大鼠脑缺血再灌注后热休克蛋白70的表达及与细胞的凋亡

热休克蛋白 70 (Hsp70 )为细胞受到缺血损害的一个敏感指标 ,又与缺血耐受有关〔1〕。但 Hsp70与细胞凋亡在局灶性脑缺血再灌注后的时间表达却鲜有报道。本实验通过测定MCAO再灌后不同时间 Hsp70表达和 TUNEL阳性细胞以探讨缺血半暗带区神经细胞的动态变化。1　材料与方法1.1　 动物　成年 Wistar雄性大鼠 30只 ,体重 2 5 0～ 30 0 g(山东省医科院提供 )。随机分为再灌注后 2 h,6 h,12 h,2 4h,48h,72 h组 ,每组 5只 ,随机抽取 2只作为假手术组。1.2 　 实验方法1.2 .1　 MCAO模型建立　用 Zea- longa〔2〕颈外动脉线栓法 :3.5 %水和…     

热休克蛋白70对大鼠心肌细胞凋亡的保护作用

目的　探讨热休克蛋白 70 (HSP 70 )对大鼠心肌细胞凋亡的保护作用。方法　体外培养大鼠心肌细胞同时温度诱导细胞产生HSP 70 ,用过氧化氢 (H2 O2 )造成心肌细胞损伤。采用免疫组化 ,DNALadder,流式细胞仪 ,细胞色素C氧化酶比活力的测定 ,电镜观察等作为检测指标。结果　温度诱导后HSP 70在胞浆中大量表达 ,损伤组与保护组凋亡率、细胞色素C氧化酶比活力差异有显著意义 (P <0 .0 1)电镜观察损伤组细胞的细胞膜、细胞器损伤明显 ,并出现凋亡小体。结论　HSP 70可延迟细胞凋亡 ,对心肌细胞具有保护作用     

热休克蛋白70对大鼠脊髓损伤后凋亡的影响

热休克预处理能减轻脊髓损伤后的凋亡,其机理可能同热休克蛋白70合成增加,并进一步抑制NF-κB的表达有关。     

热休克蛋白70对供心细胞Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的探讨热休克蛋白70(HSP70)对大鼠供心心肌细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法Wistar大鼠18只,分为两组:对照组(C,n=9),腹腔注射生理盐水0.5ml,24h后取离体心脏灌注HTK心脏保护液,4℃保存3h后建立Langendorff离体心脏灌注模型,灌注KH液2h;实验组(E,n=9)腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素(溶于生理盐水中)3.1μmol/kg(0.53mg/kg),腹腔注射24h后取离体心脏,处理方法同C组。运用免疫组化SP法测定心肌HSP70含量、Bcl-2、Bax蛋白的含量以及相关生化指标并进行统计学处理。结果HSP70含量E组(17.78±1.82)较C组(5.22±1.05)明显增高(P<0.01),Bcl-2的表达E组(41.88±5.09)较C组(31.36±3.27)明显增多(P<0.01),Bax的表达E组(22.61±3.49)较C组(40.52±4.17)明显减少(P<0.01),Bcl-2/Bax比值E组(1.86±0.11)较C组(0.77±0.01)明显增高。生化指标E组明显优于C组。结论心肌HSP70高表达对供心具有明显的保护效应,其促进心肌抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,减少促凋亡蛋白Bax表达,增加Bcl-2/Bax比率,以此抑制心肌细胞凋亡,从而发挥其对供心心肌细胞保护作用。     

热休克蛋白7O对大鼠脊髓损伤后凋亡的影响

热休克预处理能减轻脊髓损伤后的凋亡，其机理可能同热休克蛋白70合成增加，并进一步抑制NF-kB的表达有关。     

脑缺血再灌注后热休克蛋白70的表达与细胞凋亡关系的实验研究

目的 研究大鼠局灶性脑缺血再灌注后热休克蛋白70（Hsp70)的表达及与细胞凋亡的关系。方法 用线栓法制备MCAO模型,用免疫组化法测定Hsp70阳性细胞及用TUNEL法测定凋亡细胞。结果 缺血2h即有Hsp70阳性细胞,6－24h明显,3d消失。TUNEL阳性细胞于再灌注后2h出现,24－48h达高峰,72h减弱。结论 脑缺血再灌注后早期即有Hsp70表达衣细胞凋亡发生。     

N-乙酰半胱氨酸对家兔缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响

目的观察N-乙酰半胱氨酸(NAC)对家兔缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响,并探讨其机制。方法 30只家兔随机等分为假手术组、心肌缺血再灌注(I/R)组和NAC组。NAC组和I/R组制作缺血再灌注模型,前者在血流灌注后阻断主动脉和肺动脉血管10 s,同时于心尖部注入NAC溶液0.5 mL;I/R组在再灌注开始即刻给予生理盐水0.5 mL。假手术组家兔开胸后只穿线,不结扎冠状动脉左前降支。再灌注3 h后,用黄嘌呤氧化酶法测定血清超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸法测定血清丙二醛(MAD)水平。三组各取缺血区心肌组织,用原位末端标记法测定心肌细胞凋亡,并计算凋亡指数(AI)。用免疫组化SABC法检测缺血心肌组织中的Fas蛋白,计算Fas蛋白阳性表达指数(PI)。结果 I/R组的MDA水平高于、SOD活性低于NAC组和假手术组(P均<0.05);I/R组缺血区心肌细胞AI、心肌细胞中Fas蛋白PI明显高于NAC组和假手术组(P均<0.05)。结论 NAC可减少家兔缺血再灌注损伤心肌细胞的凋亡,可能是通过其抗氧化作用及下调Fas蛋白表达来实现的。     

脑缺血再灌注后热休克蛋白70的表达及与细胞凋亡关系的实验研究

目的　研究大鼠局灶性脑缺血再灌注后热休克蛋白70(Hsp70)的表达及与细胞凋亡的关系。方法　用线栓法制备MCAO模型,用免疫组化法测定Hsp70阳性细胞及用TUNEL法测定凋亡细胞。结果　缺血2h即有Hsp70阳性细胞,6～24h明显,3d消失。TUNEL阳性细胞于再灌注后2h出现,24～48h达高峰,72h减弱。结论　脑缺血再灌注后早期即有Hsp70表达及细胞凋亡发生。     

脑缺血大鼠脑组织热休克蛋白70的表达

目的　研究脑缺血时大鼠脑组织热休克蛋白 70 (HSP70 )的表达及不同脑缺血时间对HSP70表达的影响。方法　选取雄性SD大鼠 4 0只 (体重约 2 0 0g)随机分为 4组 ,每组 10只。其中一组为正常对照组 ,一组为脑缺血 2min组 ,一组为脑缺血 6min组和脑缺血 12min。实验后取大鼠脑组织匀浆并用WesternBlot法测HSP70的表达。结果　脑缺血组脑组织HSP70的表达明显增高 ,其中脑缺血 6min和 12min组与对照组相比有显著性差异 (P <0 0 5) ;脑缺血 12min与6min相比亦有显著性差异 (P <0 0 5)。结论　HSP70在脑缺血时的脑组织存在高表达 ,脑缺血时间越长 ,HSP70的表达越高。     

外源性皮质酮对大鼠主动脉内皮细胞热休克蛋白70表达的影响

目的在细胞水平观察皮质酮对热休克蛋白70（HSP70）表达的影响及量效动态变化。方法采用培养的大鼠主动脉内皮细胞,观察在不同剂量皮质酮（0．1μM,50μM,100μM）干预2h～72h后,内皮细胞热HSP70的表达情况。结果皮质酮干预大鼠主动脉内皮细胞后,HSP70蛋白表达在4h达到高峰,其中干预浓度为0．1μM组的HSP70蛋白含量增加最为明显,到72h时与正常对照组已无显著差异。结论不同干预剂量的皮质酮均可促使大鼠主动脉内皮HSP70表达增加,应激时大量分泌的皮质酮可能是通过HSP70表达增加参与内皮细胞的保护。     

N-乙酰半胱氨酸对糖尿病大鼠肾脏NADPH氧化酶表达的影响

目的探讨N-乙酰半胱氨酸（NAC）对糖尿病大鼠肾脏尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶表达的影响。方法大鼠随机分为正常对照（NC）组、正常对照NAC治疗组（CT组）、糖尿病组（DM组）和糖尿病NAC治疗组（DT组）。8周后测定血糖、胰岛素、肌酐、游离15-F2t-异前列烷和总抗氧化物水平、24小时尿蛋白排泄量（UPro/24h）、肾系膜基质增宽指数、肾皮质p22phox、p67phox、铜-锌-超氧化物歧化酶（Cu-Zn-SOD）和结缔组织生长因子（CTGF）蛋白表达。结果糖尿病大鼠UPro/24h、血浆游离15-F2t-异前列烷水平、系膜基质增宽指数、肾脏p22phox、p67phox和CTGF蛋白表达显著增高，血浆总抗氧化物浓度和肾脏Cu-Zn-SOD蛋白表达显著降低。NAC治疗能显著逆转糖尿病大鼠上述各项指标的变化。结论NAC显著降低糖尿病大鼠肾脏氧化应激水平，减轻氧化应激对肾组织的损伤，产生肾脏保护作用。     

肝细胞癌热休克蛋白70过表达与自发性癌细胞凋亡

目的探讨肝细胞癌（hepatocellularcarcinoma,HCC)热休克蛋白70（heatshockproteins70,HSP70）的表达及其与自发性癌细胞凋亡的关系。方法采用免疫组化SP法和原位末端转移酶标记法（TUNEL）检测68例HCC手术标本中HSP70表达和细胞凋亡指数,以癌旁肝组织作为对照。结果HCC和癌旁组织中HSP70阳性率分别为71%和28%,过表达分别为53%和21%,两组之间差异有非常显著意义（P＜0.01),HSP70阳性率和凋亡指数有正相关关系（r＝0.8765,P＜0.05),两者都随HCC组织学分级增高而增加。结论HCC组织中存在HSP70过表达和自发性癌细胞凋亡,两者正相关性机理尚不明了,可能是HCC生物学恶性行为的标志。     

褪黑素对糖尿病大鼠心肌热休克蛋白70表达的影响

目的研究褪黑素对糖尿病大鼠心肌组织热休克蛋白(HSP)70表达的影响及其作用机制。方法高脂高糖饮食配合中等剂量链脲佐菌素腹腔注射诱导糖尿病大鼠模型,高剂量(20 mg/kg体重)和低剂量(10 mg/kg体重)褪黑素灌胃16 w,测量心脏重量,计算心脏指数;HE染色观察心肌组织形态;免疫荧光检测心肌HSP70含量。结果褪黑素对糖尿病大鼠体质量、心脏指数和血糖值的变化无影响。褪黑素可以下调HSP70在心肌的表达,改善心肌功能。结论褪黑素可以下调HSP70在糖尿病大鼠心肌的表达,对糖尿病大鼠心肌起保护作用。     

银杏叶提取物对大鼠脑缺血再灌注损伤热休克蛋白70表达的影响

目的探讨银杏叶提取物对大鼠缺血再灌注损伤热休克蛋白70表达的影响。方法42只大鼠随机分为3组:假手术组、单纯缺血再灌注组、缺血再灌注+银杏叶提取物组,每组14只。通过免疫组织化学方法和原位末端标记法(TUNEL)检测热休克蛋白70表达及凋亡细胞数,TTC染色观察梗死体积。结果3组均可检测到热休克蛋白70的表达,单纯缺血再灌注组热休克蛋白70的表达较假手术组增强(P<0.01),缺血再灌注+银杏叶提取物组较缺血再灌注组表达增强(P<0.05)。缺血再灌注+银杏叶提取物组梗死体积及凋亡细胞数明显少于缺血再灌注组(P<0.01)。结论银杏叶提取物可能通过上调缺血缺氧后热休克蛋白70的表达减少神经细胞凋亡。     

兔动脉粥样硬化易损斑块中高表达热激蛋白70细胞与细胞凋亡的关系

目的:探讨热激蛋白(HSP)的高表达和细胞凋亡在兔动脉粥样硬化斑块中的作用。方法:取兔动脉粥样硬化易损斑块28例,镜下将斑块分为4个区,分别为纤维帽区、脂核区、肩部区和中膜平滑肌区;采用免疫组化技术检测各区不同细胞HSP70的高表达情况、原位末端标记法(TUNEL)检测各区不同细胞凋亡情况。结果:纤维帽区与肩部区HSP70的表达阳性炎性细胞数均显著高于脂核区、中膜平滑区,纤维帽区平滑肌细胞HSP70的阳性表达显著高于其他3个区。脂核区TUNEL阳性细胞数明显高于其他3个区。纤维帽区与肩部中表达HSP70的阳性细胞数大于TUNEL阳性细胞数(P<0.05,P<0.01);脂核区内TUNEL阳性细胞数明显大于表达HSP70的阳性细胞数(P<0.01)。结论:易损斑块内HSP70的高表达主要在纤维帽区及肩部区,而细胞凋亡主要在斑块脂核周围。     

腺苷后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤后HSP70表达及心肌细胞凋亡的影响

目的 通过观察腺苷后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤后热体克蛋白70(HSP70)表达及凋亡的影响,探讨腺苷后处理对心肌缺血再灌注损伤的保护机制.方法 24只成年雄性Wistar大鼠随机分为假手术对照组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、腺苷后处理组(AD组),采用结扎大鼠左冠状动脉前降支法制备大鼠心肌缺血再灌注模型;免疫组化SABC法检测HSP70表达;采用DNA原位末端缺口标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡.结果 与假手术组比较,I/R组与AD组HSP70表达水平均升高(P＜0.05),且AD组明显高于I/R组(P＜0.05).心肌细胞凋亡率,I/R组与AD组较假手术组增高(P＜0.05),且AD组明显低于I/R组(P＜0.05).结论 腺苷后处理可增加心肌缺血再灌注损伤大鼠HSP70的表达,减轻心肌细胞凋亡,有效保护心肌缺血再灌注损伤.     

N乙-酰半胱氨酸对心肌梗死后细胞凋亡及心室重塑的影响

将大耳白兔随机分为假手术组、急性心肌梗死（AMI）组、N-乙酰半胱氨酸（NAC）组。AMI模型制作成功后,给予NAC组NAC。4周后用心脏超声测左室收缩末期内径、舒张末期内径、射血分数、短轴缩短率,黄嘌呤氧化酶法测定血清超氧化物歧化酶总活力（T-SOD）,硫代巴比妥酸法测定血清丙二醛（MDA）浓度。流式细胞仪测定梗死边缘区细胞凋亡率。结果与AMI组相比,NAC组左室收缩末期内径、舒张末期内径、射血分数、短轴缩短率明显改善;T-SOD活性明显升高,MDA含量、凋亡率明显降低。提示NAC可能通过抗氧化作用抑制梗死边缘区细胞凋亡,改善心功能及心室重塑。     

热休克蛋白70及其抗体的检测对活动性肺结核的临床意义

目的　探讨热休克蛋白 70 (HSP70 )、热休克蛋白 70抗体 (HSP70 Ab)与活动性肺结核的关系。方法　用WesternBlot和WesternBlot ELISA法分别检测 3 0例活动性肺结核 (活动组 )、2 8例陈旧性肺结核 (陈旧组 )和 3 0名健康 (对照组 )血浆中HSP70和HSP70 Ab的水平。结果　活动组HSP70 [(4 675 .79± 767.11)积分光密度 ]高于陈旧组 [(2 85 4.81± 83 6.80 )积分光密度 ]和对照组 [(2 63 5 .60± 987.0 5 )积分光密度 ] (P <0 .0 1) ;活动组 1∶80抗体滴度组阳性检出率(3 3 .3 3 % )高于陈旧组 (14 .2 8% )和对照组 (10 .0 0 % ) ,两组比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论　HSP70、HSP70 Ab(1∶80 )可作为肺结核活动性诊断指标之一     

肝细胞癌中热休克蛋白70、Caspase-3的表达及其意义

本研究采用免疫组化技术检测肝细胞癌（HCC）中热休克蛋白（HSP）70、Caspase-3表达,应用原位末端标记技术（TULLER）对肝细胞凋亡进行检测,并分析它们之间的相互关系。     

热休克蛋白70激发树突状细胞抗肝癌作用的实验研究

目的探讨以树突状细胞（DC）为载体，用肝癌细胞提取的热休克蛋白70-肿瘤肽复合物（HSP-PC）刺激DC，观察经活化后的DC对肝癌细胞SMMC-7721的杀伤作用。方法用脐带血在体外培养诱导DC，用从SMMC-7721提取的HSP70—PC与DC共同培养，检测其对肝癌细胞的杀伤活性。结果经HSP70-Pc刺激后的DC对SMMC-7721的杀伤能力明显高于单纯DC对肿瘤细胞的杀伤能力。结论用HSP70—PC刺激的DC经体外实验证实具有明显的抗肿瘤效应，为临床肿瘤免疫治疗的开展提供了有效的数据。