蛋白酶体抑制剂MG-132对SHG-44细胞的体外实验研究

目的探讨蛋白酶体抑制剂MG-132对人胶质瘤SHG-44细胞增殖、细胞凋亡及细胞周期的影响。方法分别以不同浓度(5、10、20、50μmol/L)的MG-132培养SHG-44细胞。MTT法检测不同培养时间细胞增殖活力、流式细胞术检测细胞凋亡及周期、AO/EB及HE染色观察细胞凋亡变化。结果MG-132可显著抑制SHG-44细胞生长,24h时其抑制作用尤为明显,与对照组相比,5、10、20、50μmol/L浓度组细胞增殖OD值均显著低于正常对照组(P<0.01),呈现剂量依赖性抑制作用增强趋势。与正常对照组相比,MG-132处理SHG-44细胞后,于5μmol/LMG-132作用12h后即可检测到明显的凋亡亚二倍体峰,且存在时效及量效关系;同时24h各剂量MG-132处理组G2/M期细胞表达百分率显著高于正常对照组(P<0.01),S期细胞表达百分率显著低于正常对照组(P<0.01)。结论蛋白酶体抑制剂MG-132在体外可显著诱导人脑胶质瘤SHG-44细胞发生凋亡、G2/M期细胞周期阻滞并抑制细胞增殖。     

姜黄素对人脑胶质瘤SHG-44细胞抑制及凋亡的实验研究

目的探讨姜黄素（erueumin）对人脑胶质瘤SHG-44细胞体外抑制及凋亡调控作用。方法20-80μmol／L姜黄素分别处理SHG-44细胞48h后，MTT法测定姜黄素对SHG-44细胞的细胞抑制作用及各种caspase抑制剂对姜黄素作用的影响；通过流式细胞仪AnnexinV—FITC／PI凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡；透射电镜观察细胞形态学变化；荧光分光光度法检测easpase-3活性的改变。结果姜黄素明显抑制SHG-44细胞的增殖；诱导SHG-44细胞凋亡；caspase-3活性增强，各种caspase抑制剂可抑制姜黄素诱导的SHG-44细胞凋亡。结论姜黄素可明显抑制并诱导SHG-44细胞凋亡。     

五味子多糖对脑胶质瘤SHG-44细胞血管内皮生长因子表达水平的影响

目的探讨五味子多糖作用脑胶质瘤SHG-44细胞后对血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达水平的影响。方法培养脑胶质瘤SHG-44细胞,将其分为对照组和五味子多糖1.25、2.5、5 mmol/L组,利用酶联免疫吸附实验观察五味子多糖作用后SHG-44细胞分泌VEGF蛋白情况。结果五味子多糖1.25和2.5 mmol/L浓度组SHG-44细胞分泌VEGF蛋白水平呈下降趋势,而5 mmol/L浓度组SHG-44细胞分泌VEGF蛋白水平明显降低,与对照组相比有统计学意义(P<0.05)。结论五味子多糖能明显抑制SHG-44细胞分泌VEGF蛋白,提示其可能通过抑制脑胶质瘤血管生成而发挥抗肿瘤作用。     

檞皮素抑制人脑胶质瘤SHG-44细胞增殖的实验研究

目的探讨中草药檞皮素抑制人胶质瘤SHG-44细胞的增殖作用。方法运用MTT法检测檞皮素对SHG-44细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪技术分析檞皮素对SHG-44细胞增殖周期的影响。结果50～200μmol/L浓度的檞皮素均能抑制SHG-44细胞的生长,且呈明显的时间,剂量依赖性关系,细胞周期分析显示檞皮素组G1期细胞比例明显增多,呈量效关系。结论檞皮素抑制SHG-44细胞增殖,可能通过使SHG-44细胞停滞在G1期而诱导其凋亡。     

辛伐他汀体外对人U251脑胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的观察辛伐他汀体外对人U251胶质瘤细胞增殖及诱导其凋亡的作用。方法对照组和实验组分别行辛伐他汀干预,培养24、48、72、96 h,采用MTT比色法和流式细胞仪检测不同浓度及不同时间干预后人U251胶质瘤细胞增殖活性和细胞周期的变化;采用TUNEL法检测干预后细胞凋亡的情况及RT-PCR检测对照组和实验组在干预48 h后检测Caspase-3的表达。结果辛伐他汀体外可明显降低人U251胶质瘤细胞增殖活性及诱导其凋亡,浓度到达1.0μmol/L时抑制作用明显,与对照组相比具有显著性差异(P0.05)。此外,辛伐他汀对人U251胶质瘤细胞的生长抑制呈明显的量-效关系。人U251胶质瘤细胞凋亡随药物浓度增加而显著,Caspase-3的表达亦呈剂量依赖关系。结论辛伐他汀在体外可一定程度上抑制人U251胶质瘤细胞的增殖及诱导其凋亡,Caspase-3参与细胞的凋亡过程。     

氯丙嗪协同榄香烯对Hep-2细胞增殖的抑制作用

目的 体外观察盐酸氯丙嗪与榄香烯联合应用对人喉癌细胞株Hep-2细胞的增殖抑制率及对细胞周期进程各时相的影响.方法 应用 MTT(噻唑蓝)比色法和流式细胞术检测单纯榄香烯制剂及榄香烯联合氯丙嗪制剂对Hep-2细胞的增殖抑制作用.结果 单纯榄香烯组Hep-2细胞增殖抑制率随着药物浓度的增加而升高,而榄香烯联合氯丙嗪组明显高于单纯用药组,且Hep-2细胞周期进程发生明显改变,细胞凋亡率升高.结论 在一定浓度范围内盐酸氯丙嗪能够增强榄香烯对Hep-2细胞的增殖抑制率及细胞周期进程各时相变化和凋亡率,有明显的协同作用.     

蛋白酶体抑制剂Bortezomib对人脑胶质瘤增殖抑制及诱导凋亡作用

目的 探讨Bortezomib对体外SHG-44胶质瘤细胞株形态的影响及诱导凋亡作用.方法 Bortezomib体外处理培养的SHG-44胶质瘤细胞后,采用MTT法检测细胞增殖、HE染色光镜观察、Hochest33342染色荧光显微镜观察以及锇铀铅染色透射电镜观察胶质瘤细胞的形态变化,流式细胞术分析细胞凋亡率及细胞周期.结果 MTT显示Bortezomib抑制SHG-44胶质瘤的增殖与浓度和时间呈相关性;6.0 μmol/L Bortezomib处理SHG-44胶质瘤细胞24 h后,光镜、荧光显微镜、透射电镜下均可见凋亡形态学改变.流式细胞术分析细胞凋亡率为(20.31±2.84)% ( P＜0.01);细胞周期变化显示S期细胞减少到(17.65±6.38)% (P＜0.01),细胞周期被阻滞于G_0/G_1期和G_2/M期,分别为(68.51±5.62) % (P＜0.01)和(14.75±2.48)% (P＜0.01).结论 Bortezomib抑制C6胶质瘤细胞的增殖并诱导其凋亡.     

越桔原花青素对SHG-44脑胶质瘤细胞生长的作用

目的探讨越桔原花青素对体外培养的人胶质瘤细胞株SHG-44生长的影响。方法培养人脑胶质瘤SHG-44细胞,加入5%基础培养液和越桔原花青素(浓度分别为5、10、20、40μg/L)含药血清培养24、48、72 h,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测药物作用后SHG-44细胞的生长情况。结果不同浓度的越桔原花青素均可以抑制SHG-44胶质瘤细胞的生长。10、20、40μg/L越桔原花青素浓度组在作用24、48、72 h时,细胞的生长均受到了明显的抑制,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);而5μg/L浓度越桔原花青素浓度组在作用细胞72 h时,细胞的生长亦明显受到抑制,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论越桔原花青素可以抑制人脑胶质瘤SHG-44细胞生长,为其开发为抗脑肿瘤新药提供初步理论依据。     

三氧化二砷诱导人脑SHG-44胶质瘤细胞凋亡

目的观察三氧化二砷(As2O3)对SHG-44胶质瘤细胞增殖抑制的分子机制。方法在加入SHG-44胶质瘤细胞As2O348 h后,采用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)方法检测细胞增殖抑制率;RT-PCR及蛋白免疫印迹(WB)方法,检测BAX及Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平。结果As2O3对SHG-44胶质瘤细胞的抑制作用随着药物浓度的升高而增强;BAX mRNA及蛋白表达水平与对照组比无明显变化(P0.05),BAX mRNA及蛋白表达明显降低(P0.05)。结论 As2O3通过促进细胞凋亡而抑制SHG-44胶质瘤细胞的增殖。     

紫杉醇对胶质瘤SHG-44细胞的增殖抑制和辐射增敏作用

目的观察紫杉醇对胶质瘤SHG-44细胞的抑制及放射增敏作用,并探讨其作用机制。方法不同浓度紫杉醇(0、0.062 5、1.25、2.5、5和10μg/mL)作用于SHG-44细胞,MTT法检测紫杉醇对SHG-44细胞的增殖抑制作用;克隆形成法检测细胞辐射敏感性变化,流式细胞术检测细胞凋亡百分率变化。结果紫杉醇有明显的抑制SHG-44细胞增殖和提高其放射敏感性的作用,紫杉醇可提高3、6 Gy照射24 h后SHG-44细胞的凋亡率。结论紫杉醇对人胶质瘤SHG-44细胞具有杀伤及放射增敏作用。其可能机制是加强射线对肿瘤细胞的诱导凋亡效应,增强其杀伤肿瘤作用。     

布鲁生诱导人胶质瘤SHG-44细胞凋亡的机制

目的 通过体外实验探讨布鲁生诱导人胶质瘤SHG-44细胞凋亡的作用机制.方法 取人胶质瘤细胞系SHG-44培养18h,按布鲁生作用的不同浓度分组.0.125、0.25、0.5、1.0、1.5 mmol/L,作用的不同时间分组:12、24、48 h,采用四甲基耦氮唑蓝(MTT)计算细胞抑制率;吖啶橙(A0)/溴乙啶(EB)染色及流式细胞术检测细胞凋亡的变化;使用Westem印迹观察细胞BCL-2、BAX和COX-2蛋白表达的变化.结果 (1)利用MTT比色分析法,发现SHG-44细胞分别用含不同浓度布鲁生溶液培养12、24、48 h后,细胞增殖受到明显的抑制,且与浓度和时间呈正相关;(2)流式细胞仪分析结果显示,布鲁生主要使SHG-44细胞集中在晚期凋亡;(3)Western印迹凝胶电泳显示,0.25、0.5、l mmol/L浓度处理组作用24 h后,剂量性地降低SHG44细胞中COX-2、BCL-2蛋白的表达,而升高BAX蛋白的表达.结论 布鲁生能明显抑制人胶质瘤SHG-44细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制了COX-2蛋白表达有关.     

整合素拮抗剂IS201对GL15胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的观察整合素拮抗剂IS201对体外培养的GL15脑胶质瘤细胞生长的影响,并探讨其作用机制。方法将体外培养的GL15脑胶质瘤细胞接种于多孔培养板中,分别加入不同浓度的整合素αvβ3拮抗剂IS201进行干预,采用MTT法、免疫细胞化学法评价IS201对体外培养的GL15脑胶质瘤细胞生长的抑制作用,采用流式细胞术观察IS201对胶质瘤细胞凋亡的促进作用。结果 IS201对GL15胶质瘤细胞生长有明显的抑制作用,并能促进凋亡,且有量效关系。结论整合素拮抗剂IS201对胶质瘤细胞有明显抑制作用,应用整合素拮抗剂治疗脑胶质瘤前景广阔。     

地喹氯铵对脑胶质瘤细胞凋亡的影响

目的探讨地喹氯铵对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。方法用50、100、200μmol/L的地喹氯铵作用于脑胶质瘤细胞U251、U87、C6,作用时间分别为12、24、48、72、96 h,MTT检测细胞增殖情况。流式细胞仪检测76μmol/L的地喹氯铵作用48 h后的脑胶质瘤细胞U251的细胞凋亡情况。Transwell小室检测地喹氯铵对脑胶质瘤细胞侵袭能力的影响。Western印迹检测细胞中PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白的表达水平。结果 50、100、200μmol/L的地喹氯铵对U251、U87、C6脑胶质瘤细胞增殖均具有抑制作用。地喹氯铵对脑胶质瘤细胞的增殖抑制作用随着作用时间的增加而增加,随着药物作用浓度的增加而增加。地喹氯铵作用胶质瘤U251、U87、C6细胞48 h的半数抑制浓度由大到小依次为:C6>U87>U251。76μmol/L的地喹氯铵作用后的脑胶质瘤细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.01)。脑胶质瘤细胞经地喹氯铵作用后的侵袭细胞数明显低于对照组(P<0.01)。地喹氯铵作用后的脑胶质瘤细胞中PI3K、Akt的表达水平与对照组相比无明显差异,而p-PI3K、p-Akt的表达水平明显下降。结论地喹氯铵对脑胶质瘤细胞增殖、侵袭能力具有抑制作用,对脑胶质瘤细胞凋亡具有促进作用,作用机制与PI3K/Akt信号通路有关。     

五味子多糖对SHG-44细胞产生血管内皮生长因子和Caspase-8的影响

目的探讨五味子多糖(CPSC)作用于胶质瘤SHG-44细胞后对血管内皮生长因子(VEGF)及凋亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-8产生的影响,并探讨其可能的机制。方法培养胶质瘤SHG-44细胞,将其分为对照组和CPSC 50、100、200 mg/L组,分别于培养24、48、72 h时观察各组细胞增殖活力,并利用酶联免疫吸附实验(ELISA)观察CPSC作用SHG-44细胞后,细胞分泌VEGF和Caspase-8蛋白情况。结果与对照组比较,作用48、72 h时,CPSC各浓度组SHG-44细胞的增殖活性均明显受抑制,与对照组比较统计学意义显著(P0. 05或P0. 01)。50、100、200 mg/L CPSC作用SHG-44细胞72 h后,SHG-44细胞分泌VEGF蛋白水平呈下降趋势,与对照组比较,各浓度CPSC组差异均有统计学意义(P0. 05或P0. 01); Caspase-8蛋白分泌水平亦升高,与对照组比较差异有统计学意义(P0. 05或P0. 01)。结论 CPSC通过抑制SHG-44细胞分泌VEGF蛋白,促进其产生Caspase-8蛋白,进而抑制肿瘤细胞的生长。     

榄香烯体内外抑制小鼠肝癌H_（22）细胞增殖与诱导凋亡作用的研究

[目的]研究中药莪术提取物榄香烯制剂（Elemene）对小鼠肝癌H22细胞增殖的抑制及诱导凋亡的作用。[方法]体内实验,通过建立H22小鼠肝癌实体瘤模型,观察榄香烯对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用,TdT酶介导的原位缺口末端标记法（TUNEL）检测凋亡细胞。体外进行细胞培养,采用MTT法检测榄香烯对细胞增殖的影响,Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞的凋亡。[结果]不同实验组对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用程度不同,5-氟脲嘧啶组抑制肿瘤生长最明显,榄香烯高剂量组较低剂量组抑瘤效果明显;MTT检测到榄香烯对H22细胞株具有抑制作用,呈剂量和作用时间的依赖性;Annexin V-FITC/PI法检测到早期凋亡细胞;TUNEL法检测到凋亡细胞。[结论]榄香烯可有效抑制小鼠肝癌H22细胞的增殖,其抑制癌细胞增殖的途径是通过诱导细胞发生凋亡而完成的。     

五味子粗多糖与顺铂抑制脑胶质瘤细胞增殖的作用

目的研究五味子粗多糖(FSP)单独或与顺铂联合抑制脑胶质瘤细胞增殖的作用。方法培养脑胶质瘤(SHG-44)细胞,应用四甲基偶氮唑(MTT)法检测FSP单独及联合顺铂抑制细胞增殖的情况。结果脑胶质瘤SHG-44细胞在FSP浓度200、400、800μg/ml时,均可以抑制细胞的增殖(P<0.05或P<0.01),且有浓度依赖性。FSP与顺铂联合作用时可以明显地抑制细胞的生长(P<0.01)。结论 FSP可以抑制胶质瘤SHG-44细胞的增殖,联合顺铂时可发挥协同作用。     

DOX-PBCA-NP的制备及其对脑胶质瘤SHG44细胞的抑制作用观察

目的 制备阿霉素(DOX)-聚氢基丙烯酸丁酯(PBCA)-纳米粒(NP),观察其在体外对脑胶质瘤SHG44细胞的抑制作用.方法 采用乳化聚合法制备DOX-PBCA-NP,透射电镜观察其形态,紫外分光光度法测定其载药量和包封率.将SHG44细胞加入不同浓度的DOX-PBCA-NP进行培养,流式细胞仪(FCM)测定细胞凋亡和细胞周期,倒置显微镜观察细胞生长情况.结果 DOX-PBCA-NP呈圆形,载药量与包封率分别为10.58%与87.43%.在同一DOX浓度的DOX组、DOX-PBCA-NP组与对照组相比,G1/G0期SHG44细胞增多、S期细胞减少(P＜0.01),DOX-PBCA-NP组的变化较DOX组更明显(P＜0.05).结论 用乳化聚合法制备的DOX-PBCA-NP形态一致,具有较高的载药量和包封率,体外对脑胶质瘤SHG44细胞的抑制作用较DOX增强.     

氯丙嗪协同榄香烯对PLA801D细胞的增殖抑制作用

目的 观察盐酸氯丙嗪与榄香烯联合作用对人肺癌细胞株(PLA801D)的增殖抑制作用及其对细胞周期各时相的影响.方法 应用MTT比色法检测单纯榄香烯组及氯丙嗪联合榄香烯组对PLA801D细胞的增殖抑制作用,流式细胞术法检测PLA801D细胞周期进程的变化及凋亡率.结果 不同浓度的榄香烯对PLA801D细胞增殖均有抑制作用,且呈剂量依赖性,细胞周期G1期细胞增多,S期细胞减少,G2周期细胞增多,凋亡率升高.结论 榄香烯对PLA801D细胞较为敏感,尤其是榄香烯联合氯丙嗪效果更佳,细胞增殖抑制率,升高阻滞G1期细胞向S期细胞转化进程,诱导PLA801D细胞凋亡.     

鸡贫血病毒VP3基因核酸疫苗治疗荷SHG-44人脑胶质瘤大鼠的实验研究

目的探索鸡贫血病毒VP3基因核酸疫苗（pVVP3）对SHG-44人脑胶质瘤生长的抑制作用。方法构建荷SHG-44人脑胶质瘤Wistar大鼠的肿瘤模型，随机分组给予不同的处理给药，观察治疗期间及治疗后的肿瘤生长情况，通过病理组织学、超微结构分析，检测pWP3在Wistar大鼠体内的抗肿瘤作用。结果pWP3治疗组肿瘤生长速度明显受到抑制，其抑瘤率达90．58％。病理组织学及超微结构观察在pWP3治疗组可见典型的凋亡特征。说明pVVP3对SHG-44人脑胶质瘤生长有抑制作用，可诱导肿瘤细胞凋亡。     

榄香烯诱导Hep-2细胞凋亡及其对细胞周期各时相的影响

目的探讨榄香烯对体外培养的人喉癌细胞株Hep-2细胞诱导分化的机制。方法Hep-2细胞经不同浓度的榄香烯（25、50、100μg/L）作用后,相差显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期改变,同时应用电子显微镜观察Hep-2亚细胞结构改变。结果对照组细胞呈梭形贴壁生长,榄香烯组细胞变圆,贴壁不佳,细胞数目变少。流式细胞仪结果显示,G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多,与对照组比较差异显著（P〈0.01或P〈0.05）。电子显微镜下可见细胞染色质趋边、凝集、线粒体肿胀,细胞核破碎,可见凋亡小体改变。结论榄香烯能够抑制体外培养的Hep-2细胞生长,阻止G1期细胞向S期转化进程,且呈剂量依赖性,诱导Hep-2细胞凋亡。