不同多发性骨髓瘤细胞系移植小鼠的成瘤情况分析

目的:探讨在无γ射线照射条件下,几种常见的多发性骨髓瘤(MM)细胞系移植小鼠的成瘤情况,以及构建MM疾病模型便于体内实验研究。方法:利用MM细胞系LP-1、OPM2、RPMI 8226和MOLP8,以及通过转染带有Luciferase荧光素酶的慢病毒载体得到的RPMI-Luc-Puro(载体带Puromycin抗性基因)、RPMI-LucmCherry(载体带mCherry标记基因)和MOLP8-Luc-Puro稳定细胞系,经皮下或者尾静脉植入NOD/SCID或NSG小鼠。观察其肿瘤生长,测量肿瘤大小;应用流式细胞术检测小鼠尾血中CD138~+肿瘤细胞的比例;应用血清免疫固定电泳检测外周血中的游离轻链;免疫组织化学染色法鉴定肿瘤类型;应用活体成像技术监测全身肿瘤信号。结果:LP-1和OPM2细胞皮下植入NOD/SCID小鼠各21只,观察至7周均未见成瘤。RPMI 8226细胞皮下植入的NOD/SCID小鼠15只,1周后可观察到肿瘤形成,截至7周时,成瘤率80%(12/15)。血清免疫固定电泳可以检测到λ轻链,尾血中未检测到CD138~+的肿瘤细胞;免疫组织化学染色支持浆细胞肿瘤。RPMI-Luc-Puro、RPMI-Luc-mCherry和MOLP8-Luc-Puro细胞皮下植入NOD/SCID小鼠各2只。活体成像显示RPMI-Luc-mCherry细胞植入小鼠无明显肿瘤信号,RPMI-Luc-Puro和MOLP8-Luc-Puro细胞植入小鼠1周时能探测到明显肿瘤信号,但前者2周时信号消失,后者观察至3周时肿瘤信号仍存在;这两种细胞皮下植入NSG小鼠时,两者的肿瘤信号均能持续存在。RPMI 8226、RPMI-Luc-Puro、RPMI-Luc-mCherry和MOLP8-Luc-Puro细胞经尾静脉植入NOD/SCID或NSG小鼠均未出现全身播散的肿瘤信号,仅MOLP8-Luc-Puro细胞植入的1只NSG小鼠出现过短暂的全身播散信号。结论:在无γ射线照射条件下,MM细胞系植入小鼠可以成瘤,有局部成瘤倾向,全身播散能力低;不同细胞系成瘤性存在较大差异,载体改造会降低细胞的成瘤能力;免疫缺陷更严重的NSG小鼠有利于肿瘤生长。     

人-NOD/SCID小鼠异种急性移植物抗宿主病模型的建立

目的 建立一种人-NOD/SCID小鼠嵌合的异种急性移植物抗宿主病(aGVHD)模型.方法 NOD/SCID小鼠给予亚致死剂量的60Coγ射线全身照射后经尾静脉输注动员后人外周血单个核细胞(PBMNC),移植后每周检测血常规,采用流式细胞术检测人CD45+细胞的比例,分析人淋巴细胞亚群,取各脏器组织检测人、鼠保守基因序列片段,并进行免疫病理分析.结果 移植后1周起NOD/SCID小鼠的血细胞中有明确的人CD45抗原表达,随人CD45+细胞比例增高逐渐出现以体重减轻和血细胞减少为主要表现的异种急性移植物抗宿主病(X-GVHD),人-NOD/SCID嵌合体的基因组DNA中可扩增出入β-globin及小鼠保守基因HYPSIN序列片段,移植后6周生存率约为14%;人-NOD/SCID嵌合体中以人T淋巴细胞的植人为主,CD4+/CD8+细胞比例倒置;X-GVHD以人的淋巴细胞浸润为主,肝脏与肺脏是主要靶器官.结论 NOD/SCID小鼠预先给予亚致死剂量照射,再经尾静脉输注入PBMNC,能够建立X-GVHD模型.临床表现主要为植入率相关的体重减轻和血细胞减少,病理表现靶器官主要为肝脏和肺脏.该模型建立方法简便,X-GVHD发生时间(2～3周)较早,发生率(94%)高,便于在此基础上进行aGVHD防治的动物实验研究.     

肠道淋巴瘤临床病理、免疫表型及与EB病毒相关性的研究

目的研究肠道非霍奇金淋巴瘤的临床病理、免疫表型及与EBV感染的相关性。方法应用多种抗体标记B淋巴细胞(CD20，CD79a，CD45RA，k，λ，CD5，CD10，bcl-2，cyclin D1)和T淋巴细胞(CD3g，CD8，CD45RO，CD56，GramB，TIA)，同时进行细胞增殖活性的检测(Ki-67)、免疫组织化学染色(SABC法)、EBV寡核苷酸探针(EBER)原位杂交。结果60例中，免疫组化证实B细胞性淋巴瘤48例(80％)，T细胞性淋巴瘤12例(20％)。EBV—EBER原位杂交40例中6例阳性表达，均为T细胞性淋巴瘤，阳性细胞占肿瘤细胞的30％～80％，34例B细胞性淋巴瘤：EB病毒检测阴性。结论肠道淋巴瘤以B细胞淋巴瘤多发，并以惰性的黏膜相关性边缘区B细胞性淋巴瘤多发，与EBV无相关性。肠道T细胞性淋巴瘤侵袭性较强，且与EBV相关性较高。     

冻存后脐血DC介导的食管癌疫苗体内致瘤性研究

目的：探讨低温冻存后脐血树突状细胞（DC）与EC109食管癌细胞融合疫苗体内致瘤性。方法：免疫磁珠标记法分选人脐血CD34^＋干细胞，细胞因子扩增培养为成熟DC，聚二乙醇（PEG）融合法制备EC109-DC融合疫苗。流式细胞术双阳性标记鉴定融合疫苗，-80℃低温冰箱冻存，3周后融冻，流式细胞术再次鉴定融合疫苗，行体内致瘤性研究。结果：（1）融冻后疫苗体外半悬浮生长；同时高表达FR和CD80；（2）融冻后疫苗接种于SCID小鼠俸内未见肿瘤形成，脾、肺和肝等器官未出现肿瘤病变。结论：冻存未破坏融合疫苗的完整性，融冻瘤苗无体内致瘤性，其亲本EC109细胞的恶性生长特征已丧失。安全可靠。     

Bcr/Abl融合基因阳性、Flk1+CD34-慢性粒细胞白血病细胞体内生物学特性的研究

目的体内研究慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓中BCR/ABL+、Flk1+CD34-细胞的白血病干细胞特性。方法取CML患者骨髓,淋巴细胞分离液分离单个核细胞,常规接种培养,免疫磁珠分选CD45-、GlyA-及CD34-的贴壁细胞,流式细胞术鉴定其免疫表型,将其输入经亚致死量照射的NOD/SCID小鼠体内,检测人源细胞的植入及分化情况。结果植入的CML患者骨髓源BCR/ABL+、Flk1+CD34-细胞在受体小鼠体内分化为白血病细胞,受体小鼠骨髓细胞中存在Bcr/Abl融合基因阳性细胞。结论Bcr/Abl融合基因阳性Flk1+CD34-细胞具有白血病干细胞特性。     

EBV阳性的原发性中枢神经系统弥漫性大B细胞性淋巴瘤临床病理观察

目的探讨EBV阳性的原发性中枢神经系统弥漫性大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)的病理诊断和临床病理特点。方法对1例EBV阳性的中枢神经系统DLBCL的临床病理特点、免疫组化标记以及影像学特点进行详细分析,并结合相关文献进行复习。结果患者T1WI示低信号均质团块,T1WI增强示高信号均质团块,T2WI示等信号均质团块。肿瘤周围轻度水肿。肿瘤由大淋巴细胞构成,呈浸润性生长,肿瘤间质少,可见血管套袖结构,瘤细胞呈中心母细胞形态,可见数个小核仁,核分裂象易见。免疫组化肿瘤细胞LCA、CD20、CD79α、bcl-6和EBV(+),Ki-67约60%。结论 EBV阳性的原发性中枢神经系统DLBCL是罕见的恶性肿瘤,其预后较差;诊断需依靠MRI、病理、免疫组化等综合手段;化疗和放疗联合治疗可提高其生存期。     

类似人弥漫型大B细胞淋巴瘤小鼠模型的免疫学特征

本研究建立类似人弥漫型大B细胞淋巴瘤的BALB／c小鼠模型并探索其免疫学特征。将鼠源性B淋巴瘤细胞株（A20细胞）接种于同源BALB／c小鼠以建立B细胞淋巴瘤鼠模型。实验分为3组：成瘤小鼠组,未成瘤小鼠组和正常小鼠组（对照组）。用流式细胞术检测肿瘤细胞CD抗原表达及成瘤小鼠、未成瘤小鼠和对照正常小鼠的外周血和脾脏的T／B淋巴细胞亚群比例。结果表明：在成功构建病理学形态类似人弥漫大B细胞淋巴瘤的BALB／c鼠模型肿瘤组织中,检测到CD3、CD4、CD8、CD19、CD30阳性细胞的比例分别为（49．27±23．75）％,（6．07±3．65）％,（51．2±23．1）％,（67．06±16．39）％,（37．93±17．03）％,与接种前A20细胞相比,其CD3和CD8阳性细胞比例显著升高,CD19阳性表达比例显著下降（P〈0．05）。成瘤小鼠外周血淋巴细胞亚群阳性表达比例较正常小鼠有显著差异,其CD3和CD4阳性细胞比例显著降低（P〈0．05）。未成瘤小鼠脾脏淋巴细胞亚群的阳性表达比例与正常小鼠相比,CD3、CD4、CD8阳性细胞比例降低,而CD19阳性细胞比例升高（P〈0．05）。结论：本研究为在有免疫功能的小鼠体内进行B细胞淋巴瘤相关研究提供了免疫相关实验依据。     

SCID小鼠腹腔内人B细胞非霍奇金淋巴瘤模型的建立

目的 为探讨人B细胞非霍奇金淋巴瘤诊治策略提供动物模型.方法 采用4-5周龄的SCID小鼠,经腹腔接种7.5×106 个Namalwa细胞.观察小鼠的发病情况及生存时间.取瘤组织进行HE及免疫组化染色检测CD20,CD79a,Ki-67和CD3抗原的表达.结果 Namalwa细胞在SCID小鼠腹腔发病的主要表现是腹腔出现肿块,时间（18.67±1.94） d,伴竖毛、精神萎靡、行动迟缓,一般情况随时间的延长而不断恶化.荷瘤SCID小鼠中位存活时间（28.00±6.36） d.瘤细胞主要浸润肠壁、肠系膜,胃、胰、肝、脾、肾、肺的周缘、盆腔以及邻近肌组织和皮肤.CD20在瘤组织表达为散在阳性,CD79a和Ki-67为弥慢阳性,CD3为阴性.结论 成功建立SCID小鼠腹腔人Namalwa细胞株B细胞非霍奇金淋巴瘤模型,为探索淋巴瘤提供载体.     

NOD-SCID小鼠移植人体胃癌实验案例分析

目的:鉴定小鼠胃癌移植模型中生成的肿瘤类型及病理特征。方法:采用HE染色法对肿瘤病理组织学特征进行观察,用免疫组织化学的方法分析肿瘤中CD43、CD45RB、CD57、CK等标志物的表达及小鼠脾脏中CD43、CD57的表达以诊断肿瘤类型及来源。结果:经组织学观察,小鼠皮下肿瘤组织与人胃癌组织结构形态并不相符。经免疫组织化学分析,小鼠肿瘤抗人体的CD43、CD45RB、CD57均为阳性,提示肿瘤细胞中由大量T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞组成;但小鼠脾脏内T、B淋巴细胞和NK细胞均为阴性。结论:小鼠皮下肿瘤为淋巴瘤,来源于移植的胃癌组织中带有的淋巴组织。     

南瓜蛋白抗人慢性髓系白血病细胞系K562的作用研究

本研究观察南瓜蛋白(Cucurmosin,CUS)在人慢性髓系白血病(CML)K562细胞-NOD/SCID小鼠的皮下移植瘤和白血病模型体内抗肿瘤活性。采用建立K562-NOD/SCID小鼠皮下移植瘤和白血病模型,分别使用二种模型评价CUS在小鼠体内的抗K562活性。结果表明,给药剂量为0.5 mg/kg和1 mg/kg的CUS对人CML皮下移植瘤的抑瘤率分别为53.45%和59.43%;而剂量为0.25 mg/kg和0.5 mg/kg的CUS给药组小鼠的生存时间分别为39.8±5.5 d和43.4±6.6 d,抑瘤率分别为24.9%和36%。结论:CUS对小鼠体内人CML细胞系K562具有显著的抑制作用。     

应用SCID和NOD/SCID小鼠构建急性髓系白血病模型成瘤率的比较

目的:比较应用SCID和NOD/SCID小鼠构建急性髓系白血病模型成瘤率的不同。方法:分别给SCID和NOD/SCID小鼠腹腔注射HL-60细胞,观察小鼠的一般情况、应用流式细胞术检测骨髓细胞CD33阳性率,病理学检查鉴定动物模型。结果:应用SCID小鼠构建急性髓系白血病模型成瘤率为30%,而应用NOD/SCID小鼠构建急性髓细胞白血病模型成瘤率为100%。结论:接种HL-60的NOD/SCID小鼠相对于SCID小鼠成瘤率高,小鼠发病率稳定,更适宜应用于白血病机制研究。     

老年人EBV阳性的弥漫性大B细胞性淋巴瘤临床病理观察

目的探讨EB病毒阳性的老年人弥漫性大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)的组织形态特征、免疫组化、诊断与鉴别诊断,观察治疗及预后情况。方法对2例老年人EBV阳性的DLBCL行HE和免疫组化染色观察,收集临床资料并随访。结果患者年龄分别为58岁和72岁,无免疫缺陷及淋巴瘤病史。病理改变主要为大小差别较大的异型淋巴细胞弥漫浸润,散在少数R-S样细胞,可见广泛的地图样肿瘤性坏死及血管中心性浸润。免疫组化显示异型肿瘤细胞CD20弥漫强(+),80%～90%肿瘤细胞胞核EBV原位杂交呈中～强(+)。随访3～6个月,1例死亡。结论老年人EBV阳性的DLBCL罕见,是最近正在被逐渐认识的新淋巴瘤类型,其临床和病理特征独特,诊断需与淋巴瘤样肉芽肿和EBV阳性的霍奇金淋巴瘤鉴别。     

人恶性胰岛细胞瘤SCID鼠原位移植瘤免疫组织化学和超微结构的研究

目的　为探讨人恶性胰岛细胞瘤转移机制和抗转移治疗提供实验工具。方法　将人恶性胰岛细胞瘤组织植入SCID胰腺被膜下 ,观察移植瘤的侵袭转移及形态学特征 (光镜、免疫组织化学、电镜 )。结果　在SCID鼠体内成功地建立了一株人恶性胰岛素瘤原位移植模型HMI HMN 1,已传 2 1代 ,和一株人恶性胰多肽瘤原位移植模型HPPT HMN 2 ,已传2 5代 ,共移植SCID鼠共 14 7只 ,其移植生长率和自发转移率达 10 0 %。表现为肿瘤广泛侵袭胃十二指肠并有淋巴结和肝转移。病理组织学、免疫组织化学和电镜观察结果证明移植瘤细胞与瘤源人胰岛细胞瘤细胞完全一致。结论　人恶性胰岛细胞瘤SCID鼠原位移植模型的建立为研究人恶性胰岛细胞瘤转移机制和抗转移治疗提供了理想的动物模型。     

人慢性粒细胞白血病模型鼠的建立

通过SCID小鼠与NOD/Lt品系(T淋巴细胞、B淋巴细胞、自然杀伤细胞缺陷,循环补体缺乏,抗原呈递细胞分化及功能不良)回交得到的NOD/Ltsz-SCID/SCID小鼠(简称NOD/SCID小鼠).目前,NOD/SCID小鼠白血病模型的建立多采用经尾静脉接种较大数量的白血病细胞[1-3],虽然可以保证成功植入,但对研究小鼠的机体免疫反应实验十分不利,主要原因在于植入的肿瘤细胞不再分裂繁殖且小鼠本身为免疫缺陷鼠.     

RNAi沉默Notch1基因对多发性骨髓瘤细胞致瘤性的影响

目的:探讨RNAi沉默Notch1基因对多发性骨髓瘤细胞在NOD/SCID小鼠体内致瘤性的影响。方法:使用shRNA方法靶向沉默骨髓瘤RPMI8226细胞Notch1基因,建立NOD/SCID小鼠多发性骨髓瘤模型,观察Notch1基因沉默后骨髓瘤的成瘤速度、大小的变化;用ELISA法检测荷瘤小鼠血清中IL-6和VEGF水平变化。结果:Notch1-shRNA沉默Notch1基因后肿瘤细胞成瘤速度明显减慢,肿瘤体积缩小,与对照组比较差异显著。实验组小鼠血清中IL-6和VEGF水平与对照组比较明显降低(P0.05)。结论:靶向沉默Notch1基因可显著抑制骨髓瘤细胞的致瘤能力,其机制可能与Notch1基因沉默后瘤细胞分泌IL-6和VEGF的能力降低有关,Notch1基因沉默有可能成为治疗多发性骨髓瘤的新策略。     

131I-GM-CSF在人白血病SCID小鼠模型体内的生物学分布

目的 观察131I-GM-CSF在人急性髓系白血病SCID小鼠模型体内的生物学分布.方法 用SCID小鼠建立人白血病异种移植模型,用氯胺-T法制备131I-GM-CSF,观察131I-GM-CSF在白血病小鼠体内的生物学分布.结果①静脉接种的HL-60细胞在SCID小鼠体内植活,4周后发生白血病;②131I-GM-CSF主要滞留于模型小鼠的脾脏、骨髓及瘤体组织中,且前两者对131I-GM-CSF摄取于注入后30 min达峰值,组织摄取率分别为(442.9±86.4)%ID/g和(4283.8±252.8)%ID/g,滞留24h后高于其他脏器.而131I呈非特异性分布.结论 131I-GM-CSF集中分布于人白血病SCID小鼠模型脾脏、骨髓及白血病细胞浸润组织,具有组织器官相对特异性.     

SUDHL-4细胞体外培养和小鼠肿瘤模型的建立

本研究探讨人弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞株SUDHL-4的体外培养和小鼠成瘤条件。在不同条件下培养SUDHL-4细胞,对细胞生长形态及生物学特性进行观察分析;对肿瘤相关抗原表达进行免疫学分析;采用SCID小鼠皮下接种,对肿瘤生长情况和组织学形态进行研究。结果显示:培养液中加入10%胎牛血清,SUDHL-4细胞在体外生长良好,并表达多数重要的B细胞和肿瘤相关标记。采用SCID小鼠皮下接种107细胞可成功地建立人DLBCL移植瘤模型,成瘤率70%,肿瘤的组织学表现类似于人DLBCL。结论:适当条件下培养的SUDHL-4细胞的生物学和免疫学特性符合人DLBCL的特征,并具有良好的致瘤性,可为人DLBCL的相关研究提供良好的模型。     

细胞因子介导的人脐血单个核细胞体外扩增并重建NOD/SCID小鼠造血及免疫功能

背景:细胞因子介导的脐血造血细胞体外扩增有望能解决脐血移植数量不足的问题.目的:实验拟确立在无基质培养条件下体外扩增脐血单个核细胞最合适的细胞因子组合及干细胞因子、FLT3配基协同促聚核细胞生成因子对造血及免疫重建功能的影响.方法:将新鲜脐血标本分离的单个核细胞接种于含有不同细胞因子组合的无血清无基质培养体系中培养7 d,根据不同细胞因子组合分组,将3因子干细胞因子+FLT3配基+促聚核细胞生成因子组合在无血清无基质条件下扩增培养7 d前后的脐血单个核细胞移植给经亚致死量照射的NOD/SCID小鼠.在扩增培养0,7 d检测脐血CD34+细胞数及CD34+CXCR4+,CD34+CD62L+,CD34+CD49d+的细胞数.脐血移植6周后通过流式细胞仪,PCR法检测存活小鼠体内的人源性细胞.结果与结论:移植6周后,存活小鼠体内均可检测到人源性CD45+细胞,扩增脐血移植组的NOD/SCID小鼠存活率和人特异性基因捡出率均高于新鲜脐血移植组和高于生理盐水移植组(P<0.05).扩增脐血组存活NOD/SCID小鼠骨髓中可检测到人髓系细胞(CD33+),T淋巴细胞(CD4+),B淋巴细胞(CD19+)和人造血干细胞成分(CD34+)细胞的表达.结果提示干细胞因子+FLT3配基+促聚核细胞生成因子3因子组合脐血造血细胞体外扩增是最合适的细胞因子组合,其扩增的脐血单个核细胞能够植入并重建NOD/SCID小鼠的造血及免疫功能.     

SCID鼠人源化及视网膜母细胞瘤模型的建立

目的进行SCID鼠的人源化并建立人化SCID鼠视网膜母细胞瘤模型。方法SCID鼠腹腔注射人脐带血单个核细胞(CBMNC)生理盐水悬液。两周后割尾采血,检测其IgG水平。将10只人化的SCID鼠混分为两组,分别于腹股沟皮下注入视网膜母细胞瘤细胞株(SoRb-70),浓度分别为2×106,2×107,然后对肿瘤的发生率及瘤体大小连续观察,并作统计学分析,最后做病理解剖及组织切片观察。结果该实验经腹腔注射移植入SCID小鼠体内的CBMNC可在小鼠体内存活并大量增殖。移植后2～4周,SCID小鼠血清中即可检测到人免疫球蛋白。视网膜母细胞瘤细胞以两个梯度接种人化SCID鼠10只,观察8周,10只SCID小鼠7只致瘤。结论该模型的建立方法科学合理,在一定程度上可模拟人眼视网膜母细胞瘤的生物学行为,为进一步研究其发生发展机制及免疫治疗提供了一种模型。     

人 SART 3 基因疫苗对荷瘤小鼠的免疫杀伤作用

目的研究表达人T细胞识别的鳞状细胞癌抗原3（SART3）基因的DNA疫苗在小鼠体内对表达该基因肿瘤细胞的免疫杀伤作用。方法构建表达人SART3基因的C3H小鼠骨肉瘤细胞LM8-SART3,将其接种到C3H小鼠成瘤,比较疫苗治疗组和空载体对照组中肿瘤的生长情况,取小鼠淋巴细胞检测免疫反应活性并行病理切片镜下比较。结果荷瘤小鼠经疫苗注射后肿瘤生长延缓,免疫反应活性与淋巴细胞数量有关,镜下可见肿瘤细胞坏死并淋巴细胞浸润。结论表达人SART3基因的DNA疫苗能诱导小鼠免疫杀伤肿瘤细胞,抑制表达该基因的肿瘤细胞在小鼠体内生长。