一氧化氮合成酶研究进展

一氧化氮以其多样的生理、病理作用和广泛的组织分布,引起国内外学者的极大关注和兴趣。一氧化氮合成酶是体内催化L-精氨酸合成一氧化氮的酶,分三种类型。有关其蛋白质结构、基因结构特点、基因表达调节的研究进展迅速。     

肺脏中的一氧化氮和一氧化氮合成酶

一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）广泛分布于肺组织，催化左旋精氨酸生成一氧化氮（ＮＯ）；ＮＯ参与肺组织的生理功能；ＮＯ的生成异常与某些肺疾病发生有关；ＮＯＳ抑制剂和吸入ＮＯ是治疗某些肺疾病的有效措施。     

一氧化氮合成酶及其调节

一氧化氮合成酶及其调节刘景生，强文安（中国医学科学院基础医学研究所，中国协和医科大学基础医学院北京１００００５）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅ（ＮＯ）ｉｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｓｓｅｎｇｅｒａｃｃｏｕｎｔｉｎｇｆｏｒｅ...     

瘦素抑制H_2O_2诱导的大鼠心肌细胞凋亡

目的:观察瘦素(leptin)对H2O2诱导的大鼠心肌细胞凋亡的影响并探讨其作用机制。方法:应用脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记(TUNEL)法观察瘦素对H2O2诱导的大鼠心肌细胞H9c2凋亡的影响;应用Western blotting法观察瘦素、H2O2对caspase-3、胞外信号调控激酶(ERK)活性的影响。结果:(1)瘦素对H2O2诱导的H9c2细胞凋亡具有显著的抑制作用(与对照组比较P0.01),该作用可被ERK激酶抑制剂PD98059所阻断。(2)H2O2明显抑制ERK活性;而瘦素可激活ERK并部分阻断H2O2诱导的caspase-3激活。结论:瘦素对H2O2诱导的H9c2细胞凋亡具有抑制作用,其机制可能与其激活ERK信号途径有关。     

β-NGF减轻H_2O_2对HUVECs的损伤

<正>血管内皮细胞损伤被认为是导致动脉粥样硬化的重要病理原因之一,且多与氧化应激损伤有关。因此,如何保护氧化损伤后血管内皮细胞功能对于防治动脉粥样硬化等心血管疾病具有重要意义。神经生长因子β-NGF是一种多功能性神经营养因子,可以促进血管新生且与血管内皮功能密切相关,但其对氧化损伤后血管内皮细胞的作用及其机制尚未知[1]。因此本研究以人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)为研究对象,利用     

肌肽减轻H_2O_2诱导的N2a细胞损伤

目的探究肌肽对H2O2诱导的N2a细胞损伤的保护作用及其机制。方法将N2a细胞分为对照组、损伤组(给予H2O2)和肌肽保护组(预先加入肌肽)。用相差显微镜观察了细胞形态,用免疫荧光染色和免疫印迹实验检测细胞AKT1和FAS-L的蛋白表达。结果肌肽显著增加了N2a细胞增殖能力(P0.05);与对照组比较,H2O2损伤组细胞形态发生明显改变,细胞皱缩,胞膜变厚并出现发泡现象;而肌肽保护组细胞形态较损伤组明显改善;免疫荧光染色和免疫印迹实验显示,损伤组AKT1的表达显著低于对照组,FAS-L的表达显著高于对照组。而肌肽保护组AKT1的表达显著高于对照组,FAS-L的表达显著低于对照组(P0.05)。结论肌肽能够减轻N2a细胞对H2O2诱导的细胞损伤。     

低浓度H_2O_2预处理增强骨髓间充质干细胞活力

目的探讨过氧化氢(H_2O_2)预处理增强骨髓间充质干细胞(BMSCs)存活和抗凋亡能力的作用及机制。方法分离、培养、鉴定小鼠BMSCs。观察不同低浓度H_2O_2处理BMSCs 48 h后细胞的增殖,以及SDF-1及其受体CXCR4、CXCR7的表达;其次,观察经50μmol/L H_2O_2预处理BMSCs 12 h后,再经500μmol/L H_2O_2作用,或同时加入CXCR7抗体作用48 h,用Hoechst33342染核观察BMSCs凋亡率,Western blot检测Bcl-2、Bax、CXCR4、CXCR7和信号通路Akt/m TOR关键蛋白的表达。结果 25、50μmol/L H_2O_2能有效促进BMSCs增殖;50、100μmol/L H_2O_2能显著上调SDF-1、CXCR4、CXCR7表达;50μmol/L H_2O_2预处理干细胞能显著增强迁移能力,而CXCR7抗体能阻断此效应;50μmol/L H_2O_2预处理干细胞可显著抑制500μmol/L H_2O_2引起的损伤,凋亡细胞核由30.97%±3.71%降至16.23%±2.51%(P0.01),但仍然显著高于对照组(4.67%±2.37%)(P0.01);同样,预处理能显著下调Bax、上调Bcl-2表达(P0.05),上调Akt/m TOR通路关键蛋白磷酸化,CXCR7抗体则阻断此效应。结论H_2O_2预处理通过CXCR7受体活化Akt/m TOR信号通路增强干细胞存活和抗凋亡能力。     

用于ELISA的稳定的柠檬酸—H_2O_ 2溶液

常规的ELISA试验中,大都用邻苯二胺(OPD)溶于柠檬酸—H_2O_2溶液中作为辣根过氧化物酶反应底物。每次试验都要求新鲜配制,十分麻烦。我们试验了一种改进的柠檬酸—H_2O_2缓冲液,此溶液已在室温下放置6个月,效果仍好。     

仿生构建具有一氧化氮自催化生成功能的人工血管材料

目的 利用有机硒催化一氧化氮(No)供体释放NO的能力设计一种新型人工血管支架材料。方法固载有机硒催化剂的聚乙烯亚胺( SePEI)作为聚阳离子,与聚阴离子聚谷氨酸(PGA)在静电纺丝得到的纳米纤维支架聚己内酯(PCL)表面层层自组装,用紫外和原子吸收进行了定性和定量的表征层层自组装结构;在还原型谷胱甘肽(GSH)的存...     

一氧化氮合成酶在白血病细胞的表达

目的：为了探讨一氧化氮合成酶在ＣＤ２３白血病细胞的表达，以及ＣＤ２３与ＮＯ的关系。方法：采用ＣＲＴ－ＰＣＲ和ＦＡＣＳ技术及Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ放射自显影方法。结果：发现ＣＤ２３白血病细胞株可以表达ｉＮＯＳｍＲＮＡ和ｉＮＯＳ蛋白，同时ＣＤ２３可上调ｉＮＯＳ的表达。结论：ｉＮＯＳ可能与人ＣＤ２３白血病细胞的增殖和凋亡有关。     

诱生型一氧化氮合成酶分子生物学进展

一氧化氮(NO)作为一种新发现的信使分子,是近年研究的热点之一。细菌成分和(或)细胞因子可诱导某些细胞生成NO合成酶(NOS)合成NO,参与机体多种反应过程。可编码这种诱生型NOS(iNOS)的cDNA已从数种细胞在克隆成功。通过对cDNA编码蛋白同源性、功能区组成及表达的研究,使得对iNOS的认识更加深入。     

低浓度H_2O_2预处理增强小鼠BMSCs抗氧化应激损伤能力

目的探讨PI3K/Akt/m TOR信号通路介导的低浓度过氧化氢(H_2O_2)预处理增强骨髓间充质干细胞(BMSCs)抗氧化应激损伤的作用及机制。方法通过差速贴壁法分离培养小鼠BMSCs。BMSCs经或不经低浓度(50μmol/L)H_2O_2预处理12 h,再暴露于不同高浓度H_2O_2(200、250、300和500μmol/L)刺激24 h后,流式细胞术检测BMSCs凋亡;低浓度H_2O_2预处理12 h再暴露于300μmol/L H_2O_224 h后,Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3和cleaved-caspase-3的表达以及对PI3K/Akt/m TOR信号通路的影响。结果 H_2O_2呈浓度依赖性诱导BMSCs凋亡,50μmol/L H_2O_2预处理可降低200~500μmol/L诱导的BMSCs凋亡率,以及能降低300μmol/L诱导的促凋亡蛋白Bax和cleaved-caspase-3的上调和抗凋亡蛋白Bcl-2及磷酸化Akt和m TOR蛋白的表达的下调(P0.05,P0.01);PI3K抑制剂LY294002可明显地阻断H_2O_2预处理引起的上述变化。结论低浓度H_2O_2预处理通过活化PI3K/Akt/m TOR信号通路增强骨髓间充质干细胞的抗氧化应激损伤能力。     

乙酰左旋肉碱减轻H_2O_2诱导的PC12细胞氧化损伤

目的:探索乙酰左旋肉碱(ALC)对H_2O_2诱导PC12细胞氧化损伤的作用及其可能的机制。方法:采用H_2O_2诱导PC12细胞造成中度氧化损伤细胞模型,将不同浓度(100、200和400μmol/L)的ALC作用于体外培养的PC12细胞,CCK8法检测细胞的活力。实验分为:正常对照(control)组,模型(H_2O_2)组,低、中、高浓度ALC药物预处理(ALC+H_2O_2)组,共5组。流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测Nrf2和cleaved caspase-3的蛋白水平;免疫荧光染色法检测Nrf2的核转位情况。结果:不同浓度(100、200和400μmol/L)的ALC可显著抑制H_2O_2诱导的PC12细胞凋亡,以中浓度组效果最佳。与模型组相比,低、中、高浓度ALC组均可显著提高H_2O_2诱导的PC12细胞活力,抑制细胞凋亡(P0.05),显著下调cleaved caspase-3的蛋白水平(P0.05),上调Nrf2的表达水平(P0.05),促进胞浆的Nrf2向核内转移。结论:乙酰左旋肉碱对H_2O_2诱导氧化损伤的PC12细胞具有保护作用,抑制细胞凋亡从而提高其活力,其机制可能与激活Nrf2信号通路有关。     

H_2O_2和NO对滑膜成纤维细胞增殖反应的影响

采用~3H-TdR掺入法和MTT比色法研究过氧化氢(H_2O_2)和一氧化氮(NO)对兔滑膜成纤维细胞(SF)增殖反应的影响。结果表明,在使用亚适SF浓度(5×10~7细胞/L)时,~3H-TdR掺入法和MTT比色法检测结果一致。H_2O_22和亚硝基铁氰化钠(NO供体)在低浓度时促进SF增殖反应,而在高浓度时抑制其增殖反应,提示H_2O_2和NO对SF增殖反应具有双向调节作用。     

低浓度H_2O_2对肺微血管内皮细胞的迟发效应——凋亡

低浓度Ｈ２Ｏ２对肺微血管内皮细胞的迟发效应—凋亡上海医科大学病理生理学教研室（上海２０００３２）曹翔张明刘清行钱睿哲张国平金惠铭研究低浓度Ｈ２Ｏ２对大鼠肺微血管内皮细胞（ＰＭＶＥＣ）的损伤作用，及其与细胞凋亡的关系。体外培养大鼠肺微血管内皮细胞至融合...     

芥子碱对H_2O_2诱导BMSCs成脂分化的影响

目的:探讨中药有效单体芥子碱对过氧化氢(H_2O_2)诱导骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成脂分化的影响。方法 :先通过全骨髓培养法和流式细胞术鉴定并筛选未分化的大鼠BMSCs;一方面利用H_2O_2诱导BMSCs成脂分化建立模型,一方面采用CCK-8实验检测芥子碱对BMSCs的毒性作用;模型建立成功与芥子碱药用浓度确定后进行油红O半定量实验检测细胞中脂滴含量,筛选出最佳的药物浓度;随后采用油红O染色拍片直接观察药物干预24 h后对BMSCs成脂分化的影响,并且采用qPCR和Western blot实验检测BMSCs中成脂分化相关蛋白——脂肪细胞蛋白2(aP2)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和葡萄糖转运蛋白4(Glut4)的变化情况。结果:浓度为200μmol/L的H_2O_2作用1 h可诱导BMSCs成脂分化;CCK-8实验结果显示在芥子碱浓度40μmol/L的条件下对BMSCs的活力没有显著影响,同时结合油红O半定量实验结果筛选出芥子碱抑制其成脂分化的最佳浓度为15μmol/L;油红O染色实验观察到芥子碱组(15μmol/L)组脂滴较模型组数量明显减少,qPCR和Western blot实验结果亦显示正常对照组和芥子碱组aP2、PPARγ和Glut4表达均低于模型组(P0.01)。结论:芥子碱能够抑制H_2O_2诱导BMSCs向脂肪细胞分化,其机制可能与PPARγ/AMPK信号通路有关。     

雌激素对H_2O_2所致N2a细胞损伤的保护作用

目的探讨雌激素对氧自由基(H_2O_2)所致野生型鼠成神经瘤细胞株(N2a)损伤的保护作用及机制。方法应用H_2O_2制作N2a细胞凋亡的细胞模型,采用细胞计数、酶组织化学、免疫细胞化学方法,检测在雌激素作用下,神经细胞的形态结构、细胞活性和细胞早期凋亡的相关性变化。结果细胞计数结果显示,雌激素组的细胞数量[(0.60±0.12)个/mL(×10~4)]高于其它组,雌激素加H_2O_2组的细胞数量[(0.51±0.11]×104个/mL)明显高于H2O2组[(0.30±0.09)×10~4个/mL],组间差异有统计学意义(P0.05)。免疫细胞化学染色显示,Akt1阳性反应在雌激素组最强,在H2O2组最弱,但雌激素加H_2O_2组与正常对照组Akt1的表达没有明显差别,介于两者之间。Fasl呈相反变化。Caspase3酶活性检测结果显示,H_2O_2组Caspase3酶活性最高,雌激素加H_2O_2组Caspase3酶活性明显降低,其差别有统计学意义(P0.01)。结论雌激素有促进N2a细胞生长的作用,并可保护H_2O_2对N2a细胞的损伤且可以对抗凋亡。     

芒果苷对H_2O_2诱导的BRL细胞氧化损伤的保护作用

目的探讨芒果苷对过氧化氢诱导的正常大鼠肝BRL细胞氧化损伤的保护作用。方法选取正常大鼠肝细胞株BRL,通过过氧化氢诱导法制备细胞氧化损伤模型,实验设对照组、H_2O_2组、芒果苷组。HE染色、台盼蓝染色观察细胞形态变化和存活率变化;比色法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量;Western blot检测细胞中Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达变化。结果对照组BRL细胞贴壁生长良好,排列紧密。H_2O_2诱导后细胞形态不规则,胞膜皱缩,贴壁能力下降;细胞存活率降低;抗氧化酶SOD、GSH-Px活性降低,MDA含量升高(P0.05);Bax和Caspase-3蛋白表达升高(P0.05)、Bcl-2蛋白表达降低(P0.05)。与H_2O_2组相比,芒果苷可显著改善H_2O_2引起的细胞形态变化,提高细胞存活率;提高SOD、GSH-Px活性,降低MDA含量(P0.05);抑制Bax和Caspase-3蛋白表达(P0.05),上调Bcl-2蛋白表达(P0.05)。结论芒果苷对BRL细胞氧化损伤具有保护作用,其作用机制可能与其提高细胞清除氧自由基能力和抑制细胞凋亡有关。     

异丙酚对H_2O_2刺激下细胞内ASK1蛋白激活的影响

目的探讨在H2O2刺激下,异丙酚对细胞中Daxx-ASK1信号通路的影响。方法对体外培养的HEK293细胞分为对照组、H2O2刺激组以及H2O2刺激合并异丙酚处理组。采用免疫荧光、Westernblot及MTT等方法,观察异丙酚预处理对H2O2刺激下的HEK293细胞存活率以及细胞中Fas死亡结构域相关蛋白（Daxx）的亚细胞定位以及凋亡信号调节激酶1（ASK1）激活的影响。结果在200～500μmol/LH2O2刺激下,异丙酚在一定程度上能有效保护细胞,缓解抗氧化应激损伤。进一步实验发现,H2O2刺激细胞后,与H2O2刺激组相比,异丙酚处理组细胞中Daxx蛋白大部分仍然聚集在细胞核中,只有少部分移入到细胞浆中,相应ASK1的激活程度也较低。结论氧化应激刺激下,异丙酚可通过抑制细胞中Daxx蛋白的出核,进而抑制胞浆中ASK1蛋白的激活,从而起到保护细胞、抑制细胞死亡的效能。