局灶性脑缺血后室管膜 /室下区细胞迁移到梗塞区周围并分化为神经元和星形胶质细胞

目的 研究局灶性脑缺血后室管膜/室下区细胞的迁移分化,揭示梗塞区周围新生细胞的来源。方法 大脑中动脉阻塞前,将10μl0.2%的荧光染料DiI注射于体质量250~350g的雄性SD大鼠侧脑室以预标记室管膜/室下区细胞。脑缺血后,采用累积式的BrdU标记方法标记新生细胞并通过双重免疫荧光染色确定细胞分化。标记的细胞通过激光共聚焦显微镜观察。结果 在非缺血对照大鼠,DiI标记细胞定居于室管膜/室下区。局灶性脑缺血后,DiI标记细胞出现于胼胝体,邻近的纹状体和皮质。此外,缺血14d后,梗塞区周围纹状体和皮质内可见一些DiI/BrdU/GFAP或DiI/BrdU/NeuN三重标记阳性细胞。结论 局灶性脑缺血后,室管膜/室下区细胞迁移到梗塞区周围并分化成神经元和星形胶质细胞,这一发现对于理解成体神经干细胞的起源和开发促进脑损伤后内源性神经发生的新措施具有重要意义。     

成年和老年大鼠局灶性脑缺血后室管膜下区细胞增殖的比较研究

目的：比较老年和成年大鼠局灶性脑缺血后室管膜下区(the subventricular zone，SVZ)神经干细胞的增殖情况。方法：制作大脑中动脉梗塞模型，用免疫组织化学方法动态检测室管膜下区5-溴脱氧尿嘧啶(bromndeoxyuridine，BrdU)标记的阳性细胞数的变化：结果：正常组和假手术组成年大鼠SVZ的BrdU阳性细胞明显多于老年大鼠。实验组成年和老年大鼠SVZ的BrdU阳性细胞均在缺血后3d开始增加，7d时达到高峰，28d时仍高于正常水平，且成年大鼠各时间点SVZ的BrdU阳性细胞均明显高于老年大鼠。结论：大鼠脑缺血激活SVZ神经干细胞增殖，成年大鼠干细胞增殖能力强于老年大鼠。     

电针对高血脂合并脑缺血大鼠侧脑室室管膜下区星形胶质细胞活化的影响

目的观察电针对高血脂合并脑缺血大鼠前脑侧脑室室管膜下区星形胶质细胞活化的影响。方法采用SD成年雄性大鼠49只,随机分为正常组,模型组、假手术组、电针1组和电针2组。除正常组,其余各组大鼠高脂饲料喂养42 d,电针1组电针丰隆,每天1次,治疗7 d。第50天,模型组和电针组大鼠采用50% FeCl_3诱导建立高血脂合并脑血栓模型,术后电针组电针丰隆和百会,每天1次,持续14 d。用神经功能评分方法评定行为学变化,用生物化学法检测血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)水平,采用HE染色观察形态学改变,免疫组化方法检测损伤侧前脑侧脑室室管膜下区胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果模型组大鼠高血脂合并脑缺血术后TC、TG、LDL升高,HDL降低,差异具有统计学意义(P 0. 05),电针组TC、LDL水平降低(P 0. 05)。模型组大鼠神经功能评分增高,HE染色可见皱缩神经元,整体组织形态结构显脑缺血症,侧脑室室管膜下区GFAP面密度明显升高(P 0. 01),电针治疗可改善神经功能评分,缺血侧细胞核逐渐恢复正常,治疗后面密度持续增加至术后14 d,术后7 d显著,电针1组高于电针2组(P 0. 05)。结论高血脂阶段电针丰隆,脑缺血后电针丰隆、百会可通过调节血脂代谢,促进星形胶质细胞活化以及受损神经系统修复。     

褪黑素对大鼠局灶性脑缺血后梗塞体积和神经元形态变化的影响

目的：探讨褪黑素（MT）对大鼠局灶性脑缺血是否具有保护作用及其作用机制。方法：用线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）模型，大鼠随机分为缺血组，MT组（10mg/kg），尼莫地平组（0.2mg/kg）。对术后3h、6h及24h三个时间点神经功能的缺陷评分后，处死动物，测定脑梗塞体积；24小时后作HE染色，观察神经元的病理形态学改变。结果：MT可明显改善神经缺陷症状，缩小梗死体积，减轻脑组织的病理性损伤。结论：MT对大鼠局灶性脑缺血有一定的保护作用，共机制可能与MT缩小梗死体积、减轻脑组织的病理性损伤有关。     

MK-801对局灶性脑缺血再灌注大鼠细胞增殖的影响

目的 研究MK-801对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经干细胞增殖的影响.方法 60只雄性SD大鼠,随机分为正常时照组(n=6)、假手术组(n=6)、手术组(n=12)和手术MK-801不同浓度干预组(0.2、0.4、0.6、0:8、1.0和1.2 mg/kg n=36).用线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注模型,在模型制作前30 min按照不同浓度组的剂量腹腔注射MK-801,假手术组和手术对照组腹腔注射等量的生理盐水.在模型建立后第7天,通过免疫组化技术标记大鼠梗塞区大脑皮质的Brdu阳性细胞数目.结果 MK-801浓度为0.4mg/kg时,可以明显抑制内源性神经干细胞的增殖,0.8ms/ks剂量以上有显著的抑制作用,并且随着浓度升高抑制作用呈递增趋势.结论 NMDA受体拮抗剂MK-801在局灶性脑缺血后对大鼠内源性神经干细胞的增殖有抑制作用,并且随浓度的增加抑制作用增强.     

神经干细胞和骨髓基质细胞联合移植治疗局灶性脑缺血研究

目的:研究神经干细胞(NSCs)和骨髓基质细胞(MSCs)联合移植对脑缺血大鼠运动功能的改善效果。方法:采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型,将脑缺血大鼠随机分为磷酸盐缓冲液(PBS)组、NSCs组及NSCs-MSCs组,分别将各组移植材料通过立体定位法植入大鼠患侧纹状体内(仅标记NSCs),术前及术后3、7、14、30d进行神经功能缺损评分,对移植部位组织进行免疫组化染色观察。结果:30d时NSCs-MSCs组和NSCs组有13.86%和2.81%的NSCs分化为神经元,差异有统计学意义(χ2=157.71,P<0.01),神经功能缺损评分NSCs组为1.58±0.16,NSCs-MSCs组为1.00±0.13,差异有统计学意义(P<0.05),NSCs移植后集中在移植位点及周围区域,有向缺血灶迁移的趋势。能存活、分化为神经元、星形胶质细胞,并向损伤区迁徙。结论:MSCs与NSCs联合移植可促进受损组织修复,改善脑缺血大鼠的运动功能。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑缺血半影区的界定

①目的 界定大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑缺血半影区的范围。②方法 应用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型，氯化三苯基四氮唑(TTC)染色、甲苯胺蓝染色、焦油紫染色和苏木精-伊红染色界定脑缺血半影区和中心区。③结果 脑缺血再灌注2h，缺血病灶位于纹状体外侧区和额顶叶皮质下部，随着缺血再灌注时间的延长病灶范围逐渐扩大；再灌注1～2d最大，波及纹状体内侧区和额顶叶皮质上部以及梨状区皮质，之后逐渐缩小；再灌注7～14d恢复到再灌流2h的水平。缺血病灶与周围正常脑组织之间有一形态和结构过渡区，该区的着色和细胞形态结构界于病灶和正常脑组织之间，即缺血半影区。缺血中心区神经细胞明显减少，呈现坏死特征；缺血半影区细胞主要呈现核固缩、染色质凝聚等凋亡特征。④结论 脑缺血再灌注缺血中心区位于纹状体外侧区和额顶叶皮质下部，缺血半影区位于纹状体内侧区和额顶叶皮质上部以及梨状区皮质。     

局灶性脑缺血后脑室下区NMDA受体亚单位NR2B的表达变化

目的 观察局灶性脑缺血后侧脑室脑室下区N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体亚单位NR2B的表达变化.方法 44只雄性SD大鼠,随机分为正常组、假手术组和脑缺血再灌注组,线栓法制作大脑中动脉栓塞(MCAO)90 min再灌注模型,术后分3、7、14、21、28天5个时间点取脑,连续石蜡切片,免疫组化反应、图像分析系统行NR2B阳性细胞灰度值测量.结果 脑缺血后,缺血侧NR2B的表达在再灌注后3天开始增加,7天达到高峰(P<0.05),28天降至正常水平(P>0.05);缺血对侧的变化趋势同缺血侧,但表达变化的幅度明显减小.结论 局灶性脑缺血后,SVZ区NR2B表达增加,可能参与该区的神经发生.     

静脉注射骨髓基质细胞治疗大鼠局灶性脑缺血后的bFGF表达

目的探讨静脉注射骨髓基质细胞治疗大鼠局灶性脑缺血后的bFGF表达。方法采用大鼠局灶性大脑中动脉缺血1h模型，观察第3、7、14天生理盐水组，正常对照组，股静脉注射骨髓基质细胞组神经功能的恢复。免疫组化测定脑缺血再灌注第3、7、14天bFGF蛋白表达。结果神经功能评分：生理盐水组和正常对照组相比，各时间点均无显著差异（P〉0．05）；治疗组与对照组相比，治疗组第14天大鼠神经功能缺损评分减低，并且有显著性差异（P〈0．05）。免疫组化结果：在梗塞半球大量BrdU阳性细胞，对侧半球也可见少量BrdU阳性细胞。bFGF蛋白表达：生理盐水组和正常对照组之间，缺血各时间点的表达均无显著性差异（P〉0．05），治疗组与对照组相比各个时间点的表达均显著增加（P〈0．05）。结论静脉注射骨髓基质细胞治疗大鼠局灶脑缺血的机制可能与bFGF蛋白表达增加有关。     

大鼠局灶性脑缺血后一氧化氮合酶活性与细胞凋亡关系

目的：了解局灶性脑缺血再灌注过程中一氧化氮合酶（NOS）变化与脑细胞凋亡的关系。探索阻断脑细胞凋亡的时间窗。方法：用线栓法建立局灶性脑缺血模型，大脑中动脉阻塞（MCAO）的时间分别为15、30、60、90、120min，再灌注24h，用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶（NADPH-d)组化法，检测局灶性脑缺血再灌注后缺血中心区（顶叶皮层和尾壳)NOS活性变化，用苏木精－伊红和TUNEL染色法检测缺血中心式脑细胞凋亡情况。结果：NOS阳性神经元数于30min时增多最显著，90－120min隐剧减少，各组凋亡细胞数随缺血时间延长而增多。结论：局灶性脑缺血再灌注过程中神经型NOS、nNOS对缺血早期的脑损伤尤其是细胞凋亡起主要作用。     

槲皮素对成年大鼠局灶性脑缺血后侧脑室室管膜下区神经干细胞增殖的影响

摘要：目的观察槲皮素对成年大鼠局灶性脑缺血后侧脑室室管膜下区（SVZ）细胞增殖的影响。方法线栓法制作大鼠右
侧大脑中动脉阻塞模型,术后6 h腹腔注射槲皮素（50 mg/kg,1次/3 d）,术后4 h腹腔注射BrdU（50 mg/kg,1次/d）,分别于
缺血第7、14、21天采用免疫荧光染色观察侧脑室SVZ BrdU阳性细胞数。结果脑缺血第7天,缺血侧SVZ BrdU阳性细
胞较假手术组明显增多,第14天达峰值,第21天减少（P<0.01）。槲皮素组第7天时,缺血侧SVZ BrdU阳性细胞亦明显增
多,并随着缺血时间延长明显增加;与缺血组比较,槲皮素组7、14 和21 d 缺血侧SVZ BrdU阳性细胞数均显著增加（P<
0.01）,至21 d仍保持高水平。结论槲皮素可维持成年大鼠局灶性脑缺血后侧脑室SVZ的细胞增殖在较高水平。     

成年小鼠脑室下区神经干细胞培养与鉴定体系的建立

目的 建立系统的成年小鼠脑室下区神经干细胞分离、培养及鉴定体系.方法 用无血清方法分离培养成年小鼠脑室下区来源的神经干细胞;用克隆培养、BrdU整合的方法检验培养细胞的干细胞特性;用免疫荧光细胞化学方法检测Brdu、神经干细胞标记物nestin和SOX2,分化的细胞标记物Tuj1、GFAP、NG2.用Western boltting和RT-PCR方法进一步检测神经干细胞标记物nestin和SOX2的表达.结果 从成年小鼠脑室下区分离培养出具有自我更新、增殖的神经球,构成神经球的细胞nestin和SOX2呈阳性,它们分化后产生Tujl阳性的神经元、GFAP阳性的星型胶质细胞、NG2阳性的少突胶质细胞.结论 建立了简单、稳定的培养成年小鼠脑室下区神经干细胞方法.     

大鼠创伤性颅脑损伤后脑室下区内源性神经干细胞的增殖与分化

目的探讨创伤性脑损伤后脑室下区（SVZ）神经干细胞（NSCs）的增殖分化的时程变化。方法采用随机数字表法将大鼠 分为3组,对照组不做任何处理,假手术组仅切开头皮和颅骨开窗,实验组采用Feeney氏法造成颅脑损伤（TBI）。选用Nestin与 BrdU两种细胞标志物及神经元特异标志物神经元特异性烯醇化酶（NSE）及胶质细胞标志物GFAP,采用免疫荧光化学方法对3 组脑组织标本分别行双标蛋白抗体免疫荧光染色,检测TBI 后SVZ 内源性NSCs 的增殖、分化变化。结果TBI 后,伤侧 SVZNestin/NSE 、Nestin/GFAP、BrdU/NSE、BrdU/GFAP标记阳性细胞均明显增多,伤后第1天开始升高,第3天达峰值,第14天 恢复正常,实验组4个时间点间及实验组与对照组对应时间点间的比较差异均有显著性意义,其中以Nestin/GFAP标记的增殖分 裂阳性细胞升高最显著。结论TBI后,动员了伤侧SVZ中的NSCs,诱导该区内源性NSCs的增殖分化,提示SVZ是NSCs增殖 分化的重要的生发中心之一。     

Functional electrical stimulation increases neural stem/progenitor cell proliferation and neurogenesis in the subventricular zone of rats with stroke

Background Functional electrical stimulation (FES) is known to promote the recovery of motor function in rats with ischemia and to upregulate the expression of growth factors which support brain neurog...     

大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后Jak1的表达

目的　探讨Jak基因在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的表达及其在缺血性神经细胞损伤中的可能作用。方法采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的模型 ,用免疫组化方法观察Jak1蛋白在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后不同时间点脑组织中的表达。结果脑缺血再灌注损伤后 12h在栓塞侧梗死区神经元可见少量Jak1蛋白阳性表达 ,2 4h达高峰。梗死周边区表达最显著 ,表达持续时间达 1周。结论Jak1在脑缺血后表达增加 ,表明Jak1可能参与了脑缺血神经细胞损伤与修复的病理过程。     

3日龄SD大鼠慢性脑缺血后脑室下区细胞的凋亡

目的观察3日龄SD大鼠慢性缺血脑损伤后脑室下区细胞凋亡情况,了解早产儿缺血后脑进一步损伤的发病机理,为干预治疗提供时间窗实验依据。方法3日龄新生SD大鼠随机分为对照组和实验组。实验组结扎双侧颈总动脉,造成未成熟鼠慢性脑缺血脑损伤模型;对照组双侧颈总动脉不结扎,组织切片HE染色定位,采用TUNEL法分别观察脑室下区背侧、前端细胞凋亡变化。结果脑室下区背侧、前端凋亡细胞分别计数发现在缺血48、72h和1周后较对照组增多(P<0.01),于72h时间点两组差异最为显著(背侧:实验组87.0±11.5,对照组60.9±7.1;前端(冠状位):实验组86.1±5.5,对照组56.4±5.6;前端(矢状位):实验组69.1±3.5,对照组44.0±2.3,P<0.01),损伤后2周两组差异无统计学意义(P>0.05)。结论3日龄SD大鼠慢性脑缺血后脑白质损伤外,神经生发区之一:脑室下区细胞对缺氧缺血敏感,易发生凋亡,其可能为早产儿脑白质进一步损伤的机制之一,同时此模型提示慢性缺血缺氧可致神经元再生不足,提示缺血后48~72h可能为防止脑室下区损伤的时间窗。     

胶质细胞源性神经营养因子对局灶性脑缺血后海马齿状回脑电活动的影响

目的：观察胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）对局灶性脑缺血大鼠在体海马齿状回脑电活动的影响。方法：制作右侧局灶性脑缺血模型,右侧脑室注射GDNF,通过神经电生理学方法,记录正常组、脑缺血模型组、生理盐水组和GDNF组大鼠局灶性脑缺血90 min后再灌注14 d海马齿状回的脑电活动,分析脑电频谱。结果：免疫组化检测显示,GDNF组各时间点BrdU阳性细胞较脑缺血模型组和生理盐水组增多。大鼠脑电图显示,GDNF组较脑缺血模型组和生理盐水组脑电活动恢复明显,组间比较有显著性差异（均P〈0.05）。结论：GDNF可改善局灶性脑缺血后的脑损伤,促进激活内源性神经干细胞增殖、分化,改善脑缺血后的行为和脑功能。