生长抑素对人脐血CD34^＋细胞增殖能力的影响

目的探索生长抑素（SST）对造血干／祖细胞增殖能力的影响以及可能机制。方法采用免疫磁殊分选技术纯化人脐血CD34^＋细胞;SST孵育人CD34^＋细胞后,体外集落形成、扩增培养了解细胞增殖;ELISA测定细胞内外TNF-α、TGF-β水平;RT—PCR分析其受体亚型。结果在1×10^-6～1×10^-10mol／L浓度范围内,SST抑制人CD34^＋细胞集落形成及扩增倍数,其细胞集落形成抑制与SST浓度呈正相关（r=0．903,P〈0．01）。SST使CD34^＋细胞内、外TNF-α及TGF-β1浓度显著增加（P〈0．05）;人脐血CD34^＋细胞表达SST-3型受体。结论SST通过人脐血CD34^＋细胞上SST-3型受体介导,提高造血抑制因子TNF-α、TGF-β水平,抑制人CD34^＋细胞的增殖、维持其干细胞特性。     

脐血造血细胞体外扩增及在再生障碍性贫血治疗中的应用

目的：探索脐血造血细胞体外培养后生物学特性变化及输液后对再生障碍性贫血（AA）患者造血恢复和重建的影响。方法：将脐血造血细胞在多种细胞因子组合下体外培养，同时进行CD34＋细胞及粘附分子表达检测，3天后收集输液给用常规治疗方法无效的急，慢性AA患者共50例。结果：脐血造血细胞在体外培养3天后CD34＋细胞和粘附分子的表达均增加，输注后的治愈率达56％，总有效率88％，随访3－5天，50％以上患者已不再服用任何药物，各项血液指标均正常。结论：脐血造血细胞经恰当的体外培养后可明显提高CD＋细胞和粘附分子的表达及归髓能力，输液治疗AA具有良好的疗效，值得进一步尝试。     

过敏性紫癜患儿免疫功能变化与静注丙球疗效观察

目的：探讨过敏性紫癜（HSP）患儿的体液免疫，细胞免疫和细胞因子与发病机制的关系。方法：对124例混合型HSP患儿及125例健康儿童，应用单克隆抗体免疫荧光法测定T细胞亚群（CD3^ 、CD4^ 、CD8^ 、CD4^ \CD8^ ），琼脂单相免疫扩散法测定血清免疫球蛋白（IgG,IgA,IgM,IgD)，夹心法ELISA检测白介素IL（IL－1、IL－6、IL－8）及肿瘤坏死因子α（INF－α），用双盲随机法把混合型HSP患儿分成两组：Ⅰ组应用静注丙球（IVIG）300－400MG/KG.D，UBTK3－5D；Ⅱ组应用地塞米松0.3-0.5mg/kg.d，疗程5－7d，并进行疗效比较，结果：（1）HSP患儿，CD4^ 、CD4^ \CD8^ 明显高于对照组（P＜0．01），CD3^ 、CD8^ ，明显低于对照组（P＜0．01）；IgA,IgM,IgD明显高于对照组（P＜0．01）,IgG明显低于对照组（P＜0．01）；IL－1、IL－6、IL－8、TNF－α均明显高于对照组（P＜0．01）。（2）应用IVIG治疗的HSP患儿在皮疹消失时间，关节肿瘤缓解时间，腹痛缓解时间，便血消失时间等均明显短于应用激素治疗（P＜0．01）。结果：HSP患儿存在严重的免疫功能紊乱，IVIG治疗HSP患儿临床疗效明显优于激素治疗。     

妇科恶性肿瘤患者淋巴细胞亚群及相关细胞因子测定的意义

目的 测定妇科恶性肿瘤患治疗前外周血多种细胞因子、淋巴细胞亚群和淋巴细胞转化试验（LTT）并探讨其临床意义。方法 应用Elisa法、间接免疫荧光法及LTTI则定了患外周血中可溶性白介素－2（IL－2）及其受体（sIL-2R)、γ干扰素（IFN－γ）浓度变化及淋巴细胞在植物凝血素（PHA）作用后的转化率。结果 42例患入院时sIL-2R均明显升高，以卵巢癌最为显（P＜0.05)。患CD4^ 细胞显减少，CD4／CD8比例倒置，与对照组相比，外周血淋巴细胞对PHA刺激的反应明显低于正常水平，尤以卵巢癌更为明显（P＜0.01)，但患CD16^ 、CD56^ 、CD25^ 和HLA－DR＋细胞比例增加（P＜0.05)。IL－2和IFN－γ含量则无明显改变。结论 测定妇科恶性肿瘤患的sIL-2、淋巴细胞亚群和LTT有助于预后判断。     

IL-2单独或联合IL-12活化脐带血抗肿瘤效应研究

目的 研究白细胞介素2（IL－2）和白细胞介素12（IL－12）活化脐带血（ACB）的抗肿瘤效应和重建造血功能；探讨ACB性质和杀伤肿瘤细胞的机制。方法 测定ACB杀伤肿瘤细胞的活性；应用流式细胞术检测ACB细胞表面分化抗原，肿瘤细胞DNA含量及细胞凋亡的表达。结果 活化脐带血与L1210细胞、新鲜白血病细胞共同培养后显示有杀伤白血病细胞作用，以培养3－4天时最强；ACB细胞的CD3、CD8、CD16、CD56、CD71、CD95分化抗原表达与新鲜脐带血相比升高显著（P＜0．01）。L1210细胞、新鲜白血病细胞与ACB培养后分化抗原CD71、CD95表达下降，超二倍体、亚二倍体等异倍体减少，与对照组相比差异显示有统计学意义（P＜0．05）；ACB中CD34^ /CD38^-细胞群分化抗原表达与新鲜脐带血相比没有显著性差异（P＞0．05）。结论 ACB具有抗肿瘤效应，其中有细胞毒T细胞、自然杀伤细胞的作用，也有诱导肿瘤细胞凋亡机制参与；ACB还保留有重建造血的功能；IL－12ACB比IL－2ACB的活性强。     

脐血间充质干细胞对系统性红斑狼疮患者细胞因子分泌的影响

目的：体外探讨脐血间充质干细胞（UCB－MSCs）对系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMNCs）细胞因子分泌的影响。方法①UCB－MSCs的分离、扩增及鉴定；②健康志愿者及SLE患者PBMNCs的分离。③UCB－MSCs与植物凝集素（ PHA）刺激的PBMNCs共培养， ELISA法检测共培养前后各组细胞培养上清液中IL－6、IL－10、IL－2、IL－12、IFN－γ的含量。结果①UCB－MSCs呈梭形贴壁生长，能在体外连续传代，均表达CD13、CD44、CD166，不表达 CD34、CD45；②UCB－MSCs能显著下调 SLE患者 PBMNCs中 IL－10、IL－6的分泌而上调 IL－2、IL－12、IFN－γ的分泌。结论 UCB－MSCs在体外能改变SLE患者的Th1／Th2极化状态。     

Effects of tanshinone Ⅱ-A sullfonate on adhesion molecule expression of endothelial cells and platelets in vitro

探讨丹参酮ⅡＡ磺酸钠（Ｔａｎ）对培养人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）和人血小板表达粘附分子的影响．方法：用流动血细胞计数仪测定肿瘤坏死因子（ＴＮＦα）诱导人脐静脉内皮细胞ＩＣＡＭ１和凝血酶诱导人血小板Ｐ选择素的表达．结果：ＨＵＶＥＣ经ＴＮＦα处理后，明显增加细胞表面ＩＣＡＭ１的表达，增加ＨＬ６０细胞粘附到内皮细胞表面达加入细胞总数的３０％±６％（对照组为４６％±０７％）．在ＴＮＦα处理前，用Ｔａｎ（２５－２００μｍｏｌ·Ｌ－１）与ＨＵＶＥＣ共孵育，则Ｔａｎ剂量依赖性地抑制ＴＮＦα的作用．Ｔａｎ（２５－２００μｍｏｌ·Ｌ－１）与人血小板孵育后，可剂量依赖性地抑制凝血酶诱导人血小板表面Ｐｓｅｌｅｃｔｉｎ的表达．结论：Ｔａｎ可抑制内皮细胞和血小板表达粘附分子．     

足月妊娠妇羊水中4种细胞因子水平的检测及其意义

为探讨白细胞介素－6（IL－6）、白细胞介素－8（IL－8）、α－干扰素（IFN－α）、肿瘤坏死因子（TNF）在足月妊娠妇羊水中的水平及其与分娩发动的关系,随机选择孕足月顺产产妇（顺产组）32例及剖宫产妇（剖宫产组）38例,取两组外周静脉血及羊水、脐动脉血测定这4种因子水平并进行分析。结果表明,所有标本中均未检出IFN－α和TNF;顺产组羊水中IL－6、IL－8的检出率较剖宫产组明显增加,差异有非常显意义（χ^2＝7．125和4．19：P＜0．01和＜0．05）;顺产组IL－6、IL－8含量也较剖宫产组显增高。结论：足月妊娠产妇羊水中IL－6、IL－8的表达可能是启动分娩的因素之一。     

人骨髓间充质干细胞联合细胞因子的无血清培养体系体外扩增脐血干细胞研究

目的 探讨以人骨髓间充质干细胞(BM-MSC)为基质的无血清培养方法，体外扩增脐血造血干细胞(CBSC)，研究BM-MSC支持造血的功能和体外扩增时间的选择。方法 用含血小板生成素(TPO)、干细胞因子(SCF)、flt3／flk2配体(FL)和粒细胞-集落刺激因子(G-CSF)的无血清培养液，以人BM-MSC为基质，比较体外扩增脐血CD34^ 细胞7d及14d后总细胞(TC)、CD34^ 细胞和集落形成单位(CFU)数增加倍数。结果在以人BM-MSC为基质及TPO、FL、SCF和G-CSF这四种细胞因子作用下，经体外扩增7d后TC、CD34^ 细胞、CFU-GM和CFU-C数较起始分别增加了87、16、15和26倍；14d后较起始分别增加了427、38、125和104倍，与7d扩增倍数有显著性差异。结论以人BM-MSC为基质的无血清体外培养体系可以有效扩增CBSC，有潜在的临床应用价值，扩增时间应以14d为宜。     

自身免疫病患者外周血CD34+细胞动员、采集和纯化研究

目的：探讨自身免疫病患外周血造血干细胞动员、采集和纯化的效果及安全性。方法：对17例确诊自身免疫病患予环磷酰胺＋粒细胞集落刺激因子（G－CSF）动员外周血干细胞，CliniMACS系统对其中11例患外周血单个核细胞进行CD34^ 细胞阳性分选，流式细胞仪检测分选前后CD34^ 细胞纯度及淋巴细胞各亚群。结果：1例动员中并发尿崩症，2例动员失败。11例分选后CD34^ 细胞纯度平均96．1％，回收率70．14％；CD3^ 、CD19^ 、CD14^ 细胞分别去除10^3/kg,10^2/kg,10^3/kg。结论：对自身免疫病患采用环磷酰胺＋G－CSF方案动员外周血干细胞方法可靠，安全性好；外周血干细胞的纯化方法可获得高纯度和高回收率的CD34^ 细胞，并极大限度的去除T、B等细胞。     

单倍体移植治疗恶性血液病的临床研究

目的 探讨单倍体移植治疗恶性血液病的疗效.方法 在单倍体移植时采用阿糖胞苷、马利兰、环磷酰胺、甲基环已亚硝脲联合作为预处理方案,用环磷酰胺、重组人粒细胞集落刺激因子、环孢素、麦考酚酸酯、抗胸腺细胞球蛋白、白细胞介素11及甲氨蝶呤联合预防急性移植物抗宿主病（aGVHD）,治疗8例恶性血液病患者.结果 8例患者完全植入,白细胞＞1.0×10^9/L中位时间为16.3 d（＋12～＋20 d）,Ⅲ～Ⅳ度aGVHD的发生率为12.5%,中位随访时间28.8（4-65）个月,无复发,随访至2010年2月仍存活.结论 在单倍体移植治疗恶性血液病时采用阿糖胞苷、马利兰、环磷酰胺、甲基环己亚硝脲联合作为预处理方案,用环磷酰胺、重组人粒细胞集落刺激因子、环孢素、麦考酚酸酯、抗胸腺细胞球蛋白、白细胞介素11及甲氨蝶呤联合预防aGVHD是一种安全、有效的方法.     

改良预处理方案在单倍体移植治疗恶性血液病中的应

目的 探讨采用改良白消安-环磷酰胺预处理方案行单倍体移植治疗恶性血液病的疗效.方法 采用阿糖胞苷、白消安、环磷酰胺、甲环己亚硝脲及抗胸腺细胞球蛋白联合作为改良白消安-环磷酰胺预处理方案行单倍体移植治疗恶性血液病.结果 6例患者完全植入,＋12 d～＋20 d（回输干细胞前为一,回输干细胞后为＋WBC＞1.0×10^9/L,＋20 d～＋51 d PLT＞20×10^9/L,4例出现急性移植物抗宿主病,其中Ⅰ度1例,Ⅱ度2例,Ⅳ度1例,4例出现慢性移植物抗宿主病,无致命性感染发生,2例出现迟发性出血性膀胱炎,目前无恶性血液病存活13～63个月.结论 采用改良白消安-环磷酰胺顶处理方案行单倍体移植治疗恶性血液病是安全有效的方法.     

Toxicity of antimony trioxide nanoparticles on human hematopoietic progenitor cells and comparison to cell lines

Nanoparticles (NPs) are materials with one dimension in the range of 1–100 nm. The toxicity of NPs remains widely unknown and still poses concerns, due to the peculiar characteristics of materials in the nano-size range. We analyze the toxicity of seven NPs (Fe₂O₃, Fe₃O₄, Sb₂O₃, Au, TiO₂, Co, and Ag) on primary cultures of human hematopoietic progenitor cells from the bone marrow of healthy donors with CFU assays, and show that antimony oxide (Sb₂O₃) NPs and cobalt (Co) NPs have a toxic effect, while the other NPs have no effect at the tested concentrations (5, 25 and 100 μg/ml). While Co NPs suspension is toxic to both erythroid and granulocytic–monocytic precursors, Sb₂O₃ NPs at 5 μg/ml are specifically toxic to erythroid colony development, suggesting a highly selective type of toxicity. With liquid culture assays we show that Sb₂O₃ NPs impair the proliferation of erythroid progenitors, while no toxic effect is observed when Sb₂O₃ NPs are added during erythroid differentiation. CFU assays and liquid culture assays on seven human cell lines of hematopoietic origin (K562, HL-60, CEM, CEM-R, Thp-1, Jurkat, and Molt-4) show that, contrary to what observed on primary cultures of bone marrow progenitors, Sb₂O₃ NPs have no toxic effect on proliferation of any of the cell lines, raising concerns about the use of immortalized cell lines for nanotoxicology tests.     

HLA配型不合造血干细胞移植术后免疫功能重建及其与发生感染的关系

目的 观察HLA配型不合造血干细胞移植术后免疫功能重建及感染的情况.方法 选择14例接受HLA配型不合造血干细胞移植患者,分别以淋巴细胞亚群、血清球蛋白含量、移植后感染的情况为观察指标,监测移植后免疫功能与感染的关系.结果 患者移植后表现为CD4 和CD19 长期的减少,CD4 /CD8 的持续倒置,IgA恢复最慢.移植后1个月内感染率高,6个月后感染发病率减少.结论 HLA配型不合造血干细胞移植术后患者免疫功能的恢复需要数月至数年的时间,控制间质性肺炎及重症感染是降低感染病死率的关键.     

STR基因位点检查在异基因造血干细胞移植中的应用

目的 探讨短串联重复序列(STR)基因位点检查在异基因造血干细胞移植中的应用。方法 采用PCR方法对4例异基因造血干细胞移植、1例非清髓造血干细胞移植的供者和受者移植前、后STR基因进行检测，了解造血干细胞植入情况。结果 4例异基因造血干细胞移植的受者移植后STR基因型与受者移植前STR基因型不同，与供者STR基因型完全相同，提示供者造血干细胞的植入；1例非清髓造血干细胞移植的受者移植后STR基因型表现为患者移植前STR基因型和供者STR基因型的嵌合状态。结论 STR基因位点检查可以用来判断异基因造血干细胞移植的植入情况。     

A novel CXCR4 antagonist for hematopoietic stem cell mobilization

Background: Hematopoietic stem cell (HSC) transplantation is a treatment option for hematological malignancies. Current mobilization regimes frequently result in inadequate numbers of HSC for transplant therefore alternative methods of mobilization are required. Objective: The chemokine receptor CXCR4 and ligand SDF-1 are integrally involved in HSC homing and mobilization. Disruption of the SDF-1/CXCR4 axis by the CXCR4 anatagonist, plerixafor, is shown to improve HSC mobilization. Methods: The molecular and in vivo pharmacology of plerixafor and subsequent clinical development is reviewed. Results/conclusion: Preclinical studies demonstrate that plerixafor is a selective antagonist of CXCR4 and can rapidly mobilize HSC. Clinical trials demonstrated improved HSC mobilization when plerixafor was included in the mobilization regimen. These data suggest the potential for a significant role for plerixafor in hematological disease.     

异基因造血干细胞移植治疗儿童血液病

目的探讨异基因造血干细胞移植治疗儿童血液病的价值。方法采用异基因造血干细胞移植治疗11例儿童血液病，其中再生障碍性贫血2例、白血病7例、骨髓异常增生症1例、非霍奇金淋巴瘤1例；预处理采用氟达拉滨／环磷酰胺（FLU／CTX）或全身放疗／环磷酰胺（TBI／CTX），观察患儿的临床治疗效果。结果10例患儿均移植成功，9例患儿生存，其中7例无病存活，存活最长时间为5．5年；CMV感染3例，继发出血性膀胱炎1例，继发弥漫性GVHD1例。结论异基因造血干细胞移植是治疗儿童血液病的有效方法，值得临床进一步推广。     

Delivery of nucleic acid therapeutics by genetically engineered hematopoietic stem cells

Several populations of adult human stem cells have been identified, but only a few of these are in routine clinical use. The hematopoietic stem cell (HSC) is arguably the most well characterized and the most routinely transplanted adult stem cell. Although details regarding several aspects of this cell's phenotype are not well understood, transplant of HSCs has advanced to become the standard of care for the treatment of a range of monogenic diseases and several types of cancer. It has also proven to be an excellent target for genetic manipulation, and clinical trials have already demonstrated the usefulness of targeting this cell as a means of delivering nucleic acid therapeutics for the treatment of several previously incurable diseases. It is anticipated that additional clinical trials will soon follow, such as genetically engineering HSCs with vectors to treat monogenic diseases such as hemophilia A. In addition to the direct targeting of HSCs, induced pluripotent stem (iPS) cells have the potential to replace virtually any engineered stem cell therapeutic, including HSCs. We now know that for the broad use of genetically modified HSCs for the treatment of non-lethal diseases, e.g. hemophilia A, we must be able to regulate the introduction of nucleic acid sequences into these target cells. We can begin to refine transduction protocols to provide safer approaches to genetically manipulate HSCs and strategies are being developed to improve the overall safety of gene transfer. This review focuses on recent advances in the systemic delivery of nucleic acid therapeutics using genetically modified stem cells, specifically focusing on i) the use of retroviral vectors to genetically modify HSCs, ii) the expression of fVIII from hematopoietic stem cells for the treatment of hemophilia A, and iii) the use of genetically engineered hematopoietic cells generated from iPS cells as treatment for disorders of hematopoiesis.     

氨磷汀与峰龄多糖对外周血造血干细胞的刺激增殖及协同作用

目的研究氨磷汀(WR-2721)和峰龄多糖(FLPS)对人外周血造血干/祖细胞的刺激增殖及协同作用.方法分离单个核细胞(MNC),进行甲基纤维素半固体培养,观察氨磷汀和峰龄多糖对骨髓粒-巨噬细胞集落(CFU-GM)的作用.结果经0.01～5.0 mmol/L氨磷汀37℃作用30分钟的MNC以及峰龄多糖0.5～25μg/ml时CFU-GM集落数均显著高于对照组(P＜0.05),且集落较大.CFU-GM平均集落数在对照组、WR-2721(1 mmol/L)组、FLPS(5μg/ml)组和AMF+FLPS组每105MNC分别为91.4±50.4、119.8±62.9、143.2±76.4和179.2±97.6,各组与对照组相比,差异有显著性(P＜0.05);AMF+FLPS组CFU-GM集落数显著高于AMF和FLPS组(P＜0.01和＜0.05).结论氨磷汀和峰龄多糖对CFU-GM具有明显的刺激增殖及协同作用.     

巴西蘑菇多糖对造血干、祖细胞生成的影响

目的:探讨国产巴西蘑菇多糖对造血干、祖细胞生成的影响及其作用机制。方法:应用造血细胞培养技术、流式细胞仪(FACS)、逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)观察药物对小鼠骨髓细胞及人脐血单个核细胞的影响。结果:经过巴西蘑菇多糖处理的动物,造血干细胞(CFU-S)、粒-单祖细胞(CFU-GM)、红系祖细胞(CFU-E)和纤维母细胞(CFU-F)各组数值明显上升,与对照组比较,P均<0.01;FACS检测显示,实验组CD33+细胞明显上升,在诱导的d 7达高峰;经RT-PCR检测结果表明,巴西蘑菇多糖诱导人脐血单个核细胞48 h后,粒单细胞克隆刺激因子(GM-CSF)mRNA的表达量是对照组的2.72倍。结论:巴西蘑菇多糖可促进造血干、祖细胞生成并可促进人脐血单个核细胞GM-CSF基因表达。