救脑益智方剂水提液对人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞的保护作用

目的 通过观察复方中药救脑益智方剂水提液对人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞生长以及胰岛素信号通路的影响, 探讨其对神经细胞保护作用的机制。方法 体外培养SH-SY5Y细胞, 分为对照组(C组)、救脑益智1号方组和3号方组, 每组药物剂量分别为0.0625 mg/mL、0.125 mg/mL、0.25 mg/mL、0.5 mg/mL和1 mg/mL, 测定各组细胞的噻唑蓝(MTT)代谢率, 选定0.125 mg/mL进行细胞免疫荧光染色, 观察细胞形态和胰岛素受体底物-1(IRS-1)、cAMP反应元件结合蛋白(CREB)表达的变化。结果 与对照组相比, 救脑益智组MTT代谢率升高(P<0.05), 细胞形态好, 表现为细胞胞体饱满、贴壁良好、突起延长, IRS-1和CREB表达增加。结论 复方中药救脑益智水提液能促进神经细胞生长, 提高神经元胰岛素信号通路相关因子IRS-1和CREB表达, 推测其神经保护作用机制与胰岛素信号通路有关。     

李氏5号方对D-半乳糖老化小鼠海马神经元NGF信号转导的影响

通过检测D 半乳糖老化小鼠海马神经元NGF(神经生长因子 )、PI3K(磷脂酰肌醇酯 3激酶 )、Akt/PKB(蛋白激酶B)、CREB(cAMP应答元件结合蛋白 )的表达 ,观察李氏 5号方对海马神经元NGF信号转导的影响。将小鼠随机分为 5组 :正常对照组 (C组 )、D 半乳糖模型组 (D组 )、李氏 5号方大剂量药物治疗组 (L组 )、中剂量药物治疗组(M组 )、小剂量药物治疗组 (S组 )。D、L、M、S 4组每日皮下注射半乳糖 65mg/kg。L、M、S 3个治疗组分别灌胃李氏5号方 0 .6、0 .3、0 .1 5g/kg ,连续 3个月。免疫组织化学染色方法和Westernblotting检测海马神经元NGF、PI3K、Akt/PKB、CREB的表达。结果 :4种抗体C组深染的阳性细胞在海马广泛分布 ,细胞计数与D组有显著性差异 ;D组海马阳性反应细胞着色浅 ,少有突起 ,细胞数目少。 3个剂量李氏 5号方治疗组染色结果与C组相似 ,与半乳糖老化组比较均有显著性差异 ,李氏 5号方水提取液能明显上调NGF的PI3K通路中的一些信号转导蛋白 ,提示 :李氏 5号方水提取液中可能含有能激活PI3K的活性物质 ,为深入研究李氏 5号方的有效成分打下基础。     

通脉益智胶囊对脑缺血再灌注损伤诱导的小鼠海马神经细胞凋亡的影响

目的　观察通脉益智胶囊对脑缺血再灌注损伤诱导的小鼠海马神经细胞凋亡的影响 ,探讨其神经保护作用的机制。方法　雄性ICR小鼠 4 0只 ,随机分为 4组 :假手术组、模型组、通脉益智胶囊组、西药 (喜德镇 )对照组。建立小鼠反复脑缺血再灌注模型。分别采用光学显微镜、透射电子显微镜观察 ,原位末端标记法 (TUNEL)染色并计算凋亡指数 (ApoptosisIndexAI)。结果　通脉益智胶囊组病理损害明显减轻 ,凋亡指数显著低于模型组及西药对照组。结论　通脉益智胶囊可显著抑制由脑缺血再灌注损伤诱导的小鼠海马神经细胞凋亡 ,从而起到一定程度的神经保护作用     

肉苁蓉总苷对D-半乳糖脑老化模型小鼠的保护作用

目的 探讨肉苁蓉总苷(GCs)对D 半乳糖(D gal)脑老化模型小鼠的保护作用机制。方法实验分 30d和 50d,每期NIH小鼠各为 120只,随机分为 6组:正常对照组 (NC)、模型组 (D gal)、VitaminE组、GCs组:分小、中、大剂量组[ (mg.kg-1.d-1 )31. 25、62. 5、125],每组 20只。除NC组外,在各组小鼠皮下注射D gal(50mg.kg-1.d-1 );NC组皮下注射NS, D gal组和NC组给予等容积饮水灌胃,VitaminE组和GCs组灌胃给药,每日 1次,均连续皮下注射和灌胃 30d和 50d。分别测定 5min错误次数、潜伏期、脑组织SOD的活性、MDA、LF含量,并观察 50d后海马CA1区组织结构形态的变化。结果 (1)5min内的错误次数: 30d和 50d的D gal组分别为(8. 25±4. 03)次和(9. 63±6. 18)次,均显著高于其它各组(P均 <0. 01)。(2)潜伏期: 30d和 50d的D gal组分别为 (25. 21±13. 86)s和(31. 75±17. 77)s,低于NC组、GCs中剂量组和大剂量组(P<0. 05,P<0. 01)。(3)SOD活性: 30d和 50dD gal组脑组织的SOD活性较其它各组低(P<0. 05,P<0. 01)。(4)MDA含量: 30d和 50dD gal组脑组织的MDA含量均较其它各组高 (P<0. 05,P<0. 01)。(5)LF含量: 30d和 50dD gal组脑组织的LF含量均较NC组高, 30d的脑组织GCs小剂量组、VitaminE组及 50dGCs各组及VitaminE组均较D gal     

肉苁蓉总苷对D-半乳糖脑老化模型小鼠的保护作用

目的探讨肉苁蓉总苷(GCs)对D-半乳糖(D-gal)脑老化模型小鼠的保护作用机制.方法实验分30d和50d,每期NIH小鼠各为120只,随机分为6组:正常对照组(NC)、模型组(D-gal)、VitaminE组、GCs组:分小、中、大剂量组[(mg.kg -1.d -1)31.25、62.5、125],每组20只.除NC组外,在各组小鼠皮下注射D-gal(50 mg.kg -1.d -1 );NC组皮下注射NS, D-gal组和NC组给予等容积饮水灌胃,VitaminE组和GCs组灌胃给药,每日1次,均连续皮下注射和灌胃30d和50d.分别测定5min错误次数、潜伏期、脑组织SOD的活性、MDA、LF含量,并观察50d后海马CA1区组织结构形态的变化.结果 (1)5min内的错误次数: 30d和50d的D-gal组分别为(8.25±4.03)次和(9.63±6.18)次,均显著高于其它各组(P 均＜ 0.01).(2)潜伏期: 30d和50d的D-gal组分别为 (25.21±13.86)s和(31.75± 17.77)s,低于NC组、GCs中剂量组和大剂量组(P ＜0.05,P ＜0.01).(3)SOD活性: 30d和50d D-gal组脑组织的SOD活性较其它各组低(P ＜0.05,P ＜0.01).(4)MDA含量:30d和50d D-gal组脑组织的MDA含量均较其它各组高(P ＜0.05,P ＜0.01).(5)LF含量:30d和50d D-gal组脑组织的LF含量均较NC组高,30d的脑组织GCs小剂量组、VitaminE组及50d GCs各组及VitaminE组均较D-gal组低(P ＜0.05,P ＜0.01).(6)50d的D-gal组小鼠海马CA1区与NC组、GCs大剂量组及VitaminE组的组织形态不同.结论 GCs能显著改善不同天数模型小鼠的学习、记忆功能,升高脑组织的SOD活性,降低MDA、LF含量,并对海马CA1区组织结构形态学改变有保护作用.提示GCs可能是通过抗氧化的机制达到改善脑老化的作用.     

乙醇对发育期小鼠海马神经元数量的影响

目的:研究妊娠乙醇滥用对发育期海马神经元数量的影响。方法:采用C57BL/6 J小鼠,用胃饲乙醇方法建立妊娠乙醇滥用模型。对新生鼠(P0)、生后7 d(P7)、生后14 d(P14)小鼠海马进行N issl法染色,显微镜计数海马神经元的数量。结果:与对照组相比,低剂量组和高剂量组神经元明显减少(P<0.05);与低剂量组相比,高剂量组CA1区神经元明显减少(P<0.05);CA3区无明显差异(P>0.05)。结论:妊娠乙醇滥用可使发育期海马神经元明显减少。     

脑神康胶囊对缺氧复氧损伤大鼠海马神经元凋亡的影响

目的观察脑神康胶囊对缺氧复氧损伤大鼠海马神经元凋亡及其Bcl 2、Bax mRNA表达的影响。方法随机将原代培养大鼠海马神经元分为对照组、损伤组、中药低、中、高浓度组。对照组正常培养,损伤组及中药组建立缺氧复氧损伤模型,中药各浓度组于复氧时换以不同浓度含药血清的培养液,采用MTT法测各组细胞存活率,采用流式细胞仪检测凋亡率,采用RT PCR法检测Bcl 2和Bax mRNA的表达并计算两者比值。结果损伤组细胞存活率及Bcl 2 mRNA表达明显下降(P均＜0.01),凋亡率及Bax mRNA表达显著升高(P均＜0.01),Bcl 2/Bax降低(P＜0.01);中药各浓度组较损伤组细胞存活率及Bcl 2 mRNA表达均升高(P均＜0.01),凋亡率及Bax mRNA表达降低(P＜0.01,P＜0.05),Bcl 2/Bax增加(P＜0.01),且呈明显的剂量依赖性。结论脑神康胶囊对海马神经元缺氧复氧损伤有明显的保护作用,其作用机制可能与其调节凋亡相关蛋白、减少凋亡密切相关。     

肉苁蓉总苷对D-半乳糖脑老化模型小鼠海马超微结构的影响

目的观察肉苁蓉总苷(GCs)对D-半乳糖(D-gal)脑化模型小鼠海马超微结构的影响。方法NIH小鼠120只,随机分为6组:正常对照组(NC)、模型组(D-gal)、VitaminE组、GCs组分小、中、大剂量组[(mg.kg-1.d-1)31.25,62.5,125],每组20只。除NC组外,在各组小鼠皮下注射D-gal(50mg.kg-1.d-1);NC组皮下注射NS,D-gal组和NC组给予等容积饮水灌胃,VitaminE组和GCs组灌胃给药,每日1次,均连续皮下注射和灌胃50d,取小鼠海马CA1区进行电镜观察。结果GCs小、中剂量组及VitaminE组的海马CA1区神经细胞核形不规则,细胞器明显减少,染色质有不同程度的凝集;GCs大剂量组海马CA1区神经细胞核圆,细胞器增多,染色质分布均匀,与NC组的形态结构较接近。结论GCs对D-gal脑老化模型小鼠海马超微结构的保护作用呈剂量效应关系。推测GCs可能是通过抗氧化机制起到延缓衰老和防治老年性痴呆的作用。     

胍丁胺拮抗谷氨酸所致大鼠海马神经元兴奋性神经毒性的研究

目的探讨胍丁胺对L-谷氨酸（Glu）诱导的大鼠海马神经元损伤的影响。方法采用大鼠原代海马神经元培养的方法,用不同浓度Glu（1、10、100μmol/L）处理原代培养海马神经元1h,建立Glu诱导的原代培养大鼠海马神经元损伤模型,经乳酸脱氢酶（LDH）活性检测和显微镜下观察,确定建立大鼠海马神经元损伤模型的最佳浓度。处理组在已建立的大鼠海马神经元损伤模型中加入不同浓度（10、50、100μmol/L）胍丁胺,观察胍丁胺对Glu诱导的海马神经元损伤的作用。未经Glu处理的为正常对照组。结果上清液中的LDH活性（P〈0.01）和形态学观察均提示100μmol/L Glu为诱导原代海马神经元损伤的最佳浓度;100μmol/L胍丁胺能显著抑制模型中大鼠海马神经元LDH的释放（P〈0.01）;明显改善损伤后的神经元形态。结论胍丁胺对Glu诱导的大鼠海马神经元损伤具有保护作用。     

适宜游泳应激对衰老小鼠行为和免疫功能的影响

目的：观察适宜游泳应激对衰老小鼠行为和免疫功能的影响。方法：在正常对照组、D－半乳糖（腹腔内注射D－半乳糖0．12mg/g)致衰老组基础上,分别都予以游泳应激（于水温18℃,水深15cm的水中游泳15min)。8周后,对各组小鼠进行Y－迷宫、被动回避、平衡耐力等行为学测试,测定胸腺指数,并取脾脏用^3H-TdR掺入法观察脾淋巴细胞对不同有丝分裂刺激原ConA和LPS的增殖反应。结果：衰老组小鼠的学习记忆能力、平衡耐力、免疫功能与正常小组小鼠相比明显降低,但经过8周游泳应激后、正常组、衰老组小鼠学习记忆能力、平衡耐力都明显提高,胸腺指数增加,脾淋巴细胞对不同有丝分裂刺激原ConA和LPS的增殖反应能力明显提高。结论：适宜游泳应激可改善衰老小鼠行为表现和免疫功能以延缓衰老进程。     

竹节人参提取物对衰老模型小鼠的作用

目的研究竹节人参提取物对衰老模型小鼠的影响及抗衰老的作用机制.方法以D-半乳糖衰老模型小鼠和自然衰老模型小鼠为实验对象,检测D-半乳糖衰老模型小鼠心、肝组织中脂褐素(LF)及羟脯氨酸(Hyp)的含量、脑组织中单胺氧化酶(MAO)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性和一氧化氮(NO)的含量,以及自然衰老模型小鼠脑组织凋亡细胞数.结果竹节人参提取物可减少D-半乳糖小鼠肝脏及心肌组织中LF的含量,升高肝脏组织中Hyp的含量,并可提高脑组织中GSH-Px的活性,降低脑组织中NO的含量和MAO的活性;能明显减少自然衰老模型小鼠脑神经细胞凋亡数目.结论竹节人参提取物有显著的延缓衰老作用,其作用机理与抗氧化、抗自由基、抑制脂质过氧化反应有关.     

慢病毒载体靶向沉默原代大鼠海马神经元黏着斑激酶表达siRNA的筛选

目的制备针对黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)的siRNA慢病毒载体,转染入原代培养的大鼠海马神经元细胞,筛选最佳的感染条件和沉默靶点序列。方法根据siRNA原理设计、构建、酶切、转化、PCR鉴定、阳性克隆测序并病毒包装3种靶向大鼠FAK的siRNA(T1,T2,T3),并转染至原代培养的大鼠海马神经元细胞,荧光显微镜观察转染效率,实时荧光定量PCR检测神经元细胞FAK基因表达,Western blot检测FAK蛋白表达。结果成功制备3种FAK siRNA慢病毒载体,并成功转染到神经元细胞中,在感染复数(MOI)为10并加入5μg/mL polybrene条件下转染率达到90%以上。T1、T2、T3均可抑制FAK基因及蛋白的表达,但T1沉默效果最好,敲除效率达到65%,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论筛选出最佳的转染条件及最佳沉默靶向性序列T1,为后续研究整合素在阿尔茨海默病发病中的机制奠定了实验基础。     

参乌胶囊及其有效成分二苯乙烯苷对老年大鼠海马神经元突触体素表达的影响

目的观察由首都医科大学宣武医院药物研究室自行研制的抗老年性痴呆中药新药参乌胶囊(Shen-wu capsule,SW)及其有效成分何首乌二苯乙烯苷(tetrahydroxystilbene glucoside,TSG)对于老年大鼠海马神经元突触结构和突触体素表达的影响,阐明其防治神经元退行性变的机制。方法选用老年SD大鼠,从21月龄始,分别灌胃给予SW(0.8 g/kg、1.6 g/kg)和TSG(0.03 g/kg、0.06 g/kg)至24月龄。以6月龄大鼠为青年对照,未给药24月龄大鼠为老年对照。应用通道式水迷宫试验检测大鼠学习记忆能力,用电子显微镜观察脑海马神经元突触超微结构,用免疫组织化学染色检测海马神经元突触体素(synaptophysin,SYP)的表达。结果与6月龄青年对照组大鼠相比,24月龄老年大鼠通道式水迷宫试验错误次数明显增多(P<0.01);给予SW和TSG的老年大鼠在高剂量组可见水迷宫错误反应次数显著减少,与老年对照组相比差异具有统计学意义(P<0.01)。电子显微镜结果显示,24月龄老年大鼠神经元突触数量明显减少;而给予TSG大剂量灌胃组突触数量增多,并可见类似于突触球的结构。免疫组织化学染色结果可见24月龄大鼠SYP染色明显变浅,累积光密度值低(P<0.01);而灌胃给予SW和大剂量TSG组大鼠SYP表达量明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论参乌胶囊及其有效成分二苯乙烯苷对于老年大鼠的神经元突触靶位具有较好的疗效,本结果为其在临床用于延缓衰老、改善认知功能提供了实验基础。     

葛根素对喹啉酸致海马神经元损伤的保护作用

目的研究葛根素对喹啉酸(qinolinic acid,QA)诱导原代培养乳鼠海马神经元兴奋毒损伤的保护作用。方法乳鼠海马神经元原代培养后用QA诱导损伤,采用MTT法测定细胞活力,同时测定培养上清液中乳酸脱氢酶 (LDH)活性和丙二醛(MDA)的含量。结果葛根素(3×10-4mol／L、10-4 mol／L)剂量能明显提高QA致损伤的原代培养乳鼠海马神经元的细胞活力,降低其上清液中LDH活性和MDA含量,与模型组比较差异均具有显著性(P <0．01)。结论葛根素(3×10-4moL／L,10-4 mol／L)对QA所致的原代培养乳鼠海马神经元损伤有明显保护作用。     

腺苷对原代培养的大鼠海马神经元大电导钙激活钾通道的作用

目的在离子通道水平研究腺苷对原代培养的大鼠海马神经元大电导钙激活钾通道(BKCa)的作用。方法采用新生24h的乳鼠,取出海马,清除表面血管,以胰酶消化和巴氏管吹打的方法制备海马神经元,细胞培养6～8d后,MAPⅡ染色鉴别神经元表面标志;采用全细胞膜片钳技术,对细胞进行封接、破膜并记录BKCa通道电流,以细胞旁方式给药观察不同浓度腺苷对BKCa通道的作用。结果原代培养的海马神经元上可以成功记录到BKCa电流,其为一组幅值较大,可以快速激活且几乎不失活的外向电流;腺苷(1～100μmol/L)可以增大BKCa电流,浓度越高,增长幅度越大;100μmol/L腺苷对BKCa电流的影响具有电压依赖性,同时它还可以使BKCa电流的激活曲线负向漂移。结论腺苷可以增大海马神经元BKCa电流幅值,这可能是腺苷作为内源性抗癫痫物质发挥抗癫痫作用的机制之一。     

人参皂苷Rg1对吗啡依赖海马神经元胞内游离钙离子浓度的影响

目的探讨人参皂苷Rg1对吗啡依赖海马神经元胞内游离钙离子浓度(intracellular free Ca2+concentration,[Ca2+]i)的影响。方法采用荧光钙离子指示剂Fluo-3/AM,利用激光扫描共聚焦显微镜观察低剂量(1μmol/L)、中剂量(10μmol/L)、高剂量(100μmol/L)人参皂苷Rg1处理吗啡依赖原代培养大鼠海马神经元后[Ca2+]i的改变。结果低、中、高剂量人参皂苷Rg1单独处理海马神经元前后并没有引起胞内[Ca2+]i的显著改变(P>0.05),而吗啡依赖海马神经元胞内[Ca2+]i较正常海马神经元细胞明显增高(P<0.01)。此外,低、中、高剂量人参皂苷Rg1处理吗啡依赖海马神经元细胞后,均能显著抑制胞内[Ca2+]i的升高(P<0.01),并呈剂量依赖性,Rg1剂量越大,抑制作用越明显(P<0.01)。结论人参皂苷Rg1可以抑制吗啡依赖海马神经元细胞内[Ca2+]i的增高,对吗啡的成瘾性具有明显的拮抗作用,为合理安全有效地应用人参戒毒提供了实验依据。     

IGF-1对海马神经元抑制性突触传递的影响

目的观察胰岛素样生长因子1(IGF-1)对原代培养海马神经元抑制性突触传递的影响并探讨其可能机制。方法采用无血清培养基培养海马神经元,在10~14d时用于实验。电生理实验分为正常对照组和IGF-1处理组(实验前24h加入IGF-1,终浓度为10μmol/L)。细胞免疫化学实验分为正常对照组、IGF-1处理组和MAPKS转导通路抑制剂(PD98059)预处理组(IGF-1处理前1h加入PD98059,终浓度为10μmol/L)。采用全细胞膜片钳记录方法观察IGF-1对抑制性突触后电流(IPSC)的影响,用细胞免疫化学方法观察其对γ-氨基丁酸能细胞数目影响。结果IGF-1能够显著降低IPSC的频率,但与对照组比较其幅度差异无统计学意义;IGF-1能够明显减少GABA阳性细胞数目,应用PD98059后可阻断这种作用。结论IGF-1的上述作用可能参与海马对学习记忆功能的调节过程。     

脑立轻胶囊对血管性痴呆大鼠海马CA1区细胞凋亡的影响

目的研究脑立轻胶囊对血管性痴呆大鼠神经细胞凋亡的影响。方法血管性痴呆模型采用双侧颈总动脉永久性结扎制备,用TDT介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)检测。结果脑立轻胶囊大剂量组能明显减少海马CA1区神经细胞凋亡,与模型组比较有显著差异(P<0.05),与尼麦角林组比较无统计学意义。结论脑立轻胶囊能明显抑制大鼠海马CA1区神经细胞的凋亡,这可能是脑立轻胶囊治疗血管性痴呆的主要机制之一。