Shh信号通路在肝癌中的表达及与β-catenin的关系

目的探讨原发性肝细胞癌（Hepatocellular Carcinoma,HCC）中Sonic Hedgehog（Shh）信号通路基因和15-catenin的表达情况及其临床意义。方法采用免疫组织化学方法对49例HCC和相应癌旁肝组织中Glil和β-catenin蛋白表达。荧光定量PCR检测2个肝癌细胞系和正常肝细胞中相应基因mRNA的表达情况。结果免疫组化染色与RT-PCR示Glil在HCC组织中的阳性表达率为77．56％,而癌旁肝组织为40．82％,两者差异具有显著意义（P〈0．05）。β-catenin蛋白在HCC中的表达显著高于癌旁肝组织（P〈0．05）,且与Glil的表达呈正相关（r=0．594,P=0．000）。Glil和β-cateninmRNA在肝癌细胞株中高表达,在正常肝细胞中低表达（P〈0．05）。结论Glil和β-catenin在肝癌细胞中均过度表达,可能协同作用促进肝癌细胞异常增殖,参与HCC的发生和发展。     

原发性肝细胞癌组织中Smac、XIAP蛋白的表达变化及意义

目的检测原发性肝细胞癌（HCC）组织中Smac、XIAP蛋白的表达,并探讨其意义。方法采用免疫组化法检测50例肝癌组织、25例癌旁组织和15例正常肝组织中的Smac、XIAP蛋白。结果HCC组织、癌旁组织和正常肝组织中Smac蛋白阳性率分别为44．0％、80．0％、100％,XIAP蛋白阳性率分别为86．0％、28．0％、0,三者相比,P均〈0．05;HCC组织中Smac、XIAP蛋白表达均与HCC组织分化程度无关（P均〉0．05）;HCC组织中Smac和XIAP蛋白表达呈负相关（r=-0．270,P〈0．05）。结论HCC组织中Smac蛋白低表达和XIAP高表达,在HCC的发生发展有重要作用。     

受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的探讨受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O（PTPRO）在肝细胞癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学SP法和图像分析技术检测40例肝癌组织和10例正常肝组织中PTPRO基因蛋白的表达;westernblot法检测10例正常肝组织和10例肝癌组织中PTPRO蛋白的表达。结果（1）免疫组化结果显示,40例肝癌组织中PTPRO蛋白免疫组化阳性反应颗粒的平均光密度（0．1749±0．0152）明显低于正常肝组织（0．3523±0．0027）,差异有显著性（P〈0．05）;PT-PRO蛋白的表达与肝癌的组织分化有关（P〈0．05）,与肿瘤直径的大小、性别无明显相关（P〉0．05）;（2）western blot法结果显示,条带灰度扫描PTPRO在肝癌组织中的表达水平（0．1381±0．0004）明显低于正常肝组织（0．4410±0．0026）,差异有显著性（P〈0．05）。结论PTPRO的表达缺失与肝癌的发生、发展和预后可能有关。     

PeroxiredoxinⅡ基因在肝癌组织中的表达及意义

目的观察peroxiredoxinⅡ（PrxⅡ）mRNA和蛋白在黄曲霉毒素B1（AFB1）诱发树鼩HCC形成过程中的表达变化,并在人肝癌癌旁组织和正常肝组织中进行验证,以探讨PrxⅡ在肝癌形成过程中的作用。方法应用RT-PCR和Western blot方法,检测6例AFB1诱发的树鼩肝癌、癌旁组织和这些动物肝癌发生前的活检肝组织,以及6例对照组动物相应时期的肝活检组织PrxⅡ在mRNA水平和蛋白水平的表达情况,并在18例人肝癌及其相应癌旁组织以及17名正常人肝组织进行验证。结果PrxⅡ在树鼩肝癌组织中的mRNA和蛋白质表达水平均明显高于相应的癌旁和癌前组织,也高于对照组同期活检肝组织（P〈0．05）;人肝癌组织中PrxⅡ的mRNA和蛋白表达改变和树鼩相符,即肝癌中的表达高于癌旁组织和正常肝组织（P〈0．05）。结论PrxⅡ基因可能与肝癌的发生发展有关,并有可能成为防治肝癌的分子靶标。     

NHE1 mRNA在肝癌组织的表达及意义

目的 探讨钠氢交换蛋白1（NHE1）mRNA在原发性肝细胞肝癌组织及癌旁组织的表达及意义。方法采用RT—PCR检测诊断为HCC患者34例的肝癌及癌旁组织中NHE1mRNA的表达情况。结果所有肝癌组织和癌旁组织NHE1均有表达,相对表达量分别为2．892±0．882和0．802±0．206,两者存在显著性差异（P〈0．001）。作为对照的21例肝组织NHE1的相对表达量为0．872±0．186。肝癌组织与对照肝组织比较存在显著性差异（P〈0．001）;癌旁组织与对照肝组织比较差异无统计学意义（P〉0．10）。将从同一患者取材的肝癌组织和癌旁组织检测到的NHE1mRNA的表达量进行配对t检验,两者间存在显著性差异（P〈0．001）。结论NHE1mRNA在肝癌组织的表达增高,可能在肝癌的发生中起一定的作用。     

原发性肝细胞癌组织中PDCD5、Caspase-3蛋白的表达变化及意义

目的 观察原发性肝细胞癌组织中程序化细胞死亡分子5（PDCD5）、Caspase-3蛋白的表达变化,并探讨其临床意义。方法采用免疫组化二步法检测70例原发性肝细胞癌组织及30例癌旁组织中的PDCD5、Caspase-3蛋白。结果PDCD5蛋白在肝细胞癌组织、癌旁组织中的阳性表达率分别为35．7％（25／70）、63．3％（19／30）,两者相比,P〈0．05。Caspase-3蛋白在肝细胞癌组织、癌旁组织中的阳性表达率分别为31．4％（22／70）、70．0％（21／30）,两者相比,P〈0．05。PDCD5、Caspase-3在肝细胞癌组织中的表达与组织分级有关（P〈0．05）,而且两者的表达呈正相关（r=0．587,P〈0．05）。结论PDCD5、Caspase-3蛋自在肝细胞癌组织中的表达均明显下降,并与肝癌生物学行为密切相关。     

非小细胞肺癌Bcl-2基因蛋白表达及其与细胞凋亡和增殖的关系

目的探讨非小细胞肺癌Bcl-2蛋白表达与细胞凋亡和增殖的关系。方法采用SAB免疫组化法检测43例非小细胞肺癌及20例癌旁正常肺组织石蜡包埋标本Bcl-2蛋白及增殖细胞核抗原（PCNA）表达;用TUNEL法检测细胞凋亡。结果肺癌组织Bcl-2蛋白的表达显著高于癌旁肺组织,P〈0．05;肺癌组织中凋亡指数和增殖指数均明显高于癌旁正常肺组织,P〈0．01,Bcl-2表达阳性的肺癌组织细胞凋亡指数明显低于Bcl-2表达阴性组,P〈0．05;高细胞凋亡、增殖指数提示肺癌预后不良,P〈0．05。结论肺癌存在Bcl-2表达上调,Bcl-2异常表达在肺癌发生过程中可能起重要作用。     

Caveolin-1和Caspase-3蛋白在肝细胞癌中的表达及意义

目的研究Caveolin．1和Caspase-3蛋白在肝细胞癌中的表达及意义。方法采用免疫组织化学检测30例肝细胞癌,相应癌旁及10例正常肝组织中Caveolin-1和Caspase-3蛋白的表达。结果（1）Caveolin-1在正常肝组织、癌旁肝组织、肝细胞癌组织中的阳性表达率分别为90％、13．33％、10％。Caspase-3在正常肝组织、癌旁肝组织、肝细胞癌组织中阳性表达率分别为90％、70％、40％。Caveolin．1和Caspase-3在不同性质组织间的表达,差异均有统计学意义（P〈0．05）;（2）Caveolin-1与Caspase-3的表迭在肝细胞癌中无明显相关性（r=0．181,P=0．337）。结论Caveolin-1与Caspase-3在肝细胞癌组织中表达均呈下降,但两者间无明显相关性,提示在肝细胞癌中,Caveolin-1的异常与Caspase-3细胞凋亡紊乱无关。     

Caveolin-1在肝细胞癌中的表达及其意义

目的研究Caveolin-1mRNA在肝癌组织、癌旁肝组织及正常肝组织中的表达情况,及其与肝细胞癌发生发展的关系。方法收集广西医科大学肿瘤医院肝细胞癌患者手术切除的肝癌组织、癌旁肝组织各60例,正常肝组织10例。用RT—PCR方法分析Caveolin-1mRNA在3种不同组织的表达差异。结果Caveolin-1mRNA在肝癌组织、癌旁肝组织、正常肝脏组织中的相对表达量分别为0．197±0．116、0．142±0．087、0．457±0．094（P〈0．01）。结论Caveolin-1与肝细胞癌的发生、发展有密切的关系,在肝细胞癌的形成过程中可能起抑制作用。     

大肠癌中NF—kB及Livin蛋白表达与细胞凋亡指数的关系

目的 探讨NF-KB及Livin蛋白在大肠癌组织和癌旁组织中的表达及其与细胞凋亡指数的关系。方法应用免疫组化方法检测68例大肠癌和癌旁组织NF—kB和Livin蛋白的表达及细胞凋亡情况,分析NF-kB和Livin与大肠癌发生的关系。结果与癌旁组织比较,癌组织中NF-kB和Livin表达的阳性率升高,凋亡指数降低（P均〈0．05）;Livin与NF—kB表达呈正相关（r=0．292,P〈0．05）,二者表达的阳性组织较阴性组织细胞凋亡指数明显降低（P〈0．05）。结论NF．KB和Livin的表达抑制了细胞凋亡,是大肠癌的诱因之一;并且NF-kB和Livin的表达相互协同。     

磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3和甲胎蛋白联合检测对原发性肝癌的诊断价值

目的通过联合检测磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3（GPC3）、甲胎蛋白（AFP）在原发性肝癌患者血清及组织中的表达情况,探讨对原发性肝癌的诊断价值。方法分别采用ELISA和免疫组织化学法检测57例肝癌、74例肝炎后肝硬化患者和47例正常血清和肝组织GPC3、AFP表达水平,根据不同临床病理指标进行分组比较。结果 （1）肝癌患者、肝炎后肝硬化及正常对照者血清中GPC3水平分别为（212.6±137.5）、（60.9±27.8）、（39.5±18.7）ng/ml;肝癌患者血清GPC3浓度显著高于正常及肝炎后肝硬化患者（t=4.503,P〈0.05;t=6.045,P〈0.05）;血清GPC3、AFP联合检测原发性肝癌的敏感性和特异性为84.2%和95.7%,均显著高于任一单项检测（t=4.132,P〈0.05;t=6.514,P〈0.05）;（2）GPC3在肝癌组织表达高于癌旁和正常肝组织（t=3.724,P〈0.05;t=15.799,P〈0.05）;GPC3与肿瘤大小、肿瘤数目、HBsAg及AFP水平无明显相关,而与病理分级和临床分期有关;（3）AFP阳性肝癌血清GPC3阳性率为91.4%,而在AFP阴性肝癌中GPC3阳性率为59.1%。结论 GPC3联合AFP检测有助于提高原发性肝癌的确诊率,检测GPC3有助于提高AFP阴性患者肝癌的确诊率。     

肝细胞凋亡与慢性乙型肝炎病毒携带者肝组织病变的关系

目的 观察慢性HBV携带者（ASC）肝组织凋亡指数及Fas、FasL的表达,探讨肝细胞凋亡在ASC肝组织病变中的作用.方法 选取HBV携带者患者120例,并进行肝组织活检.采用原位末端转移酶标技术进行肝细胞凋亡情况检测,采用免疫组织化学技术检测肝组织中的Fas、FasL.结果 120例ASC肝组织完全正常者仅占11％,轻度肝炎组占59％,而中、重度肝炎组占30％.ASC患者的凋亡指数（AI）随着炎症程度加重而升高,正常组为1.50±1.04,而中度组、重度组分别为11.33 ±1.51和17.67 ±6.42,各组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）.肝组织免疫组化结果显示,Fas、FasL表达程度随炎症活动度加重而增强,尤其在汇管区周围碎屑状坏死区及周边小叶更明显,正常组基本无表达,而轻度组以无表达或阳性表达为主,仅见于界面炎症区的肝细胞及淋巴细胞上;中、重度肝炎组Fas、FasL则均为阳性及强阳性表达,除界面炎症区外,肝小叶中也弥漫分布.Fas强阳性表达率在中、重度组分别为34.8％和69.2％,FasL的强阳性表达率分别为30.4％和53.8％,均明显高于正常组和轻度组（P＜0.05）,同时中、重度组间比较差异亦有统计学意义,肝组织中Fas、FasL表达程度随炎症活动度加重而增强,两者间明显相关.结论 肝细胞凋亡在ASC肝组织病变的发生发展中可能起到重要作用.     

细胞凋亡在大鼠酒精和高脂饮食诱导的脂肪性肝病中的作用

目的探讨在实验性脂肪性肝病动物模型中肝细胞凋亡的作用。方法雄性Wistar大鼠46只，分为对照组、酒精组、高脂组和高脂加酒精组。制模成功后取血测血清ALT、AST、CHO、TG、FFA；PCR法和免疫组化法测定肝组织caspase-3的基因与蛋白表达；TUNEL法测定肝细胞凋亡指数；电镜下观察肝细胞凋亡情况。结果酒精组、高脂组、酒精加高脂组细胞凋亡指数分别为2．16±0．43、2．33±0．60和3．93±0．80，显著高于正常对照组（1．070．27，P〈0．05）；实验组caspase-3无论是基因还是蛋白表达均较对照组升高（P〈0．05），其中以酒精加高脂组增加最明显。析因分析显示，加用与不加用酒精或高脂饮食对caspase-3及其基因表达有显著性影响（P=0．00）；高脂饮食与酒精交互效应显著（P〈0．05）。结论酒精和高脂均能诱导肝细胞发生凋亡，同时酒精和高脂同时作用于肝脏加重肝细胞caspase-3的表达，两者具有协同损伤肝脏的作用。     

糖尿病大鼠缺血/再灌注心肌细胞凋亡及相关基因表达的研究

目的观察链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠缺血/再灌注(I/R)模型心肌细胞凋亡及相关基因的表达。方法采用STZ(45 mg/kg)诱导大鼠糖尿病4周后制备心肌缺血30 min再灌注120 min模型,用2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色法(TTC)测定心肌梗死面积,用TUNEI法检测细胞凋亡,用免疫组化方法检测凋亡相关基因的表达,透射电镜观察心肌组织超微结构的凋亡改变。结果与非糖尿病组相比,糖尿病组大鼠由I/R损伤引起的心肌梗死面积并没有增加,但是细胞凋亡指数增加(17%±3%比26%±3%,P<0.001)、Bcl-2表达降低(11.0%±3.8%比3.8%±2.5%,P<0.001)、Bax表达升高(26%±3%比36%±7%,P<0.001)、超微结构观察心肌凋亡损伤更为严重。结论糖尿病大鼠I/R心肌细胞凋亡增加,这可能与凋亡相关基因Bcl-2表达降低、Bax表达升高有关。     

甲基转移酶3B基因在胰腺癌中的表达

目的检测胰腺癌组织中甲基转移酶3B（DNMT3B）基因表达,分析其与胰腺癌临床病理参数的关系。方法应用实时定量PCR和免疫组织化学方法检测42例胰腺癌组织及相应癌旁组织、10例正常胰腺组织中DNMT3B mRNA和蛋白表达。结果胰腺癌组织、癌旁组织和正常胰腺组织DNMT3B mRNA表达量分别为9．4±5．9、1．02±0．71和0,相差非常显著（P〈0．05）;DNMT3B蛋白表达阳性率分别为83．3％、14．3％和10．0％,相差也非常显著（P〈0．01）。DNMT3B mRNA表达与临床分期、肿瘤分化程度和淋巴结转移密切相关（P〈0．05或P〈0．01）;DNMT3B蛋白表达与肿瘤的部位、淋巴结转移有关（P〈0．01或P〈0．05）;DNMT3B mRNA和蛋白表达均与年龄、性别、神经浸润、肿瘤大小、血CEA和CA19—9浓度无关。结论胰腺癌DNMT3B mRNA和蛋白高表达提示胰腺癌已发生淋巴结转移,预后较差。     

自拟中药对CCl4诱导的肝纤维化大鼠肝组织Smad3表达的影响

目的研究自拟中药对CCl4诱导的大鼠肝纤维化肝脏Smad3表达的影响，探讨其抗纤维化的作用机制。方法Wistar大鼠40只，随机分成正常对照组、模型组、自拟中药组、鳖甲软肝片组，采用CCl4背部皮下注射构建肝纤维化模型，行HE和VG染色，光镜下观察肝组织肝纤维化程度。同时免疫组化SABC方法检测各组Smad3的表达。结果与正常对照组比，模型组Smad3表达明显增强，自拟中药组大鼠肝脏Smad3的表达（0．279±0．085对0．885±0．904，P〈0．05）显著下调。另外，自拟中药组大鼠肝脏肝纤维化病理变化显著改善。结论自拟中药对CCl4诱导的大鼠肝纤维化模型肝脏Smad3表达有明显的下调作用，可能是其抗肝纤维化的主要作用机制之一。     

替米沙坦对肝纤维化大鼠肝组织TGFβ1、PDGF和PPAR-γ表达的影响

目的研究替米沙坦抗肝纤维化的分子生物学机制.方法将40只SD大鼠随机分成正常组（12只）、模型组（12只）和替米沙坦干预组（16只）.在制备四氯化碳（CCl4）肝纤维化动物模型成功后,用免疫组化法测定肝组织转化生长因子β1（TGF-β1）、过氧化物酶体增生物活化受体-γ（PPAR-γ）及血小板源生长因子（PDGF）表达.结果替米沙坦干预组大鼠肝组织TGF-β1平均标记指数（PI）为0.284±0.068,正常对照组为0.076±0.033,均显著低于模型对照组（0.739±0.065,P〈0.01）;替米沙坦干预组大鼠PDGF PI为0.259±0.050,正常对照组为0.039±0.023,均显著低于模型对照组（0.511±0.107,P〈0.01）;替米沙坦干预组PPAR-γ平均PI为0.326±0.068,正常对照组为0.115±0.021,均显著高于模型对照组（0.038±0.018,P〈0.01）.结论替米沙坦通过活化实验性肝纤维化大鼠肝组织PPAR-γ,抑制肝脏细胞因子表达,达到抗肝纤维化作用.     

动力相关蛋白-1参与糖皮质激素诱导的胰岛β细胞凋亡

目的探讨动力相关蛋白-1（DRP-1）对糖皮质激素诱导的胰岛13细胞凋亡的影响。方法采用地塞米松（Dex）处理大鼠胰岛13细胞系INS-1细胞，通过亚G1（Sub-G1）法检测细胞凋亡，Westernblotting检测DRP-1的表达。利用四环素诱导表达系统在INS-1细胞构建可诱导表达野生型DRP-1（DRP-1wt）基因和突变型DRP-1（DRP-1 k38A）基因的稳转细胞系，并用细胞免疫荧光和Westernblotting验证强力霉素（Dox）对转染基因的可诱导性。采用TUNEL法分析在Dex处理情况下，DRP-1wt基因或DRP．1k38A基因表达对Dex诱导的胰岛B细胞凋亡的影响，并同时测定相应细胞凋亡蛋白酶Caspase-3活性及细胞内活性氧（ROS）的变化情况。多组间均数比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用t检验。结果不同浓度Dex处理组细胞凋亡率[（15．7±4．2）％、（30．4±3．3）％、（61．6±5．4）％]明显高于未处理组[（3．3±1．3）％，t=6．44、14．07、30．26，均P〈0．05]；200nmol／LDex处理24、48及96h后细胞凋亡率[（10．6±1．2）％、（15．1±4．6）％、（42．6±9．8）％]明显高于处理0h组[（2．4±1．3）％，t=2．99、4．63、14．66，均P〈0．05]。Westernblotting显示Dex可诱导胰岛β细胞DRP-1基因的表达。DRP-1wt基因表达能够显著促进Dex诱导的β细胞凋亡[（53．8±7．2）％比（16．2±3．2）％，t=10．02，P〈0．05]，而DRP-1k38A基因表达反而抑制Dex诱导的B细胞凋亡[（6．2±1．1）％比（14．5±1．8）％，t=10．63，P〈0．05]。DRP-1wt基因表达能够促进Dex诱导的caspase-3活化[（1979±132）比（921±182），t=11．13，P〈0．05]及ROS产生[（772±62）比（290±56），t=13．66，P〈0．05]，而DRP-1k38A基因表达反而抑制了Dex诱导的caspase-3活化[（506±47）比（681±44），t=5．25，P〈0．05]及ROS产生[（235±14）比（309±44），t=3．86，P〈0．05]。结论DRP-1参与了糖皮质激素诱导的胰岛β细胞凋亡。     

慢性HBV携带者肝组织Fas和Fas配体表达变化及其意义

目的：观察慢性HBV携带者（chronic asymptomatic HBV carrier,ASC）肝组织Fas和Fas配体（FasL）的表达和血清可溶性Fas（sFas）水平的变化。方法对120例ASC行肝穿刺,采用免疫组织化学法检测肝组织Fas和FasL表达,采用ELISA法检测血清sFas水平。结果120例ASC肝组织完全正常者仅占11%,轻度肝炎占59%,而中、重度肝炎占30%;表现正常的肝组织无Fas和FasL表达,轻度肝炎肝组织多无表达或仅限于界面炎症区的肝细胞及淋巴细胞阳性表达,而中、重度肝炎肝组织Fas和FasL多为阳性,Fas强阳性率分别达34.8%和69.2%,FasL强阳性率分别达30.4%和53.8%,均明显高于正常组和轻度炎症组（P〈0.05）,同时中、重度肝炎组间也存在显著性差异（P〈0.05）,其分布除界面炎症区外,肝小叶中也弥漫分布;肝组织表现正常的ASC血清sFas水平为（1.68±0.33） ng/L,而轻、中、重度肝炎患者则分别为（2.58±0.31）ng/L、（3.94±0.21）ng/L和（5.94±0.26）ng/L,均较正常组显著升高（F=218.01,P〈0.01）,各组间sFas水平也均具有统计学差异（P〈0.01）。结论 Fas和FasL介导的肝细胞凋亡在慢性HBV携带者肝组织病变中可能起到了重要作用。     

多种无创检测方法评价糖尿病患者早期动脉硬化

目的多种无创检测方法联合评价2型糖尿病(DM)患者早期动脉硬化情况。方法无并发症的DM患者30例,对照组27例,行颈动脉内膜中层厚度(IMT)、踝臂指数(ABI)、肱踝脉搏波传导速度(baPWV)、压力波增强指数(AI)及血管回声跟踪技术(ET技术)检查,比较两组动脉硬化参数及其相关性。结果 DM组及对照组IMT、ABI均在正常范围,且差异无统计学意义(均为P0.05);左右两侧baPWV[(1449±232)cm/s比(1291±171)cm/s,(1452±222)cm/s比(1280±178)cm/s;P0.01]及ET技术中压力-应变弹性系数(Ep)[(137±51)kPa比(101±34)kPa,P0.01]、硬化参数(β)[(10.6±4.2)比(8.2±2.7),P0.05]、单点脉搏波传导速度(PWVβ)[(7.0±1.2)m/s比(6.1±1.0)m/s,P0.01]在DM组均明显高于对照组。DM组动脉硬化的发生率较对照组升高[67%(20/30)比26%(7/27),P0.01];Ep、PWVβ分别与左右两侧baPWV呈正相关。结论 DM患者动脉硬化发生率较对照组明显增加;ET技术中Ep、β、PWVβ与baPWV均可敏感地反映糖尿病患者早期动脉硬化。