癌-睾丸抗原NY-ESO-1在视网膜母细胞瘤中的表达

目的了解视网膜母细胞瘤(RB)组织癌-睾丸抗原(CTA)基因NY-ESO-1的表达,探讨这些基因成为RB特异性免疫治疗靶抗原的可能性。方法选15例人RB组织和12例非肿瘤病变视网膜组织及22例正常眼部组织(对照组),采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术研究上述组织NY-ESO-1的mRNA表达情况,并根据肿瘤病理分级、肿瘤大小、临床分期等临床指标进行统计学分析。结果 15例RB组织中,NY-ESO-1的表达率分别为40%(6/15);NY-ESO-1基因在12例非肿瘤病变视网膜组织及22例正常眼部组织中均不表达。结论 NY-ESO-1基因在RB组织中有一定频率的表达,NY-ESO-1的表达率与病人的性别、年龄和临床分期,肿瘤大小及病理分级均无相关性(P0.05)。NY-ESO-1有希望成为RB特异性免疫治疗的靶抗原。     

ER81在GISTs中的表达与临床病理因素及CD117、ki-67的相关性

目的:研究胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors,GISTs)组织中ER81蛋白的表达与临床病理因素的相关性.方法:采用免疫组织化学检测17例正常胃黏膜下层组织、80例GISTs组织中ER81的表达,分析ER81表达与患者年龄、NIH危险度、CD117、ki-67的关系.结果:ER81正常胃组织、GISTs中的表达率分别为11.7%,75%,差异具有统计学意义,且ER81的表达与性别、年龄无关,但与NIH危险度分级相关(P<0.05).其中ER81的表达与NIH危险度分级呈正相关.且ER81的表达CD117在GISTs患者人群中的表达无统计学差异(P<0.05),与ki-67的表达在NHI危险度的各个分期的表达无统计学差异(P<0.05).结论:ER81的表达与GISTs的发生及危险度相关;ER81的表达水平还与CD117、ki-67的表达相关.ER81有望成为GISTs分子病理诊断的新指标.     

NY-ESO-1在原发性肝癌免疫治疗中的研究进展

NY-ESO-1抗原是CT抗原家族中的重要成员,在原发性肝癌组织中广泛表达,是迄今发现的最具免疫原性的肿瘤抗原,能在NY-ESO-1表达阳性的肝癌患者体内诱导自发性体液免疫反应和特异性T细胞免疫反应。因此,NY-ESO-1被认为是较好的肿瘤候选疫苗,在原发性肝癌免疫治疗中较具发展潜力。     

肝癌细胞株中肿瘤特异性抗原MAGE、GAGE、BAGE基因表达的研究

目的 研究MAGE、GAGE、BAGE基因在肝癌细胞株中的表达情况,评价这些肿瘤特异性抗原作为肿瘤分子标记以及肿瘤免疫治疗特异性靶位的可能性。 方法 用RT-PCR检测国内建株的肝癌细胞株SMMC-7721、QQY-7701、BEL-7402中MAGE-1、MAGE-3、GAGE1-8、GAGE1-2和BAGE基因mRNA的表达,以GAPDH基因作为检测内对照,并与非肿瘤肝穿组织比较。 结果 肝癌细胞株SMMC-7721表达MAGE-1和BAGE基因;QQY-7701表达MAGE-3和BAGE基因;BEL-7402表达MAGE-1和GAGE1-2基因;3株肝癌细胞至少表达其中一个基因。肝硬化病人肝穿刺组织中MAGE、GAGE、BAGE基因表达均为阴性。 结论 MAGE、GAGE、B A G E肿瘤特异性抗原可以作为肝癌早期诊断的分子标记,并具有作为肝癌免疫治疗特异性靶位的潜在价值。     

肿瘤特异性肿瘤/睾丸抗原在肝癌组织中的表达

目的 研究7种主要肿瘤/睾丸(CT)抗原MAGE-1、MAGE-3、MAGE-4、MAGE-10、NY-ESO-1、SSX-2、SCP-1在原发性肝细胞癌(HCC)患者癌组织中的表达、编码基因的变异状况及与临床指标的关系。 方法 收集30例肝癌患者的癌和癌旁组织,采用特异性引物逆转录聚合酶链反应检测7种CT抗原的表达,并对PCR产物进行测序分析。结果 在30例HCC患者中,MAGE-1、MAGE-3、MAGE-4、MAGE-10、NY-ESO-1、SSX-2、SCP-1在癌组织中的表达率分别为66.7％、70.0％、20.0％、36.7％、40.0％、33.3％和33.3％,而癌旁没有表达。癌组织中至少表达1种、2种和3种CT抗原的阳性率分别为90.0％、70.0％和53.5％。我国肝癌表达的7种CT抗原编码基因与国外报道的相比,同源性非常高。MAGE-10和SCP-1的表达与甲胎蛋白的水平相关,MAGE-3和SSX-2表达与平均年龄相关。 结论 7种CT抗原在HCC患者癌组织中均有表达,阳性率为20.0％-70.0％,其编码基因序列高度保守。一些CT抗原的表达与临床指标存在相关性。     

胃肠道间质瘤中环氧合酶2基因的表达

目的:探讨胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors,GISTs)中环氧合酶2(cyclooxygenase 2,COX2)基因的蛋白及mRNA表达与临床病理特征及预后之间的关系.方法:采用免疫组织化学EnVision两步法检测GISTs病例肿瘤组织中COX2蛋白的表达情况;采用原位杂交方法检测GISTs中COX2mRNA的表达情况;并对患者进行随访.结果:74例GISTs中,COX2蛋白阳性表达62例,阳性表达率为83.8%;COX2 mRNA阳性表达58例,阳性表达率为78.4%.COX2蛋白及mRNA表达情况在GISTs不同危险度分组间比较差异有统计学意义(P0.05),在高危险度组中阳性表达率最高,而在不同性别、年龄、发生部位、组织学类型及是否转移组间比较差异均无统计学意义(P0.05).38例患者获访,随访率51.4%;COX2蛋白强阳性表达(+++)24例,其中5例转移,2例死亡;其余阴性(-)、弱阳性(+)及中度阳性(++)表达病例均未发现复发、转移或死亡.COX2mRNA强阳性表达(+++)17例,其中3例转移,2例死亡;阴性表达(-)6例,未发现复发、转移或死亡;而弱阳性(+)及中度阳性(++)表达病例中均有1例发生转移,未发现复发及死亡.结论:GISTs中COX2蛋白及mRNA的表达上调提示COX2可作为评估GISTs危险度分级的另一潜在指标,并且可能影响患者预后.     

OY-TES-1在肝细胞癌中的表达及抗体血清学分析

目的:了解OY-TES-1在肝细胞癌(HCC)中的表达及其抗体出现情况,探讨将OY-TES-1用于肿瘤免疫诊疗的可能性.方法:利用实时定量PCR和免疫组织化学技术,从mRNA和蛋白质两个水平研究OY-TES-1在HcC中的表达特点;采用酶联免疫吸附实验检测HCC患者及正常人血清中相应的抗体,并对其临床意义做初步的分析.结果:经实时定量PCR检测,HCC中OY-TES-1mRNA阳性率为73.21%(41/56),癌旁阳性率为64.86%(24/37),有17对HCC及配对癌旁组织均表达阳性,OY-TES-1mRNA在HCC及癌旁组织两者的表达阳性率无差异(P>0.05);在37对HCC及配对癌旁组织中,HCC中OY-TES-1mRNA水平明显高于对应的癌旁组织,其差异与病理分级有关CP<0.05).HCC中OY-TES-1蛋白阳性率为40%(4/10).血清学检测未发现76例正常人和17例肝硬化患者血清中有相应抗体,HCC患者血清抗体阳性率为20%(12/58),OY-TES-1血清抗体的出现与HCC患者的年龄、性别等临床资料无相关.结论:OY-TES-1在HCC中有较高的表达频率及表达水平,该蛋白具有较强的免疫原性,他有望作为用于HCC辅助诊断及免疫治疗的肿瘤抗原.     

肿瘤-睾丸抗原SPANX-C基因mRNA在肝细胞癌中的表达及HLA-A2限制性CTL表位的预测

目的:检测肿瘤-睾丸抗原SPANX-C基因在肝细胞癌(HCC)中的表达,预测SPANX-C/HLA-A2限制性CTL表位.为HCC的免疫治疗寻找新的靶位.方法:用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对HCC患者癌组织、相应癌旁组织和对照组织(肝硬化和正常肝组织)中的SPANX-C基因mRNA进行检测,随机选取RT-PCR阳性扩增产物进行序列测定;用超基序法和量化基序法联合预测SPANX-C/HLA-A2限制性CTL表位.结果:在所检测的115例HCC组织中有70例(60.9%)表达SPANX-C基因mRNA,癌旁组织和20例对照肝组织均不表达.SPANX-C基因的表达与肿瘤分期、肿瘤分化程度、血清甲胎蛋白(AFP)水平等临床指标无相关性(P>0.05).用基序预测法筛选出5个HLA-A2限制性CTL表位(9肽),其中SPANX-C51-59(LVVRYRRNV)与HLA-A2分子具有较高结合力.结论:SPANX-C基因mRNA在HCC组织中呈高频率特异性表达,并存在HLA-A2限制性CTL表位,有望用于HCC的免疫治疗.     

MAGE-4基因在肝细胞肝癌中的表达及临床意义

目的通过研究MAGE-4基因在肝细胞肝癌组织中的表达,并与患者临床资料进行分析,探讨 MAGE-4基因与肝细胞肝癌(HCC)患者临床指标及转移与复发的关系,为MAGE-4基因编码蛋白用于HCC患者免疫治疗提供依据. 方法用RT-PCR的方法对31例HCC患者癌组织及相应癌旁组织MAGE-4基因表达进行测定,对全部RT-PCR扩增产物中目的基因片段进行DNA测序以证实其为 MAGE-4基因,患者均测定并统计AFP、AFU、抗HCV、HBsAg、AFP mRNA、肿瘤直径等临床指标. 结果 31例HCC患者肝癌组织中MAGE-4基因表达的阳性率38.7% (12/31)明显高于癌旁组织中MAGE-4基因表达的阳性率0% (0/31),P＜0.01.HCC患者肝癌组织中MAGE-4基因表达的阳性率与患者AFP、AFU、抗HCV、HBV标志物、AFP mRNA、肿瘤直径等临床指标均无关,P＞0.05. 结论 MAGE-4基因在HCC患者肝癌组织中特异高表达,可能作为HCC患者免疫治疗攻击的靶点,HCC患者肝癌组织中 MAGE-4基因表达的阳性率与HCC患者肿瘤标志物、转移、复发均无关.     

黑色素瘤抗原基因在结直肠癌中的表达及意义

目的探讨黑色素瘤抗原基因（MAGE）-1、MAGE-3在结直肠癌组织中的表达及意义。方法采用RT-PCR方法检测MAGE-1和MAGE-3 mRNA在65例结直肠癌组织和相应正常黏膜组织中的表达,并对PCR扩增产物中的基因片段进行DNA测序验证。结果结直肠癌组织标本中,MAGE-1和MAGE-3表达率分别为18.5% （12/65）、33.9%（22/65）,MAGE-1和MAGE-3表达均为阳性者占12.3%（8/65）;相应正常黏膜组织均未检测到上述目的基因表达,DNA测序结果表明RT-PCR产物确为目的基因片段;除MAGE-1基因表达与患者年龄有相关性外（P=0.007）,两基因表达与其他临床病理特征均元相关性（P〉0.05）。结论MAGE-1、MAGE-3可作为结直肠癌疫苗的备选基因和免疫学检测的分子标志物,并作为肿瘤免疫治疗的特异性靶位基因。     

Analysis of cancer/testis antigens in sporadic medullary thyroid carcinoma: expression and humoral response to NY-ESO-1

Cancer/testis antigens (CTA) are tumor-associated antigens expressed during ontogenesis, in a number of solid tumors but not in normal tissues except testis. Most of these CTA are highly immunogenic, eliciting a humoral and cellular response in the patients with advanced cancer, and are useful for tumor-specific immunotherapy. Medullary thyroid carcinoma (MTC) is a neoplasm derived from the parafollicular cells of the thyroid and occurs in either a sporadic or a familial form. In the present study, we examined by RT-PCR the expression of a number of genes encoding CTA in 23 surgical samples of sporadic MTC. Among the 11 cDNA antigens examined, RAGE, MAGE-4, and GAGE 1-2, were not expressed in any of the tissues. SSX 2 was present only in one tissue, whereas BAGE, GAGE 1-6, MAGE-1, MAGE-2, MAGE-3, and SSX 1-5 were detected in two to five samples. NY-ESO-1 cDNA was the most frequent, being detected in 15 of 23 examined samples (65.2%). Six (26.1%) tissues did not express any CTA-specific mRNA, whereas 10 tumors expressed only one gene (43.5%), 3 (21.4%) expressed 2 genes, and 4 displayed a broad CTA gene expression. NY-ESO-1 expression in primary MTC tissues significantly correlated with tumor recurrence. The presence of specific anti-NY-ESO-1 antibodies was searched in the sera of MTC-affected patients examined by ELISA using recombinant NY-ESO-1 protein. A humoral response against this CTA was detected in 6 of 11 NY-ESO-1 expressing patients (54.5%), and in 1 of 6 patients with NY-ESO-1-negative tumor. No anti-NY-ESO-1 antibodies were detected in healthy subjects (n = 17). The presence of anti-NY-ESO-1 antibodies was searched also in the sera of MTC affected patients whose tissues were not available for CTA analysis. Anti-NY-ESO-1 antibodies were present in 15 of 42 sera (35.7%), demonstrating that MTC is a neoplasm frequently associated with humoral immune response to NY-ESO-1. Serological survey may be useful as a way to identify patients with humoral immune response to NY-ESO-1 that provide a new attractive target for vaccine-based immunotherapy of MTC.     

MAGE-1基因在肝细胞性肝癌中的表达

目的探讨ＭＡＧＥ－１基因编码的肿瘤相关抗原作为肝细胞性肝癌（ＨＣＣ）主动免疫治疗攻击靶点的可能性。方法用ＲＴ－ＰＣＲ的方法检测了３９例ＨＣＣ及癌旁组织、３种人肝癌细胞株和５例非ＨＣＣ病例肝组织中ＭＡＧＥ－１基因的表达。结果ＨＣＣ癌组织中ＭＡＧＥ－１基因表达率明显高于癌分组织中的表达率,５８．９％（２／３９）对１０．３％（４／３９）,Ｐ＜００１。３种细胞株均为阳性表达。结论ＭＡＧＥ－１基因可作为主动免疫治疗的攻击靶点,以进一步研究设计新的ＨＣＣ免疫治疗策略。     

肝癌患者及正常人群中黑色素瘤相关抗原1的基因多态性

目的 研究黑色素瘤相关抗原1(MAGE-1)在中国肝癌患者中的表达，并阐明MAGE-1基因变异是肿瘤细胞内的突变还是单核苷酸多态性(SNP)，以及基因变异在人群中的分布状况。方法 提取19例原发性肝癌(HCC)患者的癌组织、癌旁组织总RNA，用逆转录-多聚合酶链反应(RTPCR)方法检测组织MAGE-1基因mRNA的表达，并通过PCR产物测序分析编码基因是否存在变异；提取HCC患者癌组织、癌旁组织和外周血细胞基因组DNA，以及23例正常献血员外周血细胞基因组DNA，分析MAGE-1编码基因的变异状况并利用软件对变异抗原蛋白的生物学意义进行了初步探讨。结果 癌组织中MAGE-1表达阳性率为47．4％(9／19)，癌旁组织无表达。序列测定显示，MAGE-1 cDNA编码基因存在3种类型：一类是Ⅰ型(GenBank M77481)，发生率为11．1％(1／9)；另一类型(C159T，A272G，G393A)发生率为55．6％(5／9)，称之为TGA型，导致编码的2个氨基酸的改变分别是T32A和R72Q；第三种类型(A272G，C991T，A1125G)发生率为33．3％(3／9)，仅A272G引起一个氨基酸的替换(T32A)，称之为GTG型。经对基因组DNA分析，证实以上3种基因类型不是肝癌组织的基因突变，而是SNP，其在肝癌患者和正常献血员中分布的比例分别为：Ⅰ型占26．3％(5／19)和60．9％(14／23)；TGA型占57．9％(11／19)和47．8％(11／23)，GTG型占21．1％(4／19)和21．7％(5／23)。TGA型和GTG型的序列已被GenBank收录，编号为AF463515和AY148486。在男性研究对象中，SNP型别在是否患有HCC及是否表达MAGE1抗原的患者中的分布差异均无显著性。SNP可能产生多个新的能与人白细胞抗原结合的抗原表位。利用多个模块从头搭建的方法，得到Ⅰ型和TGA型的蛋白三维空间结构模型。结论 MAGE-1在HCC患者的癌组织中表达，发现MAGE-1存在3种高频分布的SNP类型，尝试建立了MAGE-1蛋白的三维空间模型，这为进一步研究不同的MAGEI-1抗原性肽疫苗奠定了基础。     

Immunohistochemical assessment of NY-ESO-1 expression in esophageal adenocarcinoma resection specimens

AIM:To assess NY-ESO-1 expression in a cohort of esophageal adenocarcinomas.METHODS:A retrospective search of our tissue archive for esophageal resection specimens containing esophageal adenocarcinoma was performed,for cases which had previously been reported for diagnostic purposes,using the systematised nomenclature of human and veterinary medicine coding system.Original haematoxylin and eosin stained sections were reviewed,using light microscopy,to confirm classification and tumour differentiation.A total of 27 adenocarcinoma resection specimens were then assessed using immunohistochemistry for NY-ESO-1 expression:4 well differentiated,14 moderately differentiated,4 moderatepoorly differentiated,and 5 poorly differentiated.RESULTS:Four out of a total of 27 cases of esophageal adenocarcinoma examined(15%)displayed diffuse cytoplasmic and nuclear expression for NY-ESO-1.They displayed a heterogeneous and mosaic-type pattern of diffuse staining.Diffuse cytoplasmic staining was not identified in any of these structures:stroma,normal squamous epithelium,normal submucosal gland and duct,Barrett’s esophagus(goblet cell),Barrett’s esophagus(non-goblet cell)and high grade glandular dysplasia.All adenocarcinomas showed an unexpected dot-type pattern of staining at nuclear,paranuclear and cytoplasmic locations.Similar dot-type staining,with varying frequency and size of dots,was observed on examination of Barrett’s metaplasia,esophageal submucosal gland acini and the large bowel negative control,predominantly at the crypt base.Furthermore,a prominent pattern of apical(luminal)cytoplasmic dot-type staining was observed in some cases of Barrett’s metaplasia and also adenocarcinoma.A further morphological finding of interest was noted on examination of haematoxylin and eosin stained sections,as aggregates of lymphocytes were consistently noted to surround submucosal glands.CONCLUSION:We have demonstrated for the first time NY-ESO-1 expression by esophageal adenocarcinomas,Barrett’s metaplasia and normal tissues other than germ cells.     

MAGE-1修饰的树突状细胞体外诱导杀伤人肝癌细胞

目的通过观察肿瘤相关抗原基因MAGE-1转导的树突状细胞(dendritic