一氧化氮合成酶阳性神经元在大鼠前脑的分布

用NADPH—d组织化学方法观察一氧化氮合成酶阳性神经元在大鼠前脑结构的分布和形态,结果显示在大脑皮质、纹状体、嗅球、杏仁核、基底前脑和下丘脑有较多一氧化氮合成酶神经元分布,这些神经元大多显示了Golgi样染色外观,它们尚不能与任何已知的神经递质类型神经元单一相对应.皮质、嗅球、纹状体和Calleja氏岛分别含有中等密度和密集的一氧化氮合成酶阳性纤维,一氧化氮合成酶阳性纤维较细,带有小的或中等大小的膨体,相互编织成疏密不等的纤维网.     

一氧化氮、内皮素的研究和应用现状

一、一氧化氮、内皮素的发现及其基本生物学性质 1.一氧化氮 血管内皮衍生的松弛因子(ARDF)发现于80年代初,1987年证实ARDF的化学本质是一氧化氮(NO)。NO合成底物为L—精氨酸.合成酶分两类。结构性NO合成酶(CNOS),诱生性NO合成酶(iNOS)。NO松弛血管平滑肌,抑制血小板的粘附聚集,参与神经信息的传递等。     

NO合成酶神经元在大鼠大脑皮质顶叶的形态特点及分布

<正>本实验选用成年雄性SD大鼠15只,经多聚甲醛灌注固定.通过顶叶,冠状切取2mm厚的脑组织块,冰冻切片20～30μm厚,用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADPH)脱氢酶组织化学染色,采用0.1M磷酸缓冲液pH7.4洗切片3次,入Triton—1000.3%室温下(20℃左右)5’～10’酶组织化学处理,Nitroblue Te-trazc lium 0.1mg/ml+1.0mg/ml NADPH(SIGMA公司),稀释液为0.1M Tris—HCl pH 8.0,37℃孵育60’,效果较好.观察结果:NO合成酶神经元各层均有,以Ⅴ—Ⅵ层最多,其次是Ⅱ—Ⅲ层,最少是Ⅰ怪.通过     

NO—神经和免疫系统的第二信使

5年前发现哺乳类细胞可合成一氧化氮(NO),这种结构简单的气体具有生理功能,从此对NO的研究甚为迅速,1989年9月14至15日在伦敦召开的有关讨论会,提供了丰富的资料。 NO合成酶分解L-精氨酸,生成NO和L-瓜氨酸。至少在巨噬细胞,NO的生物合成可能有5步,NO生物合成过程中依赖NADPH,Mg~(2+)或Ca~(2+)     

钙离子通道研究进展

<正> 70年代初期,细胞内透析技术的进展及其在神经细胞体的应用使人们首次得以在全细胞水平将Ca~(2+)电流与其它跨膜电流区别开进行研究。这些研究表明:(1),Ca~(2+)离子通道的活动是按m~2 Hodgkin-Huxley模式进行的;(2),首次指出细胞内Ca~(2+)对Ca~(2+)离子通道的功能是至关重要的;(3),Ca_2~+离子通道的一个基本特性是在细胞外有Ca~(2+)螯合剂存在的情况下,它转变为单价离子可透过的形式[Kostyuk and Krishtal, J.Physiol. (London)270:545(1977);ibid,P.569]。对后一现象的进一步研究发现Ca~(2+)本身可调节Ca_2~+离子通道的选择性,这一调节可能是通过将Ca~(2+)与Ca~(2+)离子通道的外口附近的高亲合     

CO_2气压在颈部腔镜手术中对脑组织ET、nNOS影响的实验研究

目的:探讨在颈部腔镜手术中CO2压力对兔脑组织内皮素(ET)、神经型一氧化氮合成酶(nNOS)的影响并讨论其对脑组织损伤的意义。方法:运用CO2气建立和维持兔颈部的手术空间,24只动物分成4组,每组6只,即3个气压组(4mmHg、8mmHg、12mmHg)和1个对照组(0mm-Hg)。维持CO2气压150min后,对兔脑组织进行ET、nNOS免疫组化染色并结合计算机图像分析系统对表达变化进行评定。结果:各CO2气压组与对照组相比脑组织ET、nNOS阳性表达的平均光度、平均灰度有显著性差异(P<0.05)。12mmHg气压组脑组织ET与其他气压组有显著性差异(P<0.05),并出现脑组织水肿;12mmHg气压组、8mmHg气压组脑组织nNOS与对照组、4mmHg气压组有显著性差异(P<0.05),同时出现脑组织电镜下结构改变。结论:在颈部腔镜手术中,随着CO2气压增高及手术时间的延长,脑组织ET、nNOS增加,造成脑缺血和脑组织损伤。     

哌唑嗪对原发性高血压病人红细胞Ca~(2+),Mg~(2+)-ATP酶和钙调素的影响

本实验观察了原发性高血压(EH)病人红细胞Ca~(2+)Mg~(2+)-ATP酶活性,红细胞和血浆钙调素(CaM)的变化及哌唑嗪对其影响。结果表明:EH病人红细胞基础和最大Ca~(2+),Mg~(2+)-ATP酶活性显著下降,并与血压呈显著负相关;红细胞CaM活性也显著降低并与最大Ca~(2+),Mg~(2+)-ATP酶活性呈显著正相关;经哌唑嗪治疗后,EH病人红细胞Ca~(2+),Mg~(2+)-ATP酶活性和CaM变化不显著,但血浆CaM有所降低。提示EH病人红细胞钙代谢异常与外周阻力增高有密切关系,哌唑嗪对细胞和体液CaM有不同影响。     

豚鼠窦房结受一氧化氮能神经支配的形态学观察

目的：观察豚鼠窦房结受一氧化氮能神经元及神经纤维支配的形态分布方式。方法：利用硫辛酰胺脱氢酶(NADPH diaphorase，NADPH-d)还原氮蓝四唑(nitro blue tetrazolium，NBT)，生存蓝色沉淀物显示一氧化氮合酶神经。结果：(1)窦房结周围含一氧化氮能神经节主要有三处：①右心房后壁处的窦房结心外膜下；②腔耳角处心外膜下；③腔静脉窦壁处窦房结心外膜下。结内未见NADPH—d阳性神经节或神经元；(2)窦房结内见有丰富的NADPH-d阳性神经纤维，呈细束状或嘭体串珠状，由外膜编织成网状到达内膜，部分直接起源于周围NADPH—d阳性神经元。结论：豚鼠窦房结一氧化氮能神经分布丰富，作为一种特殊的递质，NO可能直接或间接的调节着窦房结冲动的产生、释放和传递。     

活性氧簇介导血管紧张素Ⅱ对延髓神经元胞内游离Ca~(2+)水平的调节作用

目的:探讨活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)介导血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)对延髓神经元胞内游离Ca~(2+)的调节作用及其机制。方法:原代培养延髓神经元;免疫荧光双标法鉴定培养神经元的特征;给予Ang Ⅱ处理后,用二氢乙啶荧光探针法测定神经元ROS水平;同时或单独给予Ang Ⅱ和NADPH氧化酶抑制剂apocynin或自由基清除剂TEMPOL后,Fura-2/AM钙瞬变法记录神经元胞内游离Ca~(2+)的水平;CCK-8法检测神经元活性。结果:原代培养的延髓神经元多数为谷氨酸阳性的神经元;Ang Ⅱ(5μmol/L)可在10 min内显著升高神经元ROS水平(P0.01);给予Ang Ⅱ处理后延髓神经元胞内Ca~(2+)水平显著升高(P0.01);给予apocynin/TEMPOL预处理后,Ang Ⅱ引起的延髓神经元胞内Ca~(2+)的升高则被抑制(P0.05)。实验浓度的Ang Ⅱ对神经元无毒性作用。结论:ROS介导Ang Ⅱ诱导的延髓神经元胞内Ca~(2+)的升高作用,可能是Ang Ⅱ在中枢诱导氧化应激作用的潜在细胞内信号机制。     

阿霉素对兔心肾损伤与一氧化氮合酶表达

目的:探讨阿霉素(Adr)对心和肾损伤与一氧化氮合酶(NOS)表达。方法:用治疗剂量阿霉素静脉注射法建立兔心、肾损伤模型组,测定兔心输出量(CO)、左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP):取心和肾组织进行HE染色及超薄切片染色;NADPH组化染色并进行图像分析,观察动物心和肾组织中ALP、Ca~(2+)-ATP酶和 NOS的变化。结果:实验组CO、LVSP均明显低于对照组,LVEDP明显高于对照组;实验组心和肾组织的超微结构受损伤,Ca~(2+)-ATP酶活性明显下降,而NOS表达明显上调。结论:治疗剂量阿霉素能够降低心和肾组织中Ca~(2+)-ATP酶的活性和上调NOS的表达,是导致心和肾组织损伤的重要原因。     

28 大鼠孤束核中NADP神经元的分布

<正>菸草酞酰胺腺嘌吟二核苷酸磷酸黄递酶(Nuotinamide adenine dinucleotide phosphate diaphorase,NADPH)为一内源性酶,它能合成NAPH,近来再发现它是一氧化氮(NO)合成酶.NO激活鸟嘌吟核苷酸环化酶,提高谷氨酸受体中NMDA受体中cGMP水平.因此,NO被认为是一种气体性神经递质,和感觉学习、记忆等多种重要功能有关.孤束核是脑干内唯一传递内脏感觉的核团,全身大部分内脏传入投射都投射到孤     

L—型Ca~(2+)通道、NMDA受体在马桑内酯致痫中的作用:电生理和原位杂交研究

近年的研究提示,神经细胞内Ca~(2+)超载是某些神经元痫样放电产生的起始因素。但Ca~(2+)在马桑内酯(Coriaria Lactone,CL)致痫机制中的作用尚不清楚。本文选用L—型电压依赖性Ca~(2+)通道阻断剂硝苯吡啶和NMDA受体拮抗剂氯胺酮,分别阻断两类不同性质的Ca~(2+)通道,从整体、细胞、基因三个水平来系统地分析Ca~(2+)在CL致痫中的作用。     

神经调节蛋白(neuromodulin)

神经调节蛋白(neuromodulin,NeM)是一种神经组织特异性的钙调素结合蛋白,与钙调素结合有反Ca~(2+)依赖性。它与突触的可塑性、神经生长和再生有关。本文简述其分离纯化、结构与功能以及cDNA克隆与表达等方面的研究现状。     

钙调素与递质释放关系研究的进展

一、钙调素参与递质释放的研究 Ca~(2+)激发(trigger)递质释放是早为人们所知的事实。Na~(4+)内流(如神经末梢去极化时)所激发的递质释放,也是通过Na~+使细胞内贮存的Ca~(2+)释放而实现的。但在突触处介导Ca~     

细胞膜上钙转运分子机制的研究进展

Ca~(2+)浓度与细胞的代谢和细胞的功能具有密切的关系。在通常情况下,细胞外游离的Ca~(2+)浓度为10~(-3)M,细胞内游离的Ca~(2+)则为10~(-8)～10~(-7)M。为了维持细胞内如此之低的Ca~(2+)浓度,质膜上Ca~(2+)转运以及细胞内Ca~(2+)转运系统具有重要的作用。在10~3～10~4化学梯度(Ca_0~(2+)/Ca_i~(2+))范围和     

血管紧张素Ⅱ通过NADPH氧化酶源性氧化应激促进肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白1表达

目的 探讨氧化应激在血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的系膜细胞单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达中的作用.方法 体外培养人肾小球系膜细胞,应用即时定量PCR检测MCP-1表达;荧光探针2,7-二氯二氢荧光素乙酰乙酸(DCFDA)检测细胞内活性氧的产生;化学发光法检测尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶活性;Western blot检测p47phox和p67phox膜转位.24只雄性C57BL/6小鼠随机分为三组:正常对照组、模型组和夹竹桃麻素治疗组.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测尿中8-isoprostane和白蛋白水平.结果 Ang Ⅱ呈剂量依赖性诱导MCP-1表达,100nmol/L AngⅡ诱导的MCP-1表达是对照组的3.56倍.Ang Ⅱ呈时间依赖性和剂量依赖性促进系膜细胞活性氧产生.AngⅡ刺激3 min,系膜细胞内活性氧产生明显增加,至60 min达到高峰.1、10和100 nmol/L AngⅡ刺激60 min,活性氧产生分别是对照组的1.82、2.92和4.08倍.AT1R拮抗剂氯沙坦完全阻断AngⅡ诱导的活性氧产生,而AT2R拮抗剂PDl23319无抑制作用.NADPH氧化酶抑制剂夹竹桃麻素和二联苯碘几乎完全阻断AngⅡ诱导的活性氧产生,而线粒体复合体Ⅰ抑制剂鱼藤酮、黄嘌呤氧化酶抑制剂别嘌醇、环氧化酶抑制剂吲哚美辛、脂氧化酶抑制剂去甲二氢化愈创木酸、细胞色素P450氧化酶抑制剂酮康唑以及一氧化氮合成酶抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)对Ang Ⅱ诱导的活性氧产生均无明显影响.Ang Ⅱ显著刺激NADPH氧化酶活化及p47 phox和p67phox膜转位.氯沙坦、乙酰半胱氨酸(NAC)、夹竹桃麻素和二联苯碘阻断AngⅡ诱导的MCP-1表达.AngⅡ灌注后尿中8-isoprostane、白蛋白排泄及肾组织中MCP-1表达分别是对照组的5.45、16.65和2.50倍;肾组织中NADPH氧化酶活性以及p47phox和p67phox膜转位分别是对照组的2.69、2.97和2.67倍.NADPH氧化酶抑制剂夹竹桃麻素显著减轻AngⅡ诱导的蛋白尿和氧化应激,并抑制MCP-1表达.结论 NADPH氧化酶来源的活性氧调控AngⅡ诱导的MCP-1表达,抑制NADPH氧化酶活性可减轻Ang Ⅱ诱导的肾脏损害.     

葡萄籽原花青素体外抗血小板聚集的机制研究

目的: 研究葡萄籽原花青素(PC)体外抗血小板聚集的可能机制。方法: 应用血小板聚集仪研究PC、二亚苯基碘鎓(DPI,非特异性NADPH氧化抑制剂)和夹竹桃麻素(apocynin,特异性NADPH氧化酶抑制剂)对胶原诱导的健康志愿者血小板最大聚集率的影响。用化学发光仪检测PC对血小板NADPH氧化酶活性、一氧化氮(NO)含量和超氧阴离子(O₂^-·)水平的影响。用流式细胞术观察PC对血小板活化标志物PAC-1和CD62P表达率的影响。结果: PC(100 μmol/L)、apocynin(10 μmol/L)和DPI(100 μmol/L )均可显著抑制胶原蛋白诱导的血小板最大聚集率(P<0.01)。胶原蛋白激活的血小板NO含量显著降低,O₂^-·含量显著增加,100 μmol/L PC可使二者明显恢复(P<0.05)。添加了100 μmol/L PC的样本中,血小板NADPH氧化酶活性受到明显的抑制(P<0.01),血小板PAC-1 和CD62P表达率也显著降低(P<0.05)。结论: 葡萄籽原花青素可能通过抑制NADPH氧化酶的活性,进而影响血小板NO和O₂^-·含量,在一定程度上阻断血小板活化过程,最终达到抗血小板聚集的作用。     

IFN-γ在沙眼衣原体呼吸道感染中免疫防御机制的探讨

目的:检测与IFN-γ作用相关的酶吲哚胺2,3二氧化酶(IDO)、诱导性一氧化氮合成酶(iNOS)和NADPH氧化酶(ox)gp91在沙眼衣原体呼吸道感染中的表达及与机体防御的关系,探讨衣原体感染中IFN-γ免疫防御作用的机制.方法:用沙眼衣原体小鼠肺炎株(MoPn)通过鼻腔感染C57BL/6(H-2b)小鼠,用过氧化物酶连接的鼠抗衣原体脂多糖单抗染色HeLa 229细胞,检测衣原体在肺组织的生长;用RT-PCR检测衣原体感染后第7及14天小鼠肺组织IFN-γ、IDO、iNOS和gp91NADPH ox mRNA表达.结果:MoPn呼吸道感染后小鼠肺组织匀浆衣原体活性测定,于感染后第2天,HeLa 229细胞内可见有衣原体包涵体生长,IFU值增高,于感染后第7天IFU达最高水平,以后逐渐下降,至感染后21天基本恢复到基线水平.与未感染的对照组比较,Th1细胞因子IFN-γ于感染后第7天表达显著增高,感染后14天有所降低,但仍维持较高水平;同时衣原体感染可显著诱导与IFN-γ作用相关的三种酶IDO、iNOS和gp91 NADPH ox在小鼠肺组织的表达,感染后第7及14天,IDO,iNOS及gp91 NADPH ox的表达与对照组比较均有显著差异,其中IDO和gp91 NADPH ox于感染后第7天mRNA表达增高显著(P＜0.01),14天略有下降(P＜0.05).结论:衣原体呼吸道感染诱导Th1细胞因子IFN-γ mRNA高表达,参与宿主对衣原体的清除及机体免疫防御,此作用可能与其相应的酶IDO、iNOS和gp91 NADPH ox表达增高有关.     

神经系统中的一氧化氮和一氧化氮合酶

<正> 80年代初Funchgott等发现许多血管扩张剂(如ACh)的扩张血管作用是由于血管内皮受到刺激释放血管舒张因子,此因子引起血管平滑肌松弛,从而引起血管扩张;而并非由于激动其受体而直接产生者。后来的研究表明,血管舒张因子就是一氧化氮(NO)。近年来,业已从多种组织中提取了一氧化氮合酶(NOS)。在脑组织,已证实NOS就是依赖还原型辅酶Ⅱ的硫辛酸脱氢酶(NADPH Diaphorase,ND)。本文对NOS和NO的一些基本问题做一综述。     

血清氧化-还原态的监测及其与细胞损伤的关系

目的 :探讨如何评价体内的氧化还原状态及细胞的氧化还原态改变对细胞增殖、凋亡、损伤等的影响。方法 :测定正常人血清的NADPH/NADP+ 和GSH/GSSG比值 ,以了解该两项指标对机体氧化还原态的监测能力。并在培养的内皮细胞中加入各种浓度的氧化剂过氧化氢 (H2 O2 )和 /或还原剂N 乙酰 L 半胱氨酸(NAC) ,观察NADPH/NADP+ 和GSH/GSSG比值的变化与细胞活力及损伤之间的关系。以LDH释放率 ,细胞培养液中脂质过氧化物 (LPO)的浓度 ,细胞增殖活性、细胞凋亡率 ,观察细胞的增殖、损伤及其与氧化 还原态变化的关系。结果 :①在培养的内皮细胞中加入H2 O2 后 ,GSH/GSSG和NADPH/NADP+ 比值明显降低 ,细胞氧化还原状态偏向氧化应激方向 ,细胞出现氧化应激损伤 ;脂质过氧化物 (LPO)生成增多 ;LDH释放率增加 ;细胞增殖活力下降 ;凋亡率增高。氧化应激性损伤程度与GSH/GSSG和NADPH/NADP+ 比值呈负相关 ( p <0 .0 5 )。②在各浓度H2 O2 组中加入 0 .5mmol·L 1NAC ,GSH/GSSG和NADPH/NADP+ 比值恢复至接近对照组 ,上述氧化应激性损害也受到了不同程度的抑制 ,并在一定范围内呈量效关系。③单独加入NAC ,在高浓度NAC1mmol·L 1M和 2mmol·L 1时 ,GSH/GSSG和NADPH/NADP+ 比值明显升高 (VSControl,p <0 .0 1 ) ,细胞的氧化