8—Br—cAMP对人食管癌Eca—109细胞增殖与分化的效应

在人食管癌Ｅｃａ－１０９细胞中加以终浓度为１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ的８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ体外培育２４ｈ后，应用酸解ＤＮＡ及甲绿－派洛宁染色技术在同一标本上鉴别增殖细胞和分化细胞。     

过表达Beclin 1对食管癌Eca109细胞生物学行为的影响

目的：探讨自噬基因Beclin 1对食管癌细胞Eca109生物学行为的影响。方法：运用Beclin 1过表达质粒pIRES2-Zs－Green1-h Beclin 1转染食管癌 Eca109细胞株,RT-PCR和Western blot检测Beclin 1的mRNA和蛋白的表达;电子显微镜观察转染后自噬体的形成情况;MTT法检测转染前后各组细胞生长曲线的变化;血管形成实验检测其对Eca109细胞株血管形成能力的影响;Transwell小室实验检测其对Eca109细胞株迁移和侵袭能力影响;流式细胞技术检测目的基因组和对照组细胞周期的变化。结果：pIRES2-ZsGreen-hBeclin1质粒成功转染食管癌Eca109细胞株。目的基因组Eca109细胞较空载体组和未转染组生长明显抑制（P=0.000,P=0.000）;目的基因组Eca109细胞迁移、侵袭及血管形成能力明显低于对照组（P值均<0.05）;Beclin 1稳定表达后,S期细胞明显减少,细胞增殖受到抑制。结论：Beclin 1基因可以作为食管癌生长及转移的一种抑制基因。     

褪黑素联合顺铂对人食管癌Eca109细胞的抑制作用及其机制

目的:观察褪黑素(Mel)联合顺铂(DDP)对人食管癌Eca109细胞生长的抑制作用,并探讨相关的分子机制。方法:通过MTT实验检测Mel与DDP不同浓度分别单用或两药联合处理后食管癌Eca109细胞增殖情况;流式细胞仪检测用药后细胞凋亡情况;Western blot法检测Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果:Mel与DDP联用对食管癌Eca109细胞增殖的抑制率均高于单用Mel与DDP时对食管癌Eca109细胞的抑制率(P<0.05);Mel单独诱导食管癌Eca109细胞凋亡作用不强,但可增强DDP诱导的食管癌细胞凋亡(P<0.01);Mel与DDP联用后食管癌Eca109细胞Bcl-2蛋白表达减弱,Bax蛋白表达增强。结论:Mel可增强DDP对人食管癌Eca109细胞增殖的抑制作用,并具有增强DDP诱导人食管癌Eca109细胞凋亡的作用,其机制可能与上调Bax表达和下调Bcl-2的表达有关。     

仙鹤草水提液对食管癌Eca109细胞生长的抑制作用

目的:研究仙鹤草水提液对人食管癌Eca109细胞生长的抑制作用及其可能机制.方法:MTT法测定0g/L、2 g/L、4 g/L、8 g/L、16 g/L的仙鹤草水提液分别作用于Eca109细胞24 h、48 h、72 h,观察对Eca109细胞生长的抑制作用;采用免疫组织化学染色技术检测16 g/L仙鹤草水提液作用72 h对Eca109细胞Bcl-2、P53蛋白表达的影响.结果:MTT结果显示16 g/L仙鹤草水提液作用48 h和72 h后Eca109细胞生长明显受抑;免疫组化结果显示16 g/L仙鹤草水提液作用72 h后Eca109细胞内Bcl-2蛋白表达下调,P53蛋白表达上调.结论:仙鹤草水提液体外能诱导Eca109细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达及上调P53蛋白表达有关.     

探讨乙酰化酶Sirtuin-2对巨噬细胞Melanocortin 1受体表达的影响

目的：探讨去乙酰化酶Sirtuin-2 (SIRT2)对巨噬细胞Melanocortin 1受体表达的影响。方法：体外培养小鼠巨细胞株RAW264.7巨噬细胞,随机分为空白对照组（A组）、SIRT2慢病毒过表达对照组（B组）、SIRT2慢病毒过表达组（C组）、SIRT2 RNA干扰组（D组）,每组加入氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导分化为泡沫细胞共培养24 h。采用实时荧光定量（RT-qPCR）和蛋白质印迹（Western blot）检测各组细胞SIRT2 mRNA和SIRT2蛋白含量,油红O染色观察细胞内脂质含量,高效液相色谱检测细胞内胆固醇含量,免疫印迹方法分别检测细胞内Melanocortin 1受体、三磷酸腺苷结合盒转运子A1 (ABCA1)和三磷酸腺苷结合盒转运子G1 (ABCG1)表达的变化。结果：与A组相比,B、C、D组诱导的油红O染色阳性巨噬细胞数明显减少,差异有统计学意义（P<0.05）。与B组和D组相比,C组巨噬细胞SIRT2蛋白表达水平增强,细胞内ABCA1、ABCG1表达增强,Melanocortin 1受体表达上调,差异有统计学意义（P<0.0...     

ABCA1-565C/T基因多态性对心梗患者来源的巨噬细胞胆固醇外流功能影响及其机制研究

目的 比较三磷酸腺苷结合盒转运子A1(ABCA1)启动子区-565C/T不同基因型的心肌梗死患者巨噬细胞胆固醇外流功能及ABCA1蛋白表达.方法 应用人外周血单核细胞原代细胞培养及乙酰化低密度脂蛋白(Ac-LDL)诱导获得巨噬细胞,3H标记的胆固醇测量巨噬泡沫细胞胆固醇外流功能;采用western blot技术测量ABCA1蛋白表达.结果 (1)单核细胞原代培养分化成巨噬细胞,经Ac-LDL诱导成泡沫细胞 ;(2)ABCA1-565C/T TT型巨噬泡沫细胞胆固醇流出率低于CT型和CC型;(3)TT型巨噬细胞中ABCA1蛋白表达显著低于CT型和CC型,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 ABCA1-565 C/T位点 TT基因型ABCA1的蛋白表达及胆固醇外流功能较CC、CT型减低,推测TT基因型通过影响ABCA1蛋白表达而影响巨噬细胞胆固醇外流功能而促进冠心病的发生和发展.     

S1P5对食管癌细胞Eca109黏附能力的影响

目的研究S1P5对食管鳞癌Eca109细胞黏附能力的影响。方法从人正常食管黏膜上皮克隆S1P5基因,构建表达载体S1P5-EGFP,转染Eca109细胞,经G418筛选,获得S1P5-EGFP/Eca109稳定细胞株。以对照载体Control-EGFP转染的Eca109细胞作为对照,荧光显微镜下观察细胞的形态,用黏附试验评价其黏附能力。结果成功构建S1P5-EGFP和Control-EGFP载体并转染Eca109细胞获得稳定细胞株。S1P5表达于细胞膜并使细胞略呈梭形改变。S1P5过表达致Eca109细胞黏附能力明显低于对照（P〈0.05）,并且不受其配体1-磷酸鞘氨醇（S1P）的影响。结论 S1P5组成性抑制Eca109细胞的黏附能力,食管癌细胞可能通过下调S1P5的表达增强其黏附。     

stathmin基因反义寡核苷酸对Eca109细胞系生长的抑制作用

目的:研究stathmin基因反义寡核苷酸(ASODN)对Eca109细胞增殖及stathmin基因表达的抑制作用,探讨ASODN用于食管癌基因治疗的可行性.方法:实验设ASODN转染组、SODN转染组和未转染组.分别应用stathmin ASODN、SODN转染食管癌Eca109细胞.倒置显微镜观察转染细胞的形态变化,绘制细胞生长曲线,MTT法检测细胞增殖能力,RT-PCR方法检测stathmin基因的表达,采用流式细胞仪分析细胞增殖周期.结果:stathmin ASODN转染Eca109细胞后,胞体凝缩,增殖能力减弱,细胞生长及目的基因表达明显受抑(P<0.05),其抑制作用具有序列特异性.细胞分裂阻滞在分裂期的中期,G2/M期细胞数由(12.2±1.0)%升至(36.5±5.8)%.结论:stathmin基因反义寡核苷酸对Eca109细胞增殖及stathmin基因表达具有明显抑制作用,有望成为食管癌基因治疗药物.     

微小RNA-26a对食管癌Eca109细胞增殖、迁移、凋亡及细胞周期的影响

目的探讨微小RNA-26a(miR-26a)对食管癌Eca109细胞增殖、迁移、凋亡和细胞周期的影响。方法将正常培养的人食管鳞状细胞癌Eca109细胞随机分为正常对照组(正常培养的不加任何类型慢病毒的Eca109细胞)、阴性对照组(转染随机序列慢病毒)及miR-26a过表达组(转染miR-26a过表达慢病毒)。分别采用四甲基偶氮唑盐实验、细胞划痕实验、流式细胞术检测细胞增殖、迁移、细胞周期和凋亡情况。结果转染后72、96 h,miR-26a过表达组细胞增殖能力低于正常对照组和阴性对照组(P <0. 05);阴性对照组与正常对照组细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。转染后72 h,miR-26a过表达组细胞划痕愈合率低于正常对照组和阴性对照组(P <0. 05);阴性对照组与正常对照组细胞划痕愈合率比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。转染后48 h,miR-26a过表达组G_1、G_2期细胞所占比例高于正常对照组和阴性对照组,S期细胞所占比例低于正常对照组和阴性对照组(P <0. 05)。阴性对照组与正常对照组细胞G_1、S和G_2期细胞所占比例比较差异无统计意义(P> 0. 05)。结论 miR-26a可以抑制人食管鳞状细胞癌Eca109细胞增殖和迁移,阻断细胞由G_1期向S期过渡,但对细胞的凋亡无明显影响。     

ATP结合盒转运子E1基因与人肾小球系膜细胞增殖的相关性

目的 探讨ATP结合盒转运子E1基因(ABCE1)在人肾小球系膜细胞中的表达及与系膜细胞增殖的关系.方法 应用细胞免疫荧光法检测ABCE1在人肾小球系膜细胞中的表达,应用脂质体介导法将ABCE1-siRNA载体转染人肾系膜细胞,观察转染ABCE1-siRNA前后细胞增殖能力的变化.结果 ABCE1在系膜细胞浆和细胞核均有表达,在浆内表达多于核的表达,转染ABCE1-siRNA后细胞的增殖明显减慢.结论 ABCE1在人肾小球系膜细胞中有表达,且其与细胞增殖能力有关.     

8-Br-cAMP对人食管癌Eca-109细胞增殖与分化的效应

在人食管癌Ｅｃａ１０９细胞中加以终浓度为１０－５ｍｏｌ／Ｌ的８ＢｒｃＡＭＰ体外培育２４ｈ后，应用酸解ＤＮＡ及甲绿派洛宁染色技术在同一标本上鉴别增殖型细胞和分化型细胞。结果：８ＢｒｃＡＭＰ处理组增殖型细胞占６３％，分化型细胞占３７％；而对照组增殖型细胞占８３％，分化型细胞占１７％。结果提示：８ＢｒｃＡＭＰ对Ｅｃａ１０９细胞有抑制增殖和促进分化效应     

二硫苏糖醇诱导Eca109细胞凋亡及P38磷酸化检测

目的：检测二硫苏糖醇（DTT）诱导Eca109细胞凋亡及磷酸化P38（PP38）水平。方法：取对数生长期Eca109细胞分为3组：2mmol／LDTT处理组、PP38抑制剂SB203580孵育细胞2h后再加DTT处理组及对照组。应用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率；采用免疫组织化学技术检测P38的磷酸化水平。结果：DTT组、SB203580＋DTT组及对照组的细胞凋亡率分别为16．8％、7．8％和3．1％。DTT组和DTT＋SB203580组细胞凋亡率均高于对照组（P〈0．01）；与DTT组相比，SB203580＋DTT组凋亡率下降（P〈0．01）。DTT组PP38水平高于对照组（P〈0．01）。结论：DTT可诱导人食管癌Eca109细胞凋亡，P38磷酸化起促进凋亡的作用。     

木犀草苷对人食管鳞状癌Eca109细胞生长的抑制作用及其机制

目的 研究木犀草苷对人食管鳞状癌Eca109细胞生长的抑制作用及其机制。方法 Eca109细胞经不同浓度木犀草苷处理后,MTT法检测Eca109细胞增殖;倒置显微镜观察Eca109细胞形态的变化;流式细胞术检测Eca109细胞周期变化及细胞凋亡情况;RT-PCR检测Eca109细胞cyclin D1、survivin和c-myc基因表达。结果 MTT实验表明,木犀草苷80、120、160、200、240 μmol/L对Eca109细胞均有抑制作用,且与浓度相关。木犀草苷可引起Eca109细胞形态改变、体积缩小,并与周围细胞脱离,浓度为240 μmol/L时使细胞呈出芽状,有的细胞伸出多个伪足样突起;浓度为160、240 μmol/L时,可将细胞阻滞于G₂/M期,诱导细胞凋亡;浓度为240 μmol/L并处理Eca109细胞48 h后,使Eca109细胞cyclin D1、survivin和c-myc基因表达低于对照组（P＜0.05）。结论 木犀草苷对食管鳞状癌Eca109细胞的生长有显著抑制作用,其通过改变细胞周期、诱导细胞凋亡及抑制相关基因的表达发挥抗肿瘤作用。     

冰片与顺铂联用对Eca109(DDPr)细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响

目的:探讨冰片与顺铂(cisplatin,DDP)联用对耐DDP的食管癌细胞Eca109(DDPr)增殖?细胞周期和凋亡的影响?方法:采用递增药物浓度持续作用诱导法建立耐DDP的食管癌细胞Eca109(DDPr),将冰片联合DDP作用于Eca109(DDPr)细胞,MTT法检测Eca109(DDPr)细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡?结果:递增药物浓度持续作用诱导6个月后,细胞可以在含1 μg/ml DDP的培养液中稳定生长,其对DDP的耐药指数为15.886;单用冰片浓度≤1.560 μg/ml时,对Eca109(DDPr)细胞无明显抑制作用(P > 0.05),但与1 μg/ml DDP合用能显著促进DDP对Eca109(DDPr)细胞增殖的抑制作用(P < 0.05),并促进DDP诱导Eca109(DDPr)的细胞周期改变?细胞凋亡增加,细胞周期表现为G1期细胞明显增多(P < 0.05),S期细胞?G2期细胞明显减少(P < 0.05),细胞的凋亡率明显增加(P < 0.05)?结论:冰片促进DDP对Eca109(DDPr)细胞增殖的抑制作用,可能与改变Eca109(DDPr)细胞周期?增加细胞凋亡有关?     

5-氮杂胞苷对Eca109细胞增殖及RUNX3基因表达的影响

目的 探讨去甲基化制剂5-氮杂胞苷(5-azaC)干预对Eca109细胞增殖及其抑癌基因RUNX3表达的影响.方法 应用MTT法来观察5-azaC对Eca109细胞增殖的抑制能力;采用10 μmol/L、20 μmol/L和50 μmol/L 3种不同浓度的5-azaC处理Eca109细胞株,采用MSP检测干预前后RUNX3基因启动子区的甲基化状况;应用RT-PCR、Western blotting检测干预前后RUNX3基因的mRNA和蛋白表达水平的变化.结果 Eca109细胞RUNX3基因启动子区处于异常的高甲基化状态,经5-azaC处理后,高甲基化的RUNX3基因启动子部分去甲基化;处理前启动子高甲基化的RUNX3基因其mRNA或蛋白均不表达,去甲基化处理后能重新激活该基因表达,经3种不同浓度5-azaC处理后,Eca109细胞生长减慢.结论 启动子区高甲基化是食管癌Eca-109细胞RUNX3基因失活的主要原因之一, 5-azaC能逆转RUNX3基因甲基化状态, 从而调控RUNX3基因表达并抑制细胞生长.     

DTT与顺铂诱导对食管癌Eca109细胞磷酸化P38表达的影响

目的:探讨磷酸化P38在顺铂和DTT诱导的食管癌Eca109细胞凋亡中的作用.方法:分别用DTT与顺铂诱导处理食管癌Eca109细胞,未加药组作为对照.采用流式细胞仪技术检测细胞凋亡率;用免疫组化方法检测磷酸化P38的表达情况.结果:与对照组相比,DTT处理组及顺铂处理组细胞凋亡率明显升高.免疫组化结果显示:2处理组磷酸化P38的水平均明显高于对照组(P＜0.05);DTT处理组磷酸化P38大部分位于细胞核内,而顺铂组磷酸化P38则主要弥散于细胞浆内.结论:磷酸化P38在DTT和顺铂诱导的食管癌Eca109细胞凋亡时细胞内分布不同,激活的P38可能通过不同途径参与细胞凋亡.     

LIGHT-Fc基因转染上调食管癌细胞ICAM-1的表达

目的探讨LIGHT对人食管癌细胞的体外抑制效应的可能机制.方法以DOTAP脂质体介导LIGHT-Fc基因转染人食管癌细胞株Eca109,通过免疫组织化学及流式细胞仪检测来观察LIGHT-Fc转染对Eca109细胞上ICAM-1表达水平的影响.结果 Eca109细胞表达LIGHT-Fc基因上调了细胞表面ICAM-1的表达水平.结论 LIGHT-Fc基因转染上调人食管癌细胞株上ICAM-1的表达可能是其体外抑瘤效应的一种机制,但全面评价有待进一步的研究.     

DTT诱导P38核转位与食管癌Eca109细胞凋亡的研究

目的探讨P38的核转位与DTT诱导的食管癌细胞凋亡的关系。方法采用DTT处理食管癌Eca109细胞，未加药组作为对照。流式细胞仪技术检测细胞凋亡率；免疫组化方法检测P38的磷酸化水平及磷酸化P38的核转位情况。结果与对照组相比，DTT处理组细胞凋亡率明显升高。免疫组化结果显示：处理组P38的磷酸化水平明显高于对照组（P〈0．01），且处理组P—P38大部分定位于核内。结论P—P38核转位参与了DTT诱导的食管癌Eca109细胞凋亡。     

山奈酚诱导人食管鳞癌Eca-109细胞凋亡及其机制

目的研究山奈酚对人食管鳞癌Eca-109细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其机制。方法山奈酚体外作用于Eca-109细胞后,用MTT法检测细胞增殖抑制作用;TUNEL染色测定细胞凋亡率;RT-PCR检测Bax、Bcl-2基因表达变化情况;分光光度法测定Caspase-3和Caspase-9活性。结果山奈酚显著抑制Eca-109细胞增殖(P<0.01),呈剂量依赖关系。TUNEL染色结果表明山奈酚诱导Eca-109细胞发生凋亡,RT-PCR结果显示山奈酚作用后,肿瘤细胞Bax基因表达上调,Bcl-2基因表达下调,同时,Caspase-3和Caspase-9活性明显升高(P<0.01)。结论山奈酚能抑制Eca-109细胞增殖,诱导细胞凋亡。山奈酚可能通过线粒体途径诱导Eca-109细胞凋亡。