大肠杆菌菌株（λ衍生噬菌体）／PBR322衍生质粒作为人IL—6表 …

为探索人白细胞介素－６在原核细胞中高效表达的途径，选用ＢＬ２１／ＰＥＴ－２８作为表达系统，以聚质反应技术扩增了ｈＩＬ－６的经补ＤＮＡ的编码区，引入了ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ位点。用限制性内切酶ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切后，克隆于ＰＥＴ－２８载体的相应位点，转化ＤＨ５α。选出必克隆，经ＤＮＡ序列分析，表明其编码区内无非特异突变。将重组质粒转子ＤＨ５α，筛选阳性克隆，用异基硫代β－Ｄ－半乳糖苷进行诱导表     

抗人肿瘤坏死因子—α单链抗体基因在大肠杆菌中的融合表达

目的：将抗ｈＴＮＦ－α单链抗体基因克隆入融合表达载体ｐＧＥＸ４Ｔ－１中，以期得到ＧＳＴ－ＳｃＦｖ融合表达蛋白。方法：将限制性内切酶酶切拼接法获得的Ｅ６ＳｃＦｖ基因克隆入融合表达载体ｐＧＥＸ４Ｔ－１中，转化大肠杆菌ＤＨ５α，经异丙基－β－Ｄ－硫代半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导，１２％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测表达产物，光密度扫描和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ验证表达产物。结果：ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示，Ｅ６ＳｃＦｖ表达产物约为５２ｋｕ左右，与预期的结果相符；光密度扫描结果表明，ＧＳＴ－Ｅ６ＳｃＦｖ融合蛋白占菌体总蛋白的４０％；Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ证实，在相应分子量处，有ＧＳＴ－Ｅ６ＳｃＦｖ融合蛋白的显色印迹；进一步对表达产物的形式分析，ＧＳＴ－Ｅ６ＳｃＦｖ融合蛋白的表达产物为包涵体形式。结论：在大肠杆菌中成功地表达了抗ｈＴＮＦ－α单链抗体基因与谷胱甘肽巯基转移酶（ＧＳＴ）基因的融合蛋白     

人白细胞介素—15cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达

从正常人外周血中分离粘附的单核细胞，加入ＬＰＳ刺激４ｈ后提取细胞ｍＲＮＡ反转录获得ｃＤＮＡ第一链，用两对特异引物进行巢式ＰＣＲ扩增出含ＢａｍＨＩ酶切位点的编码人１Ｌ－１５成熟蛋白的ｃＤＮＡ，其大小约３６０ｂｐ。用ＰＥＧ法回收其片段并将其连接到ｐＢＳＳＫ载体的ＳｍａⅠ位点上进行序列分析，结果表明其序列与文献报道一致。然后再将其片段亚克隆插入到ｐＧＥＸ－２Ｔ的ＢａｍＨＩ位点。筛选插入方向正确的克隆，转化大肠杆菌ＪＭ１０９，以１ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ诱导５ｈ收集菌体直接进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，与阴性对照相比，ＭＷ４４ＫＤ处多出一条带，紫外扫描显示此带占菌体蛋白总量的８．８％。ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ证实此带能够特异地与兔抗人ＩＬ－１５的抗体发生反应。证明ＲＴ－ＰＣＲ所得的人ＩＬ－１５ｃＤＮＡ在大肠杆菌中获得了表达，为进一步探讨人ＩＬ－１５的生物学作用打下基础。     

应用重组PCR技术克建人单链白细胞介素12融合基因

目的 构建人单链白细胞介素１２（ｈｓｃＩＬ－１２）融合基因并在真核细胞中进行表达,为进一步研究ｈｓｃＩＬ－１２融合蛋白的生物学活性奠定基础。方法 应用重组ＰＣＲ技术将ｈＩＬ－１２ｐ４０和ｐ３５亚单位两段编码序列的ｃＤＮＡ通过一疏水性多肽接头（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３碱基序列进行前后拼拼（ＩＬ－１２ｐ４０－多肽接头－ｐ３５）,构建ｈｓｃＩＬ－１２融合基因,并进行核苷酸序列测定,进一步将ｈｓｃＩＬ－１２融合基因插入ｐｃＤＮＡ３．１真核表达载体中,转染ＣＯＳ－７细胞表达ｈｓｃＩＬ－１２融合蛋白,并行Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析。结果 该融合基因经ＤＮＡ序列分析表明：ｐ４０、ｐ３５、ｌｉｎｋｅｒ的连接顺序、方向及序列完全正确,融合基因可在ＣＯＳ－７细胞中表达ｈｓｃＩＬ－１２融合蛋白。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ显示该融合蛋白分子     

HL-60细胞中IL6基因的克隆及鉴定

目的：为探索性构建重组人白细胞介素６－绿脓杆菌外毒素融合蛋白（ＩＬ６－ＰＥ４０）以选择性杀伤高表达ＩＬ６受体（ＩＬ６Ｒ）的白血病细胞,本研究试图从人急性早幼粒细胞白血病细胞株（ＨＬ－６０）中克隆Ｎ－末端缺失２４个氨基酸的人ＩＬ６基因（ＩＬ６ｃＤＮＡ）并构建含此基因的重组质粒。方法：根据ＩＬ６基因序列设计合成可扩增ＩＬ６ｃＤＮＡ的特异性引物;利用基因重组技术,构建含ＩＬ６基因的重组质粒ｐＵＣ－ＩＬ６。结果与结论：本文首次从ＨＬ－６０中扩增出预期４８０ｂｐ的ＩＬ６ｃＤＮＡ,将其克隆至ｐＵＣ１８质粒中,命名为ｐＵＣ－ＩＬ６,并经ＥｃｏＲＩ／ＢａｍＨＩ双酶切电泳及序列分析鉴定加以确证,为进一步构建重组人ＩＬ６－ＰＥ４０奠定了坚实基础。     

庚型肝炎病毒NS5区部分基因的表达及其在EIA中的 …

目的 在大肠杆蓖中表达ＨＧＶ ＮＳ５抗原,以建立ＨＧＶ抗体血清学检测方法。方法 利用扫转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）法从人血浆中分离庚型肝炎病毒ＮＳ５部分基因,克隆到ｐＲＳＥＴ Ａ载体,经酶切初步鉴定后进行ＤＮＡ序列分析,结果表明克隆序列正确。以ｐＰＲＯＥＸ－１为表达载体,转化ＤＫ５α,诱导表达后进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析。结果 克隆的基因片段在大肠杆菌中表达出相对分子质量（Ｍ     

表皮生长因子与假单胞菌外毒素融合蛋白在大肠杆菌中的表达 …

目的和方法：应用基因工程技术，将ＥＧＦＣＤＮＡ克隆到ＰＬＹ５／ＩＬ２－ＰＥ４０载体的ＥｃｏＲⅠ、ＳｍａⅠ位点之间ＩＬ２基因位置上，再将重组融合基因亚克隆到表达载体ＰＢＶ２２０的ＥｃｏＲⅠ、ＰｓｔⅠ位点上，以探索ＥＧＦ－ＰＥ４０融合基因在大肠杆菌ＤＨ５ａ中的进行表达及其生理功能。结果：ＳＤＳ－聚丙烯胺凝胶电泳和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ表明：ＥＧＦ－ＰＥ４０融合蛋白获得表达，并且具有ＥＧＦ和ＰＥ４０的免     

人细胞间粘附分子1基因功能区Ⅰ,Ⅱ的克隆及高效表达

用ＰＣＲ聚合酶链反应技术从人细胞间粘附分子１（ＩＣＡＭ－１）ｃＤＮＡ中获取了其编码细胞外氨基端功能区Ⅰ、Ⅱ１８５个氨基酸的ＤＮＡ序列，构建了重组质粒ｐＥＴ／ｒｓＩＣＡＭ－１。经转化宿主菌，通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，薄层扫描和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ，证明目的基因在大肠杆菌中获得了高效表达。     

表皮生长因子与假单胞菌外毒素融合蛋白在大肠杆菌中的表达研究

目的和方法：应用基因工程技术，将ＥＧＦｃＤＮＡ克隆到ｐＬＹ５／ＩＬ２－ＰＥ４０载体的ＥｃｏＲⅠ、ＳｍａⅠ位点之间ＩＬ２基因位置上，再将重组融合基因亚克隆到表达载体ｐＢＶ２２０的ＥｃｏＲⅠ、ＰｓｔⅠ位点上，以探索ＥＧＦ－ＰＥ４０融合基因在大肠杆菌ＤＨ５ａ中的进行表达及其生理功能。结果：ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ表明：ＥＧＦ－ＰＥ４０融合蛋白获得表达，并且具有ＥＧＦ和ＰＥ４０的免疫学活性。结论：这为进一步研究该融合的蛋白功能和肿瘤治疗打下基础     

丙型肝炎病毒核心蛋白基因重组质粒的构建及其在真核 …

目的：构建包含丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心蛋白（Ｃ）基因片段的重组真核表达载体，并在肝细胞癌细胞株７７２１细胞中表达。方法：将从ｐＢＲＴＭＨＣＶ１－３０１１质粒切下的ＨＣＶ Ｃ基因片段插入ｐｃＤＮＡ３质粒的ＣＭＶ启动子下游，构建真核表达质粒ｐｃＤＮＡＨＣＶ－Ｃ，然后，采用脂质体转染技术，转染７７２１细胞进行瞬时表达，转染细胞裂解煮沸后，通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测表达的核心抗原     

心电向量图T环改变对冠心病诊断价值的探讨

目的:探讨心电向量图T环改变对冠心病的临床诊断价值。方法:对56例冠心病患者及60例健康人进行心电向量T环改变统计分析。结果:冠心病组在QRS/T值、QRS-T夹角、T环的L/W比值、T环角度方面与对照组有显著性差异(P<0.01),而在T环转位方面无显著性差异(P>0.05)。结论:T向量环改变对冠心病诊断有重要价值。     

细胞因子在免疫复合物型肾小球肾炎发病机制中的作用

按Ｄｉｘｏｎ方法制造血清病型肾小球肾炎动物模型，进而研究其发病机制，模型ＡＥＳＳＲ血清ＣＩＣ水平明显高于正常值（Ｐ〈０．０１）；ＣＭＳＣ水平明显低于正常值（Ｐ〈０．０１），ｓＩｌ－２Ｒ，ＩＬ－８，ＩＦＮ，ＴＮＦ和ＩＬ－２水平均明显高于正常值（Ｐ〈０．０１），ＣＩＣ与ＣＭＳＣ呈高度负相关，ｒ＝－０．９４３（Ｐ〈０．０５），ＣＩＣ与ＩＬ－８呈高度正相关，相关系数ｒ＝０．８２９（Ｐ〈０．０５）。进一步证     

枸杞子提取物对人淋巴细胞表面IL-2R表达的影响

研究了枸杞子提取物(LBr)对白细胞介素2受体(IL—2R)表达的影响。用FACS法和APAAP法研究了LBr作用3天对PHA活化扁桃体单个核细胞(TMNC)表面IL—2Rα、IL—2Rβ表达的影响,发现合适浓度的LBr(1.9ng/ml～7.8μg/ml)可促进IL—2R的表达。对α链表达的促进作用于第1天即出现,第3天达高峰,第5天始明显下降以至消失。     

不同发生阶段红系血细胞中红细胞分化因子的检测

用可诱发小鼠贫血的病毒感染小鼠，取其脾细胞，在加红细胞生成素（ＥＰＯ）的培养基中培养，获得大量相对同步化的早幼，中幼，晚幼和网织红细胞，并对这些不同发生阶段的红系细胞进行红细胞分化因子（ＥＤＦ）粗提液的分离和提取，以检测造血过程中，不同阶段红细胞ＥＤＦ的合成。并以小鼠红白血病细胞（ＭＥＬ）作为靶细胞，分析不同发育阶段ＥＤＦ粗提液对ＭＥＬ细胞的生长和分化的生物学效应。结果表明，不同发育阶段的红细胞中     

保肝类中药复方对肝星形细胞活化及细胞外基质表达的影响

目的 观察保肝类中药复方防治CCI4所致大鼠肝纤维化模型的疗效，并探讨其作用机制。方法 整体实验，采用常规切片、HE、Mallory染色和免疫组织化学ABC法检测Ⅲ型胶原和层黏连蛋白；离体实验，采用肝星形细胞分离培养，检测Ⅲ型胶原和层黏连蛋白，并经图像分析系统作定量分析。结果 保肝类中药复方能减少肝血窦及纤维隔内肌样成纤维细胞的数量，抑制纤维隔的纤维组织增生，并抑制活化的肝星形细胞分泌Ⅲ型胶原和层黏连蛋白。结论 保肝类中药复方防治肝纤维化实验疗效明显，其抗肝纤维化作用机理与抑制细胞外基质的合成和促进其降解有关。     

THE APPLIED STUDY ON BA IN DIAGNOSIS OF INTERPHASE OF ATTACK OF EPILEPSY

目的：探讨脑电地形图在癫痛发作间期诊断中应用价值。方法：脑电地形图在110例癫痫患者的发作间期被检查了。并且与脑电图进行了对比。结果：脑电地形图在110例癫痫患者发作间期有明显改变，与脑电图有显著差异（P〈0．01）。结论：脑电地形图在癫痫发作间期诊断中的应用价值是重要的。     

钙调素拮抗剂对HeLa细胞S期进程的影响

目的　探讨钙调素拮抗剂三氟拉嗪（ＴＦＰ）对ＨｅＬａ细胞Ｓ期进程的影响及其分子机理。　方法　通过ＴｄＲ双阻断法获得同步化的Ｓ期ＨｅＬａ细胞,以３Ｈ－ＴｄＲ掺入法和Ｗｅｓｔｅｒｎ 技术分别观察了ＴＦＰ对ＨｅＬａ 细胞Ｓ期进程和胸苷激酶（ｔｈｙｍ ｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ,ＴＫ）活性及细胞周期引擎分子ＣｙｃｌｉｎＡ、Ｃｄｋ２ 和细胞周期调节蛋白ｐ８０ｃｄｃ２５Ｂ、ＰＣＮＡ、ｐ２１ 蛋白表达水平的影响。　结果　ＴＦＰ（２０μｍ ｏｌ／Ｌ）能使３ Ｈ－ＴｄＲ的掺入峰值后移,并抑制了Ｃｙ－ｃｌｉｎＡ、ＰＣＮＡ、ｐ８０ｃｄｃ２５Ｂ的表达和提高了ｐ２１ 蛋白的水平,但对Ｃｄｋ２的表达几乎无影响。　结论　ＣａＭ 除了能通过影响ＰＣＮＡ的水平直接作用于ＤＮＡ 合成,同时又可通过作用于ＣｙｃｌｉｎＡ、ｐ８０ｃｄｃ２５Ｂ、ｐ２１ 等周期引擎分子和调控因子水平正调ＨｅＬａ 细胞Ｓ期进程。     

磁处理水对小白鼠免疫功能影响的实验研究

用磁处理水喂养小白鼠３０天，测定其有关的免疫学指标，结果表明：血清溶菌酶含量明显增高；循环免疫复合物ＣＩＣ含量显著降低；Ｔ、Ｂ细胞对丝裂原ＣｏｎＡ及Ｌｐｓ的反应性明显增强；一定稀释浓度的脾细胞上清液ＩＬ－１、ＩＬ－２的活性明显提高；脾细胞ＤＮ－ｙ的产生亦明显提高．上述实验提示我们，饮用磁处理水确有增强生物机体免疫功能的作用。     

独立分量分析的研究和脑电中心电干扰的消除

本文研究和提出了一种用于独立分量分析的迭代算法 ,采用该算法成功地消除了存在于脑电信号中的心电干扰。基于信息论原理 ,给出了一个衡量各分量统计独立的目标函数 ,优化该目标函数 ,得出一种用于对独立分量进行盲分离的迭代算法 ,该算法的优点在于不需要计算信号的高阶统计量 ,收敛速度快。该算法使用一种去冗余方法 ,在提取一分量后 ,将其从混迭信号中去除 ,能逐一提取各独立分量。实验结果表明独立分量分析可有效地去除脑电信号中的心电干扰成分     

三种哺乳动物牙釉质超微结构与硬度关系的初步研究

应用原子力显微镜 (AFM)和扫描电镜 (SEM )对三种哺乳动物牙釉质超微结构进行了表征 ,并应用维氏硬度计对其进行硬度测试。通过AFM观察发现 ,人的牙釉质表面主要含有圆形结构 ;猪的牙釉质表面以片状结构为主 ;牛的牙釉质表面基本都是圆形结构。从三种牙釉质的SEM图中都观察到釉质晶体结构。硬度测试测得的人、猪、牛牙釉质的维氏硬度值分别为 370kg/mm2 、336kg/mm2 、2 82kg/mm2 。对照AFM、SEM和硬度测试结果 ,发现三种牙釉质硬度的不同与牙釉质晶体宽度和致密性有关