不同的胚胎密度、培养液体积及微孔培养对小鼠早期胚胎发育的影响

目的通过比较不同胚胎密度和培养液体积及微孔(WOW)培养系统对小鼠早期胚胎发育的影响,以期优化早期胚胎发育的培养条件和环境,提高胚胎的发育率和质量。方法 (1)在液状石蜡覆盖的20μl的发育液小滴中培养5、10、20和40枚2-细胞胚胎,观察并统计8-细胞率、囊胚率和孵化囊胚率。(2)15枚2-细胞胚胎放入在5、10、20、50、100μl的发育液小滴和500μl WOW系统(每个WOW中放一枚胚胎)中,观察并统计8-细胞率、囊胚率和孵化囊胚率。(3)对各组得到的囊胚进行差异染色并计数。结果在不同胚胎密度的比较中,20μl的培养液小滴中培养10枚2-细胞胚胎得到了较高的8-细胞胚胎率、囊胚率和孵化囊胚率,而且得到囊胚的ICM、TE和ICM+TE的平均细胞数显著高于5枚和40枚胚胎组。在不同培养液体积和WOW培养系统中,5μl培养液组在各阶段胚胎发育率和得到囊胚的ICM、TE和ICM+TE的平均细胞数方面显著低于其他各组。500μl WOW培养系统组在各阶段胚胎发育率方面与得到较高发育率的20μl和50μl培养组均没有统计学差异,同时500μl WOW培养系统和20μl培养液组在孵化囊胚率和得到囊胚的ICM、TE和ICM+TE平均细胞数方面显著高于100μl培养液组。结论 20μl的培养液小滴培养10枚胚胎可以得到较高的胚胎发育率,且得到的胚胎质量较好。较少的培养液体积不利于胚胎发育,较适宜的培养液小滴体积为20⁵0μl。同时,WOW培养系统在本实验条件下取得了较好的胚胎发育效果。     

利拉鲁肽对高糖环境下体外培养的人髓核细胞凋亡的影响

目的:研究不同浓度的利拉鲁肽(liraglutide,LIR)对高糖环境下体外培养的人髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)凋亡的影响。方法:培养人髓核细胞株,第三代髓核细胞随机分为对照组(CON组,NPCM细胞培养液培养)、高糖组(HG组,0.2 mol/L高糖培养液培养)、利拉鲁肽10 nmol/L干预组(LIR10组,0.2 mol/L高糖+10 nmol/L利拉鲁肽)、利拉鲁肽100 nmol/L干预组(LIR100组):0.2 mol/L高糖+100 nmol/L利拉鲁肽、利拉鲁肽1 000 nmol/L干预组(LIR1 000组):0.2 mol/L高糖+1 000 nmol/L利拉鲁肽。各组细胞培养48 h,CCK-8对人髓核细胞的增殖活性进行定量分析,流式细胞术及ELISA检测细胞凋亡率,细胞内活性氧(ROS)检测评估氧化应激水平。采用SPSS 22.0软件进行统计学分析。结果:与正常对照组相比,高糖组细胞增殖活性明显减低,细胞内ROS生成及凋亡率明显增加(P0.05)。利拉鲁肽(10,100,1000 nmol/L)的干预使细胞增殖活性较高糖组明显升高,ROS的水平及细胞凋亡率明显降低(P0.05)。在浓度为100 nmol/L时,利拉鲁肽的促进细胞增殖,抑制氧化应激及抗凋亡作用最强,各组间差异有统计学意义(P0.05)。结论:利拉鲁肽通过抗氧化应激抑制了高糖诱导的人髓核细胞凋亡,从而发挥保护作用。     

微刺激方案中成熟卵母细胞纺锤体参数与卵细胞质内单精子注射结局间的关系

目的:探讨微刺激方案中行卵细胞质内单精子注射(intra cytoplasmic sperm injection,ICSI)时卵母细胞纺锤体的存在与否以及阻滞值等参数与ICSI后结局间的关系。方法:回顾性分析2017年12月至2019年6月期间在本院生殖中心行ICSI助孕的354例患者的临床资料,按助孕前是否见到卵母细胞纺锤体将其分成可见组(SP~+组)和不可见组(SP~-组),并测量纺锤体的阻滞值等参数,比较2组间的正常受精率、异常受精率、卵裂率、优质胚胎(优胚)率、囊胚形成率及临床妊娠率;同时在SP~+组中,比较正常受精组、卵裂组、优胚组、囊胚形成组以及临床妊娠组与其对立组间的纺锤体阻滞值差异。结果:SP+组的正常受精率、卵裂率、优胚率、囊胚形成率及临床妊娠率均显著高于SP~-组(分别为83.72%比72.22%、98.14%比85.16%、73.07%比62.50%、50.67%比36.76%、45.56%比27.27%),差异均有统计学意义(P0.05),SP~+组的异常受精率低于SP~-组(4.26%比16.11%)(P0.000 1);卵母细胞可见纺锤体时,正常受精组、卵裂组、优胚组、囊胚形成组以及临床妊娠组的纺锤体阻滞值分别高于异常受精组、未卵裂组、非优胚组、囊胚未形成组以及临床未妊娠组(2.01 nm比1.81 nm、2.03 nm比1.66 nm、2.03 nm比1.91 nm、2.20 nm比2.02 nm、2.19 nm比2.01 nm),差异都有统计学意义(P0.05),但纺锤体体积、面积、纺锤体与第一极体的角度在上述各组间的差异没有统计学意义。随年龄增高,35岁组、35～40岁组、≥40岁组的人均获SP~+卵数逐渐减少(分别为3.30个、2.91个、2.46个),差异有统计学意义(P=0.025)。结论:纺锤体可见的卵母细胞行ICSI后有更高的正常受精率、卵裂率、囊胚形成率及临床妊娠率,而异常受精率更低;临床上应首选纺锤体阻滞值高的卵子来源的胚胎或者囊胚进行移植,以提高临床妊娠概率。     

橄榄苦苷对HepG2细胞脂肪变性的作用

目的探讨橄榄苦苷对HepG2细胞脂肪变性的影响。方法人肝癌HepG2细胞株分别用浓度0、0.5、1、1.5、2mmol/L游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)培养24h,MTS法测定细胞生存率,尼罗红染色观察细胞内脂滴颗粒堆积情况,ELISA法检测细胞三酰甘油(triacylglycerol,TG)水平,选择1mmol/L FFA进行后续实验。取人肝癌HepG2细胞株随机分为空白组(培养液),FFA组(培养液+1 mmol/L FFA),1μmol/L橄榄苦苷组(培养液+1 mmol/L FFA+1μmol/L橄榄苦苷)、10μmol/L橄榄苦苷组(培养液+1mmol/L FFA+10μmol/L橄榄苦苷)、100μmol/L橄榄苦苷组(培养液+1mmol/L FFA+100μmol/L橄榄苦苷)、1 000μmol/L橄榄苦苷组(培养液+1mmol/L FFA+1 000μmol/L橄榄苦苷),培养24h采用MTS法测定细胞生存率,尼罗红染色观察细胞内脂滴颗粒堆积情况,ELISA法检测细胞TG水平。结果 MTS结果显示,FFA浓度为1.5、2mmol/L时细胞生存率[(66.50±5.83)%、(57.63±11.63)%]低于0mmol/L时(100%)(P0.05),0.5、1mmol/L时细胞生存率[(95.96±3.50)%、(95.49±7.75)%]与0mmol/L比较差异无统计学意义(P0.05);FFA浓度为0.5、1mmol/L时细胞中TG水平[(0.91±0.02)、(0.96±0.04)mmol/L]均高于0 mmol/L[(0.37±0.05)mmol/L](P0.05);1、10、100μmol/L橄榄苦苷组细胞生存率[(96.22±8.05)%、(94.94±4.51)%、(97.10±2.53)%]与空白组(100%)、FFA组[(95.42±9.42)%]比较差异无统计学意义(P0.05);1 000μmol/L橄榄苦苷组细胞生存率[(41.35±4.84)%]明显低于空白组、FFA组(P0.05);10、100μmol/L橄榄苦苷组细胞中TG水平[(0.64±0.07)、(0.57±0.02)mmol/L]低于FFA组[(0.96±0.02)mmol/L](P0.05),1μmol/L橄榄苦苷组细胞中TG水平[(0.92±0.05)mmol/L]与FFA组比较差异无统计学意义(P0.05);显微镜下10、100μmol/L橄榄苦苷组脂肪颗粒较FFA组明显减少。结论 10、100μmol/L橄榄苦苷可减少HepG2细胞内TG生成,防止肝细胞脂肪变性。     

LH对未成熟卵子体外培养成熟及发育潜能的影响

目的 探讨在体外培养液中添加LH(促黄体生成激素)对人未成熟卵母细胞体外培养成熟(IVM)及继续发育潜能的影响.方法 56例多囊卵巢综合征(PCOS)患者进行64个IVM周期治疗,其中36例共36周期在体外培养液中添加LH;另20例共28周期培养液中未添加LH.结果 LH组和对照组的卵母细胞体外培养成熟率、受精率、卵裂率、优胚率、平均胚胎移植数分别为:65.47％vs 73.02％、70.91％ vs 78.26％、92.31％ vs 86.11％、48.15％vs45.98％、2.07vs2.00,差异均无统计学意义(P＞0.05);胚胎种植率、临床妊娠率分别为:20％vs8.33％、41.67％ vs 28.57％,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 LH可能改善了未成熟卵母细胞体外成熟后胚胎的继续发育潜能.     

不同分化状态的供体细胞对小鼠克隆胚胎发育的影响

目的:探讨不同分化程度的供体细胞对克隆胚胎发育潜能的影响.方法:采用"一步法"核移植技术将供体细胞核直接注入小鼠卵母细胞,成功构建克隆胚胎.颗粒细胞克隆胚胎经含有10 mmol/L的SrCl2和5 ug/mLCB的培养液中激活处理5～6 h,R1胚胎干细胞克隆胚胎经含有10 mmol/L的SrCl2的培养液中激活处理3h,然后移入CZB培养液中继续培养.结果:颗粒细胞克隆胚胎体外的激活率、卵裂率和囊胚率与胚胎干细胞克隆胚相比具有显著差异,克隆胚胎体内移植后胚胎干细胞克隆胎儿出生率稍高(2.3%vs.1.2%),但没有显著差异.结论:供体细胞分化程度越低,克隆胚胎体内外发育潜能越高.     

玻璃化冷冻与程序化冷冻对小鼠MⅡ期的卵母细胞及经单精子卵胞浆注射得到的胚胎发育潜能的影响

目的评估两种冷冻方法对小鼠卵母细胞和单精子卵胞浆注射(ICSI)胚胎发育潜能的影响,以期为辅助生殖领域人卵母细胞的冷冻保存和胚胎发育潜能的研究提供实验依据。方法分别用玻璃化冷冻与程序化冷冻对小鼠MⅡ期的卵母细胞进行冷冻保存,解冻后存活的卵母细胞用于ICSI注射,然后将得到的胚胎体外发育并进行胚胎移植。用卡方和单因素的方差分析进行统计学分析,并比较两种方法冻存的卵母细胞解冻后的存活率,ICSI胚胎的2-细胞率、8-细胞率、囊胚率和妊娠率等。结果采用玻璃化冷冻法冷冻的MⅡ期卵母细胞存活率为81.6%,明显高于程序冷冻法组的70.7%。两组得到的胚胎在2-细胞形成率方面没有差异,但是8-细胞率和囊胚发育率差异均有统计学意义。两组假孕母体的妊娠率(63.6%和50.0%)和幼崽出生率(20.0%和12.4%)均没有统计学差异。结论与程序化冷冻相比,玻璃化冷冻对于小鼠MⅡ期卵母细胞的保存效果较好。解冻后卵母细胞用于ICSI,玻璃化冷冻组的胚胎得到较高的8-细胞率和囊胚发育率。但这两组的囊胚移植得到的妊娠率和出生率没有差异。     

冷冻保存对人卵母细胞纺锤体及发育潜能的影响

背景:卵子冷冻技术的发展为人类辅助生殖技术带来重大的突破,但卵子冷冻的效果并不理想.目的:研究冷冻保存对不同成熟时期人卵母细胞纺锤体及发育潜能的影响.设计、时间及地点:随机对照细胞学体外实验,于2005-04/2006-05在重庆市妇幼保健院完成.材料:体外受精-胚胎移植和卵胞浆内单精子显微注射治疗周期中剩余的未成熟卵子(GⅤ期和MⅠ期).方法:将未成熟卵子随机分为对照组、MⅠ/GⅤ卵冷冻组和体外成熟后MⅡ卵冷冻组,用慢冻速融的方法对MⅠ/GⅤ卵和体外成熟的MⅡ卵进行冷冻和解冻,应用Polscope对卵子的纺锤体进行观察,并观察卵子的发育潜能.主要观察指标:不同组卵子的纺锤体可见率,体外成熟情况,冷冻不同时期卵子的复苏情况,及后期的受精、卵裂、可用胚胎情况.结果:对照组纺锤体可见率77.3%,明显高于MⅡ卵冻融组、MⅠ/GV卵冻融组(56.3%,53.8%,P<0.05),冷冻造成了纺锤体的损伤;冷冻后未成熟卵的体外成熟率下降,但无统计学差异;MⅡ期卵、MⅠ期卵和GⅤ期卵复苏率相似;对照组的受精率(81.8%)明显高于MⅡ卵冻融组、MⅠ/GⅤ卵冻融组(62.5%,59.0%,P<0.05),冷冻后的卵子受精能力受到损害;对照组的卵裂率与MⅡ卵冻融组差异无显著性意义(84.4%,72.7%,P>0.05),MⅡ卵冷冻组的卵裂没有受到明显影响;对照组的卵裂率与MⅠ/GⅤ卵冻融组差异有显著性意义(84.4%,52.9%,P<0.05),MⅠ/GⅤ卵冻融后卵裂率明显下降;冷冻组的胚胎质量下降,可用胚胎率明显降低.结论:控制性超排卵周期中剩余的未成熟卵子无论是直接冷冻还是先体外培养成熟后再冷冻,卵子的纺锤体都受到了一定的损伤,对卵子的发育潜能造成了影响.     

白藜芦醇对肾细胞癌ACHN细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨白藜芦醇对肾细胞癌ACHN细胞增殖及凋亡的影响及可能机制。方法对数生长期ACHN细胞随机分为对照组(100μmol/L培养液)、25μmol/L白藜芦醇组(100μmol/L培养液+25μmol/L白藜芦醇)、50μmol/L白藜芦醇组(100μmol/L培养液+50μmol/L白藜芦醇)、100μmol/L白藜芦醇组(100μmol/L培养液+100μmol/L白藜芦醇)、200μmol/L白藜芦醇组(100μmol/L培养液+200μmol/L白藜芦醇)。培养12、24、48 h,采用CCK-8法检测细胞增殖活力;培养24 h,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用荧光探针法检测ACHN细胞氧化型二氯荧光素(dichlorofluorecin, DCF)荧光强度,采用Western blot法检测B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphom-2, Bcl-2)、caspase-3蛋白表达。结果对照组及25、50、100、200μmol/L白藜芦醇组培养12 h(0.71±0.01、0.63±0.01、0.56±0.03、0.48±0.02、0.39±0.02)、24 h(1.19±0.04、1.00±0.02、0.79±0.03、0.63±0.03、0.41±0.06)、48 h(1.62±0.02、1.15±0.03、0.79±0.04、0.62±0.04、0.41±0.08)细胞增殖活力吸光度值依次降低(P0.05),培养24 h细胞凋亡率[(7.73±0.87)%、(12.64±1.13)%、(29.43±1.25)%、(37.73±1.24)%、(48.56±1.78)%]依次升高(P0.05);培养24 h,对照组及25、50、100、200μmol/L白藜芦醇组细胞DCF荧光强度[(5.40±0.70)、(14.97±1.33)、(17.03±0.80)、(19.67±1.16)、(31.50±2.28)u/(s·mg)]及caspase-3相对表达量(0.24±0.02、0.58±0.02、1.19±0.05、1.41±0.05、1.74±0.06)依次升高,Bcl-2相对表达量(1.67±0.10、1.11±0.16、0.94±0.11、0.67±0.09、0.53±0.02)依次降低(P0.05)。结论白藜芦醇可诱导肾细胞癌ACHN细胞内活性氧累积,上调caspase-3表达,下调Bcl-2表达,进而抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,且呈剂量依赖性。     

鼠胚实验在新建IVF实验室中的质控作用

目的探讨鼠胚实验对该院新建生殖实验室培养体系进行评估的可行性。方法选择昆明系小鼠进行体内及体外受精胚胎进行培养,观察常规培养条件下不同受精方式来源的小鼠胚胎及不同培养环境下对小鼠体外受精胚胎的受精率、卵裂率、囊胚率。结果体内周期数共35个,获得受精卵共844枚,受精率95.8%,卵裂率92.7%,囊胚率96.2%;体外周期数42,获得卵母细胞1 119枚,受精率79.2%,卵裂率94.8%,囊胚率85.8%;体内受精的受精率和囊胚率与体外受精之间差异显著,且差异有统计学意义。体外受精胚胎在三气培养箱培养卵裂率为79.3%,受精率为95.4%,囊胚率为88.4%;在二气培养箱中卵裂率为82.7%,受精率为95.1%、囊胚率为84.4%;体外受精和体内受精培养在受精率、卵裂率、囊胚率差异不显著。结论无论是体内受精还是体外受精培养的囊胚率均达到了质控标准,所以本实验室的培养环境适合进行人的体外受精操作;小鼠胚胎对二气或者三气培养箱的环境不具有敏感性,小鼠胚胎具有局限性,可重复性不高。     

Tiotidine and cimetidine--kinetics and dynamics

Tiotidine and cimetidine kinetics and dynamics were compared to assess mechanisms of the longer duration of effect of tiotidine in man. Both drugs has similar lag times for absorption. Tiotidine with a meal was more slowly absorbed than when fasting and was also more slowly absorbed than cimetidine with a meal. The elimination rates for both drugs did not differ; they were both approximately 2 to 3 hr. Oral doses of cimetidine achieved areas under the plasma concentration curve approximately three times that of tiotidine but these concentrations were only 1/10 as potent. The cimetidine concentration inducing 50% inhibition of food-stimulated gastric acid secretion was 0.41 +/- 0.04 whereas it was 0.04 +/- 0.003 microgram/ml for tiotidine. The effect of tiotidine lasted longer than that of cimetidine because the doses recommended for use in man resulted in higher concentrations in plasma relative to effective concentration than clinical doses of cimetidine.