替米沙坦和氨氯地平对乳鼠心肌成纤维细胞增殖的影响

目的探讨替米沙坦联合氨氯地平对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的乳鼠心肌成纤维细胞增殖及细胞中转化生长因子-β1(TGF-β1)及ROS的影响。方法对Wistar乳鼠心肌成纤维细胞行体外原代及传代培养,将培养好的细胞分为5组:对照组(加入15%小牛血清DEME培养液)、AngⅡ组(15%小牛血清DEME培养液+1×10-6 mol/L AngⅡ),替米沙坦组(TE组,在AngⅡ组基础上加入10μmol/L替米沙坦),氨氯地平组(AM组,AngⅡ组基础上加入1μmol/L氨氯地平)及替米沙坦+氨氯地平组(TE+AM组,在AngⅡ组基础上加入10μmol/L替米沙坦+1μmol/L氨氯地平)。倒置显微镜下观察各组细胞不同时期增殖情况及TGF-β1(免疫荧光法测定)、ROS(荧光探针DCFH-DA分析)情况。结果与对照组相比,AngⅡ组心肌成纤维细胞在S期时增殖率较高,而在G0/G1期、G2/M期时增殖率下降(P0.05),TGF-β1、ROS水平显著升高(P0.05)。与AngⅡ组相比,TE组、AM组及TE+AM组心肌成纤维细胞在S期时增殖率显著下降,而在G0/G1期、G2/M期时增殖率升高(P0.05),TGF-β1、ROS水平下降(P0.05)。TE+AM组与TE组、AM组相比心肌成纤维细胞在S期时增殖率下降,在G0/G1期、G2/M期时增殖率升高更明显(P0.05),心肌成纤维细胞中TGF-β1水平低于TE组、AM组(P0.05)。结论替米沙坦联合氨氯地平能有效抑制AngⅡ诱导心肌成纤维细胞增殖,其可能机制与抑制TGF-β1过度表达及ROS过度生成有关。     

金银花黄酮类提取物对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的观察金银花黄酮类提取物对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞(CF)增殖和胶原合成的影响。方法分离、培养大鼠心肌成纤维细胞,分为空白对照组、AngⅡ模型组及AngⅡ+金银花黄酮类提取物低剂量、中剂量、高剂量组,培养48h后,采用细胞计数(CCK-8)试剂盒检测CF的增殖能力,流式细胞仪检测CF周期,免疫印迹法检测Ⅰ型胶原蛋白表达,实时定量RT-PCR检测Ⅰ型胶原蛋白mRNA的相对表达。结果 AngⅡ干预48h后AngⅡ模型组与空白对照组比较,CF增殖率和S期及G_2/M期细胞比例显著增加,Ⅰ型胶原蛋白和mRNA的表达明显升高,差异有统计学意义(P0.05或P0.01);AngⅡ+金银花黄酮类提取物低剂量、中剂量、高剂量组与AngⅡ类型组比较CF增殖和S期及G_2/M期细胞比例显著减少,Ⅰ型胶原蛋白和mR-NA的表达明显降低,差异有统计学意义(P0.01);金银花黄酮类提取物对CF作用呈剂量依赖性,高剂量组与中剂量组、低剂量组比较CF增殖和S期及G_2/M期细胞比例显著减少,Ⅰ型胶原蛋白和mRNA的表达明显降低,差异有统计学意义(P0.01)。结论金银花黄酮类提取物通过抑制AngⅡ诱导的CF增殖和胶原蛋白合成,进而发挥抗心肌纤维化作用。     

替米沙坦联合氨氯地平对血管紧张素Ⅱ诱导乳鼠心肌成纤维细胞增殖的影响

目的分析替米沙坦联合氨氯地平对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的乳鼠心肌成纤维细胞增殖的影响以及相关机制。方法新生1~3 d Wistar大鼠30只,雌雄不拘,培养原代心肌细胞,采用差速贴壁获得心肌成纤维细胞,传代培养。取对数期成纤维细胞,分组并给予处理,对照组:加入15%胎牛血清DEME培养液,AngⅡ组:15%胎牛血清DEME培养液+AngⅡ,替米沙坦组:在AngⅡ组基础上加入替米沙坦,氨氯地平组:在AngⅡ组基础上加入氨氯地平,联合组:在AngⅡ组基础上加入替米沙坦+氨氯地平。鉴定成纤维细胞。CCK-8法检测各组细胞增殖情况,应用免疫组化染色测定血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白水平,应用RT-PCR法测定LOX-1及TNF-αm RNA表达水平。结果心肌成纤维细胞胞体较大,胞浆透明,细胞呈梭形,细胞核呈椭圆形,通常含2~3个核,细胞纯度高达98%。与对照组相比,AngⅡ组增殖活性升高,而加入替米沙坦和氨氯地平后,抑制AngⅡ诱导的增殖,联合应用替米沙坦和氨氯地平较单药抑制作用更明显,差异有统计学意义(P均0.05)。与对照组相比,AngⅡ组心肌成纤维细胞TNF-α及LOX-1 m RNA表达水平显著升高,差异有统计学意义(P均0.05)。各药物干预组与AngⅡ组相比,TNF-α及LOX-1 m RNA表达水平显著降低,其中联合组下降最明显,差异有统计学意义(P均0.05)。与对照组相比,AngⅡ组心肌成纤维细胞TNF-α及LOX-1蛋白表达水平显著升高,差异有统计学意义(P均0.05)。各药物干预组与AngⅡ组相比,TNF-α及LOX-1蛋白表达水平显著降低,联合组较替米沙坦组和氨氯地平组两种蛋白的表达降低,差异有统计学意义(P均0.05)。结论替米沙坦联合氨氯地平能有效抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖,其可能机制为抑制LOX-1及TNF-α过度表达。     

银杏叶提取物对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞纤维化的干预作用

目的研究银杏叶提取物对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞纤维化的干预作用。方法体外培养心肌成纤维细胞,加入10-7mol AngⅡ模拟大鼠心肌纤维化体外模型。ELISA检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、结缔组织生长因子(CTGF)、转化生长因子-β(TGF-β)含量。结果银杏叶提取物可明显降低AngⅡ引起的心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原分泌增加,并能降低CTGF、TGF-β表达。结论银杏叶提取物可改善AngⅡ引起的心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原分泌增加,其机制可能与CTGF、TGF-β有关。     

松弛素对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠血管外膜成纤维细胞胶原水平的影响

目的:探讨松弛素(RLX)对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的大鼠血管外膜成纤维细胞胶原水平的影响及机制。方法:体外培养大鼠主动脉外膜成纤维细胞,随机分为对照组、AngⅡ组(10-6 mmol/L),RLX组(100μg/L)及AngⅡ+RLX组。采用波形蛋白染色法鉴定血管外膜成纤维细胞,用RT-PCR检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA表达,用Western blot印迹法检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9及转化生长因子(TGF)-β1蛋白的表达。结果:AngⅡ可显著增加培养液上清中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量及TGF-β1蛋白表达,而RLX明显抑制AngⅡ的上述作用;AngⅡ可显著下调细胞内MMP-2和MMP-9的蛋白表达,而RLX明显抑制AngⅡ的上述作用(均P<0.05)。结论:AngⅡ可刺激血管外膜成纤维细胞胶原合成增加,而RLX通过上调MMP-2、MMP-9表达和下调TGF-β1表达,抑制AngⅡ刺激的Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白生成,从而发挥抗血管纤维化作用。     

上调PTEN表达对血管紧张素Ⅱ诱导心肌成纤维化细胞增殖迁移的影响

目的探讨上调PTEN表达对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌成纤维化细胞增殖迁移的影响。方法将心肌成纤维化细胞随机分为空白对照组(未处理)、AngⅡ组(加AngⅡ处理)、AngⅡ+NC组(转染pcDNA3.1后,给予AngⅡ处理)和AngⅡ+PTEN组(转染pcDNA3,1-PTEN后,给予AngⅡ处理),采用脂质体2000转染细胞,并经AngⅡ处理后,Western blot检测各组细胞中PTEN蛋白的表达,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞的周期变化,Transwell小室实验检测细胞的迁移能力;ELISA检测胶原蛋白Ⅰ和Ⅲ含量。结果与空白对照组相比,AngⅡ组、AngⅡ+NC组和AngⅡ+PTEN组细胞中PTEN蛋白表达和G0/G1期细胞比例降低,而S期和G2/M期细胞比例、细胞增殖和迁移能力以及胶原蛋白Ⅰ和Ⅲ含量升高;与AngⅡ组相比,AngⅡ+PTEN组细胞中PTEN蛋白表达和G0/G1期细胞比例升高,而S期和G2/M期细胞比例、细胞增殖和迁移能力以及胶原蛋白Ⅰ和Ⅲ含量均降低;AngⅡ组与AngⅡ+NC组间差异无统计学意义。结论 PTEN在AngⅡ诱导心肌成纤维化细胞中表达下降,上调其表达可抑制AngⅡ诱导心肌成纤维化细胞增殖迁移和胶原蛋白的合成。     

依那普利拉通过调控PKC/TGF-β1通路抗鼠心室成纤维细胞增殖

目的依那普利拉(Ena)和蛋白激酶C(PKC)抑制剂白屈菜赤碱(Chele)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的新生鼠心室成纤维细胞(CFb)增殖、细胞周期、Ⅲ型胶原纤维(CollagenⅢ)、PKC和转化生长因子(TGF-β1)蛋白表达的影响,揭示Ena抗CFb增殖的内在机制。方法培养的新生Wistar大鼠CFb分为对照组、AngⅡ组、Chele+AngⅡ组、Chele+AngⅡ+Ena组和AngⅡ+Ena组,采用胰酶消化、差速贴壁法培养CFb,四氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖;免疫细胞化学染色(IC)法测定CollagenⅢ含量;流式细胞仪(FCM)检测细胞周期;免疫印迹法(WB)检测PKC和TGF-β1表达。结果与AngII组相比较,Chele和Ena组及Chele+AngⅡ+Ena组能显著降低CFb增殖率(P<0.05或P<0.001)、降低CollagenⅢ含量(P<0.05或P<0.01),提高CFb G0/G1期细胞百分比,降低S期细胞百分比(P<0.05或P<0.01),抑制PKC和TGF-β1蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。结论 Ena和Chele能显著抑制由AngⅡ诱导的CFb增殖和间质胶原分泌,可能通过抑制PKC-TGF-β1信号通路实现。     

槲皮素对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞的影响

目的研究槲皮素(Que)对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞(CFB)增殖和胶原合成的影响及其作用机制。方法采用酶消化法和差速贴壁法获得纯化的CFB,应用MTT法测定CFB增殖,羟脯氨酸法测定胶原蛋白含量,化学比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)活力含量,实时聚合酶链反应(RT-PCR)检测CFB的Ⅰ型胶原(ColⅠ)、转化生长因子(TGF)-β1基因的mRNA表达。结果槲皮素在10⁴0μmol/L浓度范围内可明显抑制AngⅡ诱导的CFB增殖和胶原蛋白合成增加,同时可升高SOD含量、降低MDA活力,可以降低ColⅠ、TGF-β1蛋白的mRNA表达。结论槲皮素可抑制AngⅡ诱导的CFB增殖和胶原蛋白合成的作用,从而延缓心肌纤维化的发展。     

解毒通络方抑制异丙肾上腺素诱导心肌损伤大鼠的胶原合成

目的观察解毒通络方对异丙肾上腺素致大鼠心肌损伤后胶原合成的干预作用。方法成年Wistar雄性大鼠随机分为对照组、模型组、解毒通络方高、中、低剂量组和ACEI组。解毒通络方组给予解毒通络方冲剂悬液10、20、30 g/kg灌胃,ACEI组给予卡托普利水溶液0.005 g/kg灌胃,对照组和模型组均给予生理盐水灌胃。7 d后,ELISA法检测各组大鼠血浆血管紧张素(Ang)Ⅱ含量;碱水解法测定心肌组织羟脯氨酸(Hyp)含量;免疫组化方法检测心肌组织ColⅠ、ColⅢ和TGF-β1表达。结果与对照组比较,模型组血清AngⅡ含量及心肌Hyp含量均明显升高(P<0.05),心肌组织ColⅠ、ColⅢ及TGF-β1蛋白表达明显增加(P<0.05);与模型组比较,解毒通络方各剂量组血清AngⅡ含量及心肌Hyp含量均降低(P<0.05),心肌ColⅠ、ColⅢ和TGF-β1蛋白表达明显减少(P<0.05);与ACEI组比较,解毒通络方高剂量组TGF-β1蛋白的阳性表达面积减少(P<0.05)。结论解毒通络方可以有效抑制异丙肾上腺素所致的大鼠心肌胶原合成,其机制可能与抑制AngⅡ生成及干扰心肌TGF-β1信号通路有关。     

促红细胞生成素对心脏成纤维细胞表型转化的影响及其信号机制

目的 观察促红细胞生成素(EPO)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导培养的乳鼠心脏成纤维细胞(CF)表型转化的影响,以及其可能的信号通路(TGF-β1-TAK1-p38MAPK)在其中的作用.方法 体外分离培养乳鼠心脏成纤维细胞,用10-6 mol/L的AngⅡ诱导培养心脏成纤维细胞表型转化,加入20 kU/L的EPO进行预干预,同时加或不加15 μmol/L的SB203580进行处理,以平滑肌肌动蛋白(SMA)表达作为心脏成纤维细胞表型转化的观察指标,应用免疫组织化学观察心脏成纤维细胞内SMA表达情况;采用实时荧光定量PCR方法检测细胞内信号分子转化生长因子β1(TGF-β1)及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK) mRNA的表达情况;采用蛋白免疫印迹法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、TGF-β1、转化生长因子激活性激酶1(TAK1)、p38MAPK以及磷酸化的TAK1(p-TAK1)和p-p38MAPK的表达情况.结果 20 kU/L的EPO能有效抑制AngⅡ诱导的CF细胞表型转化,减少CF细胞内α-SMA蛋白的沉积,降低CF表型转化相关信号分子TGF-β1、p-TAK1、TAK1、p-p38MAPK和p38MAPK的活化或表达,且加入SB203580后该作用增强.结论 EPO可抑制AngⅡ诱导的乳鼠心脏成纤维细胞表型转化为肌成纤维细胞,减轻心肌纤维化,并可降低相关信号分子mRNA及蛋白的表达,初步考虑EPO抑制心肌纤维化,减轻心室重构的作用是通过TGF-β1-TAK1-p38MAPK进行的.     

AngⅡ对人心房肌细胞膜钙通道电流的影响及替米沙坦的拮抗作用

目的观察AngⅡ对人心房肌细胞膜钙通道电流的作用,揭示其参与房性心律失常的电生理机制,为应用AngⅡ受体拮抗剂治疗房性心律失常提供实验依据。方法急性分离单个人心房肌细胞,采用全细胞膜片钳方法记录L型钙电流（ICaL）。实验分4组对照组,AngⅡ（0.1μmol/L）组,替米沙坦（0.01μmol/L）组,AngⅡ+替米沙坦组。结果与对照组相比,0.1μmol/LAngⅡ组使人心房肌细胞膜ICaL峰值电流密度显著增加（12.74±1.65vs-5.78±0.82pA/pF,P<0.05）。0.01μmol/L替米沙坦组对人心房肌细胞膜ICaL无显著影响（-5.70±0.79pA/pF）,但可拮抗AngⅡ的作用,AngⅡ+替米沙坦组的ICaL峰值电流密度（-7.38±0.91pA/pF）与AngⅡ组相比有显著差异（P<0.05）。结论AngⅡ显著增加人心房肌细胞膜ICaL峰值的电流密度。替米沙坦可拮抗AngⅡ对人心房肌细胞膜ICaL的作用。     

肾上腺髓质素对血管外膜成纤维细胞迁移及胶原生成的影响

目的:探讨肾上腺髓质素(ADM)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管外膜成纤维细胞(AF)迁移及胶原生成的影响及机制。方法:体外培养大鼠胸主动脉AF,运用Trans well技术测定不同浓度ADM对AF迁移的影响,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养上清中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量,用RT-PCR及Western blotting分析AngⅡ(10-6mol/L)及不同浓度ADM干预后大鼠胸主动脉AF内骨桥蛋白(OPN)、转化生长因子β1(TGFβ1)mRNA及蛋白的表达。结果:在AngⅡ(10-6mol/L)趋化作用下,AF迁移数目较对照组显著增多[(30.26±1.08)∶(4.35±1.26),P<0.01]。ADM可抑制AngⅡ刺激的细胞迁移,迁移细胞数目在一定范围内随着ADM浓度增加而减少;AngⅡ(10-6mol/L)诱导OPN呈高表达,ADM可下调这种表达,呈一定剂量依赖性;AngⅡ显著增加培养上清中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量,ADM呈剂量依赖的抑制AngⅡ上述作用,其中10-8mol/LADM组中Ⅰ、Ⅲ型胶原合成分别抑制了30%和31%(P<0.01),10-7mol/LADM组则分别抑制了43%和4...     

百令胶囊对抗病毒性心肌炎小鼠抗心肌纤维化作用及机制

目的探讨百令胶囊(BL)对病毒性心肌炎(VMC)小鼠的抗心肌纤维化作用及对血管紧张素(Ang)Ⅱ、转化生长因子(TGF)-β1/Smad信号通路的影响。方法以柯萨奇病毒(CV)B3感染Bala/C小鼠建立VMC心肌纤维化动物模型,同时设对照组,建模好的小鼠随机分为模型组、BL大剂量组、BL中剂量组、BL小剂量组、卡托普利组。治疗60 d后处死小鼠,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各组小鼠血清中AngⅡ和TGF-β1水平,采用Masson染色计算心肌胶原容积分数(CVF),采用Western免疫印迹法测定各组小鼠心肌组织中AngⅡ、TGF-β1、Smad2/3和Smad7蛋白表达。采用免疫组化法测定各组小鼠心肌组织胶原-Ⅰ和胶原-Ⅲ的表达。结果与对照组比较,模型组心肌CVF升高,血清及心肌组织AngⅡ及TGF-β1表达升高,心肌Smad2/3表达显著升高,Smad7表达下降,心肌胶原-Ⅰ和胶原-Ⅲ的表达明显增高(P0.01)。与模型组比较,BL大剂量组和卡托普利组心肌CVF、胶原-Ⅰ和胶原-Ⅲ表达下降,且BL大剂量组效果优于卡托普利组(P0.01)。与模型组比较,卡托普利组、BL大、中剂量组血清TGF-β1及AngⅡ浓度均有下降(P0.01);卡托普利组与BL大剂量组水平相近(P0.05);而对于心肌组织TGF-β1及AngⅡ的下调,BL大剂量组效果优于卡托普利组(P0.01)。与对照组比较,模型组Smad2/3的表达量增多,Smad7的表达量下降,差异有统计学意义(P0.01);与模型组比较,卡托普利组,BL大、中剂量组心肌Smad2/3表达量下降,Smad7表达量升高,差异有统计学意义(P0.01)。结论 BL具有抗VMC小鼠心肌纤维化的作用,效果优于卡托普利,而调控心肌AngⅡ及TGF-β1/Smad信号通路是其作用机制之一。     

血管紧张素Ⅱ在缺氧诱导的人肺成纤维细胞表型转化及胶原合成中的作用

目的:探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)在缺氧诱导的人肺成纤维细胞(human lung fibroblast,HLF)表型转化及胶原合成中的作用。方法:在缺氧条件下培养HLF-1细胞株,将细胞分为AngⅡ组、AngⅡ+替米沙坦(TST)组和对照组。采用免疫荧光法检测HLF-1细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达水平;采用Western blot法检测HLF-1细胞Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ,Col-Ⅰ)蛋白的表达水平。结果:AngⅡ组HLF-1细胞α-SMA和Col-Ⅰ蛋白的表达水平较对照组明显上调,AngⅡ+TST组α-SMA和Col-Ⅰ蛋白的表达水平较AngⅡ组明显下降。结论:AngⅡ/血管紧张素Ⅱ1型受体信号通路可诱导缺氧性HLF表型转化以及胶原合成。     

替米沙坦改善肥胖大鼠瘦素的促血管重构作用

目的 探讨替米沙坦能否抑制肥胖大鼠血管周围脂肪组织中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的瘦素合成及瘦素的促血管重构作用。方法给予20只8周龄雄性Wistar大鼠高脂喂食12周,另取体质量、周龄匹配雄性Wistar大鼠20只,给予普通喂食12周。高脂喂食大鼠中肥胖大鼠造模成功14只,随机分为高脂组(n=7)和高脂治疗组(n=7),分别给予高脂喂食和高脂+替米沙坦8mg/(kg·d),普通喂食的Wistar大鼠中抽取14只随机分为普食组(给予标准大鼠饲料,n=7)和普食治疗组[标准大鼠饲料+替米沙坦8mg/(kg·d),n=7]。替米沙坦干预20周后,比较各组大鼠体质量、生化指标、主动脉Masson染色、血浆胶原代谢指标;酶联免疫吸附试验及放免法检测各组大鼠血浆及血管周围脂肪组织中AngⅡ、瘦素水平;同时用Western blot法检测AngⅡ1型受体(AT1R)、瘦素蛋白表达水平,主动脉瘦素、瘦素受体、Ⅰ型胶原蛋白表达水平;体外实验利用AngⅡ、替米沙坦干预成熟脂肪细胞,利用Western blot及酶联免疫吸附试验检测其瘦素表达水平;利用瘦素、替米沙坦、吡格列酮、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)抑制剂干预血管平滑肌细胞,检测Ⅰ型胶原表达,并用四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞增殖情况。结果 32周后,与普食组相比,高脂组主动脉胶原容积分数升高、血浆及血管周围脂肪组织中AngⅡ及瘦素水平均较高(均P0.05),血管周围脂肪组织AT1R、瘦素蛋白表达水平升高(均P0.05),主动脉中瘦素、瘦素受体、Ⅰ型胶原蛋白表达水平升高(均P0.05);与高脂组相比,高脂治疗组主动脉胶原容积分数降低,血浆及血管周围脂肪组织中AngⅡ及瘦素水平减少(均P0.05),血管周围脂肪组织AT1R、瘦素蛋白表达水平降低(均P0.05),主动脉中瘦素、瘦素受体、Ⅰ型胶原蛋白表达水平下降(均P0.05)。体外实验发现,AngⅡ促进成熟脂肪细胞的瘦素表达,替米沙坦可以抑制AngⅡ的促瘦素合成作用(均P0.05);瘦素可促进血管平滑肌细胞Ⅰ型胶原的表达及细胞增殖,替米沙坦可以改善此现象,加入PPAR-γ抑制剂后,替米沙坦的抑制作用消除。结论替米沙坦抑制AngⅡ诱导的瘦素合成并通过部分激动PPAR-γ抑制瘦素的促血管重构作用。     

氨氯地平加替米沙坦对轻、中度高血压的疗效及与AVP和NO的关系

目的 观察氨氯地平加替米沙坦对轻、中度高血压的疗效，探讨高血压患者血管加压素(AVP)和一氧化氮（NO）的变化与疗效的关系。方法 将60例轻、中度高血压病患者（包括:正在服用降压药的高血压病患者和新发病例没有服用降压药的患者）随机分为:氨氯地平组，替米沙坦组和氨氯地平＋替米沙坦组（氨+替组）,每组各20例。测定各组治疗前后血压的变化。采用放免法、比色法测定各组患者治疗前后血浆AVP和NO的含量。结果 ①氨氯地平组、替米沙坦组及氨＋替组治疗前收缩压（SBP）分别为:(146.31±3.15)mmHg、(145.92±2.71)mmHg及(146.00±2.42)mmHg；舒张压(DBP)分别为:(93.77±2.39)mmHg、(92.54±2.68)mmHg及(94.93±1.15)mmHg。在治疗6个月后，SBP分别为:(126.69±1.74)mmHg、(126.08±1.52)mmHg及(102.71±2.20)mmHg；DBP分别为:(80.76±1.13)mmHg、(81.00±0.80)mmHg和(76.11±1.36)mmHg，与治疗前比较明显降低（P<0.05）。氨+替组患者的SBP和DBP均明显低于氨氯地平组和替米沙坦组（P<0.05）；氨氯地平组与替米沙坦组比较无显著差异。②治疗1月、2月末，氨+替组患者的血压达标率均明显高于氨氯地平组和替米沙坦组（P<0.05）；氨氯地平组和替米沙坦组比较无显著差异。③氨氯地平组、替米沙坦组及氨＋替组治疗前血浆NO的含量分别为:(12.77±0.23)μmol/L、(11.68±0.35)μmol/L及(10.09±1.04)μmol/L；治疗6个月后其含量分别为:(18.50±2.14)μmol/L、(19.07±1.96)μmol/L及(25.47±1.84)μmol/L，与治疗前比较差异显著（P<0.05）。氨+替组患者NO的含量明显高于氨氯地平组和替米沙坦组（P<0.05）；氨氯地平组和替米沙坦组比较无显著差异。④氨氯地平组、替米沙坦组及氨＋替组患者治疗前血浆AVP的含量分别为:(34.71±4.36)ng/L、(33.07±3.77)ng/L及(35.06±4.12)ng/L；治疗6个月后分别为:(22.35±2.71)ng/L、(24.12±3.11)ng/L及(17.98±1.79)ng/L,与治疗前比较差异显著（P<0.05）。氨+替组血浆AVP的含量低于氨氯地平组和替米沙坦组（P<0.05），氨氯地平组和替米沙坦组组间比较无显著差异。结论 ①3个组均能有效控制血压，但氨+替组的降压效果更佳。②3个组在显著降低血压的同时，均伴有血浆AVP含量降低和血浆NO含量增高，氨+替组的效果更明显，提示AVP和NO参与了高血压的发生发展，可作为观察高血压疗效的指标。     

睾酮对心脏老化过程中心肌纤维化的干预研究

目的观察睾酮对心脏老化过程中心肌纤维化的干预效应。方法差速贴壁法培养雄性昆明白乳鼠心肌成纤维细胞,并分为4组:A组(培养液)、B组(60 μmol/L H_2O_2)、C组(30 nmol/L 睾酮+B组)、D组(氟他胺1μmol/L+C组)。用β半乳糖苷酶染色检测细胞的阳性率,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期,二氯荧光黄荧光显色检测细胞内活性氧(ROs)。α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫化学染色反应细胞的表型转化,RT-PCR法检测转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA、P16 mRNA和cyclin D1 mRNA的表达。结果与A组比较.B组β-半乳糖苷酶染色阳性细胞增加,ROS水平增加,P16 mRNA、cyclin D1 mRNA、TGF-β1 mRNA表达上调,细胞增殖能力明显下降,G_0/G_1期细胞比例增多,同时α-SMA免疫组织化学染色出现明显强阳性;与B组比较,C组上述各项指标下降;与C组比较,D组能部分阻断睾酮的各种保护作用。结论睾酮通过受体机制干预氧化应激诱导的心肌成纤维细胞的衰老,这可能是睾酮抗心脏老化过程中心肌纤维化的机制之一。     

血管紧张素Ⅱ通过抑制人心房成纤维细胞BKCa通道诱导心房纤维化

目的 探讨在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心房纤维化的过程中,大电导钙激活钾通道(BKCa通道)的作用机制。方法 通过组织块贴壁法获取原代人心房成纤维细胞,使用免疫荧光染色进行鉴定。用浓度为500 nmol/L的AngⅡ处理人心房成纤维细胞24 h,实时荧光定量PCR与蛋白质印迹法用于检测处理前后纤维化标志基因α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原蛋白Ⅰ(collagenⅠ)和胶原蛋白Ⅲ(collagenⅢ),以及BKCa通道的α与β亚基的mRNA和蛋白表达水平,全细胞膜片钳技术检测AngⅡ处理前后的BKCa通道的电流变化。结果 (1)人心房成纤维细胞经AngⅡ处理后,α-SMA、collagenⅠ和collagenⅢ的mRNA和蛋白表达水平升高;(2)经过AngⅡ处理后,BKCa通道α及β亚基mRNA和蛋白表达水平降低;(3)人心房成纤维细胞存在功能正常的BKCa通道,具有电压依赖性;(4)人心房成纤维细胞BKCa通道的宏观电流幅度在经AngⅡ处理后降低;(5)在人心房成纤维细胞上过表达BKCa通道α亚基后,纤维化标志物α-SMA、collagenⅠ和collagenⅢ的表达受到了明显...     

依那普利联合替米沙坦对自发性高血压大鼠肾脏的保护作用

目的探讨依那普利联合替米沙坦对自发性高血压大鼠（SHRs）肾脏的保护作用。方法选择40只SHRs分成4组：依那普利组、替米沙坦组、依那普利＋替米沙坦组以及SHRs空白对照组各10只,另选同龄正常血压大鼠10只作为正常对照组。分别给予不同剂量的药物进行为期12周的灌胃治疗,定期检测各组大鼠的血压和尿蛋白含量;治疗结束后,采用放射免疫法和酶联免疫吸附法检测各组大鼠血浆和肾组织中血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、转化生长因子（TGF-β1）含量,光镜下观察肾脏组织病理改变。结果依那普利组、替米沙坦组及依那普利＋替米沙坦组均能明显降低SHRs血压和尿蛋白含量,但依那普利＋替米沙坦组效果最好。血浆和肾脏组织中的AngⅡ水平在替米沙坦组中升高,在依那普利组及依那普利＋替米沙坦组中下降;TGF-β1水平均显著降低,以依那普利＋替米沙坦组降低的程度最大。结论依那普利＋替米沙坦能明显降低SHRs的血压,并且对肾脏有很好的保护作用。     

大黄酚与转化生长因子-β1对体外培养人成纤维细胞胶原及盘状结构域受体2的调控作用及机制

目的探讨中药大黄提取物大黄酚和转化生长因子(TGF)-β1对体外培养人成纤维细胞Ⅰ型(Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)、盘状结构域受体(DDR)2的调控作用及机制。方法体外培养人成纤维细胞,用大黄酚干扰24 h,观察细胞生长特征,并用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western印迹检测Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、DDR2表达,流式细胞技术检测成纤维细胞细胞周期。细胞分为对照组、TGF组和大黄酚组。结果 TGF-β1、大黄酚上调DDR2表达,与对照组有显著性差异(P0.05)。TGF-β1组Col-Ⅰ表达上调,与对照组有显著性差异(P0.05);大黄酚组Col-Ⅰ表达下调,与对照组有显著性差异(P0.05)。TGF-β1组Col-Ⅲ表达与对照组无显著性差异(P0.05);大黄酚组Col-Ⅲ表达上调,与对照组有显著性差异(P0.05)。G1/G0期细胞比例,TGF-β1组与对照组无显著性差异(P0.05),大黄酚组低于对照组,有显著性差异(P0.05);S期细胞比例,TGF-β1组与对照组无显著性差异(P0.05),大黄酚组高于对照组,有显著性差异(P0.05);G2期细胞比例,各组间无明显差异(P0.05)。结论大黄酚和TGF-β1对培养成纤维细胞的DDR2、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达具有调控作用,并能影响其细胞周期。TGF-β1作用是通过上调Col-Ⅰ表达促进组织修复,而大黄酚作用的机制可能是降低了G1/G0期细胞比例而增加细胞增殖活性来促进组织修复,同时上调DDR2,增加Col-Ⅰ降解,减少瘢痕形成。