血竭素高氯酸盐诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的机制

目的研究血竭素高氯酸盐诱导HeLa细胞凋亡机制。方法MTT法测定血竭素高氯酸盐对HeLa细胞的细胞毒作用。通过显微镜，荧光染色观察细胞形态学变化，用琼脂糖凝胶电泳检测DNA片断化。用Western印迹法分析药物对蛋白质表达的影响。结果血竭素高氯酸盐明显抑制HeLa等细胞的增殖，诱导HeLa细胞调亡。Caspase-1，-3，-8，-9及家族抑制剂可明显抑制血竭素高氯酸盐诱导的凋亡。Western印迹结果显示血竭素高氯酸盐作用12 h后Bax及Bcl-X_L的表达明显改变，caspase-3，-8前体及caspase-3底物ICAD和PARP发生降解。结论血竭素高氯酸盐(60 μmol·L^-1)通过改变Bax/Bcl-X_L的表达激活caspase途径诱导HeLa细胞凋亡。     

吴茱萸碱诱导人子宫颈癌HeLa细胞凋亡的机制研究

目的研究吴茱萸碱(evodiamine)诱导人子宫颈癌HeLa细胞凋亡的分子生物学机制。方法用结晶紫法和琼脂糖凝胶电泳法以及用两种caspase的蛋白酶抑制剂测定细胞凋亡过程中caspase的信号传导路径。结果吴茱萸碱可诱导HeLa细胞的细胞膜皱缩、细胞质浓集及凋亡小体的形式,并清晰可见以180 bp倍数裂解的DNA梯形电泳带的出现。抑制剂VAD-fmk(caspase家族总抑制剂)和DEVD-fmk(caspase-3抑制剂)能部分抑制HeLa细胞的凋亡。结论Evodiamine诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡;caspase cascade信号传导路径与凋亡密切相关。     

白英水提物诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的实验研究

目的:观察白英水提物诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用,并初步探讨其分子机制。方法:常规方法制备白英水提物,体外培养人宫颈癌HeLa细胞。实验组设白英水提物12.5、25.0、50.0mg/mL3种浓度,以顺铂(25.0mg/L)为阳性对照组。采用细胞毒试验(MTT法)检测HeLa细胞抑制率,荧光显微镜观察HeLa细胞形态变化,琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯形泳带,半定量RT-PCR法检测凋亡相关基因survivin mRNA和caspase-3mRNA表达的变化。结果:白英水提物对HeLa细胞增殖有抑制作用,且呈明显的时效和量效关系,并诱导其发生凋亡,表现为细胞核固缩、染色质凝集、边聚等。琼脂糖凝胶电泳显示DNA梯形泳带,半定量RT-PCR法检测显示survivin mRNA表达下调、caspase-3mRNA表达上调。结论:白英水提物对HeLa细胞有较强的增殖抑制和诱导凋亡作用,其诱导HeLa细胞凋亡的分子机制可能与上调caspase-3基因表达、下调survivin基因表达有关。     

龙葵碱诱导人宫颈癌细胞HeLa凋亡的体外实验研究

目的 研究龙葵碱对人宫颈癌细胞系HeLa的凋亡作用及其抑癌机制.方法 采用噻唑蓝(MTT)法检测龙葵碱对HeLa细胞生长的影响;通过Hoechst33258染色及DNA Ladder研究龙葵碱诱导HeLa细胞凋亡的作用;RT-PCR法检测龙葵碱对环氧合酶(COX-2)表达的影响.结果 龙葵碱可剂量依赖性地抑制HeLa细胞生长,作用48h时,IC50=260μg·mL-1;可诱导HeLa细胞凋亡,荧光染色可见凋亡小体,DNA Ladder显示典型的细胞凋亡梯形条带;可降低COX-2的表达水平.结论 龙葵碱可抑制人宫颈癌细胞HeLa的增殖.诱导细胞凋亡,这可能是龙葵碱抑癌作用的机制之一.     

杨梅素诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡及凋亡通路的研究

目的研究杨梅素体外对人宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡及凋亡通路的影响。方法体外培养人宫颈癌HeLa细胞,MTT和SRB法检测细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡,计算机分析细胞周期;Western Blot法检测caspase-3、caspase-9和survivin含量。结果杨梅素对HeLa细胞的体外增殖具有抑制作用,并具有浓度和时间依耐性;杨梅素体外诱导HeLa细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在S期;杨梅素促进caspase-3和caspase-9蛋白表达,抑制survivin蛋白表达。结论杨梅素可抑制HeLa细胞的增殖,诱导其凋亡,其凋亡途径同时涉及细胞内途径和细胞外途径。     

冬凌草甲素通过诱导人宫颈癌HeLa细胞自噬下调凋亡的机制

研究冬凌草甲素通过诱导人宫颈癌HeLa细胞自噬拮抗凋亡的机制。MTT法测定冬凌草甲素对HeLa细胞的细胞毒作用。通过相差显微镜观察细胞形态学变化，用琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段化，用流式细胞仪检测细胞自噬和凋亡水平，用Western blotting检测分析药物对蛋白质表达的影响。冬凌草甲素明显抑制HeLa细胞的增殖，诱导HeLa细胞凋亡，同时诱导HeLa细胞发生自噬。Western blotting检测结果表明，冬凌草甲素作用24 h后，促凋亡蛋白Bax、细胞色素c和控制Bax活力的去乙酰化酶SIRT-1的表达明显改变。冬凌草甲素(64 μmol·L^-1)诱导的自噬通过影响SIRT-1和线粒体途径蛋白的表达下调凋亡。     

天花粉蛋白诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的分子机制研究

目的利用基因芯片技术研究天花粉蛋白对人宫颈癌HeLa细胞基因表达谱的影响,以深入探讨其作用的分子机制。方法提取药物处理前后HeLa细胞总RNA并逆转录成cDNA,在获得的cDNA上分别标记CY3和CY5两种荧光物质,然后与BiostarH-Ⅰ表达谱芯片杂交,扫描后对获得的数据用GenePixPro3·0软件分析。结果两组间存在差异性表达基因78条,其中与细胞凋亡密切相关的NOP56、TN-FSF10、CASP9、DFFB等62条基因表达上调,与细胞黏附及细胞间相互作用相关的COL9A3、MGST3、LGALS3BP等16条基因表达下调。结论天花粉蛋白可以引起HeLa细胞中多个基因的表达改变,基因芯片技术进一步揭示了其诱导HeLa细胞凋亡的作用机制。     

白藜芦醇诱导HeLa细胞凋亡的实验研究

目的:观察白藜芦醇对宫颈癌HeLa细胞凋亡作用.方法:应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测白藜芦醇对HeLa细胞的抑制效应,并采用末端标记法(TUNEL)对凋亡细胞进行定量检测.结果:白藜芦醇对HeLa细胞48h的抑制效应为20.15%,72h的抑制效应为38.60%.TUNEL检测结果为白藜芦醇促进HeLa细胞凋亡.结论:白藜芦醇抑制HeLa细胞增殖,对指导临床药物治疗宫颈癌具有重要意义.     

阿司匹林对体外培养人宫颈癌细胞凋亡作用的研究

目的 探讨阿司匹林诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及对凋亡相关基因Bcl-2和bax的作用.方法 培养人宫颈癌Hela细胞,加入不同浓度阿司匹林(1.0、5.0、10.0 mmol/L)干预培养.应用流式细胞技术检测Hela细胞凋亡和细胞周期的变化;用RT-PCR 检测细胞凋亡相关基因bcl-2及bax转录水平的改变;免疫组化法检测bcl-2及bax蛋白表达的变化.结果 与对照组相比,阿司匹林干预组Hela细胞凋亡率明显增高(P<0.05); 随着阿司匹林浓度增加,G0/G1期细胞比例下降,G2/M期细胞比例升高(P<0.05);阿司匹林干预培养后Hela细胞中bcl-2基因mRNA表达明显降低,而bax基因mRNA表达升高明显,较对照组均有统计学意义(P<0.05);阿司匹林作用48 h后,免疫组化法检测bcl-2蛋白表达下调及bax蛋白表达上调(P<0.05).结论 阿司匹林能诱导宫颈癌Hela细胞凋亡,其机制与抑制bcl-2表达,上调bax表达有关.     

HMGB1对宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响及其作用机制

目的 观察HMGB1对人宫颈癌HeLa细胞生长及凋亡的影响并研究其可能的作用机制.方法 构建HMGB1高表达质粒和RNA干扰质粒,将HMGB1高表达质粒与RNA干扰质粒分别转染到HeLa细胞中,采用MTT实验、PI单染流式细胞术和Annexin V-PI双标法流式细胞术检测HeLa细胞的增殖活性、细胞周期和凋亡情况.采用RT-PCR和western blot法检测HMGB1基因沉默对Caspase-3、bcl-2 和细胞色素C表达的影响.结果 HMGB1高表达载体(pEGFP-N1-HMGB1)与阴性对照质粒分别转染到HeLa细胞,RT-PCR和Western blot结果显示HMGB1重组质粒转染HeLa后可明显增加HMGB1的mRNA 及蛋白表达(P＜0.05).HMGB1干扰病毒载体(HMGB1 SiRNA)与空白病毒载体分别转染到HeLa细胞中,RT-PCR和Western blot结果显示HMGB1 SiRNA转染HeLa后可明显抑制HMGB1的mRNA及蛋白表达(P＜0.05).MTT法检测HMGB1高表达及基因沉默后HeLa的细胞生长曲线,结果显示HMGB1高表达可明显提高HeLa的细胞生长速度(P＜0.05),HMGB1沉默后HeLa的细胞生长明显受到抑制(P＜0.05).PI 染色流式细胞仪结果显示:HMGB1过表达后,细胞正常增殖周期被加速(P＜0.05);HMGB1沉默后,细胞增殖周期被抑制(P＜0.05).Annexin V-PI双标法流式细胞仪结果显示,HMGB1过表达后,HeLa细胞凋亡率明显下降(P＜0.05);HMGB1沉默后,HeLa细胞凋亡率明显上升(P＜0.05).RT-PCR方法检测不同细胞组Caspase-3和bcl-2 mRNA的表达,结果显示:HMGB1基因沉默后,Caspase-3 mRNA的表达明显增加(P＜0.05),bcl-2 mRNA的表达明显减少(P＜0.05).Western blot结果显示:HMGB1 基因沉默后,细胞色素C和Caspase-3蛋白表达水平增加,bcl-2蛋白表达水平减少(P＜0.05).结论 HMGB1可提高HeLa细胞生长速度、增殖周期,抑制HeLa细胞凋亡.HMGB1基因沉默可抑制Hela细胞增殖,促进其凋亡.影响Caspase-3—细胞色素C途径及调节bcl-2的表达可能是其主要作用机制.     

矢车菊素-3-葡萄糖苷诱导Hela细胞凋亡及其机制的研究

目的研究花色素苷与矢车菊素-3-葡萄糖苷对人宫颈癌细胞株Hela细胞体外增殖作用并从细胞学和分子生物学水平探讨其作用机制。方法从黑米中提取出花色素苷,再分离出矢车菊素-3-葡萄糖苷单体;用不同浓度的花色素苷和矢车菊素-3-葡萄糖苷分别处理Hela细胞后,CCK-8法测细胞生长抑制率;Hoechst 33258染色,激光共聚焦镜下观察细胞形态;流式细胞仪检测凋亡率;SABC染色检测Bax/Bcl-2的蛋白表达。结果25~400 mg/L花色素苷和12.5~200μmol/L矢车菊素可抑制Hela细胞生长,抑制率呈时间剂量依赖性;激光共聚焦镜下可见到明显的凋亡细胞;流式细胞仪检测药物处理后出现明显凋亡率;药物可使Bax表达上调,Bcl-2表达下降。结论花色素苷与矢车菊素-3-葡萄糖苷都可抑制Hela细胞生长,诱导其凋亡,其诱导凋亡的作用的机制与凋亡相关基因促凋亡基因Bax表达上调,抗凋亡基因Bcl-2表达下调有关。     

转染p21基因对人宫颈癌Hela细胞的影响

目的研究转染p21基因对人宫颈癌Hela细胞的抑制及凋亡影响。方法用Lipofectamine2000脂质体介导,将质粒pcDNA3．1（＋）-p21基因转入人宫颈癌Hela细胞株;免疫组化法检测转染021基因后,其编码蛋白在Hela细胞的表达情况;描绘p21基因转染后Hela细胞的增殖曲线;WST-1法测定OD值,计算细胞生长抑制率及流式细胞仪检测p21基因转染对Hela细胞的凋亡影响。结果免疫组化法显示p21基因转染后在Hela细胞的胞核内高表达;p21基因的表达可抑制Hela细胞的体外生长,且Hela／021细胞的生长曲线较对照组明显降低;WST-1法显示Hela／p21的细胞活力与对照组相比有显著性差异（P〈0．05）;流式细胞仪检测显示转染p21基因的Hela细胞凋亡率显著高于对照组,约20％以上。结论转染p21基因对Hela细胞具有明显的抑制和诱导凋亡作用。     

大蒜素对人宫颈癌Hela细胞增殖影响及其作用机制

目的探讨大蒜素对体外培养宫颈癌Hela细胞增殖的影响及其作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定不同浓度大蒜素对Hela细胞增殖抑制率;流式细胞术测定细胞周期变化及凋亡相关蛋白Bcl-2与Bax的表达。结果 MTT显示大蒜素能抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,并具有时间-剂量依赖性关系;流式细胞术测定结果显示10μg/ml大蒜素可明显诱导宫颈癌Hela细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在G2/M期;可降低癌基因蛋白Bcl表达（P〈0.01）,而促进Bax表达（P〈0.01）。结论大蒜素对人宫颈癌Hela细胞增殖具有抑制作用,与细胞周期阻滞和凋亡相关蛋白表达有关。     

小剂量顺铂对Hela细胞凋亡的实验研究

目的：实验研究小剂量顺铂对放疗诱导Hela细胞凋亡的作用。方法：将细胞分为空白对照组、单纯化疗组、单纯放疗组、放疗加化疗组4组,采用TUNEL法分另1检测各组细胞的凋亡率。结果：单纯放疗、化疗都可诱导Hela细胞凋亡,顺铂(化疗)可以明显增强放疗诱导的细胞凋亡。结论：小剂量顺铂可明显增加放疗诱导的Hela细胞凋亡,为临床应用小剂量顺铂使放疗增效提供了理论依据。     

PJA1诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的初步研究

目的:探讨PJA1在宫颈癌Hela细胞中的促凋亡作用。方法:采用流式细胞仪检测转染PJA1后的宫颈癌细胞12,24,36,48 h的凋亡变化。采用Western免疫印迹(Western Blot)检测凋亡通路。结果:宫颈癌Hela细胞在转染PJA1后12 h凋亡率最低,48 h最高,并且在凋亡中与caspase通路相关。结论:PJA1可以通过caspase通路促进宫颈癌Hela细胞凋亡。     

巴豆生物碱诱导Hela细胞凋亡及其作用机制

目的研究巴豆生物碱(CA)在体外诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及其作用机制。方法 MTT法检测CA对Hela细胞增殖的抑制率;AnnexinV-PI染色检测细胞凋亡;Caspase-8试剂盒检测Caspase-8在Hela细胞中的活性;RT-PCR检测Caspase-8 mRNA的表达。结果巴豆生物碱对Hela细胞生长有抑制作用,且呈剂量依赖关系。流式细胞术结果提示CA可诱导Hela细胞凋亡。CA处理Hela细胞后发现Caspase-8活性明显增加,Caspase-8的mRNA高表达。结论 CA对人宫颈癌Hela细胞有增殖抑制和诱导凋亡作用,其诱导Hela细胞凋亡的分子机制可能与上调Caspase-8基因表达有关。     

化疗药物诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的研究

目的观察顺铂(CDDP)、长春新碱(VCR)、平阳霉素(BLM)、顺铂+平阳霉素、顺铂+长春新碱在体外对人宫颈肿瘤细胞的作用。方法用四甲基偶氮唑盐(MTT)测定法观察药物对Hela细胞的影响,用流式细胞仪观察细胞凋亡变化。结果CDDP、VCR、BLM单用对Hela细胞抑制率和凋亡率均高于联合用药组。各用药组对细胞抑制率均高于凋亡率,仅CDDP组两作用相近。结论CDDP、VCR、BLM能有效抑制Hela细胞生长,联合应用出现拮抗作用。     

熊去氧胆酸选择性诱导人肝肿瘤细胞凋亡及抑制增殖的实验研究

目的探讨熊去氧胆酸(UDCA)对肝肿瘤细胞株诱导凋亡及抑制增殖的作用和机制。方法用四氮唑蓝法、流式细胞术、脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法、Wright-Giemsa染色法、电镜及免疫细胞化学等方法,观察UDCA对肝肿瘤细胞株HepG2、BEL7402和正常人肝细胞株L-02的生长活力、细胞凋亡、细胞周期及Bax/bcl-2基因表达的影响。结果UDCA对HepG2、BEL7402细胞株具有显著地抑制生长、诱导凋亡、阻滞细胞周期于S期、降低bcl-2和提升Bax表达的作用。UDCA对HepG2及BEL7402的IC50分别为0.92,0.86mmol/L。UDCA(1.0mmol/L)对HepG2及BEL7402的凋亡率分别为42%及44%,明显高于对照组(P<0.01)。UDCA对L-02细胞无明显作用。结论UDCA对HepG2、BEL7402细胞株有显著地抑制增殖及诱导凋亡作用,该作用可能与UDCA阻滞细胞周期、降低bcl-2和提升Bax的表达有关。     

熊去氧胆酸选择性诱导人肝肿瘤细胞凋亡及抑制增殖的实验研究

目的: 探讨熊去氧胆酸 (UDCA)对肝肿瘤细胞株诱导凋亡及抑制增殖的作用和机制。方法:用四氮唑蓝法、流式细胞术、TUNEL法、Wright Giemsa染色法、电镜及免疫细胞化学等方法,观察UDCA对肝肿瘤细胞株HepG2,BEL7402和正常人肝细胞株L 02的生长活力、细胞凋亡、细胞周期及Bax/bcl 2表达的影响。结果: UDCA对HepG2,BEL7402细胞株生长的抑制作用随药物浓度增高而增强(r2 =0. 96, P<0. 01;r2 =0. 97, P<0. 01;48h)。UDCA对HepG2及BEL7402的IC50分别为0. 92 mmol·L-1, 0. 86 mmol·L-1。UDCA(1. 0mmol·L-1 )对HepG2及BEL7402的凋亡率分别为(42±6) %及 (44±4) %,明显高于对照组(P<0. 01),并且阻滞细胞周期于S期。以UDCA(0. 8mmol·L-1 )处理HepG2 后bcl 2 表达由(24. 3±2. 4) %降低为 (10. 1±1. 6 ) %,Bax表达由(43±5) %升高为 (59±3) % (P<0. 01 );处理BEL7402细胞后bcl 2表达由 (21. 6±1. 8) %降为(11. 6±2. 1) %,Bax表达由 ( 44±4 ) %升高为(59±3) % (P<0. 01)。UDCA对L 02细胞无明显作用。结论: UDCA对HepG2, BEL7402细胞株有显著的抑制增殖及诱导凋亡作用,它可能与UDCA阻滞细胞周期、降低bcl 2和提升Bax的表达有关。