尘螨1类嵌合变应原TAT-IhC-R8的致敏效果分析

目的探讨尘螨1类嵌合变应原TAT-Ih C-R8的致敏效果。方法将40只BALB/c小鼠随机分为PBS对照组(PBS组)、OVA致敏组(OVA组)、R8致敏组(R8组)和TAT-Ih C-R8致敏组(TIR8组)4组,每组10只。上述3个致敏组分别用OVA、R8和TAT-Ih C-R8于第0、7、14天进行腹腔注射致敏(剂量为10μg/ml);自第21天起,分别用上述致敏液(剂量为10μg/ml)雾化吸入30 min,连续7 d。PBS组则用PBS进行腹腔注射和雾化吸入。最后一次雾化吸入24 h后将小鼠脱臼处死,分别收集支气管肺泡灌洗液(BLAFs)和血清,并进行脾细胞培养。以ELISA法检测BALFs及脾细胞培养上清液(SCSs)中细胞因子IFN-γ和IL-13水平,以及血清中特异性抗体Ig E(s Ig E)、Ig G1和Ig G2a水平;并对BALF进行白细胞和嗜酸性粒细胞(EOS)计数。此外,制作小鼠肺组织病理切片,经HE染色后进行观察。结果与PBS组相比,OVA、R8组和TIR8组小鼠肺部炎症均明显,表现为肺组织炎性细胞浸润、支气管上皮细胞部分断裂及脱落、血管炎等,而PBS组小鼠未见明显病理改变。TIR8组小鼠BALF中白细胞总数和EOS数均显著高于OVA组和R8组(P均0.01),其BALF及SCSs中IL-13水平亦明显高于OVA组和R8组(P均0.01),但IFN-γ含量则显著低于该两组(P均0.01)。TIR8组小鼠血清s Ig E和Ig G1抗体水平明显高于OVA组和R8组(P均0.01),但其Ig G2a抗体水平则显著低于该两组(P均0.01)。结论TAT-Ih C-R8可有效激发小鼠肺部炎症,且其致敏效果明显优于R8。     

地塞米松对哮喘小鼠气道平滑肌细胞中胸腺活化调节趋化因子表达的影响

目的探讨胸腺活化调节趋化因子(TARC)在哮喘小鼠气道平滑肌细胞中的表达及地塞米松对TARC的影响。方法 36只小鼠随机分为对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、地塞米松治疗组(C组),每组12只。以卵白蛋白OVA和氢氧化铝混悬液致敏及OVA激发建立哮喘小鼠模型。行支气管肺泡灌洗液(BALF)沉渣白细胞及嗜酸性粒细胞(EOS)计数,HE染色观察肺组织病理改变,应用酶联免疫吸附实验测定血清及BALF中TARC、IL-4的浓度,并用免疫组织化学的方法测定气道平滑肌细胞中TARC蛋白的表达量。结果 B组白细胞及EOS计数明显高于A、C组(P<0.01),C组EOS计数高于A组(P<0.05)。B组血清及BALF中TARC及IL-4的浓度显著高于A、C组(P<0.01);C组血清、BALF中TARC的浓度低于B组(P<0.01)。B组气道平滑肌细胞中TARC蛋白表达量较A、C组显著增高(P<0.01)。小鼠血清、BALF中TARC浓度与IL-4浓度呈正相关(r=0.669、0.845,P均<0.01)。结论 TARC在哮喘组小鼠肺组织气道平滑肌细胞中的蛋白表达量较正常组明显增多,地塞米松可能通过减少IL-4的分泌从而抑制TARC的表达。     

粉螨性小鼠哮喘模型的建立与评估

目的探讨采用椭圆食粉螨提取浸液建立C57BL/6小鼠哮喘模型的方法。方法 45只C57BL/6小鼠随机分成3组:PBS阴性对照组、卵清蛋白(OVA)阳性对照组、椭圆食粉螨(Ale o)哮喘模型组。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测支气管肺泡灌洗液(BALF)、脾细胞培养上清液中IL-4、IL-17和IFN-γ的含量,计数BALF中细胞总数并分类,同时切取小鼠未灌洗侧肺组织进行病理学观察。结果 OVA阳性对照组、Ale o模型组小鼠脾细胞上清和BALF中IL-4、IL-17及IFN-γ含量与PBS阴性对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01);OVA阳性对照组、Ale o模型组小鼠BALF中细胞总数及各类细胞数与PBS阴性对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);小鼠未灌洗侧肺组织病理学观察显示,OVA阳性对照组和Ale o模型组小鼠肺组织可见大量炎症细胞浸润,以嗜酸性粒细胞、淋巴细胞及巨噬细胞为主。结论用椭圆食粉螨提取浸液建立的C57BL/6小鼠哮喘模型具有过敏性哮喘的主要特征。     

咪喹莫特对哮喘小鼠Toll样受体7及IL-12、IL-13水平的影响

目的 研究雾化吸入一定浓度的咪喹莫特( imiquimod)对哮喘小鼠模型Toll样受体7(TLR7)的表达及Th细胞因子ID12、IL-13水平的影响.方法 30只小鼠随机分为三组,正常对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、咪喹莫特组(C组),每组10只.建立哮喘模型,干预组在吸入鸡卵白蛋白(OVA)前1h雾化吸入1.5 g/L咪喹莫特混悬液30 min,持续7天.OVA雾化结束后24h,收集肺泡灌洗液进行细胞计数和分类,并采用酶联免疫吸附法测定IL-12和IL-13的水平;HE染色观察肺组织炎症变化;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测肺组织TLR7 mRNA的表达水平.结果 ①哮喘组小鼠HE染色可见其小气道管壁增厚,分泌物增多,上皮细胞脱落,排列紊乱,黏膜下有大量的炎症细胞浸润,主要以淋巴细胞为主.咪喹莫特组炎症程度较哮喘组减轻.②哮喘组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数及各种炎症细胞较正常组明显增加,咪喹莫特治疗组的单核细胞、嗜酸性粒细胞和淋巴细胞比哮喘组显著减少(P＜0.05).③哮喘组小鼠BALF中的IL-12水平较正常组降低,咪喹莫特组较哮喘组升高(P＜0.05);而哮喘组小鼠BALF中的IL-13水平较正常组增加,咪喹莫特治疗组较哮喘组降低,较正常组增加(P＜0.05).④哮喘组小鼠肺组织TLR7 mRNA的表达较正常组减少,咪喹莫特组较哮喘组明显增加(P＜0.05).结论 雾化吸入咪喹莫特能上调TLR7 mRNA的表达,使IL-1水平升高、IL-13水平降低,从而达到防治哮喘的效果.     

联合应用IL-4突变体及抗IL-17抗体对支气管哮喘小鼠炎性细胞及细胞因子水平的影响

目的 探讨联合应用IL-4突变体及抗IL-17抗体对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠炎性细胞及细胞因子水平的影响.方法 40只BALB/c雌性小鼠随机分为对照组、哮喘组、IL-4突变体治疗组、抗IL-17抗体治疗组、联合IL-4突变体及抗IL-17抗体治疗组(简称联合治疗组).哮喘组和治疗组用鸡卵白蛋白(ovalbumin,OVA)和氢氧化铝致敏,用OVA激发,建立小鼠哮喘模型,对照组用生理盐水代替,其中IL-4突变体治疗组、抗IL-17抗体治疗组及联合治疗组分别于诱发前30 min给予腹腔注射相关抗体蛋白,对照组及哮喘组用生理盐水代替.细胞计数板测外周血炎性血细胞,酶联免疫吸附试验双抗体夹心法测定各组血清细胞因子水平变化.结果 与对照组比较,哮喘组炎性细胞数及IL 4、IL-17、IgE水平明显升高(P＜0.05);联合治疗组可有效降低炎性细胞计数及IL-4、IL-17、IgE水平,与哮喘组比较差异有统计学意义(P＜0.05);与单独治疗组相比,联合治疗组效果更明显(P＜0.05).结论 联合应用IL-4突变体及抗IL-17抗体对哮喘小鼠外周血炎性细胞有抑制作用,且可以降低IL-4、IL-17、IgE细胞因子水平,为治疗和缓解哮喘提供一定的帮助.     

白细胞介素-33在过敏性哮喘小鼠体内的变化及作用

目的探讨白细胞介素-33(IL-33)在粉尘螨1类变应原(Der f 1)诱导的过敏性哮喘小鼠中的变化及作用。方法将40只雌性BALB/c小鼠用随机数字表法分为哮喘组、免疫治疗组、抑制剂组和阴性对照组(PBS组),每组10只。哮喘组、免疫治疗组和抑制剂组分别在第0、7和14天腹腔注射100μl粉尘螨变应原提取液(含100μg/ml Der f 1),抑制剂组小鼠同时注射抑制剂(可溶性ST2 100μl,用于抑制IL-33),PBS组注射等量PBS。第21天起,各组小鼠雾化吸入粉尘螨变应原提取液(0.5μg/ml),30 min/次,1次/d,连续7 d。免疫治疗组小鼠第25天起于雾化前0.5 h,分别用200μl的Der f 1蛋白溶液(100μg/ml)腹腔注射进行免疫治疗,PBS组用PBS代替粉尘螨变应原。第27天雾化吸入后24 h处死小鼠,收集小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)和眼球血,并对BALF中嗜酸粒细胞进行计数,制作肺组织病理切片。ELISA法检测BALF中IL-5、IL-13和γ干扰素(IFN-γ)的含量及血清中特异性Ig E和Ig G2a水平。结果除PBS组小鼠外,其他组小鼠自第21天开始出现不同程度的哮喘症状。自第25天开始,免疫治疗组小鼠的哮喘症状开始缓解。哮喘组和PBS组小鼠BALF中嗜酸粒细胞总数分别为(4.41±0.36)×10~5/ml和(0.37±0.08)×10~5/ml,两组差异有统计学意义(t=24.50,P0.01);免疫治疗组和抑制剂组小鼠的嗜酸粒细胞总数分别为(1.43±0.14)×10~5/ml和(2.73±0.33)×10~5/ml,均明显低于哮喘组(F=129.72,P0.01)。ELISA检测结果显示,哮喘组、免疫治疗组、抑制剂组和PBS组BALF中IFN-γ的水平分别为(83.06±11.38)、(277.97±22.46)、(175.13±13.41)和(224.77±19.97)pg/ml,免疫治疗组和抑制剂组均明显高于哮喘组(t=17.31,t=11.71,P0.01)。哮喘组、免疫治疗组、抑制剂组和PBS组小鼠BALF中IL-5水平分别为(208.64±11.55)、(106.87±11.39)、(140.71±14.58)和(90.15±9.49)pg/ml,哮喘组的水平明显高于其他各组(F=97.19,P0.01)。哮喘组和免疫治疗组BALF中IL-13水平分别为(308.37±13.67)pg/ml和(175.66±11.79)pg/ml,两者差异有统计学意义(P0.01);抑制剂组小鼠的为(221.12±21.08)pg/ml,明显低于哮喘组(t=16.44,P0.01);PBS组为(97.57±18.38)pg/ml。免疫治疗组与哮喘组相比,小鼠肺部炎性症状均减轻,几乎无炎症细胞。抑制剂组小鼠的支气管周围也有嗜酸粒细胞增多症、上皮细胞脱落和支气管上皮细胞肥大,但较哮喘组要减轻许多。血清Ig E抗体水平的检测结果显示,哮喘组、免疫治疗组、抑制剂组和PBS组分别为(31.97±3.48)、(12.86±2.22)、(18.43±2.30)和(9.68±1.27)IU/ml,免疫治疗组和抑制剂组均低于哮喘组(t=-7.77,P0.01)。Ig G2a抗体水平的变化和Ig E相反,哮喘组、免疫治疗组和PBS组分别为(26.94±2.96)、(35.06±2.57)和(10.31±1.48)μg/ml,免疫治疗组高于哮喘组(t=6.55,P0.01)。结论 ELISA检测结果表明IL-33/ST2信号通路在小鼠过敏性哮喘中发挥着重要的作用。     

IL-17＋ T淋巴细胞在哮喘发病中的参与及表达

目的用卵白蛋白（OVA）建立小鼠哮喘模型,观察IL-17＋ T淋巴细胞在哮喘发病过程中的参与情况。方法 30只BALB/c雌性SPF级小鼠随机分为正常对照组（n=15）和哮喘模型组（n=15）;分离小鼠肺支气管肺泡灌洗液（BALF）,对BALF中细胞总数和分类计数;分离外周血的淋巴细胞,用流式细胞术检测胞内细胞因子IL-17的表达,从而测定小鼠中IL-17＋ T淋巴细胞的含量。结果哮喘模型组BALF中细胞总数和中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞百分率均高于对照组（P〈0.01）。病理观察可见哮喘模型组小鼠的气道炎症以中性粒细胞及嗜酸性粒细胞浸润为主,而对照组无此变化。哮喘模型组外周血中IL-17＋ T淋巴细胞含量较正常对照组升高（P〈0.01）。结论 IL-17＋ T淋巴细胞参与了哮喘发病过程,在哮喘急性发作的气道炎症中扮有重要作用。     

不同糖皮质激素治疗对肥胖哮喘小鼠全身和气道的影响

目的对比布地奈德雾化治疗和地塞米松口服治疗对肥胖哮喘小鼠的疗效和炎症改变。方法将75只C57/6J小鼠随机分为5组,正常组(A组)、哮喘组(B组)、肥胖哮喘组(C组)、布地奈德雾化治疗组(D组)、地塞米松口服治疗组(E组),建立饮食诱导的慢性肥胖哮喘模型。末次激发后24 h,取肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数及分类,ELLISA法测定血清中IL-17浓度,肺组织病理切片观察各组小鼠炎症评分,测定气管壁总面积(WAt)、气道平滑肌面积(WAm)和管腔基底膜周长(Pbm)。结果除A组外,其余四组小鼠均出现不同程度的哮喘发作,实验结束前B组无小鼠死亡,C组有2只小鼠死亡,D组有1只小鼠死亡,而E组有5只小鼠死亡。C组BALF中白细胞总数,中性粒细胞数、嗜酸性粒细胞数、血清IL-17浓度以及病理切片炎症评分、气管壁总厚度(WAt/Pbm)、气道平滑肌厚度(WAm/Pbm)明显高于A、B两组。两治疗组的BALF中白细胞总数、嗜酸性粒细胞数,以及病理切片炎症评分均较C组下降,但气管壁总厚度(WAt/Pbm)、气道平滑肌厚度(WAm/Pbm)改善不明显(P0.05)。E组血清IL-17浓度较C组下降(P0.05),但D组和C组无显著性差异(P0.05)。结论雾化布地奈德能够改善肥胖哮喘小鼠的气道炎症,但不能改善气道重建和全身炎症。地塞米松口服治疗虽有助于改善肥胖哮喘的全身炎症反应,但气道重建无益,且带来更高的病死率。     

粉尘螨Ⅲ类重组变应原致敏的小鼠哮喘模型致敏效果分析

目的 探讨粉尘螨Ⅲ类重组变应原（Der f3）诱导的小鼠哮喘模型的致敏效果。方法 30只6~8周龄雌性SPF级BALB/c小鼠随机分为PBS组（阴性对照组）、卵清蛋白（OVA）组（阳性对照组）和Der f3组（实验组）,OVA组和Der f3组分别使用OVA和纯化Der f3蛋白于第0、7、14天进行腹腔注射致敏,于第21d开始雾化吸入,连续7d,PBS组则换成PBS进行腹腔注射和雾化吸入。最后一次雾化吸入24h后,分别观察肺组织病理变化、支气管肺泡灌洗液（BALF）中的白细胞计数,酶联免疫吸附试验（ELISA）测定BALF和脾细胞培养上清中IL-4、IL-2、IL-17和IFN-γ的含量及血清中IgG1、IgE抗体水平变化;结果OVA组和Der f3组小鼠肺部支气管、血管粘膜下及周围肺组织有明显的炎性细胞浸润、支气管上皮细胞部分断裂及脱落,血管壁明显水肿等,而PBS组未见明显病理改变;Der f3组的BALF中白细胞总数[(19.99±1.03)×106个/ml]及嗜酸性粒细胞（EOS）[(1.81±0.07)×106个/ml]计数均明显高于PBS组（P<0.01）;与PBS组相比：BALF中IL-4 [(80.99±9.06) pg/ml]、IL-17 [(209.69±31.86) pg/ml]呈高水平表达（P<0.01）,而IL-2 [(8.29±1.27) pg/ml]和IFN-γ [(55.04±18.85) pg/ml]含量则显著下降（P<0.01）;上述指标在脾细胞培养上清中出现类似的变化。Der f3组血清中IgE [(31.92±2.68) U/ml]、IgG1 [(16.46±4.32) μg/ml]的含量表现为Th2型反应增强趋势;但OVA组和Der f3组间所有指标差异均无统计学意义（P>0.05）;结论 粉尘螨重组Der f3蛋白可成功建立小鼠变态反应性气道及肺部炎症动物模型。     

哮喘小鼠模型的建立与评价

目的探讨哮喘小鼠模型建立的方法。方法将20只SPF级BALB／C雌性小鼠随机分成对照组和模型组两组。模型的构建采用腹腔注射OVA＋氢氧化铝凝胶致敏3次后予1％OVA雾化激发7d,以生理盐水腹腔注射及雾化吸人为对照。最后1次雾化激发1h后眼球取血,取右肺作HE染色;左肺收集BALF,进行细胞计数;ELISA检测外周血IL—12水平。结果模型组小鼠激发可见典型的哮喘症状。模型组小鼠BALF中炎性细胞总数和EOS较对照组明显增多,外周血IL-12水平显著降低,且IL-12水平与BALF中EOS数呈高度负相关。结论致敏3次后雾化激发是一种较好的建立哮喘小鼠模型的方法。