CYP3A5基因多态性与晚期非小细胞肺癌紫杉醇化疗敏感性关系的研究

[目的]探讨CYP3A5基因多态性与晚期非小细胞肺癌紫杉醇化疗敏感性的关系。[方法]对接受以紫杉醇为基础化疗方案进行化疗的60例晚期非小细胞肺癌患者,采用PCR-RFLP方法检测外周血CYP3A5＊1/＊3基因多态性,比较不同基因型之间紫杉醇化疗近期疗效的差异。[结果]60例患者中,CYP3A5基因为＊1/＊1、＊1/＊3和＊3/＊3型的患者数分别有6例（10.00%）、20例（33.33%）和34例（56.67%）。＊1/＊1和＊1/＊3基因型患者的有效率为19.23%,＊3/＊3基因型患者的有效率为55.88%,＊1/＊1和＊1/＊3基因型患者的有效率明显低于＊3/＊3基因型患者（P=0.004）。[结论]对非小细胞肺癌患者治疗前进行CYP3A5基因型的测定,可预测紫杉醇的化疗疗效。     

非小细胞肺癌化疗敏感性与其临床生物学行为

〔目的〕研究非小细胞肺癌对化疗药物原发敏感情况及肺部临床生物学行为对药敏的影响。〔方法〕采用MTT比色法测定31例非小细胞肺癌标本对9种化疗药物的敏感性，每种药物设3个浓度等级，根据每种药物的抑制率进行单因素方差分析。（结果）31例肺癌标本对9种化疗药物的敏感程度依次为；异长春花碱83.87％、长春新碱77.42％、丝裂霉素74.19％、阿霉素69.72％、卡铂69、72％、顺铂61．29％、足叶乙甙58．06%、氨甲喋呤22.58％、5氟脲嘧啶19．35％；随着9种化疗药物浓度的增加，其药物抑制率亦明显增加；足叶动式和阿霉素对鳞癌抑制率明显高于腺癌；足叶乙甙和顺铂对低分化肺癌抑制单明显高于中高分化肺癌。〔结论〕非小细胞肺癌作外药敏性受多个试验因素影响，并与非小细胞肺癌的病理类型和分化程度相关。     

XRCC1基因多态性与晚期非小细胞肺癌铂类药物化疗敏感性的关系

目的: 研究DNA修复基因XRCC1的T-77C和Argl94Trp多态性与晚期肺癌患者铂类药物化疗敏感性的关系.方法: 收集经病理学确诊的、接受铂类药物为基础的化疗的晚期肺癌患者107例,提取外周血DNA,用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测基因型,分析各基因型与疗效的关系.结果: XRCC1-77位点携带至少1个C等位基因患者的化疗有效率较野生型者提高约46%,但未达到统计学意义(OR:1.46,95%CI:0.56-3.79,P=0.441).XRCC1 194位点携带至少1个Trp等位基因患者的治疗有效率是野生型者的2.51倍(OR=2.51,95%CI:1.12-5.62,P=0. 025).结论: XRCC1 Argl94Trp多态性与晚期肺癌铂类药物化疗敏感性相关,但未能发现XRCC1 T-77C多态性与化疗疗效存在明显关联.     

DNA修复基因预测非小细胞肺癌化疗敏感性研究进展

人类细胞具有一系列DNA修复系统，以防御体内和体外因素引起的不同类型的DNA损伤，保持基因组的完整性。研究表明DNA修复能力低可能与个体肿瘤易感性密切相关，然而在肿瘤的治疗过程中，DNA损伤修复能力的增加却阻碍了疗效的发挥。肿瘤细胞DNA修复能力与化疗敏感性密切相关。近来许多研究表明，DNA修复基因单核苷酸多态性（single nueleotide polymorphism，SNP）、甲基化状态以及基因的过表达均可改变DNA修复的能力，因此检测DNA修复基因的分子状态可以预测个体肿瘤化疗的敏感性。     

BAG-1 在非小细胞肺癌中的表达与含铂方案化疗敏感性的关系*

目的：研究BAG-1 在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer ,NSCLC ）中的表达与临床特征及含铂方案化疗敏感性的关系,探讨NSCLC 的铂类耐药机制。方法：应用免疫组化的方法检测125 例NSCLC 术后石蜡标本中BAG-1 蛋白的表达情况,其中75例术后给予含铂方案化疗、50例单独行手术治疗,随访后进行生存预后分析。结果：1）BAG-1 在NSCLC 中存在高表达（阳性率为64.8%）;2）BAG-1 表达水平与组织学分级相关,分级越差其阳性率越高（P=0.024、0.042）,与其它临床特征之间差异均无统计学意义;3）BAG-1 阳性组具有生存优势,且在胞浆中的表达具有更低的死亡风险（P=0.039）;4）BAG-1 阳性组在接受含铂方案化疗后不能明显延长生存时间,阴性组更能从中受益（P=0.048）。 结论：BAG-1 与铂类药物化疗敏感性相关,可能成为新型的临床预后指标,有助于NSCLC 个体化治疗方案的选择。     

非小细胞肺癌的术前化疗

我科从1985年3月至1988年9月,对59例中晚期非小细胞肺癌,进行了术前大剂量PVE(C)联合化疗,治疗结果报告如下: 全部病例均经病理组织学或细胞学诊断证实。年龄26—69岁;男43例,女16例;Ⅰ期1例,Ⅱ期27例,Ⅲ期31例;鳞癌42例,腺癌17例。 本组对拟行手术治疗的病例均常规行术前化疗,部分不很适宜手术治疗的病例亦先行化疗,部分治疗有效病例再行手术。     

甘露糖对6个人非小细胞肺癌细胞系放射敏感性影响

目的 探讨甘露糖对6个人非小细胞肺癌细胞系放射敏感性的影响及其可能机制。方法 采用Western blot检测磷酸甘露糖异构酶在6个肺癌细胞系中的表达。利用MTT法观察甘露糖对肺癌细胞系的增殖抑制作用;分别给予对照组、甘露糖组0、2、4、6、8、10Gy照射,采用平板克隆形成实验检测甘露糖对6个肺癌细胞放射敏感性的影响;流式细胞术检测对照组、甘露糖组、照射组及联合组细胞的凋亡情况。结果 6个肺癌细胞系中磷酸甘露糖异构酶表达量各不相同,其中A549细胞表达量最高,H460细胞表达量最低。11.1mmol/L甘露糖对A549、H460细胞系抑制作用相同,随着甘露糖浓度增加,对H460细胞系抑制作用更显著。采用11.1mmol/L的甘露糖可明显增加H460细胞系放射敏感性及细胞凋亡率,而对A549细胞系放射敏感性和凋亡率影响不大。结论 在磷酸甘露糖异构酶高表达的6个肺癌细胞系中,甘露糖可增强部分肿瘤细胞的放射敏感性。     

非小细胞肺癌患者外周血细胞化疗药物敏感性及其临床意义的研究

目的:通过非小细胞肺癌外周血淋巴细胞和粒细胞体外培养,对其常用的化疗药物进行敏感性检测,以筛选出最佳的化疗方案.方法:应用MTT吸光度法测定32例非小细胞肺癌患者外周血标本对临床常用的4种化疗药物及其组成的2个联合化疗方案的敏感性或耐药性,比较其差异.结果: 非小细胞肺癌化疗敏感性个体差异较大,联合化疗药物的敏感性明显优于单药.各药物对淋巴细胞和粒细胞的平均抑制率由高到低的顺序一致,各用药方案间比较均存在差异,部分有显著性差异(P<0.01).结论:外周血有核细胞体外药敏试验或耐药试验对临床肿瘤化疗用药有一定的预见性和指导性,对非小细胞肺癌患者进行化疗时,应尽量个体化用药并选择联合用药方案.     

非小细胞肺癌患者外周血细胞化疗药物敏感性及其临床意义的研究

目的：通过非小细胞肺癌外周血淋巴细胞和粒细胞体外培养,对其常用的化疗药物进行敏感性检测,以筛选出最佳的化疗方案。方法：应用MTT吸光度法测定32例非小细胞肺癌患者外周血标本对临床常用的4种化疗药物及其组成的2个联合化疗方案的敏感性或耐药性,比较其差异。结果：非小细胞肺癌化疗敏感性个体差异较大,联合化疗药物的敏感性明显优于单药。各药物对淋巴细胞和粒细胞的平均抑制率由高到低的顺序一致,各用药方案间比较均存在差异,部分有显著性差异（P〈0.01）。结论：外周血有核细胞体外药敏试验或耐药试验对临床肿瘤化疗用药有一定的预见性和指导性,对非小细胞肺癌患者进行化疗时,应尽量个体化用药并选择联合用药方案。     

Establishment,characterization and chemosensitivity of two human glioma derived cell lines

Summary Two continuous human glioma derived cell lines, LI and DF, were established in our laboratory. Both cell lines showed cytological features andin vitro behavior similar to those of the respective original neoplasms. These two lines were characterized for their main biological properties includingin vitro andin vivo growth rate, clonogenic ability and tumorigenicity in nude mice. The plating efficiencies were generally high both during exponential and stationary growth phases and a high tumorigenicity was observed. All injected nude mice developed tumors. The two lines were tested for chemosensitivity to 1,3-bis(2-chloroethyl)-1-1nitrosourea (BCNU) and cis-Diamminedichloroplatinum II (DDP). Heterogeneity in biological features and in drug sensitivity was observed. Exposure of the two lines to BCNU and DDP showed that the glioblastoma (LI) was less sensitive than the anaplastic astrocytoma (DF). For both lines BCNU was more effective on cells in plateau than in exponential phase, while the killing effect of DDP was not phase-dependent.     

沉默ATF5对卵巢癌细胞顺铂敏感性影响的研究

目的:探讨显性负抑制人转录激活因子5(ATF5)对卵巢癌细胞SKOV-3顺铂敏感性的影响。方法:采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测不同卵巢癌细胞系ATF5的表达。采用脂质体介导法将真核表达质粒pLeGFP-C1-NT-Azip-ATF5和pLeGFP-C1分别转染SKOV-3细胞,同时设空白对照组;于转染后24h给予不同浓度的顺铂作用48h,通过MTT法测定细胞增殖抑制率;转染后24h给予4μmol/L顺铂作用0、12、24和48h,通过流式细胞术和蛋白质印迹法分别检测细胞凋亡和Bcl-2蛋白的表达。结果:ATF5在3种卵巢癌细胞系中均有不同程度的表达,其中SKOV-3细胞系表达最高;显性负抑制SKOV-3细胞内源性ATF5的功能联合顺铂作用后,与非特异性转染组和空白对照组相比,特异性转染组细胞增殖明显受抑制,顺铂的IC50由5.4μmol/L下降为3.6μmol/L;顺铂作用24h,特异性转染组细胞凋亡率显著升高,约为非特异性转染组3倍,抗凋亡基因Bcl-2蛋白表达明显下降,P<0.05。结论:显性负抑制ATF5的表达可明显增强卵巢癌细胞系SKOV-3对顺铂的化疗敏感性,其协同顺铂诱导细胞凋亡的机制可能与Bcl-2的下调相关。     

RAB5A对人肺腺癌细胞系侵袭转移作用的研究

目的：探讨RAB5A基因在人肺腺癌细胞系侵袭和转移中的作用。方法：采用体外重建基底膜侵袭实验和癌细胞粘附能力；癌细胞趋化性运动能力、癌细胞分泌明胶酶的能力及活性的测定，分析RAB5A正义真核表达载体转染后的AGZY83－a和反义RNA转染后的Anip973细胞的侵袭、转移能力的改变。结果：RAB5A正义表达载体PcDNA3.1-RAB5A转染的AGZY83－a重建基底膜侵袭能力明显增强，统计学意义显著（P＜0．0005），细胞趋化性运动能力显著增高（P＜0．0005），对基底膜成分的粘附能力增大（P＜0．05），以及明胶酶分泌及活性增强等一系列趋向Anip973的变化。PcDNA3-AntiRAB5A反义RNA表达载体对Anip973重建基底膜侵袭力明显下降（P＜0．0025），趋化性运动能力显著降低（P＜0．005），对基底膜成分粘附能力降低（P＜0．05），以及明胶酶分泌减少等一系列趋向AGZY83－a的变化。结论：RAB5A在肺腺癌侵袭轩移表型形成中发挥重要的作用。反义RNA可阻断RAB5A基因的翻译过程。     

ROS1基因重排在非小细胞肺癌中的应用

目的:建立荧光原位杂交方法（fluorescent in situ hybridization,FISH）检测ROS1基因重排,评价检测试剂在临床样本中的检测情况。方法:依据ROS1断裂重排方式,设计、制备双色荧光探针。以人外周血培养细胞为检测对象评价ROS1基因重排检测探针的灵敏度和特异性,建立阴性阈值。以NSCLC患者的肿瘤组织样本为对象进行ROS1重排检测及性能评价。结果:建立的FISH方法在人外周血培养细胞检测中特异性和灵敏度均达到100%,在对192例临床样本制备的高密度组织芯片的检测中,筛查出1例ROS1 FISH阳性样本。结论:本研究制备的双色荧光探针可用于ROS1基因重排检测。通过ROS1重排检测,将有助于临床方案制定,辅助个体化治疗。     

Prognostic significance and therapeutic potential of eukaryotic translation initiation factor 5A (eIF5A) in hepatocellular carcinoma

Using comparative proteomic and genomic approaches, the authors identified eukaryotic translation initiation factor 5A (eIF5A) as an oncofetal molecule highly abundant in mouse embryonic livers and human hepatocellular carcinoma (HCC) cell lines. To evaluate the oncogenic role and prognostic significance of eIF5A in HCC, we investigate the expression patterns of the two isoforms (eIF5A1 and eIF5A2) in a cohort of 258 HCC cases by cDNA microarray. Both eIF5A isoforms were expressed in the tumors, and clinically correlated eIF5A1 with more numbers of tumor nodules and eIF5A2 with tumor venous infiltration in HCC. In a separate cohort of 50 HCCs, high level of eIF5A2, but not eIF5A1, was associated with elevated levels of deoxyhypusine synthase and deoxyhypusine hydroxylase that catalyze post‐translational hypusination of eIF5A protein. Interestingly, N1‐guanyl‐1,7‐diaminoheptane (GC7), which is an inhibitor for the first step of eIF5A hypusination, was shown to significantly impair the cell proliferation and invasion of primary HCC cells (HepG2 and Hep3B). To further demonstrate the tumorigenic role associated with eIF5A, a drastic reduction of cell proliferation was associated with suppression of eIF5A2 by transfecting Hep3B, H2‐P and H2‐M HCC cells expressing high level of this isoform using small interfering RNA (siRNA) against eIF5A2. For these assays, a milder response was usually observed in normal hepatocyte cell line. Therefore, these findings suggest that eIF5A plays an important role in HCC tumorigenesis and metastasis, and targeting eIF5A hypusination by GC7 inhibitor or eIF5A2 by RNA interference (RNAi) may offer new therapeutic alternatives to HCC patients.     

过表达程序性细胞死亡基因5 提高脑神经胶质瘤细胞对替莫唑胺的化疗敏感性

[摘要] 目的：探讨抑癌基因程序性细胞死亡基因5（programmed cell death 5 gene, PDCD5）对脑神经胶质瘤细胞增殖及替莫唑胺（temozolomide，TMZ）化疗敏感性的影响。方法：收集吉林大学第一临床医院神经外科2009 年1 月至2014 年12 月间收治的脑神经胶质瘤患者116 例。分别利用qPCR、WB及免疫组化方法检测神经胶质瘤细胞系U87、U251、稳定克隆U87-PDCD5 细胞、转染si-PDCD5 后的脑胶质瘤细胞以及原发性神经胶质瘤组织中PDCD5 mRNA及蛋白质的表达情况。MTT法检测过表达或敲降PDCD5 对胶质瘤细胞生长及TMZ化疗敏感性的影响。建立脑胶质瘤细胞系U87 裸鼠皮下荷瘤模型，随机分为对照组、TMZ组、PDCD5 组和TMZ+外源性PDCD5 重组表达载体联合组，治疗20 d 后断颈处死动物，切取瘤组织，测量瘤体积并称瘤质量。采用qPCR、WB 法检测移植瘤组织中PDCD5 的表达水平，分析PDCD5 联合TMZ 治疗对脑神经胶质瘤生长的影响。结果：PDCD5 mRNA和蛋白在U87 细胞中的相对表达量明显低于在U251 细胞中的相对表达量（均P<0.05）；在高级别脑神经胶质瘤组织中，PDCD5 mRNA和蛋白的表达明显低于低级别组织（均P<0.05）；U87-PDCD5 和U251 细胞对TMZ的敏感性均高于U87 细胞（均P<0.05），U87-PDCD5-siRNA、U251-siRNA 组细胞对TMZ的敏感性均明显低于对照组（均P<0.05）。比较裸鼠移植瘤的瘤体积和质量，对照组>TMZ组>PDCD5 组>联合组（均P<0.05）；各组移植瘤组织内PDCD5 mRNA及蛋白的表达水平趋势与之相反（均P<0.05）。结论：PDCD5 过表达可增强脑神经胶质瘤细胞对TMZ的化疗敏感性，而沉默PDCD5 表达作用则相反，PDCD5 与TMZ联合应用可更好地抑制脑神经胶质瘤裸鼠移植瘤的生长。     

miR-30a-5p通过靶向下调ATF1提高非小细胞肺癌A549细胞放射敏感性北大核心

目的:探索miR-30a-5p对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)A549细胞的放射增敏效应及其相关机制,为提高NSCLC放射敏感性提供理论依据。方法:采用qRT-PCR检测人正常肺上皮细胞株BEAS-2B、人肺癌细胞株A549、H460中miR-30a-5p表达情况;应用miR-30a-5p agomir、antagomir及对照转染A549细胞株,联合放射,检测miR-30a-5p对A549细胞株的放射增敏效应;通过生物信息学预测并筛选miR-30a-5p的靶基因,采用双荧光素酶报告基因检测进行验证;siATF1、miR-30a-5p agomir及siATF1+miR-30a-5p agomir转染A549细胞,通过qRT-PCR、Western Blotting检测靶基因表达与miR-30a-5p的关系,并通过平板克隆形成实验检测其对A549细胞株的放射增敏效应。结果:miR-30a-5p在A549和H460细胞株中表达均低于BEAS-2B细胞株(P<0.001);miR-30a-5p agomir转染联合放射,A549细胞放射生物学参数D_(0)、D_(q)、N较agomir NC组降低(均为P<0.05)。靶基因预测及验证结果显示,miR-30a-5p可以与ATF1的3'UTR特异性结合,ATF1是miR-30a-5p的一个靶基因,过表达miR-30a-5p可下调ATF1表达。siATF1、miR-30a-5p agomir及siATF1+miR-30a-5p agomir转染A549细胞联合照射,A549细胞克隆形成率及放射生物学参数D_(0)、D_(q)、N均低于对照组(均为P<0.05)。结论:miR-30a-5p通过靶向下调ATF1表达,在A549细胞中发挥放射增敏效应。     

Effect of retinoblastoma tumor suppressor gene expression on chemosensitivity of human osteosarcoma cell lines

We examined the effects of inactivation of the RB gene on chemosensitivity of human osteosarcoma cell lines, using the MTT assay and calculating the inhibition index. Although the human osteosarcoma cell lines HOS and MG63 have a wild-type RB gene, SaOS-2 and OSrb (established from retinoblastoma patient) have no active RB gene. We used these 4 cell lines in growth inhibition assays for doxorubicin, cisplatin and methotrexate, and assessed the chemosensitivity. In the growth inhibition assay for methotrexate, cell lines lacking an active RB gene were more resistant than cell lines with an active RB gene.     

BRCA1 modulates malignant cell behavior,the expression of survivin and chemosensitivity in human breast cancer cells

BRCA1 is a multifunctional tumor‐suppressive protein. Many functional aspects of BRCA1 are not fully understood. We used a shRNA approach to probe the function of BRCA1 in human breast cancer cells. Knocking down BRCA1 expression by shRNA in the wild‐type BRCA1 human breast cancer MCF‐7 and MDA‐MB‐231 cells resulted in an increase in cell proliferation, anchorage‐independent growth, cell migration, invasion and a loss of p21/Waf1 and p27^Kip1 expression. In BRCA1 knocked‐down cells, the expression of survivin was significantly up regulated with a concurrent decrease in cellular sensitivity to paclitaxel. We also found that cells harboring endogenous mutant or defective BRCA1 (MDA‐MB‐436 and HCC1937) were highly proliferative and expressed a relatively low level of p21/Waf1 and p27^Kip1 by comparison to wild‐type BRCA1 cells. Cells harboring mutated BRCA1 also expressed a high level of survivin and were relatively resistant to paclitaxel by comparison to wild‐type cells. Increase resistance to paclitaxel was due to an increase in the expression of survivin in both the BRCA1 knocked‐down and mutant BRCA1 cells because knocking down survivin expression by siRNA restored sensitivity to paclitaxel. We conclude that BRCA1 down‐modulates the malignant behavior of breast cancer cells, promotes the expression of p21/Waf1, p27^Kip1 and inhibits the expression of survivin. Moreover, loss of BRCA1 expression or function leads to an increase in survivin expression and a reduction in chemosensitivity to paclitaxel. © 2009 UICC     

沉默 AQP-5 对人结肠癌HT-29细胞的增殖、凋亡及其化疗敏感性的影响

目的： 探讨小干扰RNA（small interference RNA,siRNA）沉默水通道蛋白-5（aquaporin-5, AQP-5 ）的表达对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡及化疗药敏感性的影响。 方法： 以合成的AQP-5-siRNA序列转染HT-29细胞,采用Western blotting检测AQP-5-siRNA的转染效率,磺酰罗丹明（sulphorhodamine B, SRB）染色法检测各组细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测HT-29细胞的凋亡。分光光度法检测HT-29细胞caspase-3活性,real-time PCR和Western blotting检测AQP-5-siRNA转染后HT-29细胞中 PCNA和P53 在mRNA和蛋白水平的表达。选用5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）和顺铂（cisplatin,DDP）刺激AQP-5-siRNA转染细胞,SRB染色法检测细胞的增殖抑制率,以金正均法计算两药联合作用的Q值。 结果： 与NC-HT-29细胞相比,AQP-5-siRNA-HT-29细胞中AQP-5蛋白的表达显著下降（P<0.05）。SRB检测显示,AQP-5-siRNA-HT-29细胞的增殖抑制率显著增加\[（9.23±0.51)% vs 0,P<0.05\]。流式细胞术检测显示,AQP-5-siRNA-HT-29细胞的凋亡率显著升高\[（1081±1.32)% vs (0.99±0.18）%, P<0.05\];caspase-3活性显著升高\[（0.19±0.03） vs （009±0.01）, P<0.05\]。Real-time PCR和Western blotting结果显示,AQP-5-siRNA-HT-29细胞中PCNA mRNA和蛋白表达明显下降（P<0.05）,同时,P53 mRNA和蛋白表达明显上升（P<0.05）。AQP-5-siRNA+5-FU组细胞的增殖抑制率显著高于AQP-5-siRNA组和5-FU组\[（44.93±2.28)% vs (9.11±0.32）%、（25.68±1.71）%,均P<0.05\],AQP-5-siRNA+DDP组细胞的增殖抑制率显著高于AQP-5-siRNA组和DDP组\[（39.01±1.76)% vs (9.11±0.32）%、（18.47±1.25）%, P<0.05\],而且,AQP-5-siRNA与5-FU或DDP联用的Q值分别为1.38和1.51,均表现为协同作用。 结论： AQP-5-siRNA能抑制HT-29细胞增殖、促进其凋亡、并提高HT-29细胞对5-FU和DDP的化疗敏感性。