肾癌患者外周血Th1/Th2和Tc1/Tc2细胞因子的表达

目的检测不同临床分期肾癌患者外周血CD4+T细胞、CD8+T细胞中细胞因子的表达水平,分析Th1/Th2及Tc1/Tc2漂移对肾癌发生和转移的临床意义。方法用流式细胞仪检测60例不同分期肾癌患者和40例正常对照者外周血CD4+T细胞、CD8+T细胞分泌的IFN-γ、IL-2、TNF-α、IL-4、IL-6和IL-10的表达水平。结果与正常对照组相比,无症状型肾癌患者各细胞因子的表达无明显差异,而局限型患者Th1、Tc1类细胞因子IFN-γ、IL-2和TNF-α分泌水平降低(P<0.01),局部进展型和转移型肾癌患者Th1、Tc1类细胞因子IFN-γ、IL-2和TNF-α分泌水平明显下降(P<0.01);而Th2、Tc2类细胞因子IL-4、IL-6(P<0.05,P<0.01)分泌水平升高。结论 Th1/Th2偏移和Tc1/Tc2偏移促进了晚期肾肿瘤的进展和转移。T淋巴细胞亚群改变导致免疫功能失调,使肿瘤细胞发生免疫逃逸。     

Th17细胞/Treg细胞失衡在儿童过敏性紫癜发病机制中的作用

目的:探讨Th17细胞、CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)及其特异性转录因子RORγt和FoxP3在儿童过敏性紫癜(Henoch-Schonlein purpura,HSP)发病机制中的作用,为儿童HSP的治疗从调控Th17/Treg失衡作为切入点提供一条新思路。方法:以2012年2月——2013年3月我院(四川省人民医院)儿科诊治的初次发病的HSP急性期患儿40例作为研究对象,以及同期来我院体检的健康儿童40例作为对照,采用SYBR Green I实时荧光定量PCR技术测定外周血单个核细胞中RORγt mRNA和FoxP3 mRNA的表达水平;用流式细胞术测定外周血T淋巴细胞中Th17细胞和Treg细胞的表达水平;用双抗夹心ABC-ELISA技术测定血清IL-17A、TGF-β1、IL-2和IL-6浓度。结果:HSP组Th17细胞(2.75±0.60%)及RORγt mRNA(1.11±0.51)明显高于对照组Th17细胞(1.41±0.29%)及RORγt mRNA(0.65±0.24)(P0.01),而Treg细胞(4.56±1.26%)及FoxP3 mRNA(1.15±0.45)明显低于对照组Treg细胞(7.85±1.97%)及FoxP3 mRNA(2.32±1.13)(P0.01);HSP组血清IL-17A(40.40±11.81 pg/ml)、IL-6(75.38±27.19 pg/ml)、TGF-β1(309.41±81.03 pg/ml)与对照组IL-17A(20.32±10.70 pg/ml)、IL-6(25.16±8.31 pg/ml)、TGF-β1(236.34±66.01 pg/ml)相比明显升高(P0.01),而血清IL-2(25.60±13.19 pg/ml)水平与对照组(34.42±11.69 pg/ml)比较则降低(P0.01);在HSP组Th17细胞表达与RORγt mRNA、IL-17A、IL-6表达呈正相关,相关系数分别为0.887,0.938,0.934(P0.01);Treg细胞表达与FoxP3 mRNA,IL-2表达呈正相关,相关系数分别为0.834,0.932(P0.01)。结论:急性期HSP患儿存在Th17细胞、RORγt mRNA及IL-17A表达水平升高,Treg细胞和FoxP3 mRNA表达水平降低,Th17/Treg细胞的失衡;急性期HSP患儿存在血清TGF-β1、IL-6水平增高,IL-2水平降低,且Th17细胞表达水平与IL-6表达呈正相关,Treg细胞表达水平与IL-2表达呈正相关。     

流式细胞微球阵列术检测肝癌组织中细胞因子水平及其意义

目的应用流式细胞微球阵列术(CBA)检测原发性肝细胞癌组织中细胞因子的表达水平,探讨细胞因子改变在肝癌组织免疫微环境中的意义。方法收集36例原发性肝细胞癌的癌组织及非癌组织标本,采用流式细胞术检测组织中浸润免疫细胞的比例,CBA检测肝癌组织和非癌组织中Th1(IL-2、TNF-α、IFN-γ)、Th2(IL-4、IL-6、IL-10)、IL-17A细胞因子水平,并比较分析。结果肝癌组织中IL-6、IL-10和TNF水平分别为(292.49±325.29)pg/ml、(6.09±3.88)pg/ml和(9.55±5.60)pg/ml,比正常非癌组织的(6.82±2.69)pg/ml、(2.99±0.60)pg/ml和(3.50±0.77)pg/ml显著升高(P均<0.01),肝癌组织IL-2、IL-4及IL-17A水平分别为(4.73±0.26)pg/ml、(3.25±0.26)pg/ml和(2.05±0.29)pg/ml,显著低于正常非癌组织(P均<0.01)。而IFN-γ水平虽然较正常非癌组织高,但差异无统计学意义(P>0.05)。肝细胞癌患者CD3+T细胞、CD4+Th细胞在癌组织中的比例均高于相应的非癌组织,而CD8+细胞在癌组织中的比例较低(P<0.05);不同病理分期的细胞因子水平无统计学差异(P>0.05)。结论肝癌组织中抗肿瘤效应性细胞比例下降,Th1/Th2比例失衡,且向Th2方向漂移,导致肿瘤的发生、发展。肝癌组织微环境中细胞因子水平与肿瘤病理分期无关。     

脓毒症大鼠调节性T细胞凋亡对辅助性T细胞漂移的影响及血必净注射液的干预作用

目的 探讨脓毒症大鼠CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)凋亡对辅助性T细胞(Th)漂移的影响及血必净注射液的干预作用.方法 将Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、血必净组,每组8只.行盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症大鼠模型.于第3日采用免疫磁珠法分选各组CD4+CD25+Treg并培养12 h,用流式细胞仪检测Treg凋亡率及叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)和T淋巴细胞毒性相关抗原4(CTLA-4)的表达,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测白细胞介素-10(IL-10)的分泌量;再将CD4+CD25+ Treg与CD4+CD25-T细胞1∶1共培养,刀豆素A刺激68 h,ELISA检测Th1、Th2、Th17分泌的γ-干扰素(IFN-γ)、IL-4、IL-17水平.结果 正常组Treg凋亡率[(12.03±0.89)%]与假手术组[(9.48±2.17)%]比较差异无统计学意义;模型组Treg凋亡率[(5.87±0.44)%]明显低于正常组和假手术组;而血必净组的Treg凋亡率[(27.29±2.48)%]显著高于其他各组(P均<0.01).Foxp3、CTLA-4表达和IL-10分泌量随Treg凋亡率增加而减少,相关系数(r)分别为-0.878(P=0.042)、-0.877(P=0.042)、-0.743(P=0.010).与正常组比较,模型组IFN-γ、IL-4水平和IFN-γ/IL-4比值均明显升高[IFN-γ:(254.70±44.88)ng/L比(0.68±0.78)ng/L,IL-4:(8.82±0.61)ng/L比(3.48±0.98)ng/L,IFN-γ/IL-4比值:30.28±4.87比0.23±0.30,P均<0.01];而血必净组IFN-γ[(491.54±84.28)ng/L]和IFN-γ/IL-4比值(45.31±8.01)均显著高于模型组(P<0.01和P<0.05);各组间IL-17水平无明显差异(P均>0.05).结论 脓毒症时Treg凋亡率增加可减轻对效应T细胞的抑制功能,血必净注射液能有效促进脓毒症Treg凋亡,介导Th2向Th1漂移.     

再生障碍性贫血外周血Th17和CD4~+ CD25~+ Treg细胞表达情况研究

本研究旨在探讨成人再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)外周血Th17和CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)表达情况。45例初发AA患者分为轻型AA(n=25)和重型AA(n=25)两组,15例正常人作为对照。应用流式细胞术检测AA患者外周血中Th17和CD4+CD25+Treg的比例,ELISA检测血清及刺激后外周血单个核细胞(PBMNC)上清液中的白介素(IL-17)、γ干扰素(IFN-γ)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,并与正常对照组比较。结果表明:重型AA(SAA)组外周血Th17细胞比例,血清中IL-17及IFN-γ表达高于轻型AA(MAA)和正常人组,而重型AA组外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例降低。与轻型AA和正常对照相比,重型AA患者单个核细胞培养后上清液中IL-17及IFN-γ表达水平显著增加。AA患者血红蛋白计数与Th17细胞及血清IL-17表达呈负相关,与CD4+CD25+Treg表达成正相关。结论:重型AA患者外周血Th17细胞应答增强,而CD4+CD25+Treg细胞缺乏,贫血的严重程度与外周血Th17/Treg免疫应答失衡密切相关。     

过继妊娠诱导的CD4+CD25+调节性T细胞治疗不明原因复发性流产

目的 观察过继转输正常妊娠诱导的CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)对不明原因流产的作用机制及妊娠预后的影响.方法 以雌性CBA/J×雄性BALB/c为正常妊娠模型,以雌性CBA/J×雄性DBA/2J为自然流产模型,磁珠分选雌性CBA/J小鼠脾脏CD4+CD25+Treg细胞并流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析细胞纯度.将未孕CD4+CD25+Treg细胞和正常妊娠孕14d的CD4+CD25+Treg分别转输至流产模型孕4d(着床期)的雌性CBA/J孕鼠,于孕14d分别观察宿主孕鼠的胚胎吸收率并测定宿主外周血和母胎界面组织体外培养上清液中Th1Th2/Th3型细胞因子(IFN-γ/TGF-βI/IL-10)水平.结果 与对照组比较,过继转输正常妊娠诱导的CD4+CD25+Treg细胞的宿丰孕鼠的胚胎吸收率(11.32%)显著下降;外周血TGF-β 1/IFN-γ中位数(438)和IL-10/IFN-γ中位数(14)显著增加;母胎界而上TGF-β 1中位数(5899.02pg/mL)和IL-10中位数(158.85pg/mL)显著增加,IFN-γ中位数(18.46 pg/mL)显著下降.结论 孕早期过继转输正常妊娠诱导的CD4+CD25+Treg细胞疗法能诱导宿主母胎免疫耐受并调节细胞因子表达,有利于妊娠维持的Th2、Th3应答偏移.     

维生素D与稽留流产的免疫相关性研究

目的探讨维生素D与稽留流产的免疫相关性。方法选择2013年7月至2014年7月住院治疗的稽留流产患者73例作为观察组,另取同期人工流产的75例正常女性作为对照组。比较两组血清维生素D3水平、细胞免疫(CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)及Th1、Th2细胞因子水平差异,分析维生素D与稽留流产的免疫相关性。结果(1)观察组血清维生素D3水平低于对照组[(12.93±1.74)nmol/L vs(19.95±2.99)nmol/L],差异有统计学意义(P<0.01)。(2)观察组CD4+、CD4+/CD8+、IFN-γ、TNF-α水平均高于对照组,CD8+、IL-6、IL-10水平低于对照组,差异均有统计学意义(P均<0.01)。(3)单因素回归分析显示,维生素D3水平与CD4+、CD4+/CD8+、IFN-γ、TNF-α水平呈负相关,与CD8+、IL-6、IL-10水平呈正相关(P均<0.01)。结论稽留流产孕妇维生素D缺乏、细胞免疫功能亢进、辅助性T细胞向Th1细胞偏移,且维生素D3含量与免疫功能存在相关性。     

输卵管支原体感染不孕妇女输卵管液中TNF-α、IFN-γ和IL-6的水平

【目的】研究支原体感染导致的输卵管不孕患者输卵管液中TNF-α、IFN-γ和IL-6水平。【方法】对179例不孕妇女,应用微量肉汤稀释法检测输卵管液支原体感染情况,双抗体夹心酶联免疫吸附法检测TNF-α、IFN-γ和IL-6含量。【结果】179例不孕妇女中显示支原体阳性者97例,其中Uu阳性者91例,Mh阳性者23例,两种支原体均阳性者17例,未检测出支原体者82例。支原体阳性患者血清TNF-α含量为(171.1±21.4)ng/ml,阴性者血清TNF-α含量为(113.7±35.5)ng/ml;阳性患者血清IFN-γ含量为(70.4±11.2)pg/ml,阴性者血清IFN-γ含量为(38.9±12.9)pg/ml;阳性患者血清IL-6含量为(48.9±5.2)pg/ml,阴性者血清IL-6含量为(26.4±4.7)pg/ml;阳性者血清TNF-α、IFN-γ、IL-6均高于阴性者,差异有显著性(P<0.05)。且阳性组TNF-α和IL-6含量成正相关(r=0.893,P<0.05)。【结论】认为支原体感染引起的输卵管炎症导致不孕可能与TNF-α、IFN-γ和IL-6升高有关。     

原发免疫性血小板减少症患者Th17细胞和调节性T细胞检测的意义

目的探讨Th17细胞和调节性T细胞(Treg)在原发免疫性血小板减少症(ITP)患者中的意义。方法选取32例初诊ITP患者,其中位年龄49(18~70)岁;30例健康对照,中位年龄42岁(20~65岁)。用流式细胞术检测外周血Th17细胞及Treg细胞分别占淋巴细胞的比例;用ELISA法检测血浆中IL-6和IL-17的水平。并分析ITP患者Th17细胞、Treg细胞、IL-6和IL-17的水平与PLT的相关性。结果 (1)ITP患者Th17细胞比例明显高于健康对照(2.81%±1.33%vs.0.35%±0.75%,P<0.05);Treg细胞比例明显低于健康对照(0.70%±0.39%vs.1.26%±0.24%,P<0.05);Treg/Th17比值明显低于健康对照(0.27±0.17 vs.3.76±0.87,P<0.05);ITP患者血浆中IL-17和IL-6水平均明显高于健康对照,分别为(24.07±2.22 pg/ml vs.15.89±2.23 pg/ml,P<0.05)和(75.12±4.06 pg/ml vs.49.75±4.19 pg/ml,P<0.05)。(2)ITP患者外周血Treg细胞比例与IL-6、IL-17水平均呈显著负相关(r=-0.423,P<0.05;r=-0.456,P<0.05);IL-6与IL-17水平呈显著正相关(r=0.368,P<0.05);Th17细胞及Treg细胞呈显著负相关(r=-0.417、P<0.05)。Th17细胞比例与IL-6、IL-17水平不具相关性(r=-0.272,r=-0.104,P>0.05)。(3)ITP患者Th17细胞比例、IL-6水平和IL-17水平与血小板计数呈显著负相关(r=-0.365,P<0.05;r=-0.353,P<0.05;r=-0.464,P<0.01);Treg细胞比例与血小板计数不具相关性(r=-0.101,P>0.05)。ITP患者Th17细胞比例、IL-6水平与骨髓颗粒型巨核细胞比例呈显著正相关(r=0.371,P<0.05;r=0.359,P<0.05);Treg细胞比例、IL-17水平与骨髓颗粒型巨核细胞比例不具相关性(r=-0.230,P>0.05;r=-0.043,P>0.05)。结论 ITP患者Treg/Th17细胞平衡失调可能是影响其发生发展的一个重要因素,Th17细胞与疾病的严重程度相关。     

肝癌患者血清Th1/Th2相关因子与免疫功能的相关性研究

目的探讨肝癌患者血清Th1/Th2相关因子与免疫功能的相关性。方法选取2015年4月至2016年12月该院1 100例肝细胞癌患者和1 100例健康体检者分别作为研究组和对照组,比较两组血清干扰素γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-12、IL-4、IL-6、IL-10、C3补体、C4补体及CD4~+T细胞、CD8~+T细胞、CD19~+B细胞、CD16/65~+NK细胞水平,分析它们之间的相关性,并对Th1与Th2平衡关系进行研究。结果研究组IFN-γ、TNF-α、IL-12水平明显低于对照组,IL-4、IL-6、IL-10水平明显高于对照组(P0.05);研究组外周血CD4~+T细胞、CD16/65~+NK细胞水平明显低于对照组,CD8~+T细胞、C3补体、C4补体水平明显高于对照组(P0.05);两组外周血CD19~+B细胞水平比较,差异无统计学意义(P0.05)。肝癌患者血清IFN-γ、TNF-α、IL-12水平与CD4~+T细胞、CD16/65~+NK细胞、C3补体、C4补体水平呈正相关,与CD8~+T细胞水平呈负相关(P0.05);IL-4、IL-6、IL-10水平与CD4~+T细胞、CD16/65~+NK细胞、C3补体、C4补体水平呈负相关,与CD8~+T细胞水平呈正相关(P0.05)。受试者工作特征曲线分析结果显示,Th1/Th2比值若小于1,其恶性肿瘤发生发展的风险上升。结论 Th1/Th2相关细胞因子水平与机体细胞免疫和天然免疫功能关系密切,而肝癌患者存在Th1/Th2比值异常,并影响相关细胞因子的生成。