脑肠肽Ghrelin对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠脑主动脉血管平滑肌细胞胞内钙浓度上升的影响

目的研究脑肠肽Ghrelin对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMCs）胞内钙离子浓度上升的作用,并初步探讨其机制。方法采用细胞培养的方法获得大鼠胸主动脉VSMCs,经Fluo-4-AM染色后,采用激光共聚焦显微镜技术分别检测加入AngⅡ后,1×10^-7mol·L^-1和1×10^-5mol·L^-1的Ghrelin对胞内钙荧光强度（FI）的影响,以及腺苷酸环化酶抑制剂Sq22536对Ghrelin作用的影响。结果①2×10^-8mol·L^-1的AngⅡ可以使得VSMCs胞内钙FI上升到静息状态的（165±76）％;②随后加入1×10^-7mol·L^-1的Ghrelin可以使FI下降到（117±34）％（P〈0．01vs①）;③加入1×10^-5mol·L^-1的Ghrelin可以使FI下降到（87±22）％（P〈0．01vs①,P〈0．05vs②）;④预先以1×10^-5mol·L^-1的Sq22536孵育,再加入2×10^-8mol·L^-1AngⅡ和1×10^-7mol·L^-1的Ghrelin,胞内FI为原来的（143±24）％（P〈0．01vs②）。结论Ghrelin能够降低AngⅡ引起的大鼠胸主动脉VSMCs胞内钙离子升高作用,其机制可能与激活胞内cAMP／PKA信号通路有关。     

川芎嗪甲酸对平滑肌细胞游离钙浓度的影响

研究川芎嗪代谢产物川芎嗪甲酸（CTPZ）对大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞（PCSMC）胞质内游离钙离子浓度的影响。方法：用新型Ca^2＋荧光染色剂Fluo-3／AM负载大鼠PCSMC,细胞分为氯化钾（KCl）和去甲肾上腺素（NE）作用组,应用激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）实时测定胞质内[Ca^2＋]的变化,分别观察不同浓度的CTPZ对高钾和NE诱导胞质内钙浓度升高的影响,并与母药川芎嗪作用相比。结果：静息状态下,CTPZ对大鼠PCSMC胞质内[Ca^2＋]无明显影响。1,10,100μmol·L^-1 CTPZ能显著抑制高钾诱发的细胞内的钙浓度升高的影响,抑制率分别为（39．84-4．3）％,（49．2±3．6）％,（58．2±3．9）％。也能抑制1μmol·L^-1 NE诱发钙库释放的细胞内[Ca^2＋]升高,抑制率分别为（20．8±3．9）％,（32．3±2．5）％,（43．7±3．2）％。结论：CTPZ对大鼠PCSMC电压依赖性钙通道和细胞内钙库释放的抑制作用,能降低PCSMC胞质内[Ca^2＋]水平,其作用效果比母药川芎嗪佳。     

醋柳黄酮对血管平滑肌细胞胞内游离钙浓度的影响

目的 :探讨醋柳总黄酮 (TFH)对血管平滑肌细胞胞内游离钙浓度 ([Ca2 ]i)的影响。方法 :采用新一代钙荧光探针Fluo 3 AM检测在高钾、去甲肾上腺素 (NE)、血管紧张素II(AngⅡ )刺激下单层兔主动脉平滑肌细胞内游离钙水平的改变 ,并与传统的钙拮抗剂Verapamil(Ver)进行对照研究。结果 :TFH(10 0mg·L-1)对静息状态的血管平滑肌细胞[Ca2 ]i 无明显影响 ;TFH(6 0～ 10 0mg·L-1)呈剂量依赖性抑制高K 去极化引起的 [Ca2 ]i 升高 ,与Ver作用相似 ,但弱于Ver ;TFH (80、10 0mg·L-1)对NE、AngⅡ通过受体介导引起 [Ca2 ]i 升高均具有明显的抑制作用 ;在无细胞外Ca2 存在下 ,TFH (80、10 0mg·L-1)对NE引起的 [Ca2 ]i 升高也具有一定程度的抑制效应。结论 :醋柳总黄酮通过对电压依赖性钙通道和受体操纵型钙通道双重抑制降低血管平滑肌细胞内游离钙水平 ,这可能是醋柳黄酮产生舒血管降压作用机制之一。     

西红花苷对牛主动脉平滑肌细胞内钙离子浓度的影响

目的研究西红花苷对血管平滑肌细胞内钙离子浓度的影响。方法以Fluo-3/AM作为Ca²⁺荧光探针,采用激光扫描共聚焦显微镜观察牛主动脉平滑肌细胞内钙离子浓度的变化。结果无论细胞外有无钙离子,西红花苷(1×10^-8,1×10^-7,1×10^-6 mol·L^-1)均能明显抑制1×10^-2 mol·L^-1 H₂O₂引起的细胞内钙离子浓度的升高,其抑制率含钙条件下分别为34.1%, 57.1%和74.3%(P<0.01),无钙条件下分别为26.2%,32.1%和50.0%(P<0.01);在胞外无钙的条件下,西红花苷 (1×10^-8,1×10^-7,1×10^-6 mol·L^-1)能抑制70 mmol·L^-1 CHCl₃导致雷洛丁敏感钙池的释放,其抑制率分别为27.8%, 27.8%和50.0% (P<0.01)。结论西红花苷能抑制胞外钙离子的内流及内质网上钙离子的释放。     

川芎嗪衍生物对人阴茎海绵体平滑肌细胞游离钙浓度的影响

目的研究川芎嗪（TMP）衍生物（A3 A6）对人阴茎海绵体平滑肌细胞（PCSMC）胞质内游离钙离子（Ca2+）浓度的影响。方法采用新型Ca2＋荧光染色剂Fluo 3/AM负载人PCSMC,应用激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）实时测定胞质内［Ca2＋］i变化。以母体川芎嗪和经典钙拮抗药维拉帕米 （Ver）为阳性对照,分别观察A3 A6对去甲肾上腺素（NE）诱导胞质内钙浓度升高的影响。结果在浓度0.2 mmol&#8226;L 1时,A3 A6对NE诱发的人PCSMC内［Ca2＋］i升高有明显抑制作用,抑制率分别为49.03%,54.83%,51.48%和50.31%,优于TMP（18.96%）,远大于Ver（16.51%）（P＜0.05）。结论A3 A6对人PCSMC电压依赖性钙通道均有抑制作用,能降低PCSMC胞质内Ca2+水平,其作用效果均比TMP强。     

植物雌激素α-玉米赤霉醇的心血管保护作用

植物雌激素α-玉米赤霉醇是一种广泛存在于植物中的非甾体类化合物,生物学活性类似于雌激素,是一种选择性雌激素受体调质。α-玉米赤霉醇通过调节血脂代谢、抑制血管平滑肌的增殖迁移、调节血管活性因子的合成和释放、抗氧化损伤等发挥其广泛的心血管保护作用,并且乳腺癌、子宫内膜癌的发病风险并无明显增加,为心血管疾病的预防和治疗提供了新的思路,很有希望成为雌激素的替代药物。     

肿瘤坏死因子-α对肾入球动脉平滑肌细胞胞内钙离子浓度的影响

目的观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对肾入球动脉平滑肌细胞(RASMCs)内钙离子浓度([Ca2+]i)的影响。方法应用筛网及酶消化法进行原代雄性SD大鼠RASMCs的分离与培养,将原代培养的RASMCs间接免疫荧光α-肌动蛋白(α-actin)抗体、平滑肌肌球蛋白重链(SM)单克隆抗体染色,进行鉴定。实验分组:A.无钙缓冲液组;B.无钙缓冲液+TNF-α组;C.无钙缓冲液+内皮素组;D.无钙缓冲液+2-氨基乙基二苯硼酸盐(2-APB)+内皮素组;E.无钙缓冲液+TNF-α+内皮素组;F.无钙缓冲液+TNF-α+2-APB+内皮素组。采用confocal显微镜测定单个活细胞内Ca2+荧光强度,计算细胞内[Ca2+]i。结果 A组和B组RASMCs内[Ca2+]i分别为(109.51±52.60)和(128.07±78.56)nmol/L,两组间无显著差异(P>0.05);C组和E组分别为(240.36±56.78)和(375.45±60.39)nmol/L,两组间有显著差异(P<0.01),与前A组和B组比较也均有显著差异(P<0.01);D组和F组分别为(101.66±48.03)和(116.35±53.48)nmol/L,与A组比较无显著差异(P>0.05)。结论 TNF-α可增强内皮素刺激引起的RASMCs内[Ca2+]i增加,且通过1,4,5-三磷酸肌醇受体(IP3R)发挥作用。     

醋柳黄酮对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞胞内游离钙浓度的影响

目的 :探讨醋柳黄酮 (TFH )、槲皮素(Que)、异鼠李素 (Isor)对自发性高血压大鼠 (SHR)及Wistar Kyoto大鼠 (WKY )血管平滑肌细胞(VSMC)胞内游离钙浓度 ([Ca2 + ]i)的影响。方法 :采用钙荧光探针Fluo 3/AM检测TFH及其主要单体Que和Isor,对培养的SHR及WKY的VSMC[Ca2 + ]i 水平在高钾 (K+ )、去甲肾上腺素 (NE)、血管紧张肽Ⅱ (AngⅡ )刺激下的改变 ,并与传统的钙拮抗剂维拉帕米进行对照研究。结果 :(1)TFH10 0mg·L- 1,Que 0 .1mol·L- 1,Isor 0 .1mol·L- 1对静息状态SHR的VSMC [Ca2 + ]i 有一定的抑制作用 (P <0 .0 1) ;而对WKY的VSMC [Ca2 + ]i无明显影响 (P >0 .0 5 )。 (2 )高K+ 使SHR[Ca2 + ]i 增加明显强于WKY(P <0 .0 1) ,TFH ,Que ,Isor明显抑制高K+ 去极化引起的SHR和WKY [Ca2 + ]i 升高 ,与维拉帕米作用相似 ,其对SHR [Ca2 + ]i升高的抑制作用明显强于对WKY(P <0 .0 1)。 (3)NE ,AngⅡ使SHR[Ca2 + ]i增加明显大于WKY (P <0 .0 1) ,TFH ,Que ,Isor对NE ,AngⅡ通过受体介导引起的SHR和WKY的VSMC[Ca2 + ]i 升高具有明显的抑制作用。 (4 )无细胞外钙存在下 ,TFH ,Que ,Isor对NE引起的SHR和WKY的VSMC[Ca2 + ]i 也具有一定程度的抑制效应 ,其对SHR[Ca2 + ]i 升高的抑制效应明显强于对WKY(P <0 .0 1)?     

氟哌啶醇季铵盐衍生物对血管平滑肌细胞钙离子的影响

目的　研究氟哌啶醇季铵盐衍生物 (F2 )对大鼠胸主动脉平滑肌细胞内钙离子荧光强度的影响。方法　用Ca2 +荧光染料Fluo 3 AM负载细胞 ,在激光扫描共聚焦显微镜上测定细胞内游离钙的变化。结果　在含氯化钙 (1 2 6mmol·L-1)的细胞外液中 ,30mmol·L-1KCl使细胞内钙荧光强度迅速增强 ,4种浓度F2 (0 1、1、10、10 0 μmol·L-1)作用 3min时 ,使KCl诱导细胞内钙荧光强度分别降至 6 4%± 9% ,(n=16 ,P <0 0 5 )、16 %± 5 % ,(n =2 0 ,P <0 0 1)、0 6 %±0 8% ,(n =2 0 ,P <0 0 1)、0 1%± 0 3 % ,(n =15 ,P <0 0 1) ,呈量效依赖关系。结论　F2 通过阻断细胞膜电压依赖性钙通道降低平滑肌细胞内钙浓度     

散结镇痛胶囊对PGF_(2α)诱发小鼠子宫平滑肌细胞收缩的抑制作用探讨

目的研究散结镇痛胶囊对前列腺素F_(2α)致原代小鼠子宫平滑肌细胞收缩变化的影响,初步探讨其对痛经的治疗作用。原代培养小鼠子宫平滑肌细胞并进行纯度鉴定,给药后监测动态钙离子变化,染色法观察细胞收缩的情况,免疫荧光法测定细胞钙调蛋白(calmodulin,CaM)、肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)、磷酸化的肌球蛋白轻链2(phosphorylation of myosin light chain 2,p-MLC_(20))的蛋白表达水平。结果平滑肌肌动蛋白免疫荧光染色呈强阳性。与PGF_(2α)组比较,散结镇痛胶囊组的钙离子荧光值明显降低(P≤0.05);细胞面积明显增加(P≤0.01);CaM的蛋白表达水平明显降低(P≤0.05);MLCK的蛋白水平有下调趋势;p-MLC_(20)的蛋白表达水平明显降低(P≤0.01)。结论散结镇痛胶囊能治疗痛经,可能与其能抑制平滑肌细胞内钙离子内流,缓解细胞的收缩,降低CaM,p-MLC_(20)的蛋白表达水平有关。     

小檗胺对培养的HeLa细胞内游离钙浓度的作用(英文)

目的:研究Ca~(2 )信号传导是否参与Hela细胞的信号传导过程以及小檗胺(Ber)对HeLa细胞内钙浓度([Ca~(2 )]_i)变化的影响。方法:Fluo 3-AM负载HeLa细胞,共聚焦法测定[Ca~(2 )]_i,结果以荧光强度(FI)表示。结果:(1)有外钙时,HeLa细胞静息FI为186±44,KCl、NE、Cal,及咖啡因均升高HeLa细胞的[Ca~(2 )]_i。(2)Ber处理后,静息FI无影响,但抑制KCl、NE和Cal引起的[Ca~(2 )]_i升高(P<0.01),FI变化的速率减慢,达峰值的时间延长。(3)无外钙时,咖啡因诱导的[Ca~(2 )]_i升高不被Ber抑制。(4)Ber的上述作用与Ver的作用相似。结论:HeLa细胞属于非兴奋性细胞,但部分生物学特征与兴奋性细胞相似,Ca~(2 )同样在其信息转导中发挥重要作用。     

吸烟、硝酸甘油对动脉粥样硬化家兔血管平滑肌细胞钙浓度的影响

目的研究吸烟、硝酸甘油对动脉粥样硬化血管平滑肌细胞胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的影响,探讨吸烟对动脉粥样硬化形成及硝酸甘油的生物效应的作用。方法复制家兔动脉粥样硬化模型,分离血管平滑肌细胞。Fluo-3/AM负载细胞,应用流式细胞仪检测血管平滑肌细胞[Ca2+]i,激光扫描共聚焦显微系统测定单个血管平滑肌细胞内Ca2+的时空变化。结果各组动物主动脉壁均见到程度不同的动脉粥样硬化斑块形成。动脉粥样硬化家兔血管平滑肌细胞[Ca2+]i明显升高(48.45±5.31,与生理盐水对照组38.09±2.57比较,P<0.01);吸烟能增加动脉粥样硬化家兔血管平滑肌细胞[Ca2+]i(56.48±2.99,与单纯动脉粥样硬化组48.45±5.31比较,P<0.01);硝酸甘油则能明显降低动脉粥样硬化家兔血管平滑肌细胞[Ca2+]i(41.91±3.16,与单纯动脉粥样硬化组48.45±5.31比较,P<0.05);吸烟能明显抑制硝酸甘油降低血管平滑肌细胞[Ca2+]i的作用(47.99±5.10,与硝酸甘油组41.91±3.16比较,P<0.05)。结论吸烟能明显增加动脉粥样硬化血管平滑肌细胞[Ca2+]i,硝酸甘油则能明显降低动脉粥样硬化血管平滑肌细胞[Ca2+]i,吸烟能抑制硝酸甘油的生物学效应。     

α-玉米赤霉醇对成骨细胞增殖、分化以及OPG和RANKL mRNA表达的影响

目的:探讨α-玉米赤霉醇(α-zearalanol,α-ZAL)对小鼠成骨样细胞MC3T3-E1增殖、分化及护骨素(osteoprotegerin,OPG)和NF-кB受体活化配体(receptor activator of nuclear factor-кB ligand,RANKL)mRNA表达的影响。方法:传代培养小鼠成骨样细胞株MC3T3-E1,采用不同浓度的α-ZAL作用于细胞72 h后,MTT法检测细胞增殖活性,PNPP法检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,RT-PCR法检测ALP,OPG及RANKL mRNA的表达水平。结果:10-6～10-12mol·L-1的α-ZAL可显著抑制成骨细胞的增殖(P<0.05);显著增加ALP活性(P<0.05),但不同剂量间存在作用时间差异;并且可显著上调成骨细胞内OPG/RANKL mRNA的比值(P<0.05)。结论:α-ZAL可抑制成骨细胞的增殖、促进其分化,并可通过上调OPG/RANKL mRNA表达比值抑制破骨细胞的形成,有望作为骨质疏松症的治疗药物。