流式细胞术研究~(60)Co辐照血白细胞Bcl-2与Bax凋亡基因蛋白表达

目的　了解不同剂量60 Co辐照血淋巴细胞、粒细胞与单核细胞细胞Bcl 2与Bax凋亡基因蛋白表达。方法　应用流式细胞术 (FCM)测定。结果　经不同剂量60 Co辐照的离体全血淋巴、单核与粒细胞Bcl 2凋亡基因蛋白表达均有不同程度的下降 (P <0 .0 1) ,并随着60 Co辐照剂量的逐渐增加Bcl 2凋亡基因蛋白表达下降也逐渐明显。对淋巴细胞Bax凋亡基因蛋白表达除 35Gy剂量组与对照组比较呈显著性 (P <0 .0 1)外 ,其他剂量组未呈显著性 (P>0 .0 5 ) ;单核细胞Bax凋亡基因蛋白表达除 30Gy剂量组与对照组比较未呈显著性 (P >0 .0 5 )外 ,其他剂量组均呈显著性 (P <0 .0 1) ;粒细胞Bax凋亡基因蛋白表达未呈显著性 (P >0 .0 5 )。淋巴细胞与粒细胞经60 Co辐照后的Bcl 2 /Bax的比值不同程度的下降 (P <0 .0 1) ,尤其是淋巴细胞下降更为明显 ;单核细胞比值无改变 (P >0 .0 5 )。结论　 15 35Gy60 Co辐照可促使离体全血淋巴细胞与粒细胞凋亡 ,并且可应用Bcl 2 /Bax比值作为判断离体全血淋巴细胞经60 Co辐照后是否灭活的检测指标之一。     

人参皂甙Re抗大鼠急性缺血-再灌流心肌细胞凋亡及相关基因蛋白表达

目的　观察人参皂甙Re抗急性缺血再灌流心肌细胞凋亡及Bcl 2、Bax、Bad和Fas基因蛋白表达 ,探讨人参皂甙Re抑制心肌细胞凋亡的可能机制。方法　结扎Wistar大鼠左冠状动脉前降支 ,建立大鼠缺血 再灌流动物模型 ;采用透射电镜、缺口末端标记法检测心肌凋亡细胞 ,利用光学显微镜进行细胞计数 ;免疫组织化学检测Bcl 2、Bax、Bad和Fas基因蛋白的表达 ,并利用图像分析系统测量平均光密度值进行定量分析。结果　①假手术组未发现心肌凋亡细胞。缺血 再灌流组心肌凋亡细胞数为 (13 4 4 5± 4 5 61)个 /视野 ,Re治疗组 (90 66± 19 2 2 )个 /视野 ,两组间差异有显著性意义 (P <0 0 1)。②免疫组织化学检测发现缺血 再灌流组及Re治疗组Bcl 2、Bax、Bad和Fas基因蛋白的表达较假手术组明显增加 (P <0 0 5 ) ,Re治疗组Bcl 2的表达与缺血 再灌流组比较差异无显著性意义 (P >0 0 5 ) ,而Bax、Bad、Fas的表达明显下降 (P <0 0 5 ) ,人参皂甙Re治疗组Bcl 2 /Bad、Bcl 2 /Bad、Bcl 2 /Fas比值均较假手术组与缺血 再灌流组明显增大。结论　人参皂甙Re治疗可以抑制急性缺血再灌流诱导的心肌细胞凋亡 ,其作用机制可能是抑制了促凋亡基因Bax、Bad、Fas的表达 ,从而使Bcl 2 /Bax、Bcl 2 /Bad、Bcl 2 /Fas比值增大。     

百草枯中毒致大鼠肺组织损伤时氨溴索对肺组织Bcl-2/Bax的表达及细胞凋亡的影响

目的 探讨在百草枯(PQ)中毒所致大鼠急性肺损伤时氨溴索(AM)对肺组织Bcl-2/Bax的表达及细胞凋亡的影响.方法 44只大鼠随机分为4组:正常对照组(C组)6只、AM对照组(AM组)6只、急性肺损伤组(PQ组)16只和急性肺损伤+AM治疗组(PQ+AM组)16只.取肺组织苏木精-伊红(HE)染色来评价肺组织损伤情况;检测血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;蛋白质印迹方法检测肺组织p38丝裂酶原激活蛋白激酶(MAPK)表达;肺组织Bcl-2、Bax免疫组化分析;TUNEL检测肺组织细胞凋亡.结果 C组和AM组大鼠的肺组织结构基本完整,PQ组肺组织损伤程度加重,PQ+AM组肺组织损伤程度较PQ组减轻.PQ组血清TNF-α水平、p38 MAPK和Bax蛋白表达、肺组织细胞凋亡均较C组和AM组显著增加(P＜0.05),PQ+AM组较PQ组均有降低(P＜0.05),而抗凋亡基因Bcl-2在AM干预后较PQ组升高(P＜0.05).结论 百草枯中毒导致了大鼠急性肺损伤,经氨溴索治疗后,通过调节p38 MAPK、Bcl-2和Bax蛋白的表达从而使肺组织细胞凋亡减少,从而有效地减轻了百草枯中毒所致的大鼠急性肺损伤.     

N-乙酰半胱氨酸对百草枯中毒大鼠肺组织细胞凋亡及Fas/FasL的影响

目的 探讨百草枯( paraquat,PQ)中毒所致大鼠急性肺损伤时N-乙酰半胱氨酸( N-acetylcysteine,NAC)对肺组织的细胞凋亡和Fa/FasL表达的影响.方法 将SD大鼠随机(随机数字法)分为对照组、PQ染毒组和NAC治疗组,每组15只.复制PQ染毒大鼠急性肺损伤模型,腹腔注入2％百草枯液( 25 mg/ kg);NAC治疗组为0.5h后对PQ染毒大鼠,再腹腔注射NAC (200 mg/kg)进行干预;对照组腹腔注射等量生理盐水.利用原位缺口末端标记(TUNEL)法检测肺组织细胞凋亡率,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)方法分别检测肺组织Fas/FasL mRNA和蛋白的表达.结果 PQ组和对照组相比细胞凋亡率和Fas/FasL系统表达差异均具有统计学意义(P＜0.05);NAC治疗组细胞凋亡率和fas/fasL表达明显降低,和PQ组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 NAC可能通过抑制Fas/FasL系统活化抑制百草枯中毒大鼠肺组织细胞凋亡.     

左旋四氢巴马汀在大鼠急性脑缺血再灌注时对Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的　观察左旋四氢巴马汀 (L tetrahydropalmatine ,L THP)在脑缺血再灌注时对凋亡相关基因Bcl 2、Bax蛋白表达的影响。方法　建立大鼠急性全脑缺血再灌注模型 ,采用免疫组织化学法、原位末端标记法 ,分别检测假手术组 (S组 )、缺血再灌注组 (Ⅰ组 )、L THP治疗组 (T组 )海马CA1区Bcl 2、Bax蛋白表达水平及凋亡细胞数。结果　 (1)脑缺血再灌注时 ,海马CA1区Bcl 2蛋白的表达显著增加 (P<0 0 1) ,但随时间的延长 ,增加幅度逐渐减小 ;而T组Bcl 2蛋白表达于相应的时间点则明显大于I组 (P<0 0 1)。 (2 )I组各时间点Bax蛋白表达均大于S组 (P <0 0 1) ,且随时间延长增加幅度逐渐增大 ;而T组Bax蛋白表达在相应时间点则下降 (P <0 0 1)。 (3)T组的神经细胞凋亡数与Bcl 2 /Bax蛋白阳性细胞数比值的关系为负相关 :r=- 0 94 173,P <0 0 0 1。 (4)神经细胞凋亡数随再灌注时间延长而增加 ,L THP可减少细胞凋亡数。结论　在脑缺血再灌注细胞凋亡过程中 ,L THP可通过上调Bcl 2蛋白表达 ,下调Bax蛋白表达 ,减少神经元凋亡 ,对脑缺血损伤起保护作用     

血清淀粉样蛋白A在百草枯中毒致小鼠急性肺损伤中的表达及意义

目的:观察血清淀粉样蛋白A1(SAA1)在百草枯中毒小鼠急性肺损伤的表达及意义。方法:SPF级健康雄性昆明小鼠随机分为对照组和中毒组。中毒组予一次性腹腔注射百草枯(20 mg/kg)复制染毒小鼠模型,对照组予注射等剂量生理盐水,24 h后处死小鼠并取材。检测小鼠肺湿/干重比,苏木精-伊红染色观察肺组织病理变化,原位末端缺刻标记法观察细胞凋亡,酶联免疫吸附法检测小鼠血清SAA的表达情况,免疫荧光定量PCR法检测小鼠肺组织TGF-β1 mRNA表达的情况。结果:与对照组相比,中毒组小鼠肺组织湿/干重比、肺组织炎症及细胞凋亡显著增加,血清SAA含量明显增多(P0.05);肺组织TGF-β1 mRNA的表达均增高。结论:SAA在百草枯中毒小鼠肺损伤中显著增高,参与其炎症过程,并在其病程进展中发挥重要作用。     

Bcl-2,Bax和线粒体膜蛋白在一氧化氮供体诱导HL-60细胞凋亡中的改变

本研究探讨外源性一氧化氮 (NO)供体硝普钠 (SNP)对HL 6 0细胞诱导凋亡的可能机制。将HL 6 0细胞与SNP在体外培养 ,用DNA片段原位末端标记法 (TUNEL)测定原位细胞凋亡率 ;用流式细胞仪测定细胞DNA倍体和周期分析及Bcl 2、Bax、线粒体膜蛋白表达率的变化。结果表明 :SNP可诱导HL 6 0细胞凋亡 ,两者之间有明显的量效和时效关系。 1.0mmol/LSNP作用 4 8小时后 ,HL 6 0细胞的凋亡率分别为亚二倍体峰 (4 2 .2± 3.5 ) % ,TUNEL测定凋亡细胞率为 (5 2 .5± 7.6 ) % ,显著高于空白对照组和同浓度的高铁氰化钾 (PFC)组 ;Bax基因蛋白和线粒体膜蛋白 (APO2 .7)表达增加 ,bcl 2基因蛋白表达降低。Bax、Bcl 2和APO2 .7的表达率与SNP两者之间也有明显的量效和时效关系。结论 :外源性一氧化氮供体诱导HL 6 0细胞凋亡过程中 ,线粒体膜蛋白表达显著上调并伴随Bax和Bcl 2蛋白的表达改变。     

人参皂甙Rb1与Re抗大鼠实验性缺血再灌注心肌细胞凋亡及相关基因蛋白表达

目的　观察人参皂甙Rb1和Re对缺血再灌注心肌细胞凋亡及Bcl 2、Bax、Bad、Fas基因蛋白表达的影响 ,探讨人参皂甙Rb1和Re抑制心肌细胞凋亡的可能机制。方法　结扎Wistar大鼠左冠状动脉前降支(LAD) ,建立大鼠缺血再灌注动物模型 ;采用透射电镜、缺口末端标记法检测心肌凋亡细胞 ,利用光学显微镜进行细胞计数 ;免疫组织化学检测Bcl 2、Bax、Bad、Fas基因蛋白表达 ,并利用图象分析系统测量平均光密度值进行定量分析。结果　①假手术组未发现心肌凋亡细胞 ;缺血再灌注组心肌凋亡细胞数为 13 4.45± 45 .61个 /视野 ,Rb1治疗组为 5 1.65± 13 .71个 /视野 ,Re治疗组为 90 .66± 19.2 2个 /视野 ,3组间有显著差异 (P <0 .0 1) ;②缺血再灌注组、Rb1治疗组及Re治疗组Bcl 2、Bax、Bad、Fas基因的表达均较假手术组明显增加 (P <0 .0 5 ) ,Rb1治疗组和Re治疗组Bcl 2的表达与缺血再灌注组比较无明显差异 (P >0 .0 5 ) ,而Bax、Bad、Fas的表达明显下降 (P <0 .0 5 ) ,Rb1抑制Bax基因蛋白表达的效应较Re更为明显 (P <0 .0 5 )。Rb1治疗组和Re治疗组Bcl 2 /Bad、Bcl 2 /Bad以及Bcl 2 /Fas比值均较假手术组及缺血再灌注组明显增加 ,Rb1治疗组Bcl 2 /Bax比值较Re治疗组增大。结论　心肌缺血再灌注诱导心肌细胞凋亡 ,人参     

人参皂甙Rb1对肺缺血-再灌注损伤细胞凋亡及其调控基因表达的影响

目的:探讨人参皂甙Rb1对肺缺血再灌注(I/R)损伤细胞凋亡及其调控基因Bcl2、Bax表达的影响。方法:应用兔单肺原位热I/R模型,将24只健康家兔随机分为假手术组(S组)、I/R组及人参皂甙Rb1治疗组(Rb1组);I/R组行左肺缺血60min、再灌注120min,Rb1组在行左肺I/R前静脉给予人参皂甙Rb120mg/kg。应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测肺凋亡细胞,免疫组化法检测Bcl2、Bax基因表达,并利用图像分析系统进行定量分析。结果:I/R组及Rb1组细胞凋亡指数(AI)均明显高于S组(P均<0.01),Rb1组AI较I/R组明显降低(P<0.01)。I/R组及Rb1组Bcl2、Bax表达均较S组显著增加(P均<0.01),Rb1组Bcl2表达虽高于I/R组,但差异无显著性(P>0.05);Rb1组Bax表达明显低于I/R组(P<0.05)。Rb1组Bcl2/Bax比值显著高于I/R组(P<0.05),与S组较接近。结论:人参皂甙Rb1能抑制肺I/R的促凋亡基因Bax表达,但不影响抑制凋亡基因Bcl2表达的上调,可使Bcl2/Bax比值增加,从而减少细胞凋亡,减轻肺I/R损伤。     

异丙酚对兔主动脉阻断脊髓细胞凋亡的影响

目的探讨异丙酚对家兔主动脉阻断所致脊髓细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。方法24只家兔随机分为假手术组(A组)、缺血再灌注损伤组(B组)和异丙酚组(C组)。B、C组阻断腹主动脉40min,再灌注7d;C组于阻断腹主动脉前10min静脉注射异丙酚5mg/kg,继以微量泵静脉持续输注异丙酚20mg·kg-1·h-1直至松夹。分别测定阻断前10min(C10)、开放即刻(C40)、再灌注60min(R60)及7d(R7d)血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)值;检测脊髓凋亡神经元及Bax、Bcl2蛋白表达;观察术后后肢神经功能。结果1缺血、及再灌注后B组MDA值明显高于C10值及A组相应时间点值(P<0.05或P<0.01),SOD值变化同MDA变化相反;C组MDA值明显高于C10值(P<0.05),但显著低于B组相应时间点值(P<0.05),较A组差异无显著性。2B组Bax蛋白表达明显高于A组(P<0.05),Bcl2蛋白表达明显低于A组(P<0.01);C组Bax蛋白表达明显低于B组,但高于A组(P<0.01和P<0.05),Bcl2蛋白表达明显高于B组及A组(P均<0.01)。3B组凋亡细胞指数明显多于A组;C组明显少于B组,但高于A组(P<0.01和P<0.05)。4C组瘫痪发生率明显低于B组,其后肢神经功能明显好于B组(P均<0.01)。结论异丙酚能抑制家兔主动脉阻断所致的脊髓细胞凋亡的发生,其机制可能与其抗过氧化反应、抑制Bax蛋白、增强Bcl2蛋白的表达有关。     

百草枯中毒大鼠肺组织热休克蛋白70表达及乌司他丁干预研究

目的 观察热休克蛋白70(HSP70)在百草枯(Paraquat PQ)中毒大鼠肺组织中表达及乌司他丁干预对其影响.方法 72只Spragne-Dawley(SD)大鼠随机(随机数字法)分为3组:空白对照组(A组)、染毒组(B组)和乌司他丁组(C组),每组各24只.B组和C组PQ灌胃(80 mg/kg)染毒建立急性中毒模型.C组于PQ灌胃后30 min腹腔注射给UTI(10万U·kg-1·d-1).观察染毒后12,24,48,72 h各组肺组织HSP70的表达、湿/干重比(W/D)和病理改变.HSP70采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定.计量资料以均数±标准差((x)±s)表示,组间单因素方差分析,结果以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 与A组相比,各时间点B组和C组肺组织HSP70的表达明显增强,尤以C组为甚,差异有统计学意义.B组和C组肺组织病理检查可见PQ中毒后肺泡壁充血、炎性细胞浸润,并有局灶性出血.但C组病理改变较轻.结论 乌司他丁增强HSP70的表达,从而减轻PQ中毒大鼠急性肺损伤.     

Expression of heat shock protein 70 in lung tissues of acute paraquat poisoned rats and intervention of ulinastatin

BACKGROUND:

Paraquat (PQ) is an effective herbicide and is widely used in agricultural production, but PQ poisoning is frequently seen in humans with the lung as the target organ. Clinically pulmonary pathological changes are often used to predict the severity and prognosis of the patients. In this study, we observed the expression of heat shock protein 70 (HSP70) in rat lung after PQ poisoning and to investigate the therapeutic effects of ulinastatin.

METHODS:

Seventy-two adult healthy SD rats were randomly divided into a control group (group A, n=24), a poisoning group (group B, n=24), and an ulinastatin group (group C, n=24). The rat models of acute PQ poisoning were established by intra-gastric administration of 80 mg/kg PQ to rats of groups B and C, and the rats of group C were intra-peritoneally injected with 100 000 IU/kg ulinastatin 30 minutes after poisoning. The expression of HSP70 in lung tissue was observed, and W/D and histopathological changes in the lung tissue were compared 12, 24, 48 and 72 hours after poisoning. The expression of HSP70 in the lung tissue was assayed by using RT-PCR. All quantitative data were processed with one-way analysis of variance to compare multiple sample means.

RESULTS:

Compared to group A, the expression of HSP70 in the lung of rats in groups B and C increased significantly at all intervals (P<0.05). The pathological changes in lung tissue of rats with PQ poisoning included congestion, leukocytes infiltration and local hemorrhage, whereas those of group C were significantly lessened.

CONCLUSION:

Ulinastatin may ameliorate acute lung injury to some extent after PQ poisoning in rats by enhancing the expression of HSP70.KEY WORDS: Paraquat, Poisoning, Ulilnastatin, Heat shock protein, Acute lung injury     

Prospective experimental studies on the renal protective effect of ulinastatin after paraquat poisoning

BACKGROUND:

Paraquat (PQ) is an effective herbicide and is widely used in agricultural production, but PQ poisoning is frequently seen in humans with the lung as the target organ. Currently, there are many studies on lung injury after PQ poisoning. But the kidney as the main excretory organ after PQ poisoning is rarely studied and the mechanisms of this poisoning is not very clear. In this study, we observed the expression of caspase-3 and livin protein in rat renal tissue after PQ poisoning as well as the therapeutic effects of ulinastatin.

METHODS:

Fifty-four Sprague-Dawley (SD) rats were randomly divided into three experimental groups: control group (group A), paraquat poisoning group (group B) and ulinastatin group (group C), with 18 rats in each group. Rats in group B and group C were administered intragastrically with 80 mg/kg PQ, rats in group C were injected peritoneally with 100 000 U/kg ulinastatin once a day, while rats in group A were administered intragastrically with the same volume of saline as PQ. At 24, 48, 72 hours after poisoning, the expression of livin in renal tissue was detected by Westen blotting, the expression of caspase-3 was detected by immunohistochemistry, and the rate of renal cell apoptosis was tested by TUNEL detection. The histopathological changes were observed at the same time.

RESULTS:

Compared to group A, the expression of caspase-3 in the renal tissue of rats in groups B and C increased significantly at any time point. Compared with group B, the expression of caspase-3 in renal tissue of rats in group C decreased. Compared with group A, the expression of livin in renal tissue in rats of groups B and C increased significantly at any time point (P<0.01), especially in group C (P<0.01). TUNEL method showed that the rate of renal cell apoptosis index was higher in group B at corresponding time points than in group A (P<0.01), and was lower in group C at corresponding time points than in group B (P<0.01).

CONCLUSION:

UTI has a protective effect on the renal tissue of rats after paraquat poisoning through up-regulating the expression of livin and down-regulating the expression of caspase-3, but the regulation path still needs a further research.KEY WORDS: Paraquat, Ulinastatin, Renal, Apoptosis, Livin, Caspase-3     

血红素氧合酶-1在百草枯中毒鼠肺组织中的表达及三七总皂甙的保护作用

目的探讨急性百草枯(PQ)中毒鼠肺组织病理损伤和肺组织血红素氧合酶-1(HO-1)的表达及三七总皂甙(PNS)的保护作用。方法 150只SD雄性鼠分为正常对照组(C组)30只、PQ中毒组(PQ组)60只及PNS组60只。PQ组和PNS组一次性灌胃PQ 25 mg/kg染毒,C组给予等体积生理盐水灌胃。其中PNS组于染毒前15 min以PNS 50 mg/kg阴茎静脉注射保护,以后1次/d给药直至处死前;PQ组、C组分别在同时间点给予等体积生理盐水。观察各组大鼠在中毒后6、12 h,1、3、5、7 d肺组织病理改变,采用蛋白质印迹法分析肺组织HO-1蛋白表达和反转录-聚合酶链反应方法测定鼠肺组织HO-1 mRNA的表达。结果 C组HO-1蛋白和HO-1 mRNA绝大多数标本有弱表达,个别标本不表达;与C组相比PQ组及PNS组HO-1蛋白和HO-1 mRNA表达增强,差异有统计学意义(P<0.05);PQ组HO-1蛋白和HO-1 mRNA的表达在1 d达高峰之后下降,第3天基本恢复到C组水平;PNS组与PQ组相似,但在6 h、12 h、1 d及3 d高于PQ组,差异有统计学意义(P<0.05),至第5天和第7天二者相比差异无统计学意义(P<0.05)。PQ组肺组织病理损伤评分在6、12 h,1、3、5、7 d各亚组均高于PNS相应组,差异有统计学意义(P<0.05),C组肺组织病理大致正常,与PQ组及PNS组相比,差异有统计学意义(P<0.001)。结论 HO-1参与PQ中毒所致急性肺损伤,PNS对PQ中毒所致急性肺损伤有保护作用。     

Protective effect of gw3965 on pq-induced acute lung injury in mice via inhibition of p38mapk signal pathway北大核心CSCD

Objective To investigate the protective effects and the possible mechanisms of GW3965, a liver X receptors (LXRs) agonist, in mice with PQ-induced acute lung injury. Methods A total of 40 male c57BL/6J mice were randomly(random number) divided into four groups. In control group, mice were intra-peritoneally injected with 0.1 mL normal saline solution twice at an interval of 10 min. In paraquat poisoning group, mice were intra-peritoneally injected with paraquat in a dose of 28 mg/kg and 0.1 mL normal saline solution 10 min later. In low dose GW3965 treatment group, mice were intra-peritoneally injected with GW3965 in a dose of 10 mg/kg 10 min after PQ administration. In high dose GW3965 treatment group, mice were intra-peritoneally injected with GW3965 in a dose of 50 mg/ kg at 10 min after PQ administration. The mice were sacrificed at 72 h after PQ administration to collect lung tissues and blood specimens. Malonaldehyde(MDA) levels in blood were measured by thiobarbituric acid (TBA) method, and IL-IP and TNF-a levels in blood and lung tissues were measured using ELISA assay. Lung tissues were collected to determine the wet-to-dry (W/D) ratios ,histopathology changes by HE staining , and the levels of p38 MAPK, Bax and Bcl-2 were detected by Western blot as well as cell apoptosis by TUNEL. MultIPle groups were compared with One-way ANOVA and pairwise comparison among groups were made by least significance difference (LSD) determination. Results Compared with the control group, the PQ group had more severe lung injury, greater wet/dry weight ratio, higher MDA level in blood, higher IL-IP and TNF-a level in blood and lung tissues, higher expression of p38 MAPK, greater Bax/Bcl-2 ratio and greater numbers of cell apoptosis in lung tissucs(P<0.05). GW3965 treatment attenuated all these changes(P<0.05), and the effect of GW3965 in high dose treatment group was more remarkableCPcO.OS). Conclusion GW3965 significantly attenuates PQ-induccd acute lung injury in mice. This effect may be associated with the inhibition of p38 MAPK signal pathway. © 2018 Chinese Medical Association. All rights reserved.     

内皮祖细胞移植对百草枯中毒所致急性肺损伤MAPK通路蛋白表达的影响

目的观察百草枯(PQ)中毒导致的急性肺损伤后内皮祖细胞(EPCs)移植治疗对大鼠肺组织丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路蛋白表达的影响。方法36只SD雄性大鼠按随机数字表法平均分成三组:正常对照组、PQ损伤组和EPCs治疗组,每组12只。EPCs移植后24 h处死大鼠并收集大鼠肺组织和血清。分别采用比色法测定肺组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清中细胞炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,血气分析仪检测大鼠动脉血氧分压(PaO₂),肺组织切片后通过HE染色对肺损伤程度进行评估,Western blot方法测定肺组织中MAPK信号通路蛋白表达。结果与对照组比较,PQ损伤组大鼠血清IL-1β(μg/L:25.16±1.71 vs.34.94±1.68)和TNF-α(μg/L:51.17±2.33 vs.78.46±5.16)含量明显增加(P<0.05),PQ损伤组大鼠肺组织中MDA(nmol/m L:3.08±0.19 vs.6.89±0.44)含量明显增加(P<0.05),但是SOD(U/m L:249.11±4.71 vs.191.15±3.21)活性降低,且PaO₂(mm Hg:92.19±3.31 vs.40.18±5.54)下降(P<0.05);与PQ损伤组比较,EPCs治疗组大鼠SOD(U/m L:191.15±3.21 vs.216.64±2.39)活性升高(P<0.05),MDA(nmol/m L:6.89±0.44 vs.5.13±0.40)、IL-1β(μg/L:34.94±1.68 vs.26.11±1.43)和TNF-α(μg/L:78.46±5.16 vs.60.18±4.31)含量降低(P<0.05),PaO₂(mm Hg:40.18±5.54 vs.56.81±5.16)升高(P<0.05)。MAPK通路蛋白的磷酸化水平在对照组中仅有少量表达,而给予百草枯后表达量显著升高(P<0.05),使用EPCs治疗后各蛋白表达量又显著降低(P<0.05)。结论百草枯中毒可激活包含p38MAPK、C-JUN氨基末端激酶(JNK)、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)在内的MAPK通路。EPCs可以改善PQ中毒大鼠症状,减少肺部损伤,改善供氧,其机制可能与抑制MAPK通路各蛋白磷酸化有关。     

百草枯中毒急性肺损伤TNF-α的表达及大黄保护作用的机制

目的 观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在百草枯(PQ)中毒人鼠急性肺损伤中的表达,探讨大黄可能的作用机制.方法 PQ 50 mg/kg灌胃染毒制作PQ中毒Spragne-Dawley(SD)大鼠急性肺损伤模型.144只SD大鼠随机分为:空白对照组(A组,n=24),染毒组(B组,n=48),大黄组(C组,n=48)和空白十预组(D组,n=24).PQ(50 mg/kg)染毒,15 min内牛大黄(300 mg/kg·d)灌胃十预.血球记数板记数肺泡灌洗液巾中性粒细胞和细胞总数,Lowry法测定蛋白含量,计算中性粒细胞百分比及肺泡通透指数.取左肺HE染色脱察组织病理变化,免疫组织化学法检测TNF-α的表达.计量资料以均值±标准筹(x±s)表示,绀问单冈素方差分析,两两组间比较采用q检验,结果以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 与A组相比,B组肺组织充血、水肿,炎性细胞浸润,少数见纤维化改变,肺泡灌洗液中性粒细胞比、蛋白含量及肺泡通透指数显著增高(P＜0.01);TNF-α染毒12 h表达明显增加,免疫组织化学评分(IHS)升高,1 d达高峰,差异有统计学意义(P＜0.05).之后维持较高水平,减轻趋势平缓.C组病理改变减轻,TNF-α亦呈阳性表达,IHS升高,但与B组相比,表达延迟,升幅减低,减弱趋势明显,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 抑制TNF-α的表达,减轻炎症反应,可能是大黄减轻PQ中毒人鼠急性肺损伤的有效途径之一.     

百草枯中毒大鼠急性肺损伤机制及姜黄素的干预研究

目的探讨急性百草枯中毒大鼠肺组织氧化应激及脂质过氧化损伤机制及姜黄素的干预作用。 方法将120只成年雄性SD大鼠按不同造模方法用随机数字表法分成对照组、百草枯中毒组、姜黄素干预组,每组大鼠40只。百草枯中毒组腹腔注射百草枯15 mg/kg,姜黄素干预组腹腔注射姜黄素200 mg/kg,15 min后腹腔注射百草枯15 mg/kg,对照组腹腔注射等容量的生理盐水。百草枯中毒组及姜黄素干预组于染毒后（对照组于腹腔注射后）3 h、6 h、24 h、3 d、7 d分别随机抽取8只大鼠取材。荧光实时定量PCR法测定各组大鼠肺组织中的转化生长因子（TGF）-β₁ mRNA的表达量,硫代巴比妥酸比色法、分光光度计比色法、黄嘌呤氧化酶法分别测定肺组织匀浆中丙二醛、髓过氧化物酶（MPO）、超氧化物歧化酶（SOD）活性,光镜下观察各组肺组织病理变化。 结果染毒后6 h、24 h、3 d、7 d,与对照组相比,百草枯中毒组和姜黄素干预组肺组织TGF-β₁ mRNA的表达量明显升高（F = 136.928、32.282、52.008、30.940,P均< 0.05）,丙二醛（F = 132.896、64.988、30.622、30.192）、MPO（F = 34.738、202.578、122.019、119.626）含量升高（P均< 0.05）,而SOD活力降低（F = 34.738、202.578、122.019、119.626,P均< 0.05）;与百草枯中毒组相比,姜黄素干预组各时间点肺组织TGF-β₁ mRNA表达量、丙二醛及MPO含量均降低（P均< 0.05）,肺组织SOD活力均升高（P均< 0.05）。 结论氧化应激及细胞膜脂质过氧化过程的启动可能是百草枯中毒急性肺损伤的机制之一,姜黄素可能通过阻止该过程减轻肺损伤的程度。