKOV3。实验分为以下3组:空白对照组(未经转染的人卵巢癌SKOV3细胞)、阴性对照转染组(阴性干扰STAT3)及特异性转染组(干扰STAT3)。用MTT法检测siRNA转染后SKOV3细胞增殖活性;流式细胞仪检测其对细胞凋亡的影响,免疫荧光法检测STAT3蛋白水平的变化,qRT-PCR和Western blot方法分别检测STAT3 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果:成功转染STAT3干扰片段,转染率达90%。siRNA干扰STAT3组明显抑制卵巢癌细胞增殖活性,细胞凋亡率33.7%,并且下调STAT3蛋白在SKOV3细胞中的表达。RT-PCR和Western blot结果显示:siRNA STAT3组明显抑制人卵巢癌细胞SKOV3中STAT3 mRNA和蛋白的表达,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:特异性转染组48h后能有效地抑制SK-OV3细胞内STAT3的表达、抑制细胞增殖,其抑制卵巢癌细胞的机制可能与抑制了STAT3信号通路,促进细胞凋亡有关,为卵巢癌的生物治疗提供了一定的依据。     

Oxytocin inhibits the progression of human ovarian carcinoma cells in vitro and in vivo

The neurohypophyseal nonapeptide oxytocin (OT) is involved in many biologic functions and regulation of cell proliferation under both physiologic and neoplastic conditions. In some cases, OT exhibits an oxytocin receptor (OTR)-mediated antiproliferative effect on cancer cells. In this study, we examined the effects of OT on ovarian carcinoma progression in vitro and in vivo. We investigated the inhibitory effects of OT on cell growth, invasion and migration in vitro. Furthermore, we examined the OT effects in vivo ovarian carcinoma model. We demonstrated OTR expressions in the large majority of ovarian carcinoma tissues, and OT inhibited not only proliferation but also migration and invasion in ovarian carcinoma cells in vitro. Furthermore, we examined the mechanisms of the antiinvasive ability of OT. Secretion of matrix metalloproteinase 2 was slightly inhibited by 10(-7) M OT, while treatment with 10(-7) M OT for 24 hr remarkably enhanced the expression of E-cadherin. In addition, our in vivo study showed that intraperitoneal administration of OT resulted in the reduction of intraperitoneal dissemination of ovarian carcinoma cells. Mean tumor burden in the OT-treated group (0.2 +/- 0.11 g) was significantly (p < 0.05) less than that of physiologic saline-treated group (0.5 +/- 0.54 g). This evidence implies that OT may functionally suppress peritoneal dissemination in ovarian carcinoma.     

抑癌基因OVCA1体外对卵巢癌细胞A2780迁移和侵袭的抑制作用

目的:探讨卵巢癌基因1[ovarian cancer gene 1,OVCA1;也称为DPH2L( diphthamide synthesis protein 2-like)基因]体外对卵巢癌细胞系A2780迁移和侵袭能力的抑制作用.方法:采用脂质体法将GFP标记的携带OVCA1的重组质粒pEGFP-OVCA1或GFP空白质粒分别转染A2780细胞后,G418筛选稳定转染细胞,有限稀释法筛选稳定转染细胞的单克隆细胞株,荧光显微镜检查绿色荧光蛋白的表达及RT-PCR方法检测A2780细胞OVCA1基因mRNA的表达.A2780-OVCA1细胞为实验组, A2780-GFP细胞和A2780细胞为对照组,采用划痕实验、Transwell体外迁移实验和Matrigel体外侵袭实验检测OVCA1对A2780细胞迁移和侵袭能力的影响.结果:重组质粒pEGFP-OVCA1转染后获得了稳定表达GFP标记OVCA1蛋白的A2780细胞株.A2780-OVCA1组划痕后的细胞迁移速度明显小于两对照组(P<0.05);A2780-OVCA1组穿过Transwell滤膜的迁移细胞数明显少于两对照组(P<0.05);A2780-OVCA1组穿过Matrigel滤膜的侵袭细胞数明显少于两对照组(P<0.05).结论:OVCA1在体外具有显著抑制卵巢癌A2780细胞迁移和侵袭的作用.