肺纤维中过氧化物酶体增殖物激活受体γ的参与机制研究

[摘要] 目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）及其配体在博莱霉素诱导大鼠肺纤维化中的作用及参与机制。 方法 将24只雄性SD大鼠随机分为生理盐水对照组、罗格列酮对照组、博莱霉素组、罗格列酮干预组。经气管内注射博莱霉素建立肺纤维化模型。HE染色及Masson染色观察肺组织形态学变化;检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中乳酸脱氢酶（LDH）及转化生长因子β1（TGF-β1）浓度;应用荧光定量RT-PCR及Western blot检测肺组织中TGF-β1和PPARγ表达。 结果 博莱霉素气管内注入后肺Ashcroft评分,胶原沉积、TGF-β1表达、PPARγ表达及BALF中LDH、TGF-β1水平增加;给予罗格列酮干预后,除PPARγ表达进一步增加外,上述指标均下降。博莱霉素组PPARγ蛋白水平与TGF-β1mRNA表达、BALF中LDH含量呈负相关。 结论 PPARγ参与了肺纤维化的发生;PPARγ及其配体罗格列酮可能通过调节炎症反应,抑制TGFβ1转录,从而减少胶原沉积,对肺纤维化进行负性调控。     

格列卫对肺纤维化小鼠的干预机制

目的 探讨格列卫对小鼠肺纤维化的干预机制.方法 120只C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松组和格列卫组,每组30只.采用气管内注射博莱霉素构建肺纤维化小鼠模型,分别于7、14、21 d随机处死10只动物.免疫组化检测各组肺组织转化生长因子β1(TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达,RT-PCR检测肺组织TGF-β1mRNA含量.结果 模型组各时间点TGF-β1和α-SMA的表达均较对照组显著增加,地塞米松和格列卫处理组各时间点TGF-β1和α-SMA的表达均较模型组显著降低,而地塞米松组和格列卫组的表达水平无显著差异.TGF-β1,与α-SMA表达水平呈直线正相关(r=0.251,P<0.05).结论 格列卫对博莱霉素诱导肺纤维化的抑制作用与其抑制TGF-β1和α-SMA的表达有关.     

化瘀理肺方对大鼠肺间质纤维化时Smad7和TGF-β表达的影响

目的：探讨化瘀理肺方对博莱霉素致大鼠肺间质纤维化的治疗作用及机制。方法:将大鼠随机分为对照组、模型组、中药组、激素组,采用博莱霉素经气管内插管注入方法(5mg/kg)建立肺间质纤维化模型,对照组注入生理盐水（0.25ml/只）,从造模后的第2天起中药组给予化瘀理肺方药物灌胃（13410mg/kg）;对照组、模型组给予生理盐水灌胃（2ml/只）;激素组给予氢化可的松琥珀酸钠腹腔注射（25mg/kg）,于给药后的第14、28天分别处死,称取肺重计算肺系数;取肺组织行苏木素-伊红（HE）染色观察病理变化情况;免疫组化法测定肺组织中TGF-β、Smad7蛋白的表达情况。结果:进入结果分析的大鼠44只：①大鼠纤维化程度比较：模型组肺泡炎和肺纤维化程度较重,且胶原纤维沉积较多;中药组可见炎性细胞较少,肺泡结构基本正常,肺泡炎与肺纤维化较轻;激素组肺泡炎及纤维化减轻不明显。②TGF-β、Smad7蛋白表达量比较：中药组TGF-β蛋白表达明显低于模型组和激素组;Smad7蛋白表达明显高于模型组和激素组。结论:化瘀理肺方可明显减轻大鼠肺泡炎和肺纤维化的程度,可能通过促进Smad7蛋白的表达从而反馈抑制TGF-β蛋白的表达发挥作用。     

γ-干扰素转基因表达对不同时期博莱霉素致小鼠肺间质纤维化的作用

目的探讨小鼠γ-干扰素(mIFN-γ)在气道上皮细胞局部转基因高效表达对不同时期博莱霉素致小鼠肺间质纤维化的治疗作用.方法选择4周龄的雄性ICR小鼠(25g左右),使用博莱霉素诱导小鼠肺间质纤维化.将小鼠分为5组,阳性对照组(PC)为吸入博莱霉素组,阴性对照组(NC)为经鼻吸入生理盐水组,基因治疗A、B、C组分别于博莱霉素刺激后7、14和21 d给予小鼠滴入含有小鼠γ-干扰素cDNA片段的重组复制缺陷型腺病毒(AdCMV mIFN-γ)5×10s空斑形成单位(pfu/mL),在给予腺病毒后2周处死小鼠,收集小鼠肺组织及肺泡灌洗液(BALF),右肺经HE和Masson染色,左肺匀浆后检测羟脯氨酸含量.结果经气道给予AdCMV mIFN-γ处理的转基因组小鼠BALF中均可测得高浓度mIFN-γ表达,其水平在基因治疗A组(GTA)、基因治疗B组(GTB)和基因治疗C组(GTC)分别为(8 954.68±853.88)pg/mL、(9 312.64±361.28)pg/mL和(9643.32±612.74)pg/mL.博莱霉素刺激后第7d时给予小鼠mIFN-γ转基因处理(GTA组),小鼠肺间质纤维化程度和羟脯氨酸含量为(1 267.09±37.07)μg,与阳性对照组的(1244.86±62.46)μg相近,而于14 d(GTB组)和21 d(GTC组)后给予小鼠mIFN-γ转基因治疗,肺间质纤维化的程度则显著减轻[GTB组与GTC组羟脯氨酸含量分别为(477.24±30.79)μg和(734.29±53.12)μg],其中GTB组的纤维化程度减轻最为明显,且羟脯氨酸含量与阳性对照组相比显著下降(P＜0.001),接近阴性对照组.结论 (1)腺病毒介导的mIFN-γ能在小鼠肺内高效表达;(2)在博莱霉素致肺泡炎期给予mIFN-T转基因治疗和阳性对照组相比并不能减轻肺纤维化程度;(3)在博莱霉素致肺纤维化形成期给予mIFN-γ转基因治疗能有效的抑制成纤维细胞增殖和胶原沉积;(4)mIFN-γ不能逆转已经形成的纤维化改变.     

养阴清肺汤对大鼠肺纤维化的干预作用及对TGF-β1表达的影响

目的:观察养阴清肺汤对博莱霉素(bleomycin,BLM)致大鼠肺纤维化模型的干预作用和转化生长因子-β1(transforminggrowth factorβ1,TGF-β1)的影响,探讨养阴清肺汤参与肺纤维化的机制。方法:健康SD大鼠60只随机分3组:正常对照组(生理盐水),模型组(博莱霉素),治疗组(博莱霉素+养阴清肺汤)。分别在第71,42,1,28天,每组5大鼠,HE染色观察支气管肺组织病理改变,免疫组化观察肺组织中TGF-β1表达。结果:(1)治疗组大鼠肺泡炎和肺纤维化发生率明显降低,且程度轻,无严重肺纤维化发生。(2)治疗组肺间质中TGF-β1表达比模型组明显减少(P<0.05)。结论:养阴清肺汤能减轻博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化,可能是通过下调TGF-β1的表达而起作用。     

雾化吸入甘草酸减轻博莱霉素所致小鼠肺纤维化的机制研究

目的 研究雾化吸入甘草酸（GA）对博莱霉素所致小鼠肺纤维化的保护作用及机制。方法 SPF 级 雄性昆明小鼠90 只随机分成6 组：对照组、模型组、GA250 灌胃（IA）组、GA12 组、GA24 组及布地奈德雾 化（AI）组,每组15 只。模型组及各给药组予以5 mg/kg 的博莱霉素溶液气管滴注,复制小鼠肺纤维化模型。 24 h 后GA250 灌胃组按250 mg/kg 的剂量以GA 溶液灌胃,GA12 及GA24 组分别给予12 和24 mg/ml 剂量的GA 溶液4 ml 雾化吸入;布地奈德组雾化吸入0.25 mg/ml 的布地奈德混悬液4 ml ;对照组和模型组分别雾化等 量的生理盐水,各组每天雾化1 次,连续21 d。第7、14 和21 天,各组随机处死5 只小鼠,作HE、Masson 染 色,评价肺组织炎症及纤维化程度;血清HYP 及肺组织IL-6 含量检测胶原水平及炎症因子;Western blot 检 测小鼠肺组织IL-6、IL-17、p-Smad2 及TGF-β1 蛋白表达水平。结果 IL-6 表达在复制模型后第7 天升高 后逐渐降低,而IL-17 表达逐步升高,与其相对应TGF-β1、p-Smad2 表达也逐步升高。GA12 和GA24 组IL- 17、TGF-β1 及p-Smad2 水平降低,优于AI 和IA 组。结论 雾化吸入GA 可能通过抑制肺纤维化中IL-17/ TGF-β/Smads 通路的表达来抑制肺纤维化。     

Krtippel样因子4在实验性肺纤维化小鼠肺组织中的表达及意义

目的探讨博莱霉素诱导小鼠肺纤维化模型中,Krtippel样因子4（KLF4）的表达及其意义。方法C57BL／6小鼠随机分为生理盐水对照组（Contr01）和博莱霉素组（BLM）,经气管内注入博莱霉素（2．5mg／kg）建立实验性小鼠肺纤维化模型,注入等量生理盐水作为对照组,分别于术后第12h、1d、2d、3d、7d、14d及28d取材,采用HE染色和Masson染色观察肺组织病理变化及胶原的沉积部位和数量,实时定量PCR法和免疫组织化学法分别检测各组肺组织中KLF4mRNA和蛋白表达水平。结果博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化过程中,第1、2及3d表现为急性炎症;第7d炎症加重,并出现胶原沉积;第14d肺泡结构塌陷,胶原沉积明显;第28d肺泡结构基本正常,炎症程度和胶原沉积较轻。与对照组相比,博莱霉素组小鼠肺组织中KLF4mRNA的表达水平第1d开始升高,而后降低,第3d达最低后逐渐升高直至第28d。博莱霉素组小鼠肺组织中KLF4蛋白的表达趋势与mRNA水平基本一致,第1d开始升高,而后降低,第3d达最低后逐渐增加至第14d后再次降低。结论KLF4在博莱霉素致肺纤维化过程中呈现明显的动态变化,并可能参与了肺纤维化的发生与发展。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对博莱霉素所致肺纤维化大鼠肺组织中TGF-β1及Smad2/7mRNA表达的影响

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对博莱霉素所致大鼠肺纤维化的作用及其机制。方法健康SD大鼠随机分为正常组、模型组、泼尼松组及EGCG大、中、小剂量组,经气管内滴注博莱霉素复制肺纤维化模型,于造模后第2天开始给药,给药28 d后,取肺组织作病理形态学观察并测定其羟脯氨酸含量,采用RT-PCR法检测肺组织中转化生长因子（TGF）-β1、Smad2、Smad7 mRNA的表达。结果 EGCG各给药组大鼠肺组织肺泡炎和肺纤维化程度明显减轻（P〈0.05或〈0.01）,羟脯氨酸含量明显降低（P〈0.05或〈0.01）。RT-PCR检测结果显示,EGCG给药组大鼠TGF-β1、Smad2表达下调（P〈0.05或〈0.01）,Smad7表达明显上调（P〈0.05或〈0.01）。结论 EGCG可减轻博莱霉素所致大鼠肺纤维化程度,其作用机制可能与其调控TGF-β1/Smad信号通路有关。     

紫杉醇脂质体对肺纤维化模型大鼠转化生长因子β1表达的影响

目的观察紫杉醇脂质体对肺间质纤维化模型大鼠转化生长因子（TGF-β1）表达的影响。方法 120只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、强的松组和紫杉醇低、中、高剂量组,每组20只。通过气管内注射博莱霉素建立肺纤维化模型,静脉给予紫杉醇脂质体,以酶联免疫吸附试验法检测TGF-β1含量,探讨紫杉醇脂质体影响TGF-β1的作用机制。结果实验第7、14、21、28天紫杉醇低、中、高剂量组TGF-β1含量均低于模型组（P〈0.05）;第7、14、21、28天紫杉醇高剂量组TGF-β1含量低于强的松组（P〈0.05）。结论紫杉醇脂质体可能通过调节肺间质纤维化模型大鼠肺组织TGF-β1含量,防止肺纤维化形成。     

吉非替尼对博莱霉素致肺纤维化小鼠α平滑肌肌动蛋白的抑制作用

目的 观察吉非替尼对博莱霉素诱导肺纤维化小鼠a平滑肌肌动蛋白(a-SMA)表达的影响,探讨EGFR在肺纤维化上皮间质转分化中的作用.方法 将30只SPF级雌性BALB/c小鼠分为三组:对照组(气管滴人生理盐水)、纤维化组(气管滴人博莱霉素3 mg/kg )、纤维化吉非替尼干预组(气管滴人博莱霉素+吉非替尼灌胃20 mg/Kg ).实验第14天杀鼠取肺,肺组织石蜡切片行HE染色与Masson染色;RT-PCR法检测a-SMA的mRNA表达水平;免疫组化检测总EGFR,磷酸化EGFR及a-SMA表达.结果 纤维化吉非替尼干预组肺病理损伤较纤维化组减轻,气道上皮下胶原沉积减少,气道上皮及肺间质细胞磷酸化EGFR表达评分下降(P<0.05);同时,肺a-SMA的mRNA表达减少,免疫组化评分也明显降低(P<0.05).结论 吉非替尼抑制博莱霉素诱导小鼠肺纤维化可能与其抑制EGFR活性,下调a-SMA表达有关.     

IL-31与TGF-β1在小鼠肺纤维化过程中的表达及关系

目的 探讨白细胞介素31与转化生长因子β1在博莱霉素(BLM)致肺纤维化小鼠各时期肺组织中的表达规律以及关系.方法 取48只雄性昆明种小鼠,随机分为两组:对照组和实验组,分别给予生理盐水和博莱霉素(5 mg/kg)一次性气管内灌注后,第7、14、21和28 d处死小鼠,应用Western Blotting法测定肺组织中...     

肾纤复元胶囊对单侧输尿管梗阻大鼠模型肾间质纤维化的抑制作用及机制探讨

目的观察肾纤复元胶囊对单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠模型的治疗作用并探讨其机制。方法将48只SD大鼠随机分为假手术（SOR）组、UUO模型组、氯沙坦治疗组（LOS组）和肾纤复元胶囊治疗组（SXFYC组）。后三组采用经典的单侧输尿管梗阻术建立肾间质纤维化大鼠模型。观察术后第7、14天各组大鼠血尿生化指标变化、肾组织病理变化，检测转化生长因子β1（TGF—β1）、α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）、Ⅰ型胶原（ColⅠ）和纤维连接蛋白（FN）在肾组织中的表达及TGF-β1、α-SMA、ColⅠ和FN在基因水平的表达情况。结果不同组大鼠术后第7、14天24小时尿蛋白总量差异无显著性（P〉0．05），两治疗组血肌酐明显低于UUO模型组（P〈0．05），两治疗组间差异无统计学意义（P〉0．05）；光镜下肾组织病理切片显示两治疗组与同一时间点UUO模型组相比，肾间质纤维化程度显著降低（P〈0．05），两治疗组间差异无统计学意义（P〉0．05）；免疫组化和RT—PCR结果表明，两治疗组各时间点TGF—β1、α—SMA、ColⅠ和FN的表达均低于UUO模型组（P〈0．05），两治疗组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论肾纤复元胶囊可从一定程度上减轻UUO大鼠肾间质纤维化程度，其作用机制可能与下调TGF—β1和α—SMA表达、抑制ColⅠ和FN的合成有关。     

发现于炎症区域分子1在实验性大鼠肺纤维化组织中的表达及意义

目的研究发现于炎症区域分子1(FIZZ1)在大鼠肺纤维化组织中的表达及意义。方法 10只SpragueDawley大鼠随机分为模型组和对照组,每组5只。大鼠采用气管内注入博来霉素(5 mg·kg-1)的方法复制大鼠肺纤维化模型(模型组);采用气管内注入生理盐水(1.25 mL·kg-1)的方法制造阴性对照(对照组)。第28天处死大鼠,肺组织病理切片行苏木精-伊红染色,Ashcroft评分评定大鼠肺组织纤维化的严重程度;免疫组织化学方法检测大鼠FIZZ1和转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达。结果模型组大鼠肺纤维化程度较对照组严重,Ashcroft评分比较差异有统计学意义(P<0.01);模型组大鼠FIZZ1和TGF-β1表达水平较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 FIZZ1在肺纤维化发病机制中起重要作用,可能与TGF-β1的高表达有关。     

TGF-β1诱导大鼠心肌细胞肥大中钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ信号途径研究

目的：探讨TGF-β1诱导的大鼠心肌细胞肥大中钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ信号途径的信号表达.方法：建立TGF-β1诱导的体外大鼠心肌细胞肥大模型.PI染色标记细胞双链RNA法检测心肌细胞RNA表达量,间接检测心肌细胞肥大.实时荧光定量PCR检测心肌细胞肥大相关基因肌球蛋白重链β亚型（β-MHC）的表达.Western blotting检测心肌细胞中p-CaMKⅡ蛋白表达.结果：TGF-β1可诱导体外培养心肌细胞肥大基因的表达,β-MHC的表达明显高于对照组（P＜0.01）.PI染色TGF-β11组PI含量明显增高（P＜0.01）,TGF-β13 μg/L组心肌细胞内PI含量最高（80.57±3.56）;与对照组相比,TGF-β1可明显上调的表达p-CaMKⅡ（108.83±12.15 vs 10.6±1.35,P＜0.01）,并于TGF-β1诱导2h表达达峰.结论：TGF-β1可诱导心肌细胞肥大的形成,此过程中CaMKⅡ蛋白表达明显增加.     

卡托普利抗大鼠肺纤维化的作用及机制

目的探讨卡托普利对肺纤维化的治疗作用及可能的机制。方法将64只雄性SD大鼠随机分为对照组、博莱霉素模型组、卡托普利治疗组、地塞米松组治疗组,每组16只。采用HE染色、Masson染色行肺泡炎、肺纤维化程度分级,分别测定各组大鼠血浆AngⅡ、转化生长因子-β1（TGF-β1）mRNA含量以及羟脯氨酸、超氧化物歧化酶、丙二醛含量,并作各组间的对比分析。结果（1）第14天时：与对照组比较,其他3组大鼠肺泡炎评分、HYP含量、AngⅡ含量、MDA含量及TGF-β1 mRNA表达水平均明显升高（P〈0.05或0.01）,SOD含量均显著降低（均P〈0.01）,仅模型组肺纤维化评分显著高于对照组（P〈0.01）;与模型组比较,卡托普利组及地塞米松组肺泡炎、肺纤维化评分及HYP含量、AngⅡ含量、MDA含量及TGF-β1 mRNA表达水平均明显降低（P〈0.05或0.01）,SOD含量均显著升高（均P〈0.01）;地塞米松组显著高于卡托普利组（P〈0.01）,卡托普利组AngⅡ含量及TGF-β1 mRNA表达水平均明显低于地塞米松组（P〈0.05或0.01）。（2）第28天时：与对照组比较,其他3组大鼠肺泡炎及肺纤维化评分、HYP含量及TGF-β1 mRNA表达水平均显著升高（均P〈0.01）,模型组和地塞米松组AngⅡ含量显著升高（均P〈0.01）,仅模型组SOD含量显著降低、MDA含量显著升高（均P〈0.01）;与模型组比较,卡托普利组及地塞米松组肺泡炎及肺纤维化评分、HYP含量、MDA含量及TGF-β1 mRNA表达水平均明显低于模型组（均P〈0.05或0.01）,SOD含量均显著升高（均P〈0.01）,卡托普利组AngⅡ含量显著降低（P〈0.01）,地塞米松组AngⅡ含量显著升高（P〈0.01）;卡托普利组TGF-β1 mRNA表达水平明显低于地塞米松组（P〈0.05）。结论卡托普利可能是通过抑制AngⅡ的生成、减少TGF-β1 mRNA的表达以及纠正氧化／抗氧化失衡而博莱霉素诱导的大鼠     

β-catenin蛋白敲除对肺成纤维细胞活性影响的实验研究

目的 探讨β-catenin蛋白敲除对TGF-β1诱导的肺成纤维细胞（CCC-REPF-1）活性的影响及其机制.方法 体外培养大鼠肺成纤维细胞（CCC-REPF-1）,应用CCK-8法、Western blot、RT-PCR技术检测细胞增殖、活性及功能表达,进行统计学检验.结果 TGF-β1刺激组、pcDNA3转染组CCK-8吸光度OD值、α-SMA和Fn蛋白表达量、α-SMA、col Ⅰ、colⅢmRNA表达量明显高于正常细胞组,而E-cadherin蛋白表达量明显低于正常细胞组;F-TrCP-Ecad转染组上述值明显低于TGF-β1刺激组（P＜0.01）,E-cadherin蛋白表达量高于TGF-β1刺激组（P＜0.01）;TGF-β1刺激组、pcDNA3转染组比较无明显差异.结论 TGF-β1是促进肺成纤维细胞增殖、活化的重要细胞因子,β-catenin途径是TGF-β1发挥作用的重要信号通路,β-catenin蛋白敲除通过阻断该信号途径,阻止肺纤维化进程.     

UUO模型大鼠肾间质纤维化动态进展及α-SMA、TGF-β1和VDR表达变化

目的 观察单侧输尿管梗阻（UUO）模型大鼠肾小管间质纤维化动态进展,研究该病理过程中肾脏纤维化相关蛋白表达的变化.方法 32只清洁级SD大鼠随机分为假手术组（n=16）和UUO模型组（模型组,n=16）.两组大鼠分别于术后（模型组建模后）第2、5、9、14天分批（n=4）处死,留取手术侧（模型组梗阻侧）肾脏组织.分别采用HE和Masson染色、免疫组织化学染色及Western blotting等方法,评价肾小管间质纤维化损伤程度并检测肾脏组织α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、纤维连接蛋白（FN）、维生素D受体（VDR）及转化生长因子β1（TGF-β1）等相关蛋白的表达.结果 肾脏组织形态学观察显示,随着输尿管梗阻时间的延长,肾小管间质纤维化程度逐步加重.免疫组织化学染色显示,模型组大鼠建模后各时间点肾间质α-SMA和FN阳性面积百分比均显著高于假手术组（P＜0.05）,且随着梗阻时间的延长逐渐升高,至建模后第14天时达到高峰.Western blotting分析表明,模型组大鼠建模后各时间点α-SMA和TGF-β1相对表达量均显著高于假手术组（P＜0.05）,而VDR相对表达量显著低于假手术组（P＜0.05）;建模后第2天,模型组大鼠肾脏组织α-SMA相对表达量已显著增加;建模后第14天,模型组α-SMA和TGF-β1相对表达量分别增高至假手术组的12.7倍和8.8倍,而VDR相对表达量下降至假手术组的3%.结论 UUO模型大鼠建模后第14天可出现显著的肾间质纤维化;建模早期肾间质中α-SMA表达增加提示肾间质成纤维细胞的活化;VDR表达的进行性减少提示其与肾间质纤维化有关.     

银杏叶提取物对哮喘大鼠气道重塑及转化生长因子-β_1表达的影响

目的探讨银杏叶提取物对支气管哮喘大鼠气道重塑的影响。方法 30只雌性SD大鼠,随机分为三组（每组10只）：对照组、哮喘组和治疗组。采用卵蛋白腹腔注射和雾化吸入激发法复制哮喘大鼠模型。在末次激发24h后取动物肺组织行HE染色和Mas-son观察病理学改变;免疫组化测定转化生长因子β1（TGF-β1）表达。结果与对照组比较,哮喘组大鼠气道纤维化明显,TGF-β1表达增高（P〈0.05）;与哮喘组比较,银杏叶提取物治疗组中大鼠气道纤维化程度及TGF-β1表达减轻（P〈0.05）。结论银杏叶提取物可抑制哮喘大鼠气道重塑的发生,其机制有可能是通过抑制TGF-β1的表达而实现的。