槐耳清膏对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨槐耳清膏对人肺腺癌A549细胞增殖抑制及诱导凋亡的影响。方法制备不同浓度的槐耳清膏(0、3、6、9 mg/ml)和羟基喜树碱100μg/ml作用于A549细胞,分别于24、36和48 h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果槐耳清膏与羟基喜树碱均可诱导A549细胞凋亡,槐耳清膏各浓度组与阴性对照组相比差异显著(P<0.05),且这种抑制存在浓度和时间依赖性,槐耳清膏浓度在3.0 mg/ml 36 h后抑制作用最强,羟基喜树碱组与之比较无显著差异(P>0.05),各浓度槐耳清膏组在与A549细胞作用36 h后达到抑制高峰。结论槐耳清膏在体外能抑制人肺腺癌细胞A549的增殖,诱导细胞凋亡作用。     

槐耳清膏诱导人肺腺癌细胞A549凋亡的实验研究

槐耳清膏是药用真菌槐耳菌质的热水提取物 ,临床上证实有一定的抗癌效果。为进一步探讨其抗癌机制 ,我们研究了槐耳清膏在体外诱导人肺腺癌细胞系Ａ5 49凋亡的作用。材料与方法　引进并培养人肺腺癌细胞系Ａ5 49细胞株。制备不同浓度的槐耳清膏ＰＲＭＩ 16 40含药培养液与接种成功、呈对数生长的Ａ5 49细胞共同培养 2 4ｈ后 ,每 6ｈ进行以下观察及测定 (设阳性对照组羟基喜树碱 10 0 μｇ/ｍｌ,共同孵育 10～ 12ｈ后进行测定 ) [1] 。 (1)荧光染色 :收集培养细胞 ,清洗并均匀涂片自然风干 2 4ｈ ,置于 0 0 5ｍｇ/Ｌ的Ｈｏｅｃｈｓｔ332 5 8…     

槐耳清膏对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及其机制

目的 槐耳清膏作用于乳腺癌MCF-7细胞后,探讨槐耳清膏对乳腺癌MCF-7细胞增殖影响及其作用机制.方法 不同浓度的槐耳清膏作用于乳腺癌MCF-7细胞及MCF-7细胞转染miR-126 inhibitor或者control后,采用RT-PCR检测miR-126及其Pre-miR-126的表达,噻唑蓝(MTT)法检测细胞...     

益肺解毒方联合顺铂对肺腺癌A549细胞增殖的影响

目的探讨益肺解毒方联合顺铂对人肺腺癌A549细胞增殖的影响。方法 (1)应用血清药理学方法制备益肺解毒方药物血清。60只SD大鼠,分为低、中、高剂量组及空白血清组,每组15只。给予低、中、高剂量益肺解毒方煎剂及等体积生理盐水灌胃3 d,然后腹主动脉取血,制备益肺解毒方药物血清。(2)应用噻唑蓝(MTT)法检测益肺解毒方含药血清、顺铂及将两者协同后对人肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用。益肺解毒方药物血清组分为3个剂量组(低、中、高剂量组)、空白血清组、顺铂组;联合组(低、中、高剂量益肺解毒方与空白血清联合顺铂)。将顺铂设为5个浓度梯度(1、2、4、8、16 mg/L)。另设空白对照组、空白调零组。每组设6个复孔,实验重复3次。计算各组对人肺腺癌A549细胞增殖抑制率。结果低、中、高剂量益肺解毒方药物血清对人肺腺癌A549细胞增殖均具有抑制作用(P<0.05),且剂量与抑制率呈一定量效关系。顺铂对人肺腺癌A549细胞增殖亦具有抑制作用,且随着浓度的增高,抑制率逐渐增高,作用呈现浓度依赖效应。中、高剂量益肺解毒方药物血清与顺铂协同,协同指数>1.15,数据结果提示益肺解毒方可以协同顺铂增加其疗效。而应用低剂量益肺解毒方则与顺铂协同效应为单纯相加。结论益肺解毒方联合顺铂对肺腺癌A549细胞具有协同增效作用。     

E1A基因对人肺腺癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的 探讨E1A基因对人肺腺癌细胞增殖的抑制作用与细胞周期的关系及作用机制。方法 利用细胞增殖曲线和裸小鼠体内致瘤性实验研究E1A基因对人肺腺癌细胞增殖的影响,采用流式细胞术分析人肺腺癌细胞周期,以蛋白印迹方法分析P16、P21、P53和cyclin B1水平变化。结果 转染E1A基因后,人肺腺癌细胞（Anip973-E1A）生长缓慢,体内致瘤性降低。Anip973-E1A细胞周期出现明显的S期抑制和G2/M阻滞,周期调控蛋白P16、P21、P53水平无明显变化,但cyclin B1表达明显下降。结论 E1A基因能显著抑制人肺腺癌细胞的体内外增殖,降低周期蛋白cyclin B1的表达,使细胞周期阻滞于G2/M,这可能与A1A基因抑制作用有关。     

弓形虫Ⅰ型和Ⅱ型ROP16蛋白对人肺腺癌A549细胞增殖、周期和凋亡的影响北大核心CSCD

目的探讨弓形虫Ⅰ型和Ⅱ型ROP16蛋白对人肺腺癌A549细胞增殖、周期和凋亡的影响及分子机制。方法将构建好的Ⅰ型和Ⅱ型ROP16重组慢病毒表达载体(A549-RH ROP16、A549-Me49ROP16)感染A549细胞,经嘌呤筛选稳定后获得单克隆过表达细胞株。实时荧光定量PCR和Western blot法鉴定过表达效果,免疫荧光法检测其定位。CCK-8法测定A549细胞的增殖活性。流式细胞术检测细胞凋亡和周期变化水平。Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Cleaved Caspases-3、Caspase9、p53和细胞周期相关蛋白p21、CDK6、CyclinD1的蛋白水平。结果Western blot和q-PCR检测结果显示,重组慢病毒表达载体转染A549细胞72h后其ROP16mRNA和蛋白都有明显表达(P<0.05)。cck8检测结果显示,Ⅰ型ROP16蛋白抑制A549细胞增殖(P<0.05)。流式细胞术检测显示,与对照组比较,Ⅰ型ROP16过表达组中细胞凋亡率下降20.69%,G1期细胞百分由原来的63.2%升高到83.2%。Western blot结果显示促细胞周期G1/S转化因子CDK6、CyclinD1蛋白表达明显降低,而细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p21表达明显升高(P<0.05);促凋亡因子Bax、Cleaved Caspases-3、Caspase9、p53蛋白的表达明显升高,抗凋亡因子Bcl-2表达受到抑制(P<0.05)。而Ⅱ型ROP16过表达组与对照组无显著性差异(P>0.05)。结论Ⅰ型ROP16蛋白过表达可诱导人肺腺癌A549细胞周期停滞和细胞凋亡。     

槐耳清膏对A549细胞增殖和自噬的影响

目的 观察槐耳清膏对人肺腺癌细胞系A549细胞增殖和自噬的影响,探讨其作用机制.方法 以A549细胞为研究对象,采用CCK-8法检测槐耳清膏对A549的增殖抑制率,用Western blot 方法检测自噬相关蛋白P62、LC3B表达的变化和mTOR信号通路分子表达的变化.结果 0.5 g/L及以上的槐耳清膏可明显抑制A549细胞的增殖,并且具有时间和浓度依赖性(P＜0.05).用不同浓度(1、2、4、6、8 g/L)的槐耳清膏作用A549细胞48 h可以降低P62表达水平,增加LC3B的表达,降低mTOR信号通路关键分子的表达水平.联合使用自噬抑制剂3-MA可以加强槐耳清膏对A549细胞的增殖抑制率.结论 槐耳清膏通过下调mTOR信号通路抑制A549细胞增殖,并且诱导A549发生自噬.联合使用槐耳和自噬抑制剂可能会更有效发挥槐耳抗肿瘤增殖的作用.     

重楼皂苷Ⅶ对耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞增殖的抑制作用

目的探讨重楼皂苷Ⅶ对耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞增殖的抑制作用。方法 MTT法测定重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞的细胞凋亡率及细胞周期时相分布的影响。结果重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞的增殖有明显抑制作用,抑制率随药物浓度增加而增高,具有明显的量-效关系(P<0.05)。同时发现,重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞作用48 h及72 h组与24 h组比较细胞增殖抑制率均明显提高(P<0.05),但72 h组与48 h组比较,无统计学意义(P>0.05)。流式细胞仪分析显示,浓度为50μmol/L及100μmol/L的重楼皂苷Ⅶ作用A549/DDP细胞24 h后,与阴性对照组比较早期凋亡细胞比例明显增高;且对细胞周期时相分布影响明显,细胞阻滞G2期。结论重楼皂苷Ⅶ对人肺腺癌A549/DDP细胞的增殖具有明显抑制作用,并呈明显的浓度依赖性,与时间有一定相关性。重楼皂苷Ⅶ可引起早期凋亡细胞比例明显增加,并明显影响A549/DDP细胞周期时相分布。     

槐耳清膏对缺氧结肠癌SW480细胞VEGF及HIF-1α表达的影响

目的: 观察槐耳清膏对体外培养人结肠癌SW480细胞系VEGF和HIF-1α表达的影响.方法: 体外培养人结肠癌SW480细胞48 h, 随机分为常氧对照组(NC组)、低氧对照组(HC组)和低氧槐耳组(HH组), HH组RPMI 1640培养基含槐耳清膏(终浓度1 g/L). 半定量RT-PCR检测SW480细胞VEGF和HIF-1α mRNA表达水平, Western blot检测两者蛋白表达水平.结果: HH组和HC组VEGF、HIF-1α mRNA表达水平均显著高于NC组(4.71±0.07, 4.54±0.02 vs 1.19±0.03;5.68±0.07, 5.58±0.05 vs1.21±0.05, 均P<0.05), 但HH组与HC组比较无统计学差异. HC组VEGF、HIF-1α蛋白表达均显著显著高于NC组(0.66±0.03 vs 0.38±0.02;0.58±0.04 vs 0.31±0.03, 均P<0.05), 与HC组比较, HH组VEGF和HIF-1α蛋白表达均显著下降(0.37±0.03, 0.30±0.05, 均P<0.05).结论: 槐耳清膏通过下调人结肠癌SW480细胞内HIF-1α和VEGF蛋白表达抑制肿瘤生成.     

诺帝对人肺腺癌细胞A549及其耐药株A549DDP体外生长的影响及机制

目的探讨诺帝对肺腺癌细胞系A549及耐顺铂株A549DDP的作用及机制,为诺帝的临床应用提供理论依据。方法 MTT法检测诺帝对A549及A549DDP细胞增殖的抑制作用,流式细胞术（FCM）分析细胞周期,免疫细胞化学SP法及原位杂交法分别检测细胞质内P糖蛋白及血管内皮生长因子（VEGF）mRNA表达。结果诺帝干预后A549及A549DDP细胞增殖明显受抑,细胞周期阻滞于G0/G1期,S期细胞减少;A549及A549DDP细胞质内P糖蛋白及VEGF mRNA表达均明显降低。结论诺帝对A549及A549DDP细胞生长均有抑制作用,其机制可能是抑制肿瘤血管生成及降低P糖蛋白表达。     

人参皂甙Rg3对肺腺癌A549细胞株信号传导相关基因表达的影响

目的探讨人参皂甙Rg3[20(R)-Rg3]对人肺腺癌A549细胞株的信号传导相关基因差异表达的影响。方法A549细胞株分2组进行培养，实验组培养液中含有10^-6mol／L的20(R)-Rg3，对照组不加药物，干预培养72h后用BiostarH-40s型基因芯片测定其基因差异表达。结果共检测到有效基因点数量3490个，20(R)-Rg3干预后有24个基因发生差异表达，其中2个细胞信号和传递蛋白基因以及2个细胞骨架和运动基因上调，原癌基因和抑癌基因下调的有3个，蛋白翻译合成的基因2个下调、1个上调，DNA合成修复重组和代谢相关基因1个、免疫相关基因1个下调，代谢基因1个上调，其他功能基因也受到一定影响。结论20(R)-Rg3可显著影响人肺腺癌A549细胞株信号传导等相关基因的差异表达。     

亚硒酸钠及维甲酸对肺腺癌A549细胞分化和增殖的影响

用亚硒酸钠、反式维甲酸单独或联合作用于肺腺癌A549细胞株，了解其对肺癌细胞的分化及增殖的影响。     

二十碳五烯酸联合依托泊苷对人肺腺癌细胞A-549增殖的影响

目的观察二十碳五烯酸(EPA)联合依托泊苷对人肺腺癌细胞株A-549增殖的影响。方法将培养的对数生长期A-549细胞随机分为对照组、EPA组、依托泊苷组、联合组。前两组分别加入生理盐水和EPA 40μg/mL;依托泊苷组一分为二,分别加入依托泊苷102、0μg/mL(分别为依托泊苷A组、B组);联合组一分为二,分别加入EPA 40μg/mL+依托泊苷10μg/mL(联合A组)、EPA 40μg/mL+依托泊苷20μg/mL(联合B组);另设空白对照组(空白组),仅加入细胞悬液。分别在加药后在244、8、72、96 h采用MTT比色法测算细胞生长抑制率,用流式细胞术观察各组在加药48 h时的细胞周期变化和细胞凋亡率,用免疫组化学SABC法检测各组细胞增殖核抗原Ki-67表达变化。结果各时点细胞抑制率对照组最低,联合B组最高(P均<0.05),联合A组与依托泊苷B组近似(P>0.05);随着加药时间的延长,细胞生长抑制率逐渐升高,呈时间依赖性。EPA组、依托泊苷组及联合组G0/G1期细胞减少,S期和G2/M期细胞增多;与对照组比较,EPA组、依托泊苷组及联合组细胞Ki-67表达水平下调(P<0.05),联合组较依托泊苷组下降水平更显著(P<0.05)。结论 EPA联合依托泊苷可抑制肺腺癌细胞A-549的增殖,其机制可能与其参与A-549细胞的脂质代谢、改变细胞周期和下调细胞中Ki-67表达有关。     

姜黄素抗人肺腺癌A549/DDP细胞增殖及诱导凋亡的作用

目的 研究姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖的抑制作用及其对细胞凋亡的影响.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)测定细胞对顺铂的敏感性和姜黄素对细胞增殖的抑制作用;倒置相差显微镜和荧光显微镜下观察细胞形态学的变化;应用原位末端标记(TUNEL)染色及流式细胞仪检测细胞凋亡情况;以Western blot分析凋亡相关蛋白表达变化.结果 实验中所用的A549/DDP细胞对顺铂耐药,耐药指数为10.82.姜黄素对A549及A549/DDP细胞增殖均有抑制作用,并且呈时间、浓度依赖性(P＜0.05),对两细胞株的半数抑制浓度分别为16.28/μmol/L和18.06μmol/L,差异无统计学意义(P＞0.05).姜黄素处理A549/DDP细胞后,细胞变形、缩小、脱落.Hoechst染色显示A549/DDP细胞核缩小、变形,致密浓染,荧光成团块分布.TUNEL法以及流式细胞仪分析结果示细胞凋亡率呈明显剂量依赖关系(P＜0.05).Western blot结果显示,随姜黄素浓度的增加,天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶8(cysteinyl aspartate-specific protease-8,caspase-8)p10蛋白水平增加.结论 A549/DDP细胞对姜黄素无抗药性,姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖具有抑制作用,并能诱导细胞凋亡.caspase-8的活化是其中的机制之一.     

人肺腺癌A549细胞系培美曲塞耐药细胞株模型的建立

目的建立人肺腺癌A549细胞培美曲塞耐药细胞株模型。方法以人肺腺癌A549细胞为亲本株,应用高浓度反复间歇法模拟临床给药模式建立人肺腺癌A549细胞培美曲塞耐药细胞株。MTT法绘制生长曲线、计算倍增时间,同时检测耐药株细胞对顺铂、依托泊苷、紫杉醇、长春新碱的药物敏感性。结果亲本株IC_50为(181.75±12.56)ng/ml,耐药株IC_50为(4930.40±129.71)ng/ml,最终获得耐药指数为27.18±1.16的人肺腺癌A549细胞培美曲塞耐药细胞株,命名为A549/PEM。A549和A549/PEM增殖速度接近,倍增时间分别为(62.78±1.06)h和(62.35±0.89)h(P=0.773)。A549/PEM同时对顺铂、依托泊苷耐药,耐药指数分别为(1.93±0.02)、(8.26±1.55);对紫杉醇、长春新碱敏感,耐药指数分别为(0.89±0.10)、(0.95±0.11)。结论本研究成功建立的人肺腺癌A549细胞培美曲塞耐药细胞株模型。     

黄芩苷对A549肺腺癌细胞增殖的抑制作用及机制

目的探讨黄芩苷对A549肺腺癌细胞株增殖的抑制作用及其相关机制。方法将浓度为0、25、50、100、200、400μmol/L的黄芩苷作用于经体外培养的A549人肺腺癌细胞株24、48、72 h,采用噻唑蓝(MTT)法检测黄芩苷对A549肺腺癌细胞的抑制率;收集30μmol/L黄芩苷孵育24 h后的A549肺腺癌细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定细胞周期蛋白(Cyclin)D1、增殖细胞核抗原(PCNA)及p21 mRNA的表达水平,采用Western印迹法检测Cyclin D1、PCNA及p21蛋白的表达水平。结果不同浓度的黄芩苷对A549肺腺癌细胞的增殖均具有不同程度的抑制作用,并且呈剂量效应、时间效应关系。30μmol/L黄芩苷(实验组)作用于A459肺腺癌细胞24 h后,Cyclin D1、PCNA及其蛋白表达水平低于对照组,p21及其蛋白表达水平高于对照组(P<0.05)。结论通过抑制Cyclin D1、PCNA的表达以及促进p21的表达,黄芩苷抑制A549肺腺癌细胞增殖。     

藤梨根提取物抗人肺腺癌A549细胞生长的实验研究

采用MTT检测法、集落形成试验、流式细胞术检测细胞凋亡及建立裸鼠移植瘤模型进行体内实验,观察藤梨根提取物对肺腺癌A549细胞的生长抑制作用。结果显示各浓度的藤梨根提取物对肺腺癌A549细胞均有较强的抑制效应,且呈现出明显的时相性和量-效依赖性;藤梨根提取物作用后G0～G1期细胞数增加,细胞出现凋亡,并随药物浓度增大作用增强;移植瘤体内试验显示藤梨根提取物高剂量组移植瘤生长缓慢,体积明显小于对照组及低剂量组。表明藤梨根提取物对人肺腺癌A549细胞在体内外均有生长抑制作用,并可诱导其细胞凋亡。     

RNAi技术对人肺腺癌细胞A549内源Survivin基因表达的影响

目的 为Survivin介导的肿瘤基因沉寂疗法的临床应用提供依据.方法 应用RNA干扰技术(RNAi)将靶向Survivin的基因片段插入载体后构建重组质粒,将其导入A549细胞,MIT法检测转染前后A549细胞增殖情况, RT-PCR及Western blot法分析转染前后Survivin mRNA和蛋白表达情况.结果 成功构建重组质粒pGenesil1.1-Survivin.转染重组质粒后Survivin mRNA和蛋白的表达明显降低,抑制率分别为65%和71%,细胞增殖受抑.结论 RNAi技术构建的重组质粒可明显抑制A549细胞内源Survivin的表达和mRNA转录,其在肿瘤基因沉寂疗法中可能起重要作用.     

靶向瘦素基因的siRNA对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的 通过构建慢病毒介导的靶向瘦素基因的小干扰RNA(siRNA),探讨瘦素对A549细胞增殖和凋亡的影响.方法 建立siRNA-a组、siRNA-b组及其各自阴性对照组和空白对照组(A549)5组细胞,分别于荧光显微镜下观察细胞5d和11d的生长情况.噻唑蓝(MTT)比色法测定空白对照组、siRNA-a组及其阴性对照组细胞1～6 d的生长情况,绘制生长曲线,比较各组细胞增殖差异.流式细胞仪分析各组细胞凋亡率,观察瘦素的siRNA对A549细胞凋亡的影响.RT-PCR和Western bloting方法检测各组细胞瘦素mRNA和蛋白表达水平.结果 siRNA-a细胞镜下形态基本正常,5d后荧光效率仍较高,感染稳定,但生长较阴性对照组及空白对照组细胞缓慢.siRNA-b细胞感染48 h后,镜下见细胞肿胀、变形,空泡出现,5d后见多量细胞碎片,凋亡小体形成,呈现凋亡状态,11d后可见细胞碎片,已近完全凋亡.MTT实验siRNA-a组细胞从第3天起生长比其他各组均缓慢(P＜0.01).流式细胞仪检测细胞凋亡率结果:siRNA-a组、siRNA-b组细胞凋亡率明显高于阴性对照组和空白对照组.RT-PCR和Western bloting结果 显示干扰组细胞瘦素mRNA和蛋白表达水平较阴性对照组和空白对照组明显下调.结论 慢病毒介导的siRNA能下调肺腺癌A549细胞瘦素基因的表达,从而抑制A549细胞增殖,促进其凋亡.由此可见,瘦素的siRNA有望成为肺腺癌基因治疗的新手段.     

诺帝对肺腺癌细胞系A549细胞增殖的影响

目的 探讨化学合成物诺帝对人肺腺癌细胞系A549细胞增殖的影响.方法 采用自行合成的化合物诺帝(终浓度为100 μmol/L)处理A549细胞,处理后12、24、48和72 h,用细胞培养、流式细胞仪检测、免疫组化及图像分析等方法检测诺帝对A549细胞的影响.结果 诺帝可使A549细胞增殖受抑制,对细胞周期抑制作用主要表现于G1→S期;诺帝处理后,A549细胞增殖细胞核抗原(PCNA)表达明显减弱.结论 诺帝对A549细胞的增殖有显著抑制作用,这种作用与其抑制PCNA有关.