自噬基因Beclin1对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长的影响

目的:探讨自噬基因Beclin1在裸鼠体内对人肺腺癌A549细胞成瘤性的影响。方法:将重组质粒pRNAT-U6.2/Lenti-si423和pLenex-Beclin1通过脂质体介导的方法分别转染到A549细胞中。采用实时荧光定量PCR(real-time fluorogenic quantitative-PCR,RFQ-PCR)和蛋白质印迹法分别检测转染细胞中Beclin1mRNA和蛋白的表达;MTT法检测转染细胞在体外的增殖能力。将过表达或沉默Beclin1基因的A549细胞株分别接种于裸鼠右侧腋部皮下,观察瘤体的生长速度和大小,并采用RFQ-PCR和免疫组织化学法检测瘤体组织中Beclin1mRNA和蛋白的表达。结果:转染重组质粒pLenex-Beclin1的A549细胞中Beclin1mRNA和蛋白表达量显著增加,而体外增殖能力被明显降低;转染重组质粒pRNAT-U6.2/Lenti-si423的A549细胞中Beclin1mRNA和蛋白表达量显著减少。过表达Beclin1组的裸鼠皮下移植瘤生长缓慢,肿瘤体积明显缩小、质量明显减轻,移植瘤组织中Beclin1mRNA以及蛋白的相对表达量增加;而Beclin1基因沉默组的移植瘤组织中Beclin1mRNA及其蛋白的相对表达量降低。结论:自噬基因Beclin1的过表达可以抑制A549细胞在裸鼠体内的生长,有望成为肿瘤治疗的一个新靶点。     

RNAi沉默CXCR6基因对肺癌A549细胞增殖、体外侵袭力和裸鼠成瘤能力的影响

目的：探讨RNAi沉默CXC型趋化因子受体6（CXCR6）基因对A549细胞增殖、体外侵袭力和裸鼠成瘤能力的影响。方法 MTT法和Transwell小室模型检测稳定沉默CXCR6基因的A549细胞增殖和细胞侵袭迁移能力。将稳定沉默CXCR6的A549细胞与正常A549细胞分别皮下接种裸鼠，观察接种后肿瘤生长情况。结果稳定沉默CXCR6基因的A549细胞与正常A549细胞相比，前者增殖速率下降（P﹤0.05），平均增殖抑制率为30.70%；前者的体外侵袭力也降低（P﹤0.05），平均侵袭抑制率为74.93%，平均迁移抑制率为70.19%。裸鼠体内实验显示，稳定沉默CXCR6基因的A549细胞与正常A549细胞相比，其裸鼠体内成瘤能力降低（P﹤0.05），瘤体重量下降了62.5%。结论 RNAi沉默CXCR6基因，可以抑制A549细胞的增殖、体外侵袭力和成瘤能力。     

低氧环境下甲酰肽受体1 拮抗剂Boc2 对人肺腺癌细胞恶性生物学行为的影响

目的：探讨低氧环境下甲酰肽受体1（formyl peptide receptor 1,FPR1）的拮抗剂Boc2 对人肺腺癌细胞迁移、侵袭、增殖及成瘤能力的影响。方法：采用Western blotting 检测低氧诱导下人肺腺癌细胞A549 中低氧诱导因子1α（hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α）和FPR1 蛋白的表达情况。以FPR1 拮抗剂Boc2 体外处理低氧诱导的A549 细胞,按照随机数字表法分为3 组：对照组（常氧条件下培养）、低氧组和低氧+Boc2 处理组。细胞划痕实验、Transwell 细胞侵袭实验及MTT法分别用于检测各组细胞的迁移、侵袭和增殖能力。接种A549 细胞制备裸鼠移植瘤模型,同上分3 组,4 周后处死裸鼠,分析各组间裸鼠移植瘤体积、质量、成瘤率以及迁移相关蛋白E-钙黏素（E-cadherin,E-cad）和侵袭相关蛋白MMP-9 表达量的差异性。结果：低氧诱导能促进A549 细胞FPR1 蛋白的表达,且呈时间依赖性（P<0.05）。与对照组相比,低氧组细胞的迁移、侵袭及增殖能力均显著增强（P<0.01）,而相对低氧组,Boc2 处理能显著抑制A549 细胞的迁移、侵袭和增殖能力（P<0.05）。低氧组裸鼠成瘤率为100.0%（15/15）,对照组为60.0%（9/15）,低氧+Boc2 处理组裸鼠成瘤率为73.3%（11/15）;低氧组裸鼠移植瘤体积、质量均显著高于对照组（均P<0.01）;而相对低氧组,低氧+Boc2 处理组裸鼠肿瘤体积、质量均有显著降低（均P<0.01）。低氧组E-cad 及MMP-9 蛋白表达量显著高于对照组（P<0.01）,而与低氧组相比Boc2 处理能显著降低E-cad 及MMP-9 蛋白表达量（P<0.05）。结论：FPR1 拮抗剂Boc2 能显著抑制低氧诱导的人肺腺癌细胞A549 的迁移、侵袭、增殖及成瘤能力,表明FPR1 在人肺腺癌的发生发展过程中扮演着重要角色,并有可能成为人肺腺癌治疗的潜在靶点。     

γ-synuclein对结肠癌细胞SW1116体外及体内增殖潜能的影响

目的:研究γ-synuclein对人结肠癌细胞系体外及体内增殖潜能的影响.方法:利用真核表达载体pIRES2-EGFP和RNA干扰载体pGCsi-U6/neo/GFP构建针对γ-synuclein的重组质粒,并转染至人结肠癌细胞株SW1116,经G418筛选出稳定转染细胞株.应用CCK8法检测细胞增殖活性;软琼脂克隆法检测细胞克隆形成能力;裸鼠皮下成瘤实验检测细胞在裸鼠体内的成瘤能力.结果:经测序以及RT-PCR和Westernblot验证,重组质粒成功构建,并能够过表达或抑制γ-synuclein基因和蛋白.结果显示,y-synuclein受抑制后,SW1116细胞的增殖数目从48h至120h持续显著减少(P＜0.05),克隆形成率亦显著降低(P＜0.05).SW1116细胞的增殖和克隆形成能力与其γ-synuclein的表达水平呈正相关.过表达γ-synuclein能够部分增强SW1116细胞的增殖和克隆形成能力,但差异无统计学意义(P＞0.05).体内实验也有类似结果,过表达γ-synuclein能够稍微加快SW1116细胞瘤体生长速度,但直至第27天,其生长速度才显著加快(P＜0.05).γ-synuclein受抑制后,SW11 16细胞裸鼠皮下成瘤速度从第6天至第30天显著减慢(P＜0.05).结论:γ-synuclein与结肠癌细胞体外及体内的增殖潜能密切相关.     

RNA干扰沉默 PIN1 对肺癌A549细胞增殖、细胞周期和成瘤的影响

目的： 应用RNA干扰技术沉默肺癌A549细胞中 PIN1 （protein interacting with N1MA1）基因的表达,探讨其对A549细胞增殖、细胞周期和裸鼠成瘤能力的影响。 方法: 构建靶向 PIN1 基因的shRNA真核表达质粒pGPU6-GFP-Neo-PIN1和无义对照质粒pGPU6-GFP-Neo,以脂质体法转染A549细胞,G418筛选稳定沉默 PIN1 基因的细胞株。Real-time PCR和Western blotting验证 PIN1 基因在mRNA和蛋白水平的表达,MTT法和流式细胞术检测A549细胞增殖和细胞周期分布。将稳定沉默 PIN1 的A549细胞与对照细胞皮下接种裸鼠,观察接种后肿瘤生长情况。 结果: 成功构建了pGPU6-GFP-Neo-PIN1载体,转染A549细胞并筛选获得稳定克隆。稳定转染pGPU6-GFP-Neo-PIN1的A549细胞中 PIN1 mRNA表达量较pGPU6-GFP-Neo转染组下降了893%;蛋白表达同时也显著抑制。 PIN1 基因沉默组的A549细胞增殖速率明显下降（P<0.01）,细胞出现G1期阻滞。小鼠体内实验显示, PIN1 沉默的A549细胞在裸鼠体内成瘤能力降低（P<0.01)。结论: pGPU6-GFP-Neo-PIN1质粒稳定转染肺癌A549细胞能有效沉默 PIN1 基因的表达,从而抑制A549细胞的增殖、影响细胞周期和抑制成瘤能力。     

溶瘤性腺病毒携带canstatin基因对肺癌A549细胞小鼠移植瘤的抑制作用

目的:研究溶瘤性腺病毒介导的canstatin基因表达对A549细胞的抑制作用。方法:将构建的溶瘤性腺病毒载体CRAd-canstatin感染A549细胞。Western blot方法鉴定canstatin基因在A549细胞中的表达;结晶紫染色法和MTT法检测重组病毒体外对细胞的生长抑制作用;将腺病毒注射入荷瘤的裸鼠体内,通过测量肿瘤体积,形态学观察等方法验证CRAd-canstatin对肿瘤的抑制效果。结果:体外结果显示腺病毒介导的canstatin基因在A549细胞中有效表达。体内结果显示相比对照组而言,肿瘤体积明显缩小。结论:初步的实验表明溶瘤性腺病毒介导的CRAd-canstatin基因有望用于肺癌细胞的治疗。     

细丝蛋白A抑制荷人结肠腺癌细胞SW480裸鼠移植瘤的生长

目的:探讨细丝蛋白A(fi lamin A,FLNa)基因对人结肠腺癌SW480细胞在裸鼠体内成瘤的影响及其可能的机制。方法:将重组载体质粒pcDNA3.1/V5-His-TOPO/FLNa通过脂质体介导的方式转染到SW480细胞中,RT-PCR和蛋白质印迹法检测SW480/FLNa细胞中FLNa mRNA和蛋白的表达,MTT法检测细胞的体外增殖能力。将SW480/FLNa、SW480/pcDNA3.1和SW480细胞接种于裸鼠皮下,观察移植瘤的生长情况,计算抑瘤率,HE染色观察移植瘤组织的形态学变化,RT-PCR和蛋白质印迹法检测移植瘤组织中基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)mRNA和蛋白的表达水平。结果:FLNa基因在SW480细胞中获得稳定表达,SW480/FLNa、SW480/pcDNA3.1和SW480细胞的体外增殖能力相似;SW480/FLNa组移植瘤的生长速度和质量低于SW480组,抑瘤率为(88.7±3.5)%(P=0.000);SW480/FLNa组移植瘤组织出现退变坏死,MMP-9mRNA和蛋白的表达水平(0.11±0.02和0.02±0.00)均低于SW480组(1.12±0.02和1.25±0.05),差异均有统计学意义(P=0.012,P=0.025)。结论:FLNa基因具有抑制人结肠腺癌SW480细胞在裸鼠体内的生长作用,其作用机制可能与下调MMP-9的表达有关。     

青蒿琥酯对人肺癌A549细胞恶性生物学行为的影响及其可能机制

目的:探讨青蒿琥酯(artesunate,ART)对人肺癌细胞株A549增殖、迁移和侵袭的影响及其可能机制.方法:采用CCK-8法检测不同质量浓度的ART对A549细胞作用24、48 h后细胞的增殖水平,Transwell小室试验检测30 μg/ml青蒿琥酯对A549细胞侵袭能力的影响,划痕实验检测对A549细胞迁移能力的影响.Western blotting检测A549细胞经30 μg/ml的ART作用48 h后人抗原R(human antigen R,HuR)和MMP-9蛋白表达变化.结果:ART能够抑制人肺癌A549细胞的增殖,呈剂量依赖性(P＜0.05).与未处理组比较,ART(30 μg/ml)处理的A549细胞穿膜的细胞数目显著减少[(47.11±8.61)vs(131.00±14.58)个,P＜0.01];A549细胞迁移距离显著缩短[(1.08±0.13)vs(2.91±0.24)mm,P＜0.01];A549细胞内HuR和MMP-9蛋白表达水平降低(P＜0.05).结论:ART能够抑制肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与抑制HuR的表达有关.     

番荔枝内酯单体squamocin诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的实验研究

目的 观察番荔枝内酯单体squamocin对人肺腺癌A549细胞的体外增殖抑制及诱导凋亡的作用,并探讨squamocin诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法 MTT法检测不同浓度的squamocin对人肺腺癌A549细胞体外增殖的影响;流式细胞仪检测squamocin干预在不同时间点对人肺腺癌A549细胞凋亡率的影响;Western blotting检测squamocin干预前后细胞凋亡相关蛋白caspase-3、Bax和Bcl-2的表达情况。结果 MTT法显示,squamocin对人肺腺癌A549细胞的体外抑制作用随着squamocin浓度的增加和作用时间的延长而增强,24、48、72h半数抑制浓度（IC50）分别为16.54、9.28、6.17μg／ml;流式细胞仪检测显示,在24、48、72h实验组人肺腺癌A549细胞凋亡率之间及其与阴性对照组比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）,其中实验组72h的细胞凋亡率最高,为（51.87±1.79）％Western blotting显示,squamocin干预后细胞凋亡相关蛋白caspase-3和Bax表达上调,Bcl-2表达明显下调。结论 squamocin可诱导人肺腺癌A549细胞凋亡,这可能与squamocin上调细胞凋亡相关蛋白caspase-3、Bax表达以及降低抑制细胞凋亡基因Bcl-2表达有关。     

MicroRNA-145增强非小细胞肺癌细胞对吉非替尼敏感性及其机制探讨

目的:探讨微小RNA-145（microRNA-145,miR-145）对非小细胞肺癌细胞系吉非替尼耐药的作用及其可能的潜在机制。方法:实时荧光定量PCR（Q-PCR）方法检测正常细胞及非小细胞肺癌细胞中miR-145的表达差异;不同时间5 μmol/L吉非替尼干预肺癌细胞SPC-A-1和A549后,Q-PCR检测miR-145表达变化;miR-145 mimics和miR-145 inhibitors分别转染SPC-A-1和A549肺癌细胞后,CCK8检测细胞活力变化;双荧光素酶报告系统检测miR-145与ADAM19的靶向结合;miR-145 mimics转染SPC-A-1和A549肺癌细胞,Western blot检测ADAM19蛋白表达;Western blot检测5 μmol/L吉非替尼干预后,SPC-A-1和A549肺癌细胞中ADAM19蛋白的表达;miR-145 mimics转染SPC-A-1和A549肺癌细胞,再用5 μmol/L吉非替尼干预,Western blot检测ADAM19蛋白的表达;采用siRNA抑制ADAM19表达,再用5 μmol/L吉非替尼干预,CCK8检测细胞活力;采用BALB/C雌性裸鼠皮下接种肿瘤细胞的方法,观察上述效应。结果:Q-PCR结果显示,与正常肺上皮细胞系BEAS-2B相比较,肺癌细胞SPC-A-1和A549中miR-145表达明显降低;5 μmol/L吉非替尼干预SPC-A-1和A549细胞后,miR-145表达显著上调;转染miR-145 mimics后,CCK8结果显示两种细胞细胞活力下降;双荧光素酶报告系统结果显示,miR-145靶向结合ADAM19基因的3'-UTR区;Western blot结果显示,5 μmol/L吉非替尼诱导SPC-A-1和 A549细胞后,两种细胞中ADAM19蛋白表达均降低;miR-145 mimics转染SPC-A-1和A549细胞,之后给予5 μmol/L吉非替尼治疗,ADAM19蛋白表达下调;siRNA抑制SPC-A-1和A549细胞中ADAM19表达,再给予5 μmol/L吉非替尼治疗,CCK8结果显示,两种细胞的细胞活力显著降低;过表达BALB/C雌性裸鼠的miR-145后,显著抑制皮下肿瘤生长,并且增强吉非替尼的抗肿瘤效果。结论:miR-145显著增强肺癌细胞SPC-A-1和A549对吉非替尼的敏感性,其机制可能是通过靶向结合AMDM19基因的3'-UTR区域,从而抑制其表达。miR-145有可能成为治疗非小细胞肺癌吉非替尼耐药的有效靶点。     

LINC01426通过EZH2调节非小细胞肺癌顺铂耐药的机制研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC01426对非小细胞肺癌(NSCLC)顺铂(DDP)耐药的影响,并研究其潜在机制。方法:体外培养A549细胞和抗DDP细胞株A549/DDP,逆转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中LINC01426、zeste增强子同源物2(EZH2)mRNA表达;LINC01426和EZH2之间的相互作用通过RNA-蛋白质相互作用预测(RIP-seq)、RNA免疫沉淀(RIP)、RT-qPCR和染色质免疫沉淀(ChIP)测定进行验证。将A549/DDP细胞分为对照组(Control组)、si-NC组、si-LINC01426组、si-LINC01426+pc-NC组、si-LINC01426+pc-EZH2组,转染培养48 h,用RT-qPCR检测各组细胞中LINC01426、EZH2 mRNA、PTEN mRNA表达,CCK-8检测细胞对DDP的敏感性,集落形成实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹(Western blot)分析细胞中EZH2、PTEN、AKT、p-AKT蛋白表达。裸鼠移植瘤模型验证LINC01426是否...     

miR-449a通过下调HDAC1表达抑制肺癌细胞的增殖、侵袭和迁移北大核心

目的:分析miR-449a对人非小细胞肺癌细胞株A549增殖、侵袭和迁移的影响。方法:通过Real-time PCR检测人肺成纤维细胞MRC-5、人非小细胞肺癌细胞株A549和HCC827中miR-449a和组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)的表达水平。利用CCK-8法和Transwell法分析miR-449a对A549细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。使用生物信息软件分析miR-449a的靶向集合位点,并构建荧光素酶报告基因质粒,通过荧光素酶报告基因法分析miR-449a对HDAC1的靶向调控作用。通过Western blot分析miR-449a和HDAC1表达水平对A549细胞增殖及EMT相关分子表达水平的影响。建立裸鼠皮下瘤模型分析miR-449a和HDAC1对A549细胞体内增殖的影响。结果:miR-449a在MRC-5细胞中表达水平显著高于A549(P<0.0001)和HCC827(P<0.01);HDAC1在MRC-5细胞中表达水平显著低于A549(P<0.0001)和HCC827(P<0.01)。CCK-8法检测显示在A549细胞中转染miR-449a能够显著抑制其增殖。Transwell法检测显示在A549细胞中转染miR-449a能够显著抑制其侵袭和迁移(P<0.0001)。生物信息学预测显示miR-449a能够靶向结合HDAC1的3'-UTR;双荧光素酶报告基因分析显示,miR-449a能够靶向作用于HDAC1的3'-UTR抑制萤光素酶表达,Real-time PCR的结果表明过表达miR-449a能够显著抑制HDAC1的表达。在A549细胞中转染miR-449a或针对HDAC1小干扰RNA(siRNA)均能够下调HDAC1的表达,抑制细胞体内、外增殖;同时E-cadherin和ZO-1的表达水平下降,而N-cadherin、Fibronectin和Vimentin的表达水平增加。结论:miR-449a通过靶向抑制HDAC1的表达,抑制肺癌细胞的增殖、侵袭和迁移。     

ADAM17-shRNA转染的骨髓间充质干细胞对裸鼠乳腺癌移植瘤生长的影响

目的:探讨转染解聚素-金属蛋白酶17-shRNA(a disintegrin and metalloprotease 17-shRNA,ADAM 17-shRNA)的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenehymal stem cells,BMMSC)对乳腺癌MCF-7细胞裸鼠移植瘤的抑制效果.方法:全骨髓贴壁法分离并培养3周雄性SD大鼠的BMMSC,利用慢病毒介导的ADAM17-shRNA转染BMMSC.30只裸鼠建立MCF-7乳腺癌移植瘤模型,种植肿瘤细胞14d后建模成功.按照数字表法随机分成对照组(注射等量PBS)、BMMSC组(注射l×106/mlBMMSC)和转染组(注射1×106/ml转染ADAM 17-shRNA的BMMSC),每组10只.在种植细胞第15天开始经尾静脉注射BMMSC进行抑瘤实验(0.1 ml/只,每3d给药1次,共计5次),观察裸小鼠移植瘤的生长情况;抑瘤实验16d后处死裸鼠.利用Real-time PCR法检测移植瘤组织ADAM17 mRNA表达,Westem blotting法检测移植瘤组织ADAM 17蛋白表达.结果:抑瘤实验16d时,对照组、BMMSC组移植瘤体积明显高于转染组[(787.15±25.95)、(767.02±28.98) vs (361.89±19.75)mm3,均P＜0.01];BMMSC组、转染组抑瘤率明显高于对照组(2.57％、53.89％ vs 0.00％,均P＜0.05).对照组、BMMSC组ADAM17 mRNA的表达水平明显高于转染组(1.00±0.01、0.97±0.08 vs 0.30±0.09,均P＜0.05);对照组、BMMSC组ADAM 17蛋白表达水平明显高于转染组(0.70±0.09、0.68±0.02 vs 0.45±0.05,均P＜0.05).结论:ADAM 17-shRNA通过BMMSC介导可将ADAM17靶向归巢至裸鼠乳腺癌移植瘤并发挥抑瘤作用.     

新基因CT120在肺癌组织中的表达及其对细胞生长的影响

背景与目的：基因CT120是我们实验室从染色体17p13.3位点获得的一个细胞膜相关新基因,mRNA水平检测结果表明该基因在人正常肺组织中不表达,但在人肺癌细胞系SPC－A－1中高表达。本研究进一步从蛋白水平研究CT120在肺癌及癌旁组织中的差异表达及CT120异位表达（ectopic expression）与过表达（overexpression）对细胞生长的影响。方法：用生物信息学方法设计15肽,合成并偶联到大分子载体KLH上制成人工免疫原,制备鸡抗CT120多肽抗体;通过Western blotting方法检测CT120在不同肿瘤细胞系中的表达;通过免疫组织化学技术比较CT120在肺癌及癌旁组织中的差异表达;通过集落形成试验研究CT120异位表达对NIH／3T3细胞生长的影响;通过生长曲线及裸鼠成瘤试验研究CT120过表达对A549细胞生长的影响。结果：获得有效的鸡抗CT120抗体（IgY）;CT120蛋白在不同肿瘤细胞系中表达程度不同,并在不同类型的肺癌组织中高表达;CT120基因异位表达显著促进NIH／3T3细胞的生长;同时CT120过表达对A549细胞在体内体外的生长有促进作用。结论：基因CT120与肺癌的发生发展有关,是一个人肺癌相关新基因。     

环格列酮抑制人肺癌A549细胞增殖活性的实验研究

目的　研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂环格列酮对人肺癌细胞株A5 4 9体内外生长的影响 ,探讨其可能机制。方法　培养A5 4 9细胞 ,加入不同浓度的环格列酮 ,采用MTT方法检测A5 4 9细胞生长情况 ,用流式细胞仪进行细胞周期分析 ;Westernblot检测环格列酮对PPARγ蛋白表达的影响。建立裸鼠肺癌动物模型 ,随机将其分为 :对照组 (A组 ,10只 )和环格列酮注射组 (B组 ,10只 )。B组隔天注射环格列酮 10 0 μl(10 0 μmol/L) ,连续 15次 ,A组注射 10 0 μl生理盐水 ,1个月后切除瘤灶、并称瘤重 ,计算其抑瘤率。标本采用免疫组化检测细胞周期素D1(cyclinD1)的表达 ,同时采用Westernblot检测细胞周期素依赖性激酶抑制子p2 1蛋白的表达。结果　 (1)环格列酮体外抑制A5 4 9细胞生长 ,并呈现明显时间和剂量依赖性。 (2 )经环格列酮处理后的PPARγ蛋白表达增加。 (3)经环格列酮治疗后 ,A组的瘤重为 (2 .79± 0 .33)g ,B组的瘤重为 (1.5 1± 0 .4 0 )g ,B组的抑瘤率达 4 7.0 % ,A组的cyclinD1较B组明显增高 ,A组的p2 1蛋白表达水平较B组明显降低。结论　环格列酮能抑制肺癌A5 4 9细胞的恶性增殖 ,呈明显的时间及剂量依赖性 ,并诱导其分化 ,其机制与PPARγ干预细胞周期的调控有关     

circSMARCA5通过CCL5富集Treg细胞促进非小细胞肺癌细胞的增殖

目的：检测circSMRCA5在非小细胞肺癌（NSCLC）组织和细胞中的表达,以及其在NSCLC发生发展中的潜在功能和机制。方法：用qPCR 法检测circSMARCA5在NSCLC 组织中的表达。使用慢病毒转染法将circSMARCA5过表达质粒和对照质粒pLC5分别转染人肺癌A549 和H1975 细胞。采用qPCR法检测稳定转染细胞中circSMARCA5的表达水平。通过CCK-8、克隆形成、细胞周期和异种移植瘤实验检测circSMARCA5 过表达对A549 和H1975 细胞生物学行为的影响。通过转录组测序、KEGG和GO富集分析,确定circSMARCA5可能的靶基因。分别构建circSMARCA5过表达A549、Lewis 细胞BABL/c 裸鼠和免疫正常的C57 小鼠皮下移植瘤模型,观察circSMARCA5对裸鼠皮下移植瘤生长的影响,流式细胞术检测对Lewis 细胞移植瘤组织中Treg 细胞水平的影响。结果：circSMARCA5在NSCLC 组织中呈高表达（P<0.01）。过表达circSMARCA5可以在体外促进NSCLC 细胞的增殖（P<0.05,P<0.01）。体内实验中,circSMARCA5 可以促进裸鼠皮下移植瘤的生长（P<0.01）。机制上,经KEGG 和GO 富集分析,确定C-C 趋化因子配体5（CCL5）为circSMARCA5 的下游靶基因。过表达circSMARCA5 组A549 和H1975 细胞中CCL5 的表达量增加（均P<0.05）。circSMARCA5 介导的CCL5 上调促进了免疫正常的C57 小鼠皮下移植瘤的生长。C57 小鼠皮下移植瘤制备成的单细胞悬液行流式细胞术检测显示,circSMARCA5过表达组的Treg 细胞比例高于对照组[（3.1±0.5）% vs （1.0±0.1）%,P<0.05]。结论：circSMARCA5在NSCLC组织中呈高表达,其可能通过CCL5将Treg 细胞招募到肿瘤中,导致肿瘤的免疫逃逸,促进NSCLC的进展。     

c-Met在人非小细胞肺癌A549细胞系中表达活性与放疗抵抗的关系

目的:探讨c-Met对A549人非小细胞肺癌细胞系的放疗抵抗作用及发生机制.方法:采用人肺癌细胞系A549体外培养作为研究对象.将经不同浓度c-Met抑制剂处理后的A549细胞经或不经X线照射,用Western blot法检测c-Met及c-Src蛋白磷酸化形式表达水平,观察不同浓度c-Met抑制剂对c-Met和c-Src蛋白活性的抑制作用,同时用MTT法检测不同处理组细胞增殖抑制情况,流式细胞仪(FCM)检测不同处理组的细胞凋亡情况.结果:X线照射可使A549细胞系c-Met及c-Src磷酸化水平升高(P＜0.05),经或不经X线照射c-Met抑制剂(PHA665752)均可使c-Met及c-Src磷酸化水平降低,即有效抑制其蛋白活性表达(P＜0.05).MTT法及流式细胞法检测结果显示c-Met蛋白活性表达得到有效抑制后,A549细胞经X线照射后增殖抑制率及凋亡率较单纯放疗时明显增高(P＜0.05).结论:X线照射后c-Met信号通路活化使A549人非小细胞肺癌细胞系产生放疗抵抗,c-Src可能位于c-Met信号通路下游共同参与放疗抵抗,有效抑制c-Met蛋白活性表达可提高A549细胞放疗敏感性,其机制与抑制细胞增殖及诱导细胞凋亡有关.     

延龄草总皂苷调控hsa_circ_0025033/miR-149对非小细胞肺癌细胞生物学行为的影响

目的:研究延龄草总皂苷对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞A549增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:将不同浓度的延龄草总皂苷作用于A549细胞,应用实时定量PCR检测hsa_circ_0025033和miR-149的表达,应用双荧光素酶基因系统验证hsa_circ_0025033与miR-149的靶向关系。分析干扰hsa_circ_0025033表达对A549细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。结果:延龄草总皂苷可抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡,下调hsa_circ_0025033表达,上调miR-149表达(P＜0.05)。干扰hsa_circ_0025033可抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡(P＜0.05)。hsa_circ_0025033可靶向结合miR-149,干扰hsa_circ_0025033表达可上调miR-149表达(P＜0.05)。过表达hsa_circ_0025033逆转延龄草总皂苷对A549细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响(P＜0.05)。结论:延龄草总皂苷能够抑制NSCLC细胞A549增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡,可能与调节hsa_circ_0025033/miR-149通路有关。