抗CD14单克隆抗体对脓毒症急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞内NF-κB(p65)影响的研究

目的探讨抗CD14单克隆抗体在大鼠脓毒症急性肺损伤中对肺泡巨噬细胞内NF-κB(p65)的影响。方法 15只雄性SD大鼠,体重(150±20)g,随机分为3组,Sham组、CLP组和Anti-CD14组,每组5只,选用经典的盲肠结扎穿孔(CLP)法制作急性肺损伤动物模型。造模成功后6 h,应用ELISA检测血浆MIP-2、IL-10浓度,左肺采用Western blot测定肺内NF-κB(p65)蛋白的表达水平,取右肺下叶行HE染色、切片后在光镜下观察肺脏病理形态变化。以Sham组作为对照组。结果 ELISA结果显示:CLP组的血浆MIP-2浓度显著高于Sham组和Anti-CD14组,Anti-CD14组的血浆MIP-2浓度低于CLP组,有统计学差异(P<0.05);三组的血浆IL-10浓度比较无统计学差异(P>0.05);Western blot检测显示:CLP组和Anti-CD14组的NF-κB(p65)表达量高于Sham组(P<0.05),Anti-CD14组的NF-κB(p65)表达量低于CLP组(P<0.05)。HE染色显示:CLP组和Anti-CD14组肺内均出现炎症细胞浸润、肺间质增厚、出血,Anti-CD14组肺组织炎性表现较CLP组显著减轻。结论抗CD14单克隆抗体能同脂多糖竞争性地结合肺泡巨噬细胞膜表面受体CD14分子,阻止肺内NF-κB(p65)的核内移位,减少致炎因子生成和释放,抑制炎症细胞浸润,起到肺保护作用。     

血必净对创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织核因子-κB p65表达作用的研究

目的 观察创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织核因子-κB(NF-κB)p65基因及蛋白表达,并探讨血必净对其的干预作用.方法 SD大鼠110只,随机分为正常组(A组,n＝10)、创伤弧菌脓毒症组(B组,n＝50,采用大鼠左下肢皮下注射创伤弧菌悬液制作大鼠创伤弧菌脓毒症模型)和血必净治疗干预组(C组,n＝50,感染后半小时腹腔注射血必净4 mL/kg).B、C组于染菌后1、6、12、24、48 h活杀(各时间点n=10),采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR) 法、Western blot法和双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测大鼠肺组织NF-κB p65的基因与蛋白表达及IL-10的含量,数据采用单因素方差分析.结果 与A组比较,B组大鼠肺组织创伤弧菌感染后6、12 h NF-κB p65 mRNA表达量与6、12、24和48 h肺组织NF-κB p65蛋白表达量均明显增高 (P<0.05);与B组相同时间点比较,C组6 h肺组织NF-κB p65 mRNA表达量与12、24及48 h肺组织NF-κB p65 蛋白表达量明显减少(P<0.05); 与A组比较,B组创伤弧菌菌感染12、24和48 h IL-10的含量明显增加(P<0.05),与B组相同时间点比较,C组24 h(52.444±9.605)肺组织IL-10的含量明显增高(P<0.05);感染后48 h,大鼠肺内血管明显充血,间质水肿并伴炎性浸润,肺泡腔塌陷,血必净干预后,肺组织损伤有所减轻.结论 NF-κB参与了创伤弧菌脓毒症肺损伤过程;血必净能抑制NF-κB p65的表达,从而起到保护创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织的作用.     

脓毒症大鼠心肌CD14和血管细胞黏附分子-1的变化与心肌损害的相关性研究

目的 研究脓毒症大鼠心肌组织CD14和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)含量的变化与心肌损害的相关性.方法 盲肠结扎穿刺法建立大鼠脓毒症模型.32只模型大鼠分别在感染后不同时间点处死,以8只正常大鼠作为对照组.分离左心室心肌组织,进行免疫组化染色和心肌损害的病理解剖评定.ELISA法检测大鼠外周血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)的浓度.免疫组化法检测大鼠心肌组织CD14和VCAM-1的含量.结果.①不同时间点被处死的32只脓毒症大鼠,心肌组织均有不同程度的损害,感染时间越长,心肌损害程度越重.②脓毒症大鼠外周血清 cTnI的浓度均显著高于正常对照组,且随着感染时间的延长而逐渐增高(F=647.63,P<0.05).③脓毒症大鼠心肌组织CD14和VCAM-1的含量均显著高于正常对照组,且随着感染时间的延长而逐渐增高(F=427.87,P<0.05;F=709.30,P﹤0.05).④脓毒症大鼠心肌组织CD14和VCAM-1的含量与外周血清 cTnI的浓度呈正相关关系(P均<0.05).结论.CD14和VCAM-1在脓毒症大鼠心肌组织中的含量增加,并与心肌炎症损害的程度有关,可能参与了脓毒症心肌损害的发病过程.     

亚硒酸钠对哮喘大鼠肺组织核因子κB和细胞间黏附分子1表达的影响

目的：观察哮喘大鼠肺组织中核因子κB和细胞间黏附分子1的表达及其相关性,了解亚硒酸钠干预后对其的影响.方法：[1]实验于2004-10/2004-12在南京医科大学动物实验基地完成.选用SPF级雄性Wistar大鼠18只.[2]随机将大鼠分为3组：哮喘组（实验第1天腹腔注射100g/L卵蛋白,氢氧化铝生理盐水悬液1 mL致敏,第8天重复注射1 mL,2周后,超声雾化吸入10 g/L卵蛋白20 min诱发其哮喘发作,1次/d,共14d）,亚硒酸钠干预组（亚硒酸钠干预组致敏和诱发同哮喘组,诱喘前0.5 h给予亚硒酸钠生理盐水悬浮液1.5 mL灌胃）和正常对照组（用同等量的生理盐水替代卵蛋白腹腔注射和雾化吸入,余处理同哮喘组）,每组6只.[3]采用免疫组织化学方法观察肺组织核因子κB和细胞间黏附分子1的表达,采用德国LEICA DMRA2,分析软件采用QWIN软件.以肺内支气管为分析对象,分别检测支气管壁胞核核因子κB阳性细胞比例和胞浆细胞间黏附分子1阳性细胞比例,取平均值.[4]计量结果间差异比较采用方差分析和t检验,各组均数间用q检验进行两两比较,相关性采用Pearson相关性分析.结果：大鼠18只均进入结果分析.[1]支气管上皮细胞细胞间黏附分子1和核因子κB：哮喘组和亚硒酸钠干预组明显高于正常对照组[哮喘组：（13.16&;#177;2.74）%,（31.96&;#177;6.22）%;亚硒酸钠干预组：（6.99&;#177;1.79）%,（18.09&;#177;4.13）%;正常对照组：（1.67&;#177;0.95）%,（5.08&;#177;1.92）%,P＜0.01],亚硒酸钠干预组明显低于哮喘组（P＜0.01）.[2]相关性：哮喘大鼠支气管上皮细胞核因子κB与细胞间黏附分子1蛋白表达呈正相关（r=-0.782,P＜0.01）.结论：[1]核因子κB可能对哮喘大鼠细胞间黏附分子1蛋白的表达具有调控作用.[2]亚硒酸钠可以抑制核因子κB的激活,从而减少受其调控的细胞间黏附分子1的表达.     

β1受体阻滞剂对脓毒症大鼠心肌损伤的影响

目的：探讨β1受体阻滞剂对脓毒症大鼠心肌损伤的影响和机制。方法将健康雄性大鼠72只随机分为对照组、脓毒症组、治疗组,每组24只。脓毒症组采用盲肠结扎穿孔法（ CLP）建立脓毒症模型,对照组仅剖腹而不进行CLP。脓毒症组和对照组在关腹后皮下注射生理盐水3 mL／100 g;治疗组除皮下补液外,经尾静脉注射艾司洛尔15 mg／（ kg? h）持续静脉泵入,分别于3、6、12、24 h采集标本,在每个时间点每组大鼠均为6只,观察三组血清肿瘤坏死因子－α（TNF－α）、心肌组织核转录因子－κB p65（NF－κB p65）、心肌肌钙蛋白I（cTnI）的变化。结果与对照组比较,脓毒症组在各时间点血清TNF－α浓度、cTnI浓度及心肌组织NF－κB p65表达均显著升高（P＜0.05）;与脓毒症组比较,治疗组在各时间点血清TNF－α浓度、cTnI浓度及心肌组织NF－κB p65表达均降低（ P＜0.05）。结论β1受体阻滞剂艾司洛尔可减轻脓毒症大鼠心肌损伤,其机制可能与抑制心肌NF－κB p65的表达,降低血清促炎介质的产生有关。β1受体阻滞剂能改善脓毒症失控的炎症反应以及保护心肌功能。     

亚硒酸钠对哮喘大鼠肺组织核因子κB和细胞间黏附分子1表达的影响

目的:观察哮喘大鼠肺组织中核因子κB和细胞间黏附分子1的表达及其相关性,了解亚硒酸钠干预后对其的影响。方法:①实验于2004-10/2004-12在南京医科大学动物实验基地完成。选用SPF级雄性Wistar大鼠18只。②随机将大鼠分为3组:哮喘组(实验第1天腹腔注射100g/L卵蛋白,氢氧化铝生理盐水悬液1mL致敏,第8天重复注射1mL,2周后,超声雾化吸入10g/L卵蛋白20min诱发其哮喘发作,1次/d,共14d),亚硒酸钠干预组(亚硒酸钠干预组致敏和诱发同哮喘组,诱喘前0.5h给予亚硒酸钠生理盐水悬浮液1.5mL灌胃)和正常对照组(用同等量的生理盐水替代卵蛋白腹腔注射和雾化吸入,余处理同哮喘组),每组6只。③采用免疫组织化学方法观察肺组织核因子κB和细胞间黏附分子1的表达,采用德国LEICADMRA2,分析软件采用QWIN软件。以肺内支气管为分析对象,分别检测支气管壁胞核核因子κB阳性细胞比例和胞浆细胞间黏附分子1阳性细胞比例,取平均值。④计量结果间差异比较采用方差分析和t检验,各组均数间用q检验进行两两比较,相关性采用Pearson相关性分析。结果:大鼠18只均进入结果分析。①支气管上皮细胞细胞间黏附分子1和核因子κB:哮喘组和亚硒酸钠干预组明显高于正常对照组犤哮喘组:(13.16±2.74)%,(31.96±6.22)%;亚硒酸钠干预组:(6.99±1.79)%,(18.09±4.13)%;正常对照组:(1.67±0.95)%,(5.08±1.92)%,P<0.01犦,亚硒酸钠干预组明显低于哮喘组(P<0.01)。②相关性:哮喘大鼠支气管上皮细胞核因子κB与细胞间黏附分子1蛋白表达呈正相关(r=0.782,P<0.01)。结论:①核因子κB可能对哮喘大鼠细胞间黏附分子1蛋白的表达具有调控作用。②亚硒酸钠可以抑制核因子κB的激活,从而减少受其调控的细胞间黏附分子1的表达。     

Maresin-1对急性胰腺炎小鼠炎症因子及组织病理损伤的影响

目的 基于p38丝裂原活化蛋白激酶/核转录因子-κB(p38 MAPK/NF-κB)信号通路,探究Maresin-1对急性胰腺炎(AP)小鼠的影响。方法 随机将50只小鼠分为假手术组(sham组)、急性胰腺炎组(AP组)、Maresin-1低剂量组(Mar-1 L组)、Maresin-1高剂量组(Mar-1 H组)和p38 MAPK信号通路抑制剂组(SB203580组),每组各10只。除sham组外,其余各组小鼠均采用腹腔注射雨蛙素联合脂多糖(LPS)建立AP模型;sham组注射等量0.9%氯化钠溶液。Mar-1 L组、Mar-1 H组和SB203580组分别在注射Maresin-1和SB203580雨蛙素3 h后,第1次腹腔注射Maresin-1(25、50 ng/kg)和SB203580溶液(5 mg/kg),12 h后进行第2次腹腔注射;sham组和AP组注射等量0.9%氯化钠溶液。采用苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠胰腺组织病理损伤;酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测血清淀粉酶、脂肪酶、炎性因子水平;试剂盒测定胰腺组织髓过氧化物酶(MPO)活性;免疫组化法检测胰腺组织中CD6...     

核因子-κB与细胞间黏附分子-1在角膜移植排斥反应中的表达及环孢素A对两者表达的影响

目的探讨核因子-κB在角膜移植排斥反应中的作用,为进一步研究角膜移植排斥反应发病机制及治疗提供新的思路.方法实验于2004-12/2005-02在南方医科大学珠江医院眼科完成.实验分组同基因移植组Wistar大鼠5只为供者,Wistar大鼠10只为受者;同种异体移植组Wistar大鼠5只为供者,SD大鼠10只为受者.同种异体移植+环孢素A治疗组Wistar大鼠5只为供者,SD大鼠10只为受者.建立大鼠穿透性角膜移植动物模型,用免疫组织化学染色法检测角膜移植术后植片中核因子-κB和细胞间黏附分子-1表达,显微镜下记数植片中央区400倍视野中阳性细胞数的平均值,并以植片排斥反应指数及病理学表现作参照.结果纳入实验大鼠30只,均进入结果分析.①同基因移植组角膜植片中的角膜上皮细胞、基质细胞及内皮细胞有核因子-κB和细胞间黏附分子-1的微弱表达,表达强度分别为3.16±1.25,2.83±1.54;同种异体移植组角膜上皮细胞、内皮细胞、基质层细胞及新生血管内皮细胞核因子-κB和细胞间黏附分子-1表达增强,分别为16.77±2.76,13.63±1.93;同种异体移植环孢素A治疗组角膜上皮细胞、内皮细胞、基质层细胞及新生血管内皮细胞有核因子-κB和细胞间黏附分子-1的弱表达,分别为6.77±1.86,4.57±1.91.②各组间核因子-κB和细胞间黏附分子-1的表达强度有显著性差异(P＜0.01).③对比观察发现,各组角膜植片中NF-κB和细胞间黏附分子-1的表达部位和强度相似,相关性分析核因子-κB与细胞间黏附分子-1的表达强度呈正相关(r=0.875,P＜0.01),且核因子-κB的表达与排斥反应指数也具有明显的正相关性(r=0.829,P＜0.01).结论核因子-κB可能通过调控细胞间黏附分子-1等基因的表达,参与角膜移植排斥反应的发生,在角膜移植免疫中起着中心调控者的作用.而免疫抑制剂GsA通过减弱核因子-κB核转位和发挥活性,抑制排斥反应.     

不同浓度高氧对大鼠肺组织NF-κB和IL-8表达的影响

目的观察不同浓度高氧对大鼠肺组织NF-κB及IL-8表达的影响,探讨高氧所致肺损伤(HILI)的发生浓度及机制。方法 32只成年雄性SD大鼠随机分为4组,即对照组(吸入空气)、50%O2组、70%O2组和90%O2组,吸氧时间均为96 h。采用RT-PCR法检测肺组织NF-κB p65 m RNA表达水平,采用ELISA法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)IL-8含量,测定肺组织湿干重比值(W/D)和BALF中性粒细胞计数,并在光镜下观察各组大鼠肺组织的病理学改变。结果随着吸氧浓度的增加,肺组织NF-κB p65 m RNA表达水平、BALF中IL-8的含量、肺组织W/D比值及BALF中性粒细胞计数均逐渐增加,其中90%O2组增加最明显,与对照组、50%O2组及70%O2组比较差异均有统计学意义(均P<0.05),而对照组、50%O2组和70%O2组之间各项指标比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。相关性分析表明,肺组织NF-κB p65 m RNA与BALF中IL-8含量之间呈正相关(r=0.858,P<0.01)。结论吸入氧浓度超过90%且持续96 h以上,即可导致大鼠肺组织损伤,其发生可能与高氧激活肺组织细胞表达NF-κB,上调IL-8表达,导致中性粒细胞聚集和活化而引起的炎症反应有关。     

萝卜硫素对脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织Toll样受体4/核因子κB信号通路的影响

目的评价萝卜硫素对于脓毒症急性肺损伤（ALI）大鼠肺组织炎症反应以及Toll样受体4（TLR4）/核因子κB（NF-κB）信号通路的影响。 方法将30只雄性Sprague Dawley大鼠按随机数字表法分成假手术组、模型组和治疗组,每组各10只。模型组和治疗组大鼠采用盲肠结扎穿孔（CLP）法制备大鼠脓毒症模型,治疗组大鼠在术后立即腹腔注射50 mg/kg的萝卜硫素注射液,其余两组注入等量等渗NaCl溶液;于术后24 h大鼠右侧颈总动脉采集动脉血标本,然后处死大鼠取肺组织测定肺组织湿/干比。采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测三组大鼠肺组织匀浆标本肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）、NF-κB p65表达水平;荧光实时定量PCR检测三组大鼠肺组织TLR4 mRNA的表达。 结果假手术组、模型组及治疗组大鼠肺组织湿/干比[（4.00 ± 0.13）、（6.10 ± 0.05）、（5.80 ± 0.08）]、氧合指数[（315 ± 11）、（177 ± 7）、（200 ± 12）mmHg]、TNF-α[（6.05 ± 0.29）、（45.06 ± 0.52）、（27.09 ± 0.85）ng/L]、IL-1β[（8.02 ± 0.21）、（38.23 ± 0.81）、（32.73 ± 1.12）ng/L]及NF-κB p65[（0.375 ± 0.013）、（1.230 ± 0.045）、（0.988 ± 0.043）ng/L]表达水平比较,差异均有统计学意义（F = 480.891、255.309、4 245.262、1 918.168、564.842,P均< 0.001）。进一步两两比较发现,模型组和治疗组大鼠肺组织湿/干比、TNF-α、IL-1β、NF-κB p65表达水平均较假手术组大鼠显著升高（P均< 0.05）,治疗组大鼠肺组织湿/干比、TNF-α、IL-1β、NF-κB p65表达水平均较模型组大鼠显著降低（P均< 0.05）;而模型组和治疗组大鼠氧合指数均较假手术组大鼠显著降低（P均< 0.05）,治疗组大鼠氧合指数较模型组大鼠显著升高（P < 0.05）。荧光实时定量PCR结果显示,三组大鼠肺组织TLR4 mRNA表达水平比较,差异具有统计学意义（F= 224.538,P < 0.001）。进一步两两比较发现,与假手术组比较,模型组及治疗组大鼠肺组织TLR4 mRNA表达均显著升高（P均< 0.05）;而治疗组大鼠肺组织TLR4 mRNA表达较模型组显著降低（P < 0.05）。 结论萝卜硫素可减轻脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织炎症反应、肺水肿程度,改善缺氧状态,对于肺组织具有一定保护作用,且其作用机制可能与干预TLR4/NF-κB信号途径相关。     

乌司他丁对脓毒症大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1表达的影响

目的 通过观察乌司他丁注射液对脓毒症大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1 (HMGB1)表达的影响,探讨乌司他丁对脓毒症大鼠肺保护的作用机制.方法 90只健康的雄性SD大鼠随机分为假手术组(A组)、阳性对照组(B组)、乌司他丁治疗组(C组),每组30只.采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制作大鼠脓毒症模型.分别采用生理盐水或乌司他丁注射液每12 h重复腹腔注射,并于术后0、6、12、24、48、72 h随机处死大鼠.分别采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫组织化学法(IHC)检测肺组织中HMGB1的表达.结果 A组各时间点变化不明显;B组12 h开始升高,至24 h达到高峰,显著高于组内0、6、12、72 h及A、C组对应时间点水平(P＜0.01).B组在48 h略有下降,72 h接近12 h水平;C组各时间点的变化趋势同B组相似,但在24、48 h显著低于B组同期水平(P＜0.05);RT-PCR法与IHC法表现一致.肺泡上皮细胞水肿亦较B组明显减轻.结论 乌司他丁对脓毒症大鼠肺组织有明显的保护作用,其机制可能与抑制肺组织HMGB1的表达有关.     

丙酮酸乙酯对脓毒症大鼠血清HMGB1表达的影响及其作用的研究

目的 观察丙酮酸乙酯(EP)对脓毒症大鼠血清高迁移率族蛋白1表达水平的影响,及其对动物多器官功能的干预作用.方法 采用雄性Wistar大鼠,以盲肠结扎穿孔法(CLP)建立脓毒症大鼠模型.80只大鼠随机分为假手术组(n=20)、脓毒症组(n=20)、EP早期治疗组(n=20)和EP晚期治疗组(n=20).各组分别于模型建立后24 h和48 h颈动脉置管留取标本后活杀,检测血清高迁移率族蛋白1(HMGB1)水平以及24 h丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、肌酸激酶(CK)及动脉氧分压(PaO2)等各器官功能指标的变化.结果 脓毒症组、EP治疗组各时相点血清HMGB1水平均较假手术组高(P<0.01);EP早期组和EP晚期组HMGB1均较同时相点脓毒症组显著降低(P<0.01).与脓毒症组相比,EP治疗组血清ALT、AST、BUN、Cr、CK、PaO2水平均明显改善(P<0.01);脓毒症组24 h血清HMGB1与血清ALT、AST、BUN、Cr、CK、PaO2水平的变化之间存在显著相关性(P<0.01).结论 EP对脓毒症大鼠的重要器官功能具有保护作用,其机制可能与EP抑制HMGB1的释放有关.     

CD14 receptor occupancy in severe sepsis: results of a phase I clinical trial with a recombinant chimeric CD14 monoclonal antibody (IC14)

OBJECTIVE: Binding of bacterial cell wall components to CD14 and co-receptors on myeloid cells results in cellular activation and production of proinflammatory mediators. A recombinant anti-CD14 monoclonal antibody (IC14) has been shown to decrease lipopolysaccharide-induced responses in animal and human models of endotoxemia. This study was performed to evaluate the safety, pharmacokinetics, pharmacodynamics, and clinical pharmacology of IC14 in patients with severe sepsis. DESIGN: Randomized, double-blind, placebo-controlled, dose-ranging, multiple-center trial. SETTING: Six medical and surgical intensive care units located in Germany and The Netherlands. PATIENTS: Forty patients with severe sepsis. INTERVENTIONS: IC14 was administered intravenously to eight patients/cohort as single (1 mg/kg or 4 mg/kg) or multiple doses (4 mg/kg daily for 4 days, or 4 mg/kg on day 1 followed by 2 mg/kg daily for 3 days). A placebo group (two patients/cohort) was also included. MEASUREMENTS AND MAIN RESULTS: The overall incidence and types of adverse events were similar among treatment groups. One patient in the group receiving multiple-dose IC14 4 mg/kg daily for 4 days experienced an anaphylactic reaction after receiving the first dose of study drug. IC14 did not induce antibody formation or increase the incidence of secondary bacterial infection. A mean IC14 serum concentration of approximately 1 microg/mL was required to achieve 50% of maximum membrane-bound CD14 receptor occupancy on peripheral blood monocytes. The pattern of proinflammatory and anti-inflammatory cytokines, chemokine, soluble receptor, soluble E-selectin, and acute phase proteins in response to treatment was highly variable by patient and IC14 treatment group. CONCLUSIONS: Single and multiple doses of IC14 were generally well tolerated and did not induce antibody formation or increase the incidence of secondary bacterial infection. The results suggest that CD14 blockade with IC14 warrants further clinical investigation to determine its ability to attenuate the proinflammatory response due to infection.     

脓毒症大鼠肝组织基因表达的研究

目的筛选脓毒症大鼠肝组织中与正常组织差异表达的基因并进行初步功能分析。方法雄性Wistar大鼠30只，随机分为模型组和空白对照组，每组15只。参照盲肠结扎穿孔术（CLP）制备大鼠脓毒症模型，采用含有4096个大鼠基因cDNA克隆的表达谱基因芯片，检测并分析脓毒症大鼠肝组织在CLP后24h的基因表达变化，并以计算机软件筛选出差异表达的基因。结果CLP后24h共筛选出522条与空白对照组相比出现差异的基因，占基因芯片总点数的12．7％，其中244条基因表达下调，278条基因表达上调。结论脓毒症导致的多器官功能障碍综合征（MODS），涉及到一系列与细胞周期、调控、细胞凋亡、免疫相关基因、各种基本生物化学物质代谢酶类基因和能量代谢相关基因、血液相关基因、癌基因相关基因、生长因子类基因、应激反应类基因、细胞信号转导相关基因、DNA结合转录和转录调节因子相关基因、DNA复制与修复相关基因、蛋白质翻译与修饰、加工、降解相关基因等相关的基因表达异常；采用基因芯片检测技术有利于全面揭示脓毒症中的基因表达模式，快速高效地发现新的研究目标和基因治疗途径。     

内毒素性休克大鼠肺组织糖皮质激素受体mRNA的表达

目的 探讨内毒素(LPS)性休克大鼠肺组织糖皮质激素受体(GR)mRNA的表达.方法 56只SD大鼠,随机(随机数字法)分IPS休克组(16只)、LPS+血管活性肠肽(vasosctive intestinal peptide,VIP)组(16只)、LPS+VIP+糖皮质激素(GC)组(16只)和对照组(8只).尾静脉注射LPS制作休克模型,尾静脉注射LPS 10 mg/kg后,分别于15 min内注射VIP 5 nmol/kg或VIP 5 nmol/ks+甲基强的松龙3 mg/kg,对照组注射等容量生理盐水,分别于沣射后6 h和24 h处死,留取肺标本,观察肺组织病理变化,RT-PCR榆测肺组织GR mRNA的表达.结果 (1)肺组织病理改变:LPS组见肺泡腔结构破坏、肺泡间隔增宽、炎性细胞浸润、出血、间质水肿,细胞器破坏,LPS+VIP组和IPS+VIP+GC组病变较轻.(2)GR mRNA的表达:注射LPS后6 h,LPS组和LPs+VIP组GR mRNA表达下降,与对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.05).LPS组下降较LPS+VIP组稍明显,但差异无统计学意义(P＞0.05).24 h GR mRNA表达恢复.LPS+VIP+GC组GR mRNA表达6 h增加,24 h GR mRNA表达更高(P＜0.05).结论 LPS致肺损伤时,肺组织GR mRNA的表达减少.VIP和GC可抵抗炎症反应、减轻肺损伤,其机制可能与增强GR mRNA的表达有关.     

异丙酚后处理对急性肺损伤大鼠肺组织Toll样受体4表达的影响

目的 探讨异丙酚后处理对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织中Toll样受体4(TLR4)表达的影响.方法 将30只SD大鼠按随机数字表法分为对照组、ALI组及异丙酚后处理组3组,每组10只.经股静脉泵入8 mg/kg LPS 30 min诱导ALI模型,对照组给予等量生理盐水.异丙酚后处理组于制模后股静脉推注20 mg/kg异丙酚,再以40 mg· kg-1·h-1微量泵匀速泵入维持1h.于给药结束后6h处死大鼠,取肺脏测定湿/干重(W/D)比值,计算肺通透性指数(LPI),用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定肺组织TLR4 mRNA表达.结果 与对照组比较,ALI组肺W/D比值、LPI、TLR4 mRNA表达及BALF中TNF-α水平(ng/L)均明显升高[肺W/D比值:5.30±0.28比4.21 ±0.14,LPI(×10-3):8.7±2.2比3.3±2.0,TLR4 mRNA:2.451±0.028比0.998±0.021,TNF-α:643.46±62.31比120.43±12.65,均P＜0.05];而异丙酚后处理组肺W/D比值、LPI、TLR4 mRNA表达及BALF中TNF-α水平均较ALI组明显降低[肺W/D比值:4.68±0.19比5.30±0.28,LPI(×10-3):5.8±2.0比8.7±2.2,TLR4 mRNA:1.126±0.025比2.451±0.028,TNF-α:290.53±32.01比643.46±62.31,均P＜ 0.05],但仍显著高于对照组(均P＜0.05).结论 异丙酚后处理能明显改善LPS诱导的ALI,其作用机制可能是通过下调TLR4 mRNA表达,从而抑制“瀑布样”炎症反应.     

莱菔硫烷对重症急性胰腺炎大鼠肺组织内血红素加氧酶-1及环氧合酶表达的影响

目的探讨莱菔硫烷对重症急性胰腺炎(SAP)肺组织血红素加氧酶-1(HO-1)及环氧合酶(COX)表达的影响。方法将72只大鼠随机分为对照组(N组)、SAP模型组(SAP组)和莱菔硫烷组,每组各24只,分别于术后3、6、12h对各组进行肺损伤评分、检测肺组织湿干比(W/D)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、HO-1mRNA、COX mRNA的表达量。结果 SAP组的各指标均明显高于N组(P0.05);莱菔硫烷组的病理评分、肺W/D值、TNF-α、IL-1β、COX-2mRNA表达量较SAP组明显降低(P0.05),HO-1mRNA表达量较SAP组明显升高(P0.05);相关性分析示HO-1mRNA表达量与COX-2mRNA、TNF-α、IL-1β的表达水平呈明显负相关(P0.05)。结论莱菔硫烷增加了SAP肺组织中HO-1的表达量从而减轻急性肺损伤,这可能与通过抑制COX表达有关。     

高迁移率族蛋白B1表达水平与大鼠脓毒症严重程度及预后关系的实验研究

目的探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）与脓毒症严重程度及预后间的关系，寻找致死性脓毒症的可靠监测及治疗指标。方法90只SPF级雄性SD大鼠（体重250～300g）被随机分为假手术组（A组）、盲肠结扎穿孔术（CLP）组（B组）及丙酮酸乙酯（EP）治疗组（C组），每组30只，分别施以假手术（A组）或CLP（B组和C组）。术后立即腹腔注射生理盐水（Ns）2ml（A组和B组）或EP2ml（130mg／kg，C组），12h重复1次。以术后0、6、12、24、48和72h为观察点，观察各组大鼠术后活动、进食、竖毛、腹泻、眼球凹陷、呼吸等情况；活杀并观察腹腔肠管扩张、充血、腹水、病灶包裹、肺表面充血等情况。另取20只大鼠以B、C两组同样的模型及处理方式观察生存时间。采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）技术检测肝组织HMGBl mRNA表达水平，酶联免疫吸附法（ELISA）检测血浆白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-6及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平；绘制各组生存曲线，并进行相关分析。结果B组大鼠术后脓毒症表现最强，C组明显减轻。而A组没有相关表现或表现轻微。B组血浆IL-1β、IL-6和TNF-α水平于术后6h显著升高，至12h已明显下降；而C组上升的幅度明显低于B组，但明显高于A组。B组肝脏HMGBl mRNA表达水平在12h开始升高，24h达高峰，并维持至48h后开始下降，且HMGBl表达水平与IL-6水平呈正相关（r=0．91）。C组生存时间较B组明显延长（P〈0．01），HMGBl表达水平与脓毒症严重程度及动物生存率显著相关。结论脓毒症晚期释放的HMGBl是脓毒症致死效应的关键炎症介质，其表达水平与实验动物的脓毒症严重程度及预后高度相关。     

Initial evaluation of human monoclonal anti-lipid A antibody (HA-1A) in patients with sepsis syndrome

HA-1A, a human monoclonal immunoglobulin M antibody that binds specifically to the lipid A domain of endotoxin, was administered to septic patients to evaluate the safety, pharmacokinetics, and immunogenicity of the antibody. Thirty-four patients received a single infusion of either 25 mg, 100 mg, or 250 mg, and were followed clinically for 14 to 21 days after treatment. HA-1A serum levels were measured before infusion and frequently after infusion with a radiometric assay. A one-compartment pharmacokinetic model was fit to the measured serum levels, and accurately described the changes in HA-1A level over time in each dose group (r2 = .99). The mean +/- SEM apparent volume of distribution of HA-1A was 48.5 +/- 4.5 ml/kg, and the mean serum clearance was 2.8 +/- 0.4 ml/kg.h. The mean serum half-life of HA-1A was 15.9 +/- 1.5 h. The mean serum level one hour after a 100-mg dose was 33.2 +/- 2.4 micrograms/ml, and the mean concentration 24 h later was 9.1 +/- 1.6 micrograms/ml. The dose administered and presence of Gram-negative bacterial infection did not significantly influence the volume of distribution or serum clearance. No adverse reactions to HA-1A were observed, and no antibodies against HA-1A were detected in any patient. These data indicate that the pharmacokinetics of HA-1A are well described by a one-compartment pharmacokinetic model, and that HA-1A is safe and nonimmunogenic in patients with sepsis.